Ренопротективни ефекат оридонина у мишјем моделу акутне повреде бубрега путем супресије упале укључене у макрофаге
Mar 17, 2022
УВОД
Важна карактеристика акутногповреда бубрега(АКИ) је нагли пад уфункцију бубрега. То је глобално здравствено питање које је изазвало широку забринутост у друштву. Према статистикама, око 13,3 милиона људи широм света пати од АКИ сваке године, од којих је 85 одсто у земљама у развоју, што ће убити 1,7 милиона људи.1,2) Приметно, АКИ није једна болест, и може бити компликација вишеструких болести. Нормално, може бити узроковано сепсом, шоком, исхемијом-реперфузијом и тровањем. Након дуготрајног развоја, ова болест има тенденцију да пређе у хроничнуобољење бубрега,конгестивна срчана инсуфицијенција и завршни стадијумбубрежна болест.3–5) Укратко, АКИ може да изазове огроман економски терет и практично ће повећати психичко и физичко оптерећење пацијената.Реналисхемија-реперфузија се тренутно сматра најчешћим узроком АКИ, а обично се јавља током трауме, хируршке ресекције илитрансплантација бубрега. Макрофаги су једне од кључних инфламаторних ћелија које играју важну улогу у напредовању АКИ. Минцле се углавном експримује на мијелоидним ћелијама и неутрофилима, посебно на макрофагима. Има високо задржан лектински домен Ц-типа који је главни играч у антифунгалном имунитету. Матсумото је првобитно верификовао идентитет Минцле као липополисахаридом (ЛПС) – протеин индукованог протеина који може да активира нуклеарни фактор-каппаБ (НФ-κБ) преко Цард9-Бцл10-МАЛТ1 сигнализације, што доводи до формирање ефикасног Т помагача 1 (Тх1) и Тх17 подтипова који промовишу експресију инфламаторних фактора за повезивање урођених и адаптивних имуних одговора.6) Недавна истраживања су открила да Минцле такође може да препозна све врсте абнормалних супстанци у ћелијама, да осети оштећење- повезане сигнале, а затим реаговати на релевантне одговоре. На пример, Минцле се може везати за -ГлцЦер који је свеприсутни интраћелијски метаболит из оштећених ћелија, активирајући и индукујући цитокине, и покрећући антиген-специфичне Т ћелијске одговоре.7) Минцле је рецептор који осећа хетерогену ћелијску смрт, може препознати ендогени лиганд САП130 који ослобађају мртве ћелије, индукује производњу инфламаторних цитокина и покреће инфилтрацију неутрофила у оштећена ткива.8,9) Посебно, Ланов тим потврђује да је Минцле посебно индукована на М1 макрофагима и да игра кључну улогу у одржавању фенотипа упале М1 макрофаги.6) Стога циљана терапија мешањем може бити кључ за лечење АКИ болести.
ЦИСТАНЦХЕ ЋЕ ПОБОЉШАТИ ФУНКЦИЈУ БУБРЕГА/БУБРЕГА
Оридонин је тетрациклично дипептидно природно једињење са кауриенским скелетом екстрахованим из Лондона, које има широк спектар биолошких функција, укључујући антимикробне, антитуморске, антиинфламаторне и антифиброзне. Многе врсте истраживања су објавиле антитуморски потенцијал и механизам ових природних дитерпеноида у низу ћелијских линија рака.10,11) и потврђено је да је Оридонин као лек против рака тренутно у фази И клиничких испитивања у Кина. Међутим, улога Оридонина уобољење бубрегаретко се пријављује. Неколико врста истраживања је потврдило да Оридонин може смањити протеинурију иоштећење бубрегана моделима спонтаног еритематозног лупуса мишева, а ин витро студије су откриле да Оридонин може смањити лучење инфламаторних цитокина и инфламаторни одговор изазван ЛПС након третмана Оридонином.12,13) У овој студији смо се фокусирали на откривање потенцијала Оридонина. у лечењу АКИ, и да ли је његов основни механизам повезан са инхибицијом Минцлеа у макрофагима. Ова студија може пружити јаке доказе за скрининг терапије АКИ.
Кључне речи:Оридонин; акутна повреда бубрега (АКИ); макрофаг; минцле; упала; функцију бубрега
МАТЕРИЈАЛИ И МЕТОДЕ ЖивотињеТридесет шест мужјака мишева Ц57БЛ/6 (старости 8–10 недеља) добијено је од Беијинг Витал Ривер Лаборатори Анимал Тецхнологиес Цо., Лтд. (Пекинг, Кина), и смештени у просторију са контролисаном температуром и влажношћу -контролисана просторија Центра за експерименте на животињама Југозападног медицинског универзитета (21.0 ± 2,0 степен и 65 ± 5 процената, респективно). Сви мишеви су стохастички подељени у три групе: лажна група, група модела са исхемијом-реперфузионом повредом (ИРИ) (ИРИ група) и ИРИ група третирана Оридонином (ОР група) (15 мг/кг). Пре операције, мишеви су анестезирани интраперитонеалном ињекцијом од 45 мг/кг натријум пентобарбитала. АКИ модел миша успостављен је билатералним стезањембубрежниартерије 35 мин. Мишеви у лажној групи били су изложени трбушној шупљини само 35 минута, док су мишеви у групи ОР континуирано интрагастрично давани Оридонином током 3 дана након операције, а другим групама је дата иста количина физиолошког раствора као контрола. Мишеви су еутаназирани интраперитонеалном ињекцијом пентобарбитал натријума разблаженог физиолошким раствором (200 мг/кг) трећег дана. Сви експерименти на животињама спроведени су у складу са Смерницама за негу лабораторијских животиња (број дозволе 201812-55).
ЦИСТАНЦХЕ ЋЕ ПОБОЉШАТИ БУБРЕЗУ/БУБРЕЗУ
Хемикалије и реагенсиОридонин (БП1041, чистоћа већа или једнака 95 процената) је добијен од Биопурифи пхитоцхемицалс Лтд. (Ченгду, Кина). Антитела на НФ-κБ, п-АКТ и индуцибилну синтазу азот оксида (иНОС) купљена су од Целл Сигналинг Тецхнологи (Беверли, МА, САД). Интерлеукин (ИЛ)-1, фактор некрозе тумора (ТНФ)-, Минцле, п-НФ-κБ и АКТ антитела су купљена од Санта Цруз Биотецхнологи (Санта Круз, Калифорнија, САД). Комплет за екстракцију укупне РНК је добијен од Тианген Биоцхемицал Тецхнологи (Беијинг) Цо., Лтд. (Пекинг, Кина). Комплет за реверзну транскрипцију, комплет за ПЦР у реалном времену који обезбеђује Схангхаи Промега Биопродуцтс Цо., Лтд. (Шангај, Кина). ЛПС (Есцхерицхиа цоли 055:Б5) обезбедила је Сигма Цхемицал (Сент Луис, МО, САД). Реагенс за ДНК трансфекцију је добијен од Зета Лифе (Зета Лифе, САД).
Ћелијска култура и трансфекцијеЋелије РАВ264.7 су купљене од Банке ћелија Кинеске академије наука (Шангај, Кина), култивисане на 37 степени у окружењу од 5 процената ЦО2 у Дулбеко-овом модификованом медијуму Еагле'с медиум (ДМЕМ) са високим садржајем глукозе. Варење је обављено када су ћелије нарасле до 80 процената ушћа. Цео експеримент је користио ћелије логаритамске фазе раста. Прекомерна експресија Минцлеа у ћелијама РАВ264.7 изведена је трансфекцијом Минцле-овереекспресионог плазмида (Генецхем, Шангај, Кина) у ћелије са Зета Лифе Адванцед ДНК реагенсом за трансфекцију. Морфологија и статус раста ћелија посматрани су помоћу светлосног микроскопа.
Комплет за бројање ћелија-8 (ЦЦК-8) АнализаТри хиљаде ћелија је засејано у 96-плочу са 6 реплицираних бунара по групи. Након тога, ћелије су изгладњеле у медијуму без серума током 24 сата, након чега је уследио третман са медијумом који садржи лек током 24 сата. Затим, након уклањања медијума, додајте 100 µЛ 10% ЦЦК-8 реагенса у сваки бунар и инкубирајте 3 х. Стопа преживљавања ћелија је израчуната према вредности апсорбанције сваког бунара.
Процена бубрежне функцијеНиво серумског креатинина и азота уреје мерени су коришћењем одговарајућег комплета (Јианцхенг, Нањинг, Кина). Вредности су изражене као ммол/Л серума.
Хематоксилин-еозин (Х&Е) и периодично бојење киселином-Сцхиффом (ПАС)Тхе цоллецтедбубрегаткиво је стављено у 4 процентни параформалдехид током 24 х, а затим стављено у растворе етанола различитих концентрација и стављено у блокове ксилена и воска за уградњу. Пре бојења, слајдови су стављени у пећницу на 60 степени на 2 х, а затим девоскани и рехидрирани. Неки узорци су обојени пигментима еозина и хематоксилина, други узорци додају алкохол периодичне киселине и раствор Сцхиффдие одвојено. Коначно, посматрано и фотографисано микроскопском камером.
Ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА)Ниво ИЛ-1, ИЛ-6 и ТНФ- у супернатанту ћелијске културе је мерен коришћењем ЕЛИСА комплета (ИЛ-1: Необиосциенце, ЕМЦ001б; ИЛ-6: Необиосциенце , ЕМЦ004; ТНФ-: Необиосциенце, 500850). Извршите испитивање узорка према методи коју је обезбедио добављач реагенса и израчунајте вредност концентрације сваке групе према стандардној кривој.
ЦИСТАНЦХЕ ЋЕ ПОБОЉШАТИ БОЛ БУБРЕГА/БУБРЕГА
Вестерн БлотСви узорци животиња и ћелија су лизирани у пуферу за радиоимунопреципитацију (РИПА) на леду и центрифугирани да би се добио одговарајући узорак протеина. Цоомассие бриллиант блуе тест је коришћен за одређивање концентрације протеина у сваком узорку, а гел је коришћен са одређеном количином узорака протеина. Свака група протеина је одвојена електрофорезом натријум додецил сулфат-полиакриламидног гела (СДС-ПАГЕ), а затим пребачена на мембрану од поливинилиден дифлуорида (ПВДФ). Након инкубације мембране са примарним антителима на 4 степена преко ноћи, секундарна антитела су инкубирана на собној температури 1 сат. Боја траке је развијена раствором за развијање боје, а интензитет сиве траке израчунат је софтвером Имаге Ј.
ПЦР у реалном временуУкупна РНК је добијена према упутствима за употребу Тианген комплета и растворена је у води без ензима. Према релевантним упутствима, користимо комплет за реверзну транскрипцију за синтезу цДНК. Услови РТ-ПЦР реакције су изведени на следећи начин: 37 степени током 15 минута, 95 степени током 5 минута, а затим 40 циклуса
95 степени за 10 минута, 95 степени за 15 с и 60 степени за 1 минут. Релативни ниво експресије мРНК сваког гена је нормализован у односу на глицералдехид-3-фосфат дехидрогеназу (ГАПДХ). Секвенце прајмера су приказане у табели 1.Имунофлуоресцентно бојењеРАВ264.7 ћелије су фиксиране у 4 процента параформалдехида, затим блокиране албумином говеђег серума на собној температури (рт) током 1 х, и инкубиране са одговарајућим примарним антителима на 4 степена преко ноћи. После испирања физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) 3 пута, ћелије су инкубиране са секундарним антителима на собној температури 1 х. Језгро је обојено 4′-6-диамидино- 2-фенилиндолом (ДАПИ). Слике имунофлуоресценције су снимљене микроскопом Никон Ецлипсе (Никон, Токио, Јапан).Статистичка анализаРезултати статистичке анализе су представљени као средња вредност ± стандардна девијација (СД). Поређења између група су обављена коришћењем једносмерне АНОВА, п< 0.05="" was="" considered="" significant.="" graphpad="" prism="" 7="" software="" was="" used="" to="" calculate="" data="" for="" statistical="">
РЕЗУЛТАТИ
Оридонин инхибирао исхемију-реперфузију изазвану повреду бубрега и упалуДа би се проценио заштитни ефекат оридонина на АКИбубрегаизазване исхемијом-реперфузијом, испитали смо креатинин у крви, азот урее ибубрежнииндекс тубуларне повреде мишева у свакој групи, као и експресија инфламаторних цитокина у бубрежном ткиву и процениобубрежнипатологија Х&Е и ПАС бојењем. Резултат је приказан на слици да су нивои креатинина у серуму (Слика 1а) и азота уреје (Слика 1б) у групи модела АКИ смањени током континуиране ињекције Оридонина током три дана. Сходно томе, индекс тубуларне повреде показао је да Оридонин снажно смањује тубуларну некрозу убубрегаАКИ мишева (слика 1ц). ПЦР резултати у реалном времену су показали да је Оридонин значајно смањио нивое мРНА ИЛ-1, МЦП-1 и Ф4/80 убубрегагрупе модела АКИ (сл. 1д–ф). Штавише, резултати патолошког бојења и имунофлуоресценције показали су да је Оридонин значајно смањио тубуларну некрозу (слика 1г) и ниво протеина инфламаторних цитокина (слика 1х) код АКИ мишева, што је ефикасно побољшало оштећење бубрега, што указује на то да је Оридонин имао значајне анти-повреде. и антиинфламаторни ефекти на АКИ моделу.
Оридонин инхибирао сигнални пут Минцле/АКТ/НФ-κБ у бубрезима АКИ мишеваДа би се разјаснио терапијски механизам Оридонина набубрежниупалу, даље смо испитали активацију Минцле/АКТ/НФ-κБ сигнализације након оридонина примене. Вестерн блот резултати су показали да интервенција Оридонина може значајно смањити експресију протеина повезаних са упалом ИЛ-1 и иНОС у АКИбубрезии смањују активацију протеина АКТ и НФ-κБ пута (слике 2а-е), што указује да Оридонин може инхибирати упалу изазвану ИРИ убубрегаоф АКИ. Посебно, резултати ПЦР-а у реалном времену и Вестерн блот-а показали су да Оридонин ефикасно смањује нивое мРНА и протеина Минцлеа убубрегамодела АКИ (сл. 2ф, г). Да би се открила локација Минцлеа убубрега, извршили смо имунофлуоресценцију у свакој групи (слика 2х), резултати су показали да се Минцле налази убубрежниинтерстицијум и ко-локализован са макрофагним маркером Ф4/80, што указује да је Минцле углавном експримиран убубрежнимакрофага, и снажно регулисани после АКИ. Резултати Имуно-ФЛ флуоресценције су такође показали да се макрофаги значајно повећавају након АКИ, што указује на важну улогу макрофага у развоју АКИ. Приметно је да је Оридонин значајно инхибирао Минцле убубрежнимакрофаг АКИ мишева. Горе наведени резултати указују да се Оридонин може побољшатибубрегаупала и повреда инхибирањем Минцле/АКТ/НФ-κБ сигнализације.
Оридонин је значајно обновио морфолошке промене макрофага РАВ264.7 изазване ЛПС-омДа бисмо проучавали ефекат Оридонина на инфламаторне макрофаге, користили смо ЛПС да стимулишемо ћелије РАВ264.7 да конструишумодел инфламаторних ћелија. Хемијска структура Оридонина је приказана на слици 3а. Стога смо тестирали токсичност Оридонина у различитим концентрацијама на ћелијама РАВ264.7. Резултати ЦЦК8 показују да када је концентрација 5 µМ, Оридонин нема значајан утицај на ћелијску морфологију (слика 3б), што је коришћено у наредним ин витро експериментима. Изненађујуће смо открили да је Оридонин значајно побољшао морфологију макрофага изазвану ЛПС-ом (слика 3ц), укључујући смањење интрацелуларних вакуола и стварање ћелија чврстијих.
Оридонин је потиснуо лучење и експресију инфламаторних фактора у ЛПС-стимулисаном РАВ264.7Ћелије Да бисмо разјаснили антиинфламаторни ефекат оридонина на ћелије РАВ264.7 стимулисане ЛПС-ом, користили смо ФЛ флуоресцентни ПЦР у реалном времену, ЕЛИСА и имунофлуоресценцију за мерење инфламаторних фактора које лучи свака група ћелија. Резултати су показали да Оридонин значајно смањује нивое мРНК ИЛ-1, ИЛ-6, ТНФ-, иНОС и МЦП-1 у ћелијама стимулисаним ЛПС (слике 4а–е). Штавише, Оридонин је такође значајно смањио лучење ИЛ-1, ИЛ-6 и ТНФ- у супернатанту у моделу инфламаторних ћелија (слике 4ф–х), као и нивое протеина инфламаторни цитокини у макрофагу стимулисаном ЛПС (слика 4и). Горе наведени резултати показују да Оридонин има очигледан антиинфламаторни ефекат на макрофаге.
Оридонин је блокирао Минцле/АКТ/НФ-κБ сигнални пут у инфламаторном макрофагу ин витроМинцле, као рецептор за препознавање образаца, неопходан је за промовисање упале повезане са макрофагом убубрегаоф АКИ. Горе наведени резултати експеримента на животињама показали су да Оридонин може смањити експресију Минцлеа убубрегаоф АКИ. Стога смо даље истражили да ли Оридонин може смањити ниво мРНК и протеина Минцлеа у моделу упале макрофага стимулисаног ЛПС-ом. Резултати Вестерн блот-а, имунофлуоресценције и ПЦР-а у реалном времену показали су да 5 µМ Оридонин не само да значајно смањује експресију мРНА (слика 5ц), већ и смањује ниво протеина Минцлеа у инфламаторном макрофагу (слике 5а, б , д). Штавише, Оридонин је значајно смањио ниво протеина иНОС и фосфорилисаног-АКТ и НФ-κБ у ћелијама третираним са ЛПС РАВ264.7.
Прекомерна експресија Минцле елиминисала је инхибиторни ефекат оридонина на упалу у ћелији РАВ264.7 стимулисаној ЛПСДа бисмо утврдили да ли је Минцле главна мета Оридонина да инхибира упалу у макрофагу, трансфектовали смо ћелије РАВ264.7 са Минцле прекомерно експресионим плазмидом да бисмо појачали експресију Минцлеа. Према резултатима ПЦР-а у реалном времену и Вестерн блот-а, показало се да су нивои мРНК и протеина Минцлеа у ћелијама РАВ264.7 повећани након трансфекције (слике 6а, б). Плазмид је затим трансфектован у инфламаторне ћелије третиране Оридонином, а резултати су показали да је експресија Минцлеа такође повећана у ћелијама ове групе (слике 6ц, д). Вектор је трансфектован у ћелијама као негативна контрола. Резултати експеримената опоравка су показали да прекомерна експресија Минцлеа у инфламаторном макрофагу третираном Оридонином повећава активацију АКТ и НФ-κБ повећањем нивоа фосфорилације ова два протеина (слике 6д–г), што сугерише да Оридонин инхибира упалу макрофага. може кроз Минцле који регулише низводно и низводно АКТ и НФ-κБ сигнализацију. Штавише, резултати ПЦР и ЕЛИСА у реалном времену показали су да је прекомерна експресија Минцлеа обновила експресију и секрецију цитокина у инфламаторном макрофагу третираном Оридонином (слике 6х–л). Горе наведени резултати су показали да Оридонин инхибира упалу у макрофагима регулацијом Минцле/АКТ/НФ-κБ сигнализације.
ДИСКУСИЈА
АКИ је клинички синдром узрокован различитим етиологијама и патолошким механизмима.Реналисхемијско-реперфузиона повреда је чест патофизиолошки процес у клиникама и један је од главних узрока акутногповреда бубрега.14,15) Инфламаторни одговор је сложена мрежа укључена убубрежнипаренхимске ћелије и резидентне имуне ћелије, у којима макрофаг игра важну улогу уповреда бубрега.16) Услед промена у имунолошком микроокружењу, макрофаги ће бити поларизовани у неколико фенотипова, углавном подељених на М1 и М2 типове. иНОС израз је знак М1 типа. Студије ин виво и ин витро откриле су да је експресија иНОС повећана у групи модела, а да се експресија смањује након третмана. Лектин Ц-типа изазван макрофагом (Минцле) је лектински рецептор Ц-типа експримиран на активираним макрофагима и генетски је локализован на мишјем 6Ф2 и хуманом хромозому 12П31. Неке студије су известиле да Минцле учествује у покретању урођеног имунолошког одговора тако што препознаје рецепторе за препознавање молекуларних образаца повезаних са патогеном.17) Неке експерименталне студије су откриле да након церебралне исхемијске повреде код мишева, повећана инфилтрација белих крвних зрнаца у повређеном подручју може довести до губитка неурона у области васкуларне перфузије, а нокаут Минцлеа може значајно
успоравају исхемијску повреду изазвану оклузијом средње мождане артерије. Најновије истраживање открива да Минцле може да осети смртбубрежнитубуларне епителне ћелије које се комбинују са -глукозилцерамидом, убрзавајући инфламаторни одговор и одлажући елиминацију упале.18) Студије ообољење бубрегаје исти као и резултати нашег истраживања који су показали да је Минцле високо експримиран и у моделима исхемије-реперфузије и код модела АКИ изазваног цисплатином, а посебно је изражен на макрофагима типа М1-. Укратко, циљана Минцле студија може бити нови третман за сродне болести узроковане инфламаторним макрофагима. Наша студија је открила да је експресија Минцле повећана у моделу АКИ мишева
конструисан исхемијом-реперфузијом. Према резултатима имунофлуоресценције ко-локализације, Минцле је углавном изражен набубрегамакрофага моделне групе мишева и у складу је са резултатима Лановог истраживања. Минцле се индукује посебно на М1 макрофагима, где Минцле-ски сигнализација промовише и одржава инфламаторне фенотипове М1 макрофага у акутном стању.запаљење бубрега.6) Минцле припада лектинском рецептору Ц-типа (ЦЛР) који може препознати гљивице и друге облике микроорганизама или асептичне опасности. Они изазивају упалу преко протеина линкера ЦАРД9, након чега следи склапање комплекса ЦАРД9-Бцл10 и типична регулација НФ-κБ. Постоји регулаторни однос
између НФ-κБ и АКТ протеина.10,19) У студији инфламације макрофага стимулисаних ЛПС-ом, потврђено је да је експресија АКТ и НФ-κБ повећана. Након тога, трансфектовали смо плазмид високе експресије Минцлеа у ћелију која је третирана интервенцијом лека, а резултати су открили да је сигнални пут АКТ и НФ-κБ поново активиран. Може се закључити да Минцле може утицати на експресију протеина овог пута. Међутим, није јасно како Минцле регулише ова два сигнална пута, и није јасно да ли се протеин активира кроз пут неба, како каже објављено истраживање.
Оридонин је природно дитерпеноидно једињење екстраховано из Ориона и има широк спектар фармаколошких ефеката, укључујући антитуморске, антиинфламаторне и неуропротективне. У истраживању неуропротективне функције Оридонина, Венов тим је открио да Оридонин може блокирати инсулинску резистенцију инхибирањем аутофагије како би побољшао когнитивну дисфункцију.20) Линов тим је открио да Оридонин може заштитити од Паркинсонове болести и нападаја смањењем неурооксидативног стреса и других неуропротективних ефеката. 21) Најтемељније је проучаван антитуморски ефекат Оридонина. Истраживачки тим је направио лек у честице за инхалацију за лечење мишева модела рака плућа не-малих ћелија, који су показали снажан инхибиторни ефекат ангиогенезе и про-апоптотички ефекат и имали значајан ефекат против рака.22) Оридонин такође може да испољи антиинфламаторно ефекат. Може да инхибира Нотцх пут, индукује поларизацију макрофага да пређе на антиинфламаторни фенотип и потисне појаву аутоимуног неуритиса.23)
Такође може да ублажи настанак остеоартритиса тако што инхибира лучење инфламаторних фактора и производњу редуктивне оксидазе.24) Неке студије су показале да Оридонин такође има значајне ефекте на различитеболести бубрега. Студије су известиле да Оридонин може да сарађује са 5-флуороурацилом (5-ФУ) да би показао антитуморске ефекте и побољшао цитотоксичност 5-ФУ убубрежнићелије рака.25) Према резултатима ин виво експеримента ове студије, Оридонин може значајно смањити серумски креатинин уреа азот код мишева са исхемијско-реперфузионом повредом и значајно смањити његово патолошко оштећење. Резултати су такође показали да Оридонин може да инхибира инфламаторну активност везану за супресију АКТ и НФ-κБ пута, што је слично резултатима истраживања Оридонин интервенције у дијабетичкој нефропатији и може истовремено да смањи инфилтрацију инфламаторних цитокина и активност наплате. попут рецептора 4 (ТЛР4)/НФ-κБ сигналног пута.26) Горе наведени резултати сугеришу да Оридонин може инхибирати Минцле и потиснути активност АКТ и НФ-κБ пута. У ин витро експериментима, ови индикатори пута су повећани у моделу упале макрофага стимулисаног ЛПС-ом, а такође су смањени Оридонином. Резултати експеримената обнављања показали су да је прекомерна експресија Минцлеа у инфламаторном макрофагу третираном Оридонином повећала активности АКТ и НФ-κБ сигнализације, што је резултирало повећањем експресије и секреције инфламаторних цитокина у ћелијама третираним Оридонином, што сугерише да Оридонин инхибира инфлацију. макрофаг може путем супресије Минцле и АКТ/НФ-κБ сигнализације
ЦИСТАНЦХЕ ЋЕ ПОБОЉШАТИ ИНФЕКЦИЈУ БУБРЕГА/БУБРЕГА
Постоји много начина да се конструишу АКИ животињски модели, укључујући билатералну исхемију-реперфузију, унилатерални ИРИ са контралатералном нефректомијом, цисплатин, токсин дифтерије, ЛПС, аристолохичну киселину или фолну киселину. Међутим, ињекција цисплатина не може у потпуности симулирати клиничке пацијенте. Модел изазван ињекцијом токсина дифтерије има тенденцију да продужи прогресијуобољење бубрега, што углавном може довести добубрежнифифиброза и гломеруларна склероза, као и благо оштећење тубула. Нефропатија аристолохичне киселине је тубулоинтерстицијски нефритис, а фолна киселина је такође индуктор нефротоксичностибубрежнифифиброза, али је клиничка инциденција ове две болести ниска.27) Акутни индуковани ИРИповреда бубрегаје глобални проблем јавног здравља повезан са високим морбидитетом, морталитетом и трошковима здравствене заштите. Због тога користимо исхемију-реперфузију за конструисање акутногбубрегамодел повреде мишева. Неколико студија је пријавило различита времена стезањабубрежниартерија. Истраживачки тим је успоставио ИРИ животињски модел за билатерално стезањебубрежнипедикуле Спрагуе-Давлеи (СД) пацова током 1 х.28) Други истраживачки тим је стезао билатералнебубрежниартерије током 45 минута да би се припремио модел реперфузије код пацова Вистар. Поред тога, спроведена је студија коришћењем мишева Ц57БЛ/6Ј за клемање билатералних бубрежних педикула у трајању од 35 минута да би се направио модел.29) На основу претходних експерименталних резултата, утврђено је да је реперфузија настављена након билатералнебубрежниартерија је стегнута на 20 минута, а серумски креатинин се вратио на нормални почетни ниво три дана касније. Због тога смо изабрали да стегнемо билатералне бубрежне артерије 35 минута пре реперфузије, а промене серумског креатинина су биле стабилне након операције три дана. Током операције можемо приметити да је бојабубрегамења из ружичасте у светлоцрвену, што је узрокованобубрежниартеријска васкуларна исхемија. Након уклањања клипа 35 мин касније, можемо приметити да је бојабубрегавраћа у нормалу, конструисан је ИРИ-АКИ модел. Укратко, овај налаз је показао да Оридонин има значајан антиинфламаторни ефекат и може заштитити бубреге у АКИ од повреда, које углавном могу укључивати инхибицију Минцлеа и активности његовог низводног сигнализирања НФ-κБ и АКТ. Ова студија пружа нови потенцијални механизам лечења Оридонином за АКИ, који може да пружи опције за клиничко лечење АКИ.
