Студија о побољшању ефеката екстракта фенилетаноидних гликозида из Роуцхонгронг (Цистанцхе Десертицола) на метаболизам липида у јетри АпоЕ - / - мишева са исхраном са високим садржајем масти на основу регулације експресије АЦОКС1 - ЦПТ2

САЖЕТАК Циљ:Да истражитеефекти екстракта фенилетаноидних гликозидаизЦистанцхе десертицола(ПГЦД) на метаболизам липида у АпоЕ- / - јетри мишева изазваном исхраном са високим садржајем масти. Методе: 70 мужјака АпоЕ- / - мишева храњених исхраном са високим садржајем масти подељено је у 5 група, модел (МОД) група, мишевима позитивне контроле дат је аторвастатин [20 мг / (кг·д)] + езетимиб [20 мг / (кг ·д)](А + Е), дате су групе ниске, средње и високе дозе ПГЦДПГЦД[250, 500, 1000 мг / ( кг·д)]; још 14 мужјака Ц57БЛ/ 6Ј мишева са ацхов дијетом постављено је као нормална контролна (ЦОН) група. 12. викенда детектован је садржај ТГ и активности АЛТ и АСТ у серуму и ткиву јетре према упутству за употребу. Свеже ткиво јетре је хомогенизовано и садржај синтазе масних киселина (ФАС), дуголанчаног ацил - ЦоА дехидрогеназе (ЛЦАД) и глутатион пероксидазе (ГСХ - Пк),супероксид дисмутаза (СОД)активности су тестиране ЕЛИСА методом, док је садржај малондиалдехида (МДА) и липидног пероксида (ЛПО) детектован кидметодама. Експресије мРНК ацил-коензима А оксидазе 1 (АЦОКС1) и карнитин палмитоилтрансферазе 2 (ЦПТ2) детектоване су РТ-ПЦР експериментима.

КЛИКНИТЕ ОВДЕ ДА ЗНАТЕ 80%ФЕНИЛЕТАНОИДНИ ГЛИКОЗИДИПРИРОДНИ ОРГАНСКИ ЕКСТРАКТ ЦИСТАНЦХЕ

Услуга подршке Вецистанцхе-а - највећи извозник цистанцхеа у Кини:

Е-пошта:wallence.suen@wecistanche.com

Вхатсапп/тел:+86 15292862950

Купите за више детаља о спецификацијама:

хттпс://ввв.кјцистанцхе.цом/цистанцхе-схоп

Резултати:За разлику од групе модела,три дозе ПГЦД су све смањиле нивое ТГу јетри и серуму на дозно-зависан начин и снизила активност АЛТ и АСТ у серуму. Све три дозе ПГЦД су смањиле садржај ФАС у зависности од дозе и значајно повећале садржај ЛЦАД у јетри.ПГЦД промовисанактивности ГСХ - Пк и СОД и значајно су смањиле садржај МДА и ЛПО у јетри. РТ-ПЦР експерименти су показали да ПГЦД подиже нивое мРНА АЦОКС1 и ЦПТ2 у ткиву јетре.

Закључак:ПГЦД може побољшати метаболизам липида и одговор на оксидативни стрес и смањити таложење липида у ткиву јетре регулацијом експресије мРНА АЦОКС1 и ЦПТ2.

Кључне речи:Екстракт фенилетаноидних гликозида из Цистанцхе десертицола; АЦОКС1; ЦПТ2;метаболизам липида;оксидативни стрес; АпоЕ- / - мишеви

Безалкохолна масна болест јетре(НАФЛД) је једна од најраширенијих болести јетре у свету, са преваленцијом од скоро 30% у општој популацији. Болест масне јетре у Кини расте по годишњој стопи од 0,594% [1]. Појава и развој НАФЛД уско су повезани са прекомерним уносом калорија у организам. Исхрана са високим садржајем масти доводи до прекомерне акумулације масти у јетри и индукује НАФЛД[2], а почетни корак у његовој патогенези је таложење триацилглицерола (ТГ) у ћелијама јетре[2] 3]. До данас не постоје специфични терапијски лекови који циљају на патогенезу НАФЛД. Проналажење безбедних, ефикасних лекова са јасним механизмима за превенцију и лечење НАФЛД-а постао је важан задатак за истраживаче. Цистанцхе десертицола ИЦ Ма је паразитска биљка из рода Цистанцхе из породице Оробанцхацеае. Његова главна компонента, фенилетаноидни гликозиди, има функцију јачања имунолошке функције тела, анти-агинг, анти-радијацију, антиоксидацију и хепатопротективну и друге ефекте[4-5]. Ова студија намерава да спроведе прелиминарну студију о механизмуФенилетаноидни гликозиди из Цистанцхе десертицола(ПГЦД) у побољшању метаболизма липида.

1 Експериментални материјали

1.1 Експериментални лекови

Меснате стабљике Цистанцхе десертицола (садржај влаге 8,5%) купљене су од Хотан Дицхен Пхармацеутицал Цо., Лтд.; референтне супстанце фенилетаноидних гликозида (главне компоненте вербаскозид и ехинацеасиде) (обе чистоће > 98%) купљене су од Манстера, Цхенгду, Сицхуан Биотецхнологи Цо., Лтд.; Аторвастатин: Пфизер Шангај; Езетимиб: Мерцк Пхармацеутицалс Цо., Лтд.

1.2 Експерименталне животиње

6 до 8 недеља стари мужјаци мишева Ц57БЛ/6Ј и АпоЕ-/- мишева, телесне тежине (20 ± 2) г, купљени од Цхангзхоу Цавинс Екпериментал Анимал Цо., Лтд., број лиценце: СЦКСК (Су) 2016-0010 , 12 х / 12 х светлосни циклус, температура (22 ± 1) степен, влажност 50% ~ 60%, слободан унос хране и воде. Пре експеримента, мишеви су храњени стандардном исхраном 1 недељу да би се прилагодили. Сва брига о животињама и експерименти прате прописе Комитета за етику експерименталних животиња Првог медицинског универзитета Шандонг (Етички број: В202107080303).

1.3 Експериментални реагенти

Храна са високим садржајем масти: Харлан Теклад; ТГ, АЛТ, АСТ комплети: Беијинг Солебао Биотецхнологи Цо., Лтд.; ФАС, ЛЦАД комплети: Схангхаи Лангтон Биотецхнологи Цо., Лтд.; ГСХ-Пк комплет: Схангхаи Јининг Биотецхнологи Цо., Лтд.; СОД, МДА, ЛПО, БЦА комплети: Нањинг Јианцхенг Биотецхнологи Цо., Лтд.; Тризол комплет: Инвитроген, Царлсбад, ЦА; АЦОКС1 и ЦПТ2 прајмери: дизајнирао Сангон Биоенгинееринг (Схангхаи) Цо., Лтд.

1. 4 Екпериментал Инструментс Хеи - ВАП Екперт Ротари Евапоратор: Немачка

Хеидолпх; Вариоскан ЛУКС мултифункционални читач микроплоча: ТхермоФисхер; ФД8508 вакуум замрзивач за сушење: Илшин, Јужна Кореја; Ф6/10 хомогенизатор: Схангхаи Флуороцо; Агилент1260 течни хроматограф високих перформанси, Цари 3500 УВ спектрофотометар: Агилент Тецхнологиес Лтд.; Куант студио5РТ - ПЦР инструмент: Тхермо Фисхер Биоцхемицалс, Инц.

2.3.1 Телесна маса и индекс јетре

На крају 12. недеље, мишеви су постили и измерени. Мишеви су анестезирани натријум пентобарбиталом и жртвовани. Јетре су сакупљене да би се израчунао индекс јетре.

2.3.2 Детекција индикатора серума

Узмите серум и откријте активности серумске аспартат аминотрансферазе (АСТ) и аланин аминотрансферазе (АЛТ) у низу у складу са операцијом комплета; БЦА одређује садржај протеина у серуму и детектује садржај ТГ.

2.3.3 Детекција фактора који се односе на метаболизам липида у ткиву јетре

Под условима од 4 степена, измерити одговарајућу количину свеже јетре и хомогенизовати је у ПБС-у, центрифугирати (радијус центрифуге 7,5 цм, 3 000 р/мин) хомогенат 1 мин, узети супернатант и измерити садржај протеина ткива јетре помоћу БЦА. Садржај ТГ у ткиву, ЕЛИСА метода за откривање садржаја синтазе масних киселина (ФАС) и садржаја дуголанчане ацил-ЦоА дехидрогеназе (ЛЦАД) у ткиву јетре.

2.3.4 Детекција оксидативних фактора у вези са ткивом јетре

Под условима од 4 степена, измерити одговарајућу количину свеже јетре и хомогенизовати је у ПБС, центрифугирати хомогенат (центрифугални радијус 7,5 цм, 3 000 р/мин) 15 мин, узети супернатант и измерите садржај протеина у ткиво јетре са БЦА. Пратите реагенсе Упутства у кутији откривају активности супероксид дисмутазе (СОД) и глутатион пероксидазе (ГСХ-Пк), и истовремено детектују нивое малондиалдехида (МДА) и липид пероксида (ЛПО).

2. 3. 5 РТ-ПЦР детекција

Експресија АЦОКС1/ЦПТ2 мРНА у ткиву јетре: Узмите одговарајућу количину свежег ткива јетре, користите комплет Тризол за екстракцију укупне мРНК ткива јетре, користите МуЛВ реверзну транскриптазу за синтезу цДНК и користите цДНК као шаблон за извођење квантитативне флуоресценције у реалном времену ПЦР (Кпцр) детекција. Реакциони услови су били: предденатурација на 95 степени у трајању од 2 мин; денатурација на 95 степени током 10 с, жарење: 60 степени за 30 с, екстензија на 72 степена за 35 с, 34 циклуса, и коначно екстензија на 72 степена током 5 минута, и квантификација у реалном времену помоћу аутоматског анализатора. Експресија мРНА АЦОКС1 и ЦПТ2. Ротор-гене К софтвер. 1.7 (Киаген) је коришћен за анализу података, а 2-△△Цт метода је коришћена за бројање релативних нивоа мРНА и ГАПДХ. Свака група експеримената је изведена паралелно > 3 пута. Секвенце прајмера су следеће: ГАПДХ, узводно: 5' - ГЦЦАЦЦЦ АГААГАЦТГТГ - 3', низводно: 5' - АТГТАГГЦЦАТГАГГТЦЦАЦ - 3'; АЦОКС1, узводно: 5' -ЦГЦЦАЦЦТТ ЦААТЦЦ АГАГТ - 3' низводно: 5' -ТЦТГЦГАТГЦЦАААТТЦЦЦЦТ - 3'; ЦПТ2, узводно: 5'- ТЦЦТЦЦТАЦТЦ АГГАЦГЦАА - 3' низводно: ТТГГГАТЦТТЦЦГЦТЦАЦАЦ.

2.4 Статистичке методе

СПСС 20.0 статистички софтвер је коришћен за анализу података. Подаци мерења су изражени као (к ± с). За поређење између група коришћена је једносмерна анализа варијансе. П < 0,05 сматра се статистички значајном разликом.