Студија о неуроендокрино-имуној функцији Цистанцхе Десертицола и њених производа за кухање пиринчаног вина у моделу пацова изазваним глукокортикоидима-Ⅱ

3.2.4. Имунохистоцхемистри

Неуронску апоптозу контролишу многи апоптотички и антиапоптотички гени, углавном ген Бак који промовише апоптозу и антиапоптотички гени из породице гена Бцл-2. Бцл-2 је локализован у органелама које производе реактивни кисеоник, као што су митохондрије, ендоплазматски ретикулум и нуклеарне мембране. Бцл-2 има мали утицај на слободне радикале кисеоника, али можеспречавају оксидативно оштећење ћелија. Бак се транспортује из цитоплазме до митохондријалне мембране, мења структуру митохондријалне мембране и промовише ослобађање цитохрома ц и индукцију апоптозе.

ПРИРОДНИ ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ПОБОЉШАЊЕ СЕКСУАЛНЕ ФУНКЦИЈЕ ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

Дошло је до експресије у цитоплазми надбубрежне жлезде Бак и Бцл-2 протеина. Бојење је показало све жуте честице. У поређењу са БЦ групом, просечна оптичка густина Бак протеина у МЦ групи је значајно порасла (П< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Слика 5(б) показује да је у поређењу са оном из БЦ групе, просечна оптичка густина Бцл-2 протеина у МЦ групи значајно смањена (П< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Протеин каспаза-3 је локализован углавном у цитоплазми у свом оригиналном облику у нормалним ткивима и има ниску експресију. Позитивни сигнали су бледо жути или браонкасто жути. У поређењу са БЦ групом, експресија каспазе-3 у МЦ групи се значајно повећала (П< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

У нормалним ткивима, експресија Фас гена је смањена, а позитиван сигнал за ин ситу хибридизацију био је браонкасто жути. Као што је приказано на слици 5(д), у поређењу са БЦ групом, просечна оптичка густина Фас протеина у МЦ групи се повећала (П< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

ФасЛ протеин се налази углавном у ћелијској мембрани или цитоплазми, а његови позитивни сигнали су браон боје. У поређењу са БЦ групом, просечна оптичка густина ФасЛ гена у МЦ групи је значајно порасла (П< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Резултати су показали да ЦД и ВЦД могуиндукују апоптозу у инфламаторним ћелијамаи смањују оштећење надбубрежне жлезде промовисањем експресије ФасЛ протеина и везивањем за Фас протеин, активирањем протеина каспазе{0}} и покретањем каскаде каспазе. Ефекат групе ВЦД-ХД је био најбољи.

3.3. Одређивање имунолошке функције

3.3.1. Индекс имунолошких органа

У поређењу са онима из БЦ групе, коефицијент тимуса и индекс слезине у МЦ групи су значајно смањени (П< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better. 

ПРИРОДНИ ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ПОБОЉШАЊЕ СЕКСУАЛНЕ ФУНКЦИЈЕ ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

3.3.2. Детекција подскупина Т лимфоцита у периферној крви

Проценат ЦД4+ ћелија у горњем левом квадранту и ЦД8+ ћелија у десном доњем квадранту у БЦ и свакој групи лекова био је већи од оног у МЦ групи. У поређењу са БЦ групом, однос ЦД4+ТхЦД8+ се значајно смањио у МЦ групи (П< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Одређивање нивоа ИЛ-10, ИЛ-6, ИЛ-2, ТНФ-Α и ИФН-Ц у серуму

Слика 8 показује да је у поређењу са БЦ групом ниво ИЛ-6, ТНФ- и ИФН-ц значајно повећан (П< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Резултати експеримента посматрања микроскопом лимфног ткива

Слика 9 показује да је у групи БЦ био присутан велики број лимфоцита. Лимфоцити и ретикулоцити су били лабаво распоређени у центру са раштрканим округлим или овалним тимоцитима. Није било некрозе, инфилтрације инфламаторних ћелија и абнормалних промена.

МЦ група показала је велику количину лимфоидне некрозе ткива, са неуређеним распоредом лимфоцита и ретикулоцита у центру. Округли или овални тимоцити су нестали, евидентна је масивна дегенерација или некроза ћелија, а постојала је инфилтрација инфламаторних ћелија са абнормалним патолошким променама.

У ЦД групама морфолошке карактеристике лимфоцита су се вратиле у нормалу, а распоред централних лимфоцита и ретикулоцита је био скоро нормалан. Округли или овални тимоцити су се опоравили, али је остао мали број дегенеративних или некротичних лимфоцита и инфилтрирајућих инфламаторних ћелија.

У ВЦД групама и ПЦ групи боље су поправљене морфолошке карактеристике лимфоцита. Лимфоцити и ретикулоцити у центру су били добро поређани, округли или овални тимоцити су били скоро нормални, али је остао мали број инфилтрирајућих и дегенеративних лимфоцита.

3.4. Експресија гена ЦаМ протеина

Сматрало се да РК вредност (ЦаМ мРНА -актин мРНА) испитује експресију ЦаМ мРНК. РК БЦ групе је био 1. Експресија ЦаМ мРНК у хипоталамусу у МЦ групи значајно се повећала (П< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Дискусија

Кинеска фармакопеја [2] бележи да се ЦД и ВЦД могу користити у клиници као главни типови комада за декокцију. Након што се попари пиринчаним вином,ефекти против старења и тонирања бубрега-јангбили побољшани. Путем УПЛЦ-КкК-МС детектовали смо квантитативне промене у бази хемијског материјала током процеса парења пиринчаног вина. Иридоидни гликозиди су били нестабилни и садржај ових гликозида се смањио, чак и постао недетектљив. Променио се и садржај фенилетанол гликозида, што је могло да изазове промене у фармакодинамици и клиничком ефекту.

ПРИРОДНИ ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ПОБОЉШАЊЕ СЕКСУАЛНЕ ФУНКЦИЈЕ ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

Класични модел недостатка бубрега-јанга је реплициран супкутаном ињекцијом кортикостерона [19]. Предозирање кортикостерона може инхибирати тајну ЦРХ у хипоталамусу. У међувремену, тајна АЦТХ је такође била инхибирана. Смањен је ниво хормона коре надбубрежне жлезде, а самим тим и смањена функција ХПА осе. Хипофункција ХПА осе је уобичајена карактеристика недостатка бубрега-јанга [20]. Тада пацови показују феномен "исцрпљења" и симптоми су у складу са симптомима недостатка бубрега-јанга на клиници.

У групи МЦ, ниво ЦРХ, АЦТХ, Т и ЦОРТ у серуму пацова значајно се смањио (П< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Модулација пропорције чланова породице Бцл-2 је један од кључних механизама помоћу којих ФасТхФасЛ посредује у путу рецептора смрти, а породица Бцл-2 регулише митохондријски пут [21]. Фактор који инхибира апоптозу Бцл-2 и фактори који индукују апоптозу, као што је Бак, сви припадају породици Бцл-2 [22]. Апоптоза ћелије се може одредити релативним односом фактора који инхибирају апоптозу и фактора који индукују апоптозу [23]. Митохондрије имају функцију централних контролних тачака за многе облике апоптозе [24]. Ова студија је показала да ЦД-МД и ВЦД могу закључити експресију Бак и повећати Бцл-2 напобољшати недостатак бубрега-јанга. Фас је главни рецептор смрти који индукује апоптозу лигацијом са Фас лигандом (ФасЛ) [25]. Експресија Фас и ФасЛ у МЦ групи је порасла, док је ова експресија значајно порасла у групи ВЦД-МД (П< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Недостатак имунолошке функције је једна од важних манифестација дефицита бубрега-јанга [28]. У овој студији смо открили да се индекс слезине и тимуса групе ВЦД-МД значајно опоравио (П< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

ХПА оса је најважнији регулаторни систем јер регулише лучење глукокортикоида и ендокрини систем за одржавање секреторне функције коре надбубрежне жлезде [32]. Прекомерна експресија ЦаМ мРНА у ткиву хипоталамуса била је повезана са недостатком јанга бубрега. ЦД и ВЦД би могли да блокирају калцијумове канале, инхибирају експресију ЦаМ мРНК у хипоталамусу и смање прилив калцијума, смањујући тако активност Ца2+·ЦаМ комплекса.

Формирање недостатка бубрега-јанга је процес развоја хроничне болести. Бубрег више није чисто анатомски појам, већ је општи термин за неуроендокрини имунитет и генитоуринарни систем. Неуроендокрино-имуна (НЕИ) мрежа је важан интегрисани регулаторни систем [33]. ЦД и ВЦД могу регулисати функцију ХПАТ осе и побољшати опоравак од недостатка бубрега-јанга. Овај резултат пружа експерименталну основу за клиничку превенцију и лечење недостатка бубрега-јанга.

ПРИРОДНИ ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ПОБОЉШАЊЕ СЕКСУАЛНЕ ФУНКЦИЈЕ ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%