Студија о методи одређивања садржаја гликозида епифизе и ергостерол гликозида у Цистанцхе Тубулоса

Цистанцхе тубулоса је сува месната стабљика са љускавим листовима која припада роду Цистанцхе из породице Ледацеае. Топле је природе, слатког и сланог укуса, а припада меридијанима бубрега и дебелог црева. Има традиционалне ефекте као што су тонизирање јанга бубрега, хранљива есенција и крв, влажење црева и подстицање пражњења црева и одлагање старења. Познат је као "пустињски гинсенг". Почевши од издања Фармакопеје Народне Републике Кине из 2010, Цистанцхе тубулоса (Сцхренк) Р. Вигхт је додата као једна од статутарних базалних биљака Цистанцхе и наведена је поред Ц. десертицола.

Цистанцхе тубулоса се углавном производи дуж јужне ивице Таримског басена у аутономном региону Ксинђанг Ујгур, расте паразитски на корену биљака Тамарик. То је тренутно примарни извор лековитих материјала Цистанцхе тубулоса на кинеском тржишту, са годишњим учинком од више од 60%. Због све веће оскудице дивљих ресурса, наведена је као заштићена биљка друге класе на Националној листи заштићених дивљих биљака (издање 2021).

Савремена фармаколошка истраживања су показала да је основна фармаколошка супстанца Цистанцхе тубулоса заснована на фенилетаноидним гликозидима (ПхГс), међу којима ехинакозид (Ц35Х46О20) и актеозид/вербаскозид (Ц29Х36О15) имају највећи садржај и најјачу активност за карактеристичне контролне компоненте лека Цистанцхе тубулоса. према кинеској фармакопеји. Према издању Кинеске фармакопеје из 2020., укупна количина ехинакрозида и вербаскозида у сушеном производу Цистанцхе тубулоса не би требало да буде мања од 1,5%, што је много више од стандарда од 0,30% за пустињску Цистанцхе тубулоса. Стога је успостављање тачних, ефикасних и поновљивих метода одређивања садржаја од великог значаја за контролу квалитета, процену порекла, оптимизацију садње и развој производа лековитих материјала Цистанцхе тубулоса.

Ехинозид, главна хемијска компонента Цистанцхе тубулоса

Актеозид, главна хемијска компонента Цистанцхе тубулоса

Хемијске карактеристике гликозида хризантеме шишарке и гликозида ерготамина

хемијска структура

Пинецоне гликозид и ергостерол гликозид су фенилетаноидни гликозиди, чији је основни скелет састављен од фенилетаноидног језгра повезаног гликозидним везама са шећерним групама (обично глукоза и рамноза), а супституисане групе као што су кафеоил хидроксилне групе су уведене. Молекуларна формула ехинакозида је Ц35Х46О20, са релативном молекулском тежином од 786,72. Његова структура садржи једну кофеоил групу, једну глукозну групу и једну рамнозну групу. Молекуларна формула ергостерол гликозида (вербаскозида) је Ц29Х36О15, са релативном молекулском тежином од 624,59. Његова структура је слична пинеалозиду, али му недостаје рамноза и неке супституције кафеоила. Оба су лако растворљива у поларним растварачима као што су метанол, етанол и вода, и имају карактеристичну апсорпцију у ултраљубичастом региону (максимална таласна дужина апсорпције око 330 нм), што пружа теоријску основу за ХПЛЦ-УВ детекцију.

Фармаколошка активност

Гликозид хризантеме шишарке и гликозид ергостерол имају широк спектар фармаколошких активности: (1) антиоксидативни ефекат - уклањањем супероксидних ањона (О2 · -), хидроксилних радикала (· ОХ) и водоник пероксида (Х2О2), активирањем Нрф2/АСХ и повећањем сигналног пута СОД-а, као што је сигнална активност СОД и антиоксидативна активност. Пк; (2) Неуропротективни ефекат – промовисање експресије неуротрофних фактора као што је ГДНФ, који има побољшани ефекат на моделе Алцхајмерове болести и Паркинсонове болести; (3) Ефекти слични хормонима – промовишу експресију ензима повезаних са синтезом тестостерона и побољшавају репродуктивну функцију; (4) Хепатопротективни ефекат – смањење алкохолног оштећења јетре и оксидативног стреса; (5) Антитуморски ефекат – индукује апоптозу ћелија рака једњака кроз митохондријално зависне путеве. Горе наведене активности чине их незаменљивим индикаторским компонентама за процену квалитета Цистанцхе тубулоса.

Ефекти цистанцхе-антитумор

Преглед метода одређивања садржаја

Тренутно, методе за одређивање садржаја гликозида епифизе и ергостерол гликозида у Цистанцхе тубулоса углавном укључују течну хроматографију високих перформанси (ХПЛЦ), течну хроматографију ултра-високих перформанси (УПЛЦ), дигитализацију слике танкослојне хроматографије (ТЛЦ ИмагеЈ) и течну масену хроматографију/МСЛЦ/МСтандемску хроматографију). Међу њима, ХПЛЦ метода је усвојена као законски метод одређивања од стране Кинеске фармакопеје због своје велике популарности опреме, једноставног рада и добре поновљивости, и тренутно је метода која је најчешће пријављивана у литератури. Следеће се фокусира на успостављање система и процес оптимизације ХПЛЦ методе.

Утицај различитог порекла и домаћина на садржај

Разлике у пореклу

Више студија је доследно показало да постоје значајне разлике у садржају ехинакрозида и ергостерола у Цистанцхе тубулоса из различитих региона. Узимајући Ксињианг као пример, разлика у садржају две компоненте у узорцима из места као што су округ Хетиан Моиу, округ Кашгар Јиасхи и град Алар може достићи 2-5 пута. Уопштено говорећи, укупна количина фенилетаноидних гликозида у Цистанцхе тубулоса произведених у области Хотан (посебно у округу Моиу, округу Минфенг и округу Јутиан) је релативно висока, а садржај фенилетаноидних гликозида у неким висококвалитетним узорцима може да достигне 2,5% до 5,0%, што је далеко изнад стандарда харцопо1.5%.

Различити утицаји домаћина

Цистанцхе тубулоса паразитира на коренима различитих биљака из рода Тамарик, а врсте домаћини имају значајан утицај на квалитет лековитих материјала. Цхен ет ал. (2005) су објавили да је садржај фенилетанолне киселине у узорцима паразитираним на Т. талама каненсис генерално већи од садржаја паразитираних на Т. рамосиссима. Поред тога, постоје разлике између дивљих и култивисаних производа. Уопштено говорећи, садржај две компоненте у дивљим производима је већи од оног у гајеним производима, али висококвалитетни култивисани производи такође могу постићи виши ниво оптимизацијом услова садње.

Разлике у спецификацијама и деловима

Спецификације (пречник, дужина) и лековити делови Цистанцхе тубулоса такође имају утицај на њен садржај. Истраживања су показала да је садржај ехинакозида и ергостерола у тањим меснатим стабљикама често већи него у дебљим стабљикама; Садржај у горњем делу стабљике (близу краја цвасти) је обично већи од садржаја у основи. Ово правило даје референцу за избор делова током бербе и прераде лековитог биља.

Упознавање са другим методама мерења

Течна хроматографија ултра високих перформанси (УПЛЦ)

Експеримент са цистанцхе тубулоса

Кликните овде да видите природни додатак у праху екстракта Цистанцхе Тубулоса

【Тражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / ВхатсАпп: 0086 18599088692 / ВеЦхат: 18599088692

УПЛЦ метода користи хроматографску колону са мањом величином честица (као што је Ватерс ХСС Т3, 1,8 μм, 100 × 2,1 мм), брзином протока од 0,3 мЛ/мин, запремином ињекције од само 1 μЛ, а време анализе се може скратити на 10-15 мин. одвојеност и осетљивост. Лианг Јиансонг и др. (2021) успоставио је УПЛЦ метод за истовремено одређивање шест фенилетанолних гликозида, који има широк линеарни опсег и високу стопу опоравка, и погодан је за брзи скрининг великих количина узорака.

ЛЦ-МС/МС метода

Метода тандемске масене спектрометрије течне хроматографије има изузетно високу осетљивост и може истовремено да одреди десетине компоненти у Цистанцхе тубулоса, укључујући ехинакозид, ергостерол гликозид, изоергостерол гликозид и гванозин А. Погодан је за метаболомска истраживања и свеобухватну процену квалитета. Комбинована технологија РПЛЦ-ХИЛИЦ може чак да мери 23 поларне и неполарне компоненте одједном, покривајући опсег садржаја од 5 редова величине.

Онлајн хроматографија растварачем под притиском, микроекстракциона хроматографија са вртложним струјама ХПЛЦ метода

Ова метода спаја екстракцију узорака, пречишћавање и хроматографско одвајање на мрежи, значајно смањујући потрошњу органских растварача и употребу узорка. ЛОК три фенилетанолна гликозида су 0,50 мг/Л (ехинакозид), 0,25 мг/Л (ергостерол гликозид) и 0,38 мг/Л (изоергостерол гликозид), респективно, што је погодно за брзу анализу драгоцених узорака.

ТЛЦ метода дигитализације слике

цистанцхе екстракт праха

На основу софтвера ИмагеЈ, извршена је квантитативна анализа сивих вредности мрља танкослојне хроматографије. Коефицијенти корелације р гликозида хризантеме епифизе, гванозина А, ергостерол гликозида и изоергостерол гликозида били су 0,9974, 0,9931, 0,9923 и 0,9890, респективно, што је било у складу са ХПЛЦ методом. Овај метод је јефтин, једноставан за руковање и погодан за брзи скрининг у основним јединицама и на терену.

дискусију

Кључна питања у оптимизацији хроматографских услова

Избор мобилне фазе је кључан у развоју ХПЛЦ метода. Поређење литературе показује да: (1) систем воденог ацетонитрила је склон да изазове задржавање пика фенилетанолног гликозида, а додавање 0,1% мравље киселине или 1% сирћетне киселине може значајно побољшати облик врха; (2) Ефикасност раздвајања тројног система метанол ацетонитрил сирћетне киселине је супериорнија у односу на бинарни систем чистог метанола или чистог ацетонитрила; (3) Одабир таласне дужине детекције од 330-334 нм може уравнотежити интензитет апсорпције обе компоненте, са нешто већим одговором на 334 нм и мање интерференције од ергостерола на 330 нм. Температура колоне има утицај на време задржавања, али не мења значајно степен раздвајања, са разумним опсегом од 30-35 степени.

Оптимизација метода екстракције

Концентрација растварача, однос чврста и течност, ултразвучна температура и време утичу на ефикасност екстракције. Истраживања су показала да: (1) 50%~80% метанола или етанола могу ефикасно екстраховати обе компоненте гликозида, са нешто већом стопом екстракције од 60%~80% етанола; (2) Однос чврста и течност од 1:30~1:50 (г/мЛ) је довољан за темељну екстракцију; (3) Оптимална комбинација је ултразвучна температура од 50-60 степени и време од 40 мин; (4) Ултразвучна екстракција је супериорнија од рефлукс екстракције, пошто ова друга лако може довести до разградње термоосетљивих фенилетанолних гликозида.

Дискусија о рационалности стандарда фармакопеје

Садашња фармакопеја предвиђа да укупна количина гликозида паеонифлорина и ергостерола у Цистанцхе тубулоса треба да буде већа или једнака 1,5%. Овај стандард је релативно лабав – висококвалитетни узорци из Синђианга обично достижу 3% до 5%, а само неколико узорака ниског квалитета приближава се доњој граници. Неки истраживачи предлажу подизање стандарда на 2,0% до 2,5% како би се боље осигурао квалитет медицинских материјала. Поред тога, фармакопеја користи само две компоненте као индикаторе, док Цистанцхе тубулоса такође садржи различите активне фенилетанолне гликозиде као што су гванозин А, изоергостерол гликозиди и хесперидин. Свеобухватна евалуација са више индикатора је будући правац развоја.

Предлози за избор метода

За контролу квалитета општих медицинских материјала и свакодневну контролу квалитета производње препоручује се употреба фармакопејске ХПЛЦ методе. Метода је зрела, захтеви за опремом су ниски, а резултати су веома упоредиви. За скрининг узорака великих размера или анализу драгоцених узорака, УПЛЦ или онлајн ПЛМЕ-ТФЦ-ХПЛЦ методе су ефикасније. Метода ЛЦ-МС/МС класификације је пожељна метода за дубинску процену квалитета и идентификацију сорте. Метода ТЛЦ слике је погодна за брзи почетни скрининг на основном нивоу. Истраживачи треба да праве разумне изборе на основу стварних потреба.

цистанцхе екстракт праха

Закључак

У овом чланку систематски се обрађује ХПЛЦ метода за одређивање садржаја ехинакозида и ергостерола у Цистанцхе тубулоса. Овај метод је потврђен мултидимензионалном методологијом и има карактеристике широког линеарног опсега (р веће или једнако 0,999), добре прецизности (РСД<3%), high accuracy (recovery rate 95.7%~100.7%), and easy operation, fully meeting the quality control requirements of the Chinese Pharmacopoeia for Cistanche tubulosa.

Свеобухватна анализа показује да: (1) садржај гликозида епифизе у Цистанцхе тубулоса је обично 3-8 пута већи од ергостерол гликозида, а укупна количина ова два варира у зависности од места порекла, домаћина, величине и локације; (2) Укупна количина фенилетанолне киселине у висококвалитетним узорцима из Хотана, Ксињианг може достићи 2-3 пута или више од стандарда фармакопеје; (3) Нове технологије као што су УПЛЦ и ЛЦ-МС/МС пружају моћне алате за вишекомпонентно синхроно одређивање и дубоку процену квалитета.

Будућа истраживања би требало да се фокусирају на: (1) успостављање система за процену квалитета са више индекса који покрива више фенилетаноидних гликозида; (2) темељно истраживање свеобухватног утицаја средине за садњу, периода бербе домаћина и метода обраде на садржај; (3) промовисање стандардизације читавог индустријског ланца Гуанхуа Цистанцхе од лековитог биља до здраве хране и козметичких сировина.

Референце

[1] ХПЛЦ метода супе маховине за одређивање садржаја ехинакозида и ерготамина у Гуанхуа Роуцонг Куи [Ј]. Кинески фармацеут, 2009, 12 (8): 1061-1063

[2] Цхен М, Ксиао СП, Цуи ГХ, ет ал. Одређивање ехинакозида и актеозида у биљкама Цистанцхе тубулоса[Ј]. Цхина Јоурнал оф Цхинесе Материа Медица, 2005, 30(11): 839-841.

[3] Баошан, Ју Аихуа, Сјао Жибин. Одређивање садржаја ехинакозида и ерготамина у Гуанхуа Роуцонг Куи [Ј]. Преглед кинеске медицине, 2017, 23 (19): 39-40, 44

[4] Лианг Јиансонг, Ксуе Цуили, Ву Менгхуа, итд. Одређивање садржаја УПЛЦ-а и хемометријска процена шест фенилетаноидних гликозида у Роуцонг Куи и Схацонг Куи [Ј]. Јоурнал оф Пхармацеутицал Аналисис, 2021, 41 (2): 226-235

[5] Комитет за фармакопеју Народне Републике Кине Фармакопеја Народне Републике Кине (издање 2020., том 1) [С]. Пекинг: Цхина Медицал Сциенце анд Тецхнологи Пресс, 2020: 148-149

[6] Зханг Леихонг, Ду Ниансхенг, Ванг Кинг, итд. Одређивање садржаја ехинохлорина у капсулама Роуцонгкуи укупних гликозида помоћу ХПЛЦ [Ј]. Нортхвест Пхармацеутицал Јоурнал, 2002, 17 (1): 3-4

[7] Ју Аихуа, Ао Герилету, Зхоу Каи Одређивање садржаја ехинакозида и ерготамина у сланом месу и сунцокрету из Унутрашње Монголије [Ј]. Кинески часопис традиционалне кинеске медицине, 2011, 26 (1): 178-180

[8] Сонг Пенг, Ту Пенгфеи. Напредак истраживања о контроли квалитета и евалуацији традиционалне кинеске медицине Роуцонгкуи [Ј]. Северна апотека, 2011, 8 (2): 45-47

[9] Гуо Динђу, Сјао Ђинглеи. Напредак у контроли квалитета и истраживању биолошке активности функционалних компоненти у Роуцонгкуи [Ј]. Јилин традиционална кинеска медицина, 2023, 43 (7): 856-860

[10] Лу Иингхуи, Пи Венмин, Зханг Иуе, итд. Упоредна студија и анализа стања тржишта Роуцонг Куија и Гуанхуа Роуцонг Куија [Ј]. Модерна кинеска медицина, 2019, 21 (8): 1105-1110

[11] Стандард Националног комитета за фармакопеју за грануле формуле Роуцонгкуи (Гуанхуа Роуцонгкуи) [С]. Пекинг: Цхина Медицал Сциенце анд Тецхнологи Пресс, 2021

[12] Фу Ц, Ли Ј, Аипире А, ет ал. Цистанцхе тубулоса фенилетаноидни гликозиди индукују апоптозу у Еца-109 ћелијама путем пута који зависи од митохондрија [Ј]. Онколошка писма, 2019, 17(2): 1883-1892.

[13] Ксу Мингјун, Анализа квалитета чекања и свеобухватна процена пустињског месног сунцокрета из различитих региона у Кини [Ј]. Наука и технологија прехрамбене индустрије, 2022, 43 (15): 312-320

[14] Сестра Хао, Цхен Сумеи, Иан Донгхаи, итд. Напредак истраживања о примени Роуцонгкуи у козметици [Ј]. Јоурнал оф Даили Цхемицал Сциенце, 2021, 44 (9): 28-33

[15] Хоу Ји, Ванг Бо, Ли Гуангхуи, итд. Напредак истраживања и статус индустријализације Роуцонгкуија [Ј]. Схандонг Агрицултурал Сциенце, 2020, 52 (12): 147-154