Трајни цитотоксични одговор мононуклеарних ћелија периферне крви невакцинисаних особа примљених на интензивну интензивну негу због критичног ЦОВИД-а-19 је од суштинског значаја да би се избегао фатални исход

Апстрактан: Главни циљ ове студије је био да се утврди утицај цитотоксичне активности мононуклеарних ћелија периферне крви (ПБМЦ) на исход невакцинисаних појединаца са критичним ЦОВИД-19 примљеним на интензивну негу. Узорци крви од 23 особе су прикупљени по пријему, а затим сваке 2 недеље током 13 недеља до смрти (Екитус група) (н=13) или отпуста (група за преживљавање) (н=10). Нисмо пронашли значајне разлике између група у социодемографским, клиничким или биохемијским подацима које би могле утицати на фатални исход. Међутим, директна ћелијска цитотоксичност ПБМЦ од појединаца Екитус групе против псеудотипова САРС-ЦоВ-2-заражених Веро Е6 ћелија значајно је смањена по пријему (-2.69- пута; п=0. 0234) и након 4 недеље на интензивној нези (−5.58- пута; п=0.0290), у поређењу са појединцима који су преживели, и није се побољшало током хоспитализације. Ин витро, третман са ИЛ-15 ових ћелија није повратио ефективну цитотоксичност ни у једном тренутку све до фаталног исхода, а повећана експресија маркера имуне исцрпљености примећена је у НКТ, ЦД4+ и ЦД 8+ Т ћелије. Међутим, ИЛ-15 третман ПБМЦ од појединаца групе Сурвивал значајно је повећао цитотоксичност у 4. недељи (6.18- пута; п=0.0303). Сходно томе, имуномодулаторни третмани који могу да превазиђу исцрпљеност имунитета и индукују трајну, ефикасну цитотоксичну активност могу бити од суштинског значаја за преживљавање током хоспитализације због критичног ЦОВИД-а-19.

Кључне речи: САРС-ЦоВ-2; ЦОВИД-19; Имуни одговор; цитотоксични одговор; ИЛ-15

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

1. Представљање

Неколико случајева атипичне вирусне пнеумоније повезане са избијањем заразе на пијаци морских плодова у граду Вухан (провинција Хубеи, Кина) откривено је у децембру 2019. Нови коронавирус назван тешки акутни респираторни синдром коронавирус 2 (САРС-ЦоВ-2) брзо проширио широм света изазивајући пандемију болести корона вируса 2019 (ЦОВИД-19) [1]. Од тада је широм света пријављено око 626 милиона случајева ЦОВИД-19 и 6,5 милиона повезаних смртних случајева (ажурирано октобра 2022) [2]. Различити фактори ризика и коморбидитети могу утицати на напредовање ЦОВИД-19 међу појединцима, што је утицало на поређење клиничких података између погођених земаља од почетка пандемије [3]. Међутим, утврђено је да клиничке манифестације ЦОВИД-19 могу да варирају од асимптоматске инфекције до синдрома акутног респираторног дистреса (АРДС) [4]. Међу различитим факторима ризика који су били повезани са већом вероватноћом развоја тешког облика ЦОВИД-19 су старост, мушки пол и претходни коморбидитети као што су дијабетес, хипертензија и/или гојазност [5,6]. Тешки и критични ЦОВИД-19 је такође повезан са цитопенијом, углавном ЦД4+ Т лимфоцита, као и са прекомерном исцрпљеношћу природних убица (НК) и ЦД8+ Т ћелија, које доводи до имунокомпромитованог стања које није у стању да избрише инфекцију, поред развоја озбиљних компликација као што су цитокинска олуја и тромботични догађаји [7]. Главни узрок развоја тешког облика болести и смрти код пацијената са ЦОВИД-19 сматра се прекомерним инфламаторним одговором који може да подстакне развој шока и/или хиперцитокинемије са мултиорганском дисфункцијом [4]. Овај синдром је познат као цитокинска олуја [8] и сличан је болести хемофагоцитне лимфохистиоцитозе (сХЛХ), која се састоји од стања хиперинфламације изазване вирусном инфекцијом [9,10]. То може бити повезано са чињеницом да САРС-ЦоВ-2 користи рецептор ензима који конвертује ангиотензин 2 (АЦЕ2) да инфицира циљне ћелије. Везивање САРС-ЦоВ-2 за АЦЕ2 рецептор, који је широко експримиран у ћелијама различитих ткива [11], доводи до повећања ангиотензина ИИ, који активира нуклеарни фактор-κБ (НФ-κБ). Активација овог есенцијалног фактора транскрипције стимулише експресију проинфламаторних цитокина, хемокина и адхезионих молекула [12]. Упркос овом прекомерном инфламаторном одговору, чини се да је неефикасно очистити инфекцију и, услед активације Т-ћелија, може се завршити апоптозом [13]. Ова цитокинска олуја може бити одговорна за лимфопенију [12,14], као и за смањење нивоа НК и ЦД8+ Т ћелија са исцрпљеним фенотипом и повећаном експресијом инхибиторних рецептора као што је НКГ2А у НК ћелијама и ПД{{47 }} у ЦД8+ Т ћелијама [15,16]. Штавише, експресија маркера дегранулације као што је ЦД107а је обично смањена на површини ових ћелија [15], што доказује постојање оштећења у капацитету да се елиминишу заражене ћелије код особа са тешким и критичним ЦОВИД-19 [17 ]. Упркос брзом глобалном одговору на развој и примену ефикасних вакцина, појава нових варијанти које могу да побегну од имуног одговора изазваног вакцином резултирала је брзим падом заштите од симптоматске болести [18]. Сходно томе, неопходно је наставити истраживање за ефикасне терапије против ЦОВИД-19. Неколико третмана је тестирано да побољша статус појединаца хоспитализованих због тешке и критичне болести, али није доказано да је ниједан специфичан за елиминисање заражених ћелија или смањење стопе инфекције [15,19]. Стога је супортивна терапија као што је терапија кисеоником и течношћу и даље међу најважнијим стратегијама које се примењују у лечењу ових особа [2,4,16,20]. Неспецифични третмани као што су кортикостероиди такође су били корисни за контролу и смањење претераног инфламаторног одговора [21,22]. Недавно је ФДА одобрила неколико лекова за лечење особа са благим до умереним ЦОВИД-19, као што су молнупиравир, нирматрелвир и ритонавир, али само у хитним случајевима за оне особе са високим ризиком да напредује до тешке болести [23–26]. Молнупиравир показује антивирусну активност широког спектра због своје способности да индукује мутагенезу РНК интерференцијом са неколико вирусних РНК зависних РНК полимераза (РдРп), укључујући РдРп који користи САРС-ЦоВ-2 за репликацију и транскрипцију свог РНК геном [27]. Такође је доказано да комбинација нирматрелвира и ритонавира може да заустави ширење инфекције на животињским моделима инхибицијом главне вирусне протеазе 3ЦЛпро САРС-ЦоВ-2- 2 [28]. Међутим, ови антивирусни лекови се морају примењивати заједно са другим мерама као што су вакцине да би се покренуо снажан цитотоксични имуни одговор који може да елиминише инфициране ћелије. Већина ћелија са цитотоксичном активношћу, као што су ЦД8+ Т лимфоцити и НК и НКТ ћелије, захтевају присуство интерлеукина-15 (ИЛ-15) за своју функцију и хомеостатску регулацију [29]. ИЛ-15 активира ЦД8+ Т ћелије за њихову активацију специфичним антигенима и такође побољшава цитотоксичност и пролиферацију НК ћелија. Према томе, ИЛ-15 може побољшати и урођени и адаптивни ћелијски имуни одговор против инфицираних ћелија [22,25]. ИЛ-15 такође спречава апоптозу НК и Т ћелија тако што повећава регулацију анти-апоптотичких фактора као што је Бцл-2 и смањује про-апоптотичке факторе као што је ГСК-3 [26], чиме се избегава цитопенија. Сходно томе, ИЛ-15 је предложен као нови имуномодулаторни цитокин у имунотерапији канцера и сматран је помоћним средством у режимима вакцине [26,30]. Клиничка испитивања фазе 1 са хуманим болусом ив инфузије ИЛ-15 (рхИЛ-15) или ИЛ{101}} суперагониста Н-803 су показала да овај цитокин може изазвати значајну експанзију и/или активацију ЦД4+, ЦД8+ и НК ефекторских ћелија ин виво, па је стога примењен за лечење рака или вирусних инфекција као што је ХИВ [31–35]. Због тога, употреба имуномодулаторних агенаса као што је ИЛ-15 који могу да поврате цитотоксичну активност код особа хоспитализованих због критичног ЦОВИД-а{108}} може бити корисна за уклањање вируса из организма. У овој опсервационој, лонгитудиналној студији, окарактерисали смо еволуцију цитотоксичног имуног одговора на САРС-ЦоВ-2 у мононуклеарним ћелијама периферне крви (ПБМЦ) изолованим од особа са дијагнозом ЦОВИД{111}} које су примљене на интензивну јединице за негу (ИТУ) због тешких компликација, као и утицаја овог одговора на крајњи исход у поређењу са другим битним факторима ризика. Такође смо проценили капацитет ових ћелија да реагују на третман са ИЛ-15 и побољшају њихов цитотоксични антивирусни одговор. Резултати добијени у овој студији могу допринети бољем разумевању улоге цитотоксичног одговора у фаталном исходу ЦОВИД-19 и напредовању ка развоју ефикасних имуномодулаторних третмана који промовишу уклањање вируса.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Енханце Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

2. Материјал и методе

2.1. Студијски предмети

За ову студију су регрутоване 23 особе са критичним ЦОВИД-19 које су примљене у Интензивну негу болнице Университарио Рамон и Цајал (Мадрид, Шпанија) од октобра 2020. до априла 2021. године. Овај период је обухватио и други и трећи талас пандемије ЦОВИД-19 у Шпанији (од јуна до децембра 2020. и од децембра 2020. до марта 2021.). Учесници су насумично регрутовани након хоспитализације према следећим критеријумима: овлашћење информисаног писменог или усменог пристанка за учешће у студији, хоспитализовани на интензивној нези због критичног ЦОВИД-19, позитиван САРС-ЦоВ-2 РТ-кПЦР тест у назофарингеалном размазу обављен на пријему у болницу према интерним валидираним протоколима, старији од 18 година и невакцинисани против САРС-ЦоВ-2 у време инфекције. Узорци периферне крви и клинички подаци прикупљани су сваке 2 недеље, укупно 13 недеља, а узорци крви су обрађени и криоконзервирани до тренутка анализе. Овај период је израчунат узимајући у обзир да је дужина боравка у болници у Шпанији током првих таласа пандемије процењена на 35 дана у просеку [36], тако да смо могли да обавимо најмање два комплетна круга регрутовања и праћења. После 13 недеља, учесници су подељени у две групе према коначном исходу: фатални исход (н=13), од сада Екитус; или отпуст из болнице (н=10), од сада Преживљавање.

2.2. Етичка изјава

Појединци који су учествовали у овој студији су регрутовани из болнице Университарио Рамон и Цајал (Мадрид, Шпанија). Сви су дали информирани писмени пристанак да учествују у студији или су свједочили усмени пристанак уз писмену сагласност представника да би избјегли руковање контаминираним документима. Важећи шпански и европски закони о заштити података обезбедили су поверљивост и анонимност свих учесника. Протокол за ову студију (ЦЕИ ПИ 32_2020-в2) је припремљен у складу са Хелсиншком декларацијом и претходно прегледан и одобрен од стране Етичких комитета Институто де Салуд Царлос ИИИ (ИРБ ИОРГ0006384) и болнице која учествује.

2.3. Ћелије

Пет милилитара пуне крви је сакупљено у ЕДТА Вацутаинер епрувете (Бецтон Дицкинсон, Мадрид, Шпанија) и одмах обрађено да би се изоловали ПМБЦ и плазма центрифугирањем са градијентом густине Фицолл-Хипакуе (Пхармациа Цорпоратион, Нортх Пеапацк, Њ, САД), а затим су криоконзервирано до анализе. Вијабилност ћелија након одмрзавања је процењена оптичком микроскопијом и проточном цитометријом. Веро Е6 (бубрег афричког зеленог мајмуна) ћелијску линију (ЕЦАЦЦ 85020206) је љубазно обезбедио др Антонио Алцами (ЦБМ Северо Оцхоа, Мадрид, Шпанија), а ове ћелије су узгајане у ДМЕМ са додатком 10% ФЦС, 2 мМ Л- глутамин, и 100 јединица/мЛ пеницилина и стрептомицина (Лонза, Базел, Швајцарска).

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

2.4. Псеудотипни тест инфекције САРС-ЦоВ-2

Цитотоксична активност против САРС-ЦоВ-2 ПБМЦ-а учесника је анализирана коришћењем Веро Е6 ћелија инфицираних једноциклусним псеудотипизованим вирусом пНЛ4-3∆енв_САРС ЦоВ-2-С ∆19(Г614)_Рен. Овај вирус кодира САРС-ЦоВ-2 шиљасти гликопротеин са мутацијом Д614Г унутар ХИВ-1 генома, као и ген Ренилла луциферазе генерисан као што је претходно описано [37,38]. Варијанте САРС-ЦоВ-2 које садрже мутацију Д614Г у протеину спике (С) почеле су да круже рано у пандемији и постале су брзо доминантне у многим регионима [39,40]. Укратко, монослој Веро Е6 био је инфициран са пНЛ4-3∆енв_ САРС-ЦоВ-2-С∆19(Г614)_Рен (100 нг п24 Гаг/бунар ) током 48 х. Затим су ћелије испране и заједно култивисане 1 х са ПБМЦ од учесника (однос 1:1), претходно третиране или не са ИЛ-15 (13 нг/мЛ) током 48 х. Доза ИЛ-15 коришћена за ову студију је одабрана, узимајући у обзир претходно описану дозу која изазива највећи ефекат на пролиферацију НК (10–25 нг/мЛ) [41], као и преференцијално проширење цитотоксичности меморије. ЦД8+ Т ћелије (мање или једнако 5 нг/мЛ) [42]. Цитотоксична активност ПБМЦ на монослоју Веро Е6 одређена је након уклањања супернатанта са ћелијама у суспензији и дисоцијације Веро Е6 ћелија са плоче раствором трипсин-ЕДТА (Сигма Алдрицх-Мерцк, Дармстадт, Немачка) и накнадна квантификација активности каспазе-3 у одвојеним ћелијама луминисценцијом коришћењем система за анализу Цаспасе-Гло 3/7 (Промега, Мадисон, ВИ, САД). Да би се утврдило које популације цитотоксичних ћелија су одговорне за ову активност, ПБМЦ су сакупљени из супернатанта и затим анализирани проточном цитометријом.

2.5. Анализа проточне цитометрије

За бојење маркера фенотипизације површине ћелије, коришћена су следећа коњугована антитела: ЦД{{0}}ПЕ, ЦД8-АПЦ-Х7, ЦД56-ФИТЦ и ЦД1{{24 }}7а-ПЕ-Ци7, купљен од БД Биосциенцес (Сан Хозе, Калифорнија, САД). За бојење маркера исцрпљености коришћена су следећа коњугована антитела: ЦД3-БВ510, ЦД8-АПЦ-Х7, ЦД56-ФИТЦ и ПД1-БВ650, купљена од БД Биосциенцес, као и ЦД4-ПЕ, купљен од Иммуностеп СЛ (Саламанка, Шпанија) и ТИГИТ-АлекаФлуор700 купљен од Тхермо Фисхер-а (Валтхам, МА, САД). Узорци су узети коришћењем БД ЛСРФортесса Кс-20 проточног цитометра са софтвером ФАЦС Дива в 6.0 (БД Биосциенцес, Франклин Лакес, Њ, САД), а затим анализирани коришћењем ФловЈо софтвера в10.0.7 (Трее Стар Инц., Асхланд, ОР , САД).

2.6. Откривање САРС-ЦоВ-2 РНАемије

Укупна РНК је екстрахована из узорака плазме користећи КИАамп МинЕлуте Вирус Кит (Киаген Ибериа, Мадрид, Шпанија) у аутоматизованом екстрактору КИАцубе (Киаген, Хилден, Немачка). САРС-ЦоВ-2 РНА детекција је извршена РТ-кПЦР тестом са циљевима у генима омотача (Е) и нуклеокапсида (Н), као што је претходно описано [43], што је део Привремених смерница Светског здравља Организација (СЗО) за дијагностичко тестирање САРС-ЦоВ- 2 [44]. Узорци су сматрани позитивним за анализу када је вредност циклуса квантификације (Цк) била испод 45 циклуса.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

2.7. Статистичка анализа

Све статистичке анализе и графике су обављене коришћењем софтвера ГрапхПад Присм верзије 8.4.3 (ГрапхПад Софтваре Инц., Сан Дијего, Калифорнија, САД). Групна поређења су обављена коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, Вилцокон-овог теста рангирања подударних парова, једносмерног АНОВА и Тукеи-овог теста вишеструких поређења. Фишеров егзактни тест је коришћен за процену разлика у клиничким карактеристикама између две групе. Вредности п < 0.{{10}}5 (двострано) сматране су статистички значајним. Средња вредност и стандардна девијација коришћени су за израчунавање Цохенове д статистике коришћењем калкулатора величине Екцел ефекта [45]. Величина ефекта од 0,2, 0,5, 0,8 или већа од или једнака 1,2 била је индикација мале, средње, велике и веома велике величине ефекта, респективно [46].

3. Резултати

3.1. Карактеристике учесника

Ова опсервациона, лонгитудинална студија обухватила је 23 пацијента са дијагнозом ЦОВИД-19 који су примљени на интензивну терапију због тешких компликација. Узорци крви су прикупљани сваке 2 недеље током укупно 13 недеља или до коначног исхода. Није пријављено да ниједан од учесника у овој студији није вакцинисан против ЦОВИД-19 у време инфекције и хоспитализације. Главне социодемографске и клиничке карактеристике свих учесника сумиране су у табели 1.

Табела 1. Демографски и клинички подаци свих учесника из групе Екитус и Сурвивал групе који су ангажовани за ову студију.

Средња старост Екитус групе била је 65.0 година (ИКР 62.0–69.0), док је средња старост групе за преживљавање била 63.{7} } година (ИКР 59.0–68,5). Већина учесника (73,9%) били су мушкарци, а 65,2% је имало најмање један коморбидитет. Главни коморбидитети су били дислипидемија (52,2%), хипертензија (39,1%) и дијабетес мелитус (26,1%). Већина пацијената је примала кортикоиде (82,6%), антибиотике (82,6%) и антикоагулансе (82,6%) као стандардни третман. Такође су примали друге третмане као што су тоцилизумаб (17,4%) и ремдесивир (8,7%). Најчешћи знаци и симптоми били су пнеумонија (100%), кашаљ и искашљавање (87.0%), диспнеја (87,0%) и грозница (87,0%). Током боравка на интензивној инвазивној механичкој вентилацији било је потребно 12 пацијената (92,3%) из Екитус групе и 10 пацијената (100%) из групе Сурвивал. Нисмо пронашли значајне разлике између обе групе у социодемографским и клиничким подацима. Такође смо анализирали биохемијске податке крви на почетку (први узорак) између обе групе и нисмо нашли значајне разлике ни између група. Детаљније информације о клиничким подацима, хоспитализацији и подацима о биохемији крви сваког учесника приказане су у додатним табелама С1 и С2.

3.2. Дужина боравка у болници и интензивне неге

Просечна дужина боравка у болници била је 59.0 (ИКР 36.0–100.0) дана у Екитус групи и 73. 0 (ИКР 44,5–90.{{20}}) дана у групи за преживљавање (Слика 1А). Просечна дужина боравка у интензивној нези износила је 49,0 (ИКР 25,5–82,0) дана у Екитус групи и 44,0 (ИКР 25,0–66,5) дана у групи Сурвивал (Слика 1Б). Нису нађене значајне разлике у овим параметрима између обе групе.

Слика 1. Дужина боравка у болници и на интензивној нези. Дужина боравка у болници (А) и интензивне неге (Б) (дани) код особа са критичним ЦОВИД-19 које су према коначном исходу подељене у две групе: фатални исход, Екитус група (попуњене тачке); или опоравак и отпуст из болнице, група за преживљавање (празне тачке). Свака тачка одговара једној особи, а вертикалне линије представљају средњу вредност ± стандардну грешку средње вредности (СЕМ). Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста.

3.3. Нивои лимфоцита периферне крви

Особе из групе Екитус су показале лимфопенију (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Слика 2. Број лимфоцита у периферној крви током хоспитализације због критичног ЦОВИД-19. Број лимфоцита (ћелије/мм3) одређиван је сваке 2 недеље током укупно 13 недеља или до коначног исхода у узорцима крви учесника Екитус (попуњене тачке) и Сурвивал (празне тачке) група. Праг за лимфопенију је приказан на 1000 ћелија/мм3 испрекиданом линијом. Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група коришћен је Вилцокон У-тест.

3.4. Цитотоксична активност ПБМЦ против ћелија Веро Е6 заражених псеудотипизираним САРС-ЦоВ-2

Процењивали смо цитотоксичну активност ПБМЦ хоспитализованих пацијената у лонгитудиналним узорцима квантификацијом активације каспазе-3 у монослоју Веро Е6 ћелија инфицираних псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2 након ко-културе у трајању од 1 х ( однос 1:1). Цитотоксични капацитет ПБМЦ изолованих од особа Екитус групе није се значајно променио током хоспитализације и остао је стабилно низак до фаталног исхода (Слика 3). Ова цитотоксична активност се није значајно повећала када су ове ћелије стимулисане ИЛ-15 током 48 х. У групи Сурвивал, цитотоксична активност ПБМЦ је повећана 2.69-пута (п=0.0234; Цохен'с д=1.12) у базалном узорку (т {{17} }) у поређењу са Екитус групом, и стално се повећавао до 6. недеље хоспитализације. Ово повећање је показало статистички значај у поређењу између група у 4. недељи (5.58- пута; п=0.0290; Цохен-ов д=1.28). Од 6. недеље надаље, цитотоксична активност се смањивала у групи за преживљавање до отпуста из болнице, што је било у складу са смањењем броја лимфоцита у истој недељи хоспитализације (видети слику 2). Третман ИЛ-15 повећао је 2.30-пута у просеку цитотоксичну активност ПБМЦ појединаца из групе Сурвивал у свим узорцима током праћења. После 4 недеље хоспитализације, ИЛ-15-индукована цитотоксична активност је повећана 618- пута (п=0.0303; Цохен'с д=1.05) у ПБМЦ-има појединци из групе Опстанак.

Слика 3. Директна ћелијска цитотоксичност ПБМЦ изолованих од хоспитализованих пацијената са критичним ЦОВИД-19. Цитотоксични капацитет ПБМЦ од појединаца група Екитус (попуњене тачке) и Сурвивал (празне тачке) мерен је квантификацијом активности каспазе-3 у монослоју Веро Е6 ћелија инфицираних псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2 након ко-културе (1:1) током 1 х у базалним условима (сиве линије) или након третмана са ИЛ-15 током 48 х (црне линије). Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група коришћен је Вилцокон У-тест.

3.5. Нивои НК и НКТ ћелија

Нивои ћелија са цитотоксичним фенотиповима анализирани су у ПБМЦ-овима који су заједно култивисани са Веро Е6 ћелијама инфицираним псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2. Нисмо пронашли значајне разлике између нивоа ћелија са НК фенотипом (ЦД3-ЦД56+) између обе групе појединаца, чак ни након третмана са ИЛ-15 (слика 4А). Експресија маркера дегранулације ЦД107а на површини ових ћелија остала је непромењена код особа из Екитус групе. Иако се овај израз стално повећавао од 4. недеље до отпуста из болнице у групи Сурвивал, ова разлика није постигла статистички значај у поређењу са Екитус групом (Слика 4Б). Третман са ИЛ-15 није значајно модификовао експресију ЦД107а у овим ћелијама. Од 4. недеље, ПБМЦ из појединаца обе групе су показали повећање нивоа ћелија са НКТ фенотипом (ЦД3+ЦД56+) који је био 4.17-пут више у ПБМЦ-овима из појединци Екитус групе у 6. недељи, иако ова разлика није постигла значај (п=0.0571; Цохенов д=3.15) (Слика 5А). Ово повећање је било нешто веће када су ћелије третиране ИЛ-15 у обе групе, иако ни подаци нису достигли статистички значај (Слика 5А). Експресија ЦД107а се није значајно променила између обе групе или после третмана са ИЛ-15 (Слика 5Б).

Слика 4. Нивои НК ћелија у ПБМЦ од појединаца хоспитализованих са критичним ЦОВИД-19. (А) Укупни нивои НК ћелија (ЦД3-ЦД56+) и (Б) експресија дегранулационог маркера ЦД107а у овим ћелијама процењени су у ПБМЦ у базалним условима (сиве линије) или након третмана са ИЛ-15 током 48 х (црне линије) након ко-културе (1:1) са Веро Е6 ћелијама инфицираним псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2 током 1 х. Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група коришћен је Вилцокон У-тест.

Слика 5. Нивои НКТ ћелија у ПБМЦ од појединаца хоспитализованих са критичним ЦОВИД-19. Укупни нивои НКТ ћелија (ЦД3+ЦД56+) (А) и експресија маркера дегранулације ЦД107а у овим ћелијама (Б) процењени су у базалним условима (сиве линије) или након третмана са ИЛ{ {5}} 48 х (црне линије) након ко-културе (1:1) током 1 х са Веро Е6 ћелијама инфицираним псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2. Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група коришћен је Вилцокон У-тест.

3.6. Нивои ЦД8+ Т ћелија

Број ЦД8 је повећан 2.07- пута (п=0.0409; Цохен-ов д=0.94) у базалном узорку (т=0) Екитус групе у поређењу са групом за преживљавање, а ови нивои су остали стабилни до фаталног исхода (слика 6А). ИЛ-15 није произвео значајан повољан ефекат на нивое ове ћелијске популације. У групи Сурвивал, ЦД8+ Т ћелије су у просеку смањене 1.51-пут у поређењу са Екитус групом (слика 6А). Експресија ЦД107а је смањена 1.53-пут (п=0.0313) у 4. недељи у ЦД8+ Т ћелијама код јединки Екитус групе и остала је непромењена до фаталног исход. Третман са ИЛ-15 показао је благу корист у експресији овог маркера дегранулације, али ова разлика није била значајна (Слика 6Б). У групи Сурвивал, такође је дошло до смањења експресије ЦД107а у ЦД8+ Т ћелијама у 4. недељи, а затим је дошло до повећања даље, али није постигнут значај пре или после третмана са ИЛ{{26 }} (слика 6Б).

Слика 6. Нивои ЦД8+ Т ћелија у ПБМЦ од појединаца хоспитализованих са критичним ЦОВИД-19. (А) Укупни нивои ЦД8+ Т ћелија (ЦД3+ЦД8+) и (Б) експресија дегранулационог маркера ЦД107а у овим ћелијама процењена је у ПБМЦ у базалним условима (сива линије) или након третмана са ИЛ-15 током 48 х (црне линије) након ко-културе (1:1) са Веро Е6 ћелијама инфицираним псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2 током 1 х. Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група коришћен је Вилцокон У-тест.

3.7. Нивои маркера исцрпљености

Нивои експресије маркера имуне исцрпљености ПД-1 (програмирани протеин ћелијске смрти) и ТИГИТ (Т ћелијски имунорецептор са Иг и ИТИМ доменима) анализирани су проточном цитометријом у ЦД4+ Т ћелијама и цитотоксичним ћелијама из свим учесницима. Анализирани су узорци добијени у време пријема у болницу (т=0) до 6. недеље хоспитализације, због недостатка узорака доступних након овог времена. ЦД4+ и ЦД8+ Т ћелије појединаца Екитус групе показале су нивое ПД-1 који су значајно повећани за 1,72 (п=0.0095; Цохен-ов д {{ 11}}.87)- и 2.92- пута (п=0.0317; Цохен'с д=2.07) после 4 недеље хоспитализације, респективно, у поређењу са појединцима из Група за преживљавање (слика 7А, Б, леви графикони). У НКТ ћелијама, нивои ТИГИТ су значајно порасли од тренутка пријема у болницу до 6 недеља хоспитализације код особа из Екитус групе, а ови нивои су повећани 1.76-пут (п=0.0357 ; Цохен'с д=0.33) након 2 недеље хоспитализације, у поређењу са групом за преживљавање (Слика 7Ц, десни графикон).

Нису примећене значајне разлике између група у нивоима експресије ових маркера исцрпљености у НК ћелијама (Слика 7Д).

Слика 7. Нивои експресије маркера исцрпљености у ПБМЦ-овима од појединаца хоспитализованих са критичним ЦОВИД-19. Нивои експресије ПД-1 и ТИГИТ у ЦД4+ Т ћелијама (А), ЦД8+ Т ћелијама (Б), НКТ ћелијама (Ц) и НК ћелијама (Д). Свака тачка одговара средњој вредности података, а вертикалне линије представљају СЕМ. Статистичка значајност између група израчуната је коришћењем Манн–Вхитнеи У-теста, а унутар група је коришћена АНОВА.

3.8. Квантификација САРС-ЦоВ-2 РНАемије у плазми

Присуство РНК из САРС-ЦоВ-2 је анализирано у плазми свих индивидуа у базалном узорку (т=0), и нису добијени позитивни резултати ни код једног учесника, са вредностима Цк испод границе позитивне детекције од 45 циклуса.

4. Дискусија

САРС-ЦоВ-2 инфекција може изазвати неколико клиничких приказа ЦОВИД-19 које се крећу од асимптоматске инфекције до тешке, критичне или чак фаталне болести [4]. Иако је општа вакцинација становништва у великој мери смањила тешке облике болести, појава нових варијанти САРС-ЦоВ-2 повећава број особа које развију критични ЦОВИД-19 и треба да буду хоспитализовани због продорних инфекција [47,48]. Због тога је и даље приоритет развијање превентивних и терапијских стратегија које могу да избегну развој критичних облика ЦОВИД-19 и фаталних исхода код хоспитализованих пацијената. Описано је да старији људи са коморбидитетом представљају већи ризик од развоја тешког и критичног ЦОВИД{{1{{30}}}} [49]. У Шпанији, најзначајнији независни предиктори смрти од ЦОВИД-19 су мушкарци старији од 50 година са удруженим коморбидитетима као што су хипертензија и дијабетес [36]. У нашем истраживању, већина учесника обе групе је приказала ове карактеристике, без значајних разлика међу њима у социодемографским, клиничким или биохемијским подацима који могу утицати на тежину болести или фатални исход. У ствари, обе групе су показале повећане нивое биохемијских параметара који су повезани са већим ризиком од лошег исхода ЦОВИД-19, као што су Ц-реактивни протеин (ЦРП) и лактат дехидрогеназа (ЛДХ) [50–56 ]. С друге стране, иако је пријављено да особе са тешким ЦОВИД-19 могу имати САРС-ЦоВ-2 РНАнемију [54], која је повезана са повећаним ризиком од смртности [55], ниједан од учесника наше студије није представио детектабилну РНК у серуму, тако да нисмо могли да установимо корелацију између детектабилне виремије и фаталног исхода. Коначно, ЦОВИД-19 показује већу дужину боравка у болници и стопу морталитета у поређењу са другим заразним болестима које захтевају пријем на интензивну негу, као што су пнеумонија стечена у заједници (ЦАП) или сепса [56], а процењено је на 35 дана у просеку за оне појединце који су били хоспитализовани у Шпанији током првих таласа пандемије [36]. У нашој студији, средња дужина боравка у болници била је слична између групе Екитус и Сурвивал (59,0 и 73,0 дана, респективно), а 50% свих учесника је остало више од 40 дана на интензивној нези. Стога се морају узети у обзир други диференцијални фактори да би се објаснио фатални исход у Екитус групи и опоравак у групи Сурвивал.

Предности цистанцхе тубулоса- ојачати имуни систем

Лимфопенија се такође сматра фактором ризика за озбиљност болести која је повезана са дужим боравком у болници [57]. У нашој студији, 73,9% учесника и Екитус и Сурвивал групе показало је низак број лимфоцита. Међутим, ниво укупних лимфоцита био је у просеку виши код учесника групе Сурвивал, у поређењу са Екитус групом. Ово је у складу са претходним запажањем да оне особе које су умрле од ЦОВИД-19 временом развијају тежу лимфопенију у поређењу са онима који преживе [58] и да ови лимфоцити обично показују исцрпљен фенотип, што доводи до постепена имунодефицијенција [15,16]. Због ефикасног цитотоксичног антивирусног одговора који је неопходан за контролу вирусних инфекција, укључујући САРС-ЦоВ-2 [17], реконституција имунитета је кључна за опоравак од ЦОВИД-19. Убрзање ове имунолошке реконституције у великој мери зависи од хомеостатске периферне експанзије лимфоцита, што би могла бити добра стратегија за побољшање исхода појединаца хоспитализованих због тешког ЦОВИД-19 [58]. ИЛ-15 је цитокин неопходан за функцију и хомеостазу ЦД8+ Т ћелија, НК и НКТ ћелија [29], и предложен је као нови имуномодулаторни третман за неколико болести као што је рак и ХИВ инфекција [26,30,35,59]. Стога смо у овој студији проценили да ли лечење ин витро са ИЛ-15 може побољшати цитотоксични одговор код ПБМЦ хоспитализованих појединаца са тешким и критичним ЦОВИД-19 како инфекција напредује, како бисмо утврдили његову валидност као кандидат за стимулацију реконституције имунитета током ЦОВИД-19. Са анализираном дозом, приметили смо свеукупно повећање цитотоксичног одговора на циљне ћелије инфициране псеудотипизованим САРС-ЦоВ-2 у ПБМЦ-овима оних појединаца који су преживели ЦОВИД-19 после 44 дана у просеку хоспитализације у тхе ИЦУ. Овај цитотоксични одговор је ефективно повећан 2.{28}}пута у просеку након третмана са ИЛ-15 у свим узорцима прикупљеним током праћења, при чему је 6. недеља хоспитализације била прекретница од које се број лимфоцита а цитотоксична активност је почела да опада до отпуста из болнице. Упркос томе што деле сличне социодемографске, клиничке и биохемијске карактеристике и што су били хоспитализовани скоро исто време (укупно 59 дана, од којих је 49 дана било на интензивној интензивној нези), група појединаца који нису преживели ЦОВИД{{34} } је показао ПБМЦ који нису реаговали у присуству инфицираних циљних ћелија, чак и када су биле стимулисане ИЛ-15. Укупни нивои лимфоцита су били изнад прага лимфопеније код особа из ове групе од 2. недеље хоспитализације. Међутим, ови нивои се нису значајно повећали током хоспитализације и није откривен ефикасан антивирусни одговор, чак ни у присуству ИЛ-15 у испитиваној дози. Одсуство одговора на ИЛ-15 је описано за друге хроничне инфекције као што су вирус хумане имунодефицијенције (ХИВ), вирус хепатитиса Ц (ХЦВ), вирус хепатитиса Б (ХБВ) и хумани Т лимфотропни вирус (ХТЛВ), у којима исцрпљеност имунитета може утицати на експресију специфичног рецептора ИЛ-15, ЦД122, у ЦД8+ Т ћелијама [60], чинећи их нереагујућим на овај хомеостатски стимулус. Имунолошка исцрпљеност која је карактеристична за ЦОВИД-19 није примећена само код ЦД8+ Т ћелија, већ иу другим типовима цитотоксичних ћелија као што су НК и НКТ ћелије [15,16]. Стога, одсуство одговора на ИЛ-15 код ПБМЦ из Екитус групе може бити повезано са повећаном исцрпљеношћу имунитета која се не може превазићи само третманом ИЛ-15 у испитиваној дози. Ово је такође примећено у клиничким испитивањима фазе И у којима је монотерапија са ИЛ-15 била неефикасна упркос огромној експанзији цитотоксичних ћелија [31,32]. Сходно томе, други костимулаторни третмани би били неопходни да би се индуковао ефикасан одговор код ових појединаца, као што су инхибитори имунолошке контролне тачке или моноклонска антитела која циљају на инфициране ћелије, да би се побољшала ћелијска цитотоксичност зависна од антитела (АДЦЦ).

Такође смо одредили типове ћелија који су углавном били укључени у развој овог појачаног цитотоксичног одговора у групи појединаца који су преживели ЦОВИД-19. Показано је да је присуство функционалних ЦД8+ Т ћелија од суштинског значаја за заштиту животињских модела од развоја тешког ЦОВИД-19 [61,62]. Штавише, одсуство ефикасног ЦД8-посредованог цитотоксичног одговора је означено као суштински фактор за повећану подложност старијих људи да развију тешки или критични ЦОВИД-19 [63]. Изненађујуће, нивои ЦД8+ Т ћелија су били 2.07-пута (п=0.0409) виши у Екитус групи у време хоспитализације (т=0) , и остали су појачани до смртног исхода, у поређењу са групом за преживљавање. Иако су појединци из Екитус групе показали број лимфоцита нешто изнад прага лимфопеније, ови нивои су остали скоро непромењени све време када су били хоспитализовани. Штавише, описано је да лимфопенија може довести до обрасца коегзистирајуће супресије и активације у којем постоји периферни губитак Т ћелија истовремено са интензивном пролиферацијом ЦД8+ пула Т ћелија [64,65]. Ово би објаснило благо повећане нивое ЦД8+ Т ћелија уочених у ПБМЦ учесника из Екитус групе од 6. недеље хоспитализације па надаље, упркос томе што укупни нивои лимфоцита остају непромењени и изнад прага лимфопеније, такође указује на потенцијално смањење ЦД4+ Т ћелија. Међутим, ове ЦД8+ Т ћелије су показале ниску цитотоксичну активност, што је утврђено ниском експресијом маркера дегранулације ЦД107а на површини ћелије, док је експресија овог маркера повећана у ЦД8+ Т ћелијама од учесници групе Опстанак од 4. недеље па надаље. Експресија ЦД107а се сматра биомаркером за процену цитотоксичног капацитета [66], а описано је да је смањена на површини ћелија изолованих од особа са ЦОВИД-19, у поређењу са неинфицираним, здравим донорима [15 ].

Стога, повећана експресија ЦД107а на површини ЦД8+ Т ћелија може бар делимично да објасни допринос ових ћелија појачаној цитотоксичној активности уоченој у ПБМЦ-има учесника из групе за преживљавање. Поред тога, приметили смо повећану експресију маркера исцрпљености ПД-1 у ЦД4+ и ЦД8+ Т ћелијама код појединаца Екитус групе, што такође може допринети смањењу цитотоксичности активност и одговор на ИЛ-15 ових ћелија. Друге популације ћелија могу бити укључене у цитотоксичну активност против псеудотипова САРС-ЦоВ-2-заражених ћелија, као што су НК и НКТ ћелије. Као што се дешава код других тешких акутних инфекција, НК ћелије могу бити регрутоване на месту инфекције САРС-ЦоВ-2 [67], што би објаснило смањен број циркулишућих НК ћелија који је примећен код свих учесника. Штавише, цитокинска олуја која се развија током тешког и критичног ЦОВИД-19 може довести до дисфункционалног статуса НК ћелија које би експримирале високе нивое инхибиторних рецептора контролних тачака као што су НКГ2А или ПД-1 [68]. У нашој студији, нивои НК ћелија су били слични између обе групе до 6. недеље, у којој су учесници групе Сурвивал показали прогресивно повећање до отпуста из болнице. Ово је у корелацији са повећаном експресијом ЦД107а, која је у НК ћелијама повезана са појачаним лучењем цитокина и побољшаном лизом циљних ћелија [7,69], иако је описан проценат НК ћелија које експримирају маркере активације као што је ЦД107а. ниже код особа са ЦОВИД-19 у поређењу са здравим контролним особама [70]. Супротно томе, иако су нивои НКТ ћелија у великој мери повећани у групи Сурвивал од 6. недеље надаље, експресија ЦД107а је остала скоро непромењена, док су показали повећане нивое маркера исцрпљености ТИГИТ на површини ћелије који се стално повећавао до 6. недеље хоспитализације. . Једно од најважнијих ограничења наше студије била је смањена величина узорка. Ипак, статистичка значајност је постигнута између група у неколико битних параметара који су такође показали велику или веома велику величину ефекта када су израчунате обједињене разлике између група.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

5. Закључци

У закључку, најважнији допринос ове студије борби против имунопатологије изазване САРС-ЦоВ-2 инфекцијом је потврда да је смањени антивирусни капацитет ПБМЦ-а критичан фактор у прогресији до фаталног ЦОВИД-а {2}}, чак и изнад других социодемографских, клиничких и биохемијских фактора. Стога, употреба имуномодулаторних третмана који могу да појачају цитотоксичност може допринети позитивном исходу током хоспитализације због критичног ЦОВИД-а-19. Повећана цитотоксична активност посредована ИЛ-15 код појединаца из групе за преживљавање се вероватно није ослањала на повећане нивое цитотоксичних ћелија већ на имунокомпетентност ових ћелија да реагују на такав стимулус. Стога би праћење експресије маркера исцрпљености и реаговања на хомеостатске стимулусе као што је ИЛ-15 ових ћелијских популација код хоспитализованих особа могло бити корисно као предикторски маркер фаталног исхода како би се покренуле додатне мере за спречавање то. Сходно томе, ова опсервациона студија је доказ концепта да би употреба ИЛ-15 код појединаца хоспитализованих са ЦОВИД-19 могла побољшати антивирусни имуни одговор, иако сам овај стимуланс не би био ефикасан код оних особа које не реагују ћелије услед имуне исцрпљености или поремећеног сигналног пута ИЛ-15Р, што је неопходно у превенцији исцрпљености [71], чак и када показују број лимфоцита изнад прага лимфопеније. Потребно је више студија са већом популацијом да би се процениле комбинације све већих доза ИЛ-15 са другим имуномодулаторним агенсима као што су инхибитори имуних контролних тачака или моноклонска антитела која циљају заражене ћелије како би се обновио и побољшао антивирусни одговор током критичних облика ЦОВИД-а -19.

Референце

1. Атзродт, ЦЛ; Макнојиа, И.; МцЦартхи, РДП; Олдфиелд, ТМ; По, Ј.; Та, КТЛ; Степп, ХЕ; Цлементс, ТП Водич за ЦОВИД-19: Глобална пандемија изазвана новим коронавирусом САРС-ЦоВ-2. ФЕБС Ј. 2020, 287, 3633–3650. [ЦроссРеф] [ПубМед]

2. Контролна табла СЗО за корона вирус (ЦОВИД-19). Доступно на мрежи: хттпс://цовид19.вхо.инт/ (приступљено 18. октобра 2022.).

3. Цапалбо, Ц.; Ацети, А.; Симмацо, М.; Бонфини, Р.; Роццо, М.; Рицци, А.; Наполи, Ц.; Роццо, М.; Алфонси, В.; Тегги, А.; ет ал. Експоненцијална фаза пандемије ЦОВИД-19 у централној Италији: пут интегрисане неге. Инт. Ј. Енвирон. Рес. 2020, 17, 3792. [ЦроссРеф] [ПубМед]

4. Хуанг, Ц.; Ванг, И.; Ли, Кс.; Рен, Л.; Зхао, Ј.; Ху, И.; Зханг, Л.; Фан, Г.; Ксу, Ј.; Гу, Кс.; ет ал. Клиничке карактеристике пацијената заражених новим коронавирусом из 2019. у Вухану, Кина. Ланцет 2020, 395, 497–506. [ЦроссРеф] [ПубМед]

5. Хаибар, Х.; Каземниа, К.; Рахим, Ф. Основна хронична болест и ЦОВИД-19 инфекција: Најсавременији преглед. Јундисхапур Ј. Цхрониц Дис. Царе 2020, 9, е103452. [ЦроссРеф] 6. Хамед, СМ; Елкхатиб, ВФ; Кхаирала, АС; Нореддин, АМ Глобална динамика САРС-ЦоВ-2 клада и њихов однос са епидемиологијом ЦОВИД{11}}. Сци. Реп. 2021, 11, 8435. [ЦроссРеф]

7. Ердинц, Б.; Сахни, С.; Готлиеб, В. Хематолошке манифестације и компликације ЦОВИД-19. Адв. Цлин. Екп. Мед. 2021, 30, 101–107. [ЦроссРеф]

8. Ху, Б.; Хуанг, С.; Јин, Л. Олуја цитокина и ЦОВИД-19. Ј. Мед. Вирол. 2021, 93, 250–256. [ЦроссРеф]

9. Рамос-Касалс, М.; Брито-Зерон, П.; Лопез-Гуиллермо, А.; Кхамасхта, МА; Босцх, Кс. Адулт хемопхагоцитиц синдроме. Ланцет 2014, 383, 1503–1516. [ЦроссРеф]

10. Мехта, П.; МцАулеи, ДФ; Бровн, М.; Санцхез, Е.; Таттерсалл, РС; Мансон, ЈЈ; у име ХЛХ Ацросс Специалти Цоллаборатион, УК. Преко специјалности. ЦОВИД-19: Размотрите синдроме цитокинске олује и имуносупресију. Ланцет 2020, 395, 1033–1034. [ЦроссРеф]

11. Ли, М.-И.; Ли, Л.; Зханг, И.; Ванг, Кс.-С. Експресија гена АЦЕ2 ћелијског рецептора САРС-ЦоВ-2 у широком спектру људских ткива. Инфецт. Дис. Сиромаштво 2020, 9, 45. [ЦроссРеф]

12. Јианг, И.; Рубин, Л.; Пенг, Т.; Лиу, Л.; Ксинг, Кс.; Лазаровићи, П.; Џенг, В. Олуја цитокина у ЦОВИД-19: од вирусне инфекције до имунолошких одговора, дијагнозе и терапије. Инт. Ј. Биол. Сци. 2022, 18, 459–472. [ЦроссРеф] [ПубМед]

13. Зхан, И.; Царрингтон, ЕМ; Зханг, И.; Хеинзел, С.; Лев, АМ Живот и смрт активираних Т ћелија: По чему се разликују од наивних Т ћелија? Фронт. Иммунол. 2017, 8, 1809. [ЦроссРеф] [ПубМед]

14. Хуанг, И.; Праната, Р. Лимфопенија код тешке корона вирусне болести-2019 (ЦОВИД-19): Систематски преглед и мета-анализа. Ј. Интензивна нега 2020, 8, 36. [ЦроссРеф] [ПубМед]

15. Зхенг, М.; Гао, И.; Ванг, Г.; Сонг, Г.; Лиу, С.; Сун, Д.; Ксу, И.; Тиан, З. Функционална исцрпљеност антивирусних лимфоцита код пацијената са ЦОВИД-19. Ћелија. Мол. Иммунол. 2020, 17, 533–535. [ЦроссРеф]

16. Рха, М.-С.; Јеонг, ХВ; Ко, Ј.-Х.; Цхои, СЈ; Сео, И.-Х.; Лее, ЈС; Са, М.; Ким, АР; Јоо, Е.-Ј.; Ахн, ЈИ; ет ал. ПД-1-које експримирају САРС-ЦоВ-2-специфичне ЦД8+ Т ћелије нису исцрпљене, већ функционишу код пацијената са ЦОВИД-19. Имунитет 2021, 54, 44–52. [ЦроссРеф]

17. Вигон, Л.; Фуертес, Д.; Гарциа-Перез, Ј.; Торрес, М.; Родригуез-Мора, С.; Матеос, Е.; Цорона, М.; Саез-Марин, АЈ; Мало, Р.; Наварро, Ц.; ет ал. Смањен цитотоксични одговор код ПБМЦ пацијената са ЦОВИД-19 примљеним у интензивну интензивну терапију: биомаркери за предвиђање озбиљности болести. Фронт. Иммунол. 2021, 12, 665329. [ЦроссРеф]

18. ВХО. Привремена изјава о разматрањима при доношењу одлука за коришћење варијантних ажурираних вакцина против ЦОВИД{2}}. Доступно на мрежи: хттпс://ввв.вхо.инт/невс/итем/17-06-2022-интерим-статемент-он-децисион-макинг-цонсидератионс-фор-тхе-усе-оф вариант-упдатед-цовид{{15} }вакцине (приступљено 15. августа 2022).

19. Мисхра, СК; Трипати, Т. Једногодишње ажурирање о пандемији ЦОВИД{1}}: Где смо сада? Ацта Троп. 2021, 214, 105778. [Унакрсна референца] 20. Ли, Кс.; Генг, М.; Пенг, И.; Менг, Л.; Лу, С. Молекуларна имунолошка патогенеза и дијагноза ЦОВИД-19. Ј. Пхарм. Анал. 2020, 10, 102–108. [ЦроссРеф]

21. ТРЦ Гроуп. Дексаметазон код хоспитализованих пацијената са ЦОВИД-19. Н. Енгл. Ј. Мед. 2021, 384, 693–704. [ЦроссРеф]

22. Зхоу, Кс.; Иу, Ј.; Цхенг, Кс.; Зхао, Б.; Маниам, ГЦ; Зханг, Л.; Сцхлунс, К.; Ли, П.; Ванг, Ј.; Сун, С.-Ц. Деубиквитиназа Отуб1 контролише активацију ЦД8+ Т ћелија и НК ћелија регулацијом прајминга посредованог ИЛ-15-. Нат. Иммунол. 2019, 20, 879–889. [ЦроссРеф]

23. Парумс, ДВ Тренутни статус оралних антивирусних лекова за САРС-ЦоВ-2 инфекцију код нехоспитализованих пацијената. Мед. Сци. Монит. 2022, 28, е935952-1. [ЦроссРеф] [ПубМед]

24. Цоузин-Франкел, Ј. Антивирусне пилуле би могле да промене ток пандемије. Сам. доц. Адв. Сци. 2021, 12, 799–800. [ЦроссРеф] [ПубМед]

25. Мунтаселл, А.; Оцхоа, МЦ; Цордеиро, Л.; Берраондо, П.; де Церио, АЛ-Д.; Цабо, М.; Лопез-Ботет, М.; Мелеро, И. Циљање контролних тачака НК ћелија за имунотерапију рака. Цурр. Опин. Иммунол. 2017, 45, 73–81. [ЦроссРеф] [ПубМед]

26. Патидар, М.; Иадав, Н.; Далаи, СК Интерлеукин 15: Кључни цитокин за имунотерапију. Цитокински фактор раста Рев. 2016, 31, 49–59. [ЦроссРеф]

27. Кабингер, Ф.; Стиллер, Ц.; Сцхмитзова, Ј.; Диенеманн, Ц.; Кокић, Г.; Хиллен, ХС; Хобартнер, Ц.; Црамер, П. Механизам мутагенезе САРС-ЦоВ-2 изазване молнупиравиром. Нат. Структура. Мол. Биол. 2021, 28, 740–746. [ЦроссРеф] [ПубМед]

28. Хунг, И.-П.; Лее, Ј.-Ц.; Цхиу, Ц.-В.; Лее, Ц.-Ц.; Тсаи, П.-Ј.; Хсу, И.-Л.; Ко, В.-Ц. Орална терапија нирматрелвиром/ритонавиром за ЦОВИД-19: Зора у тами? Антибиотици 2022, 11, 220. [ЦроссРеф]

29. Гуо, И.; Луан, Л.; Патил, НК; Схервоод, ЕР Имунобиологија комплекса ИЛ-15/ИЛ-15Р као антитуморског и антивирусног средства. Цитокински фактор раста Рев. 2017, 38, 10–21. [ЦроссРеф]

30. Зханг, С.; Зхао, Ј.; Баи, Кс.; Хандлеи, М.; Схан, Ф. Биолошки ефекти ИЛ-15 на имуне ћелије и његов потенцијал за лечење рака. Инт. Иммунопхармацол. 2021, 91, 107318. [ЦроссРеф]

31. Валдманн, ТА; Дубоис, С.; Миљковић, др.мед.; Цонлон, КЦ ИЛ-15 у комбинованој имунотерапији рака. Фронт. Иммунол. 2020, 11, 868. [ЦроссРеф]

32. Дубоис, СП; Миљковић, др.мед.; Флеисхер, ТА; Питталуга, С.; Хсу-Алберт, Ј.; Бриант, БР; Петрус, МН; Перера, ЛП; Муллер, ЈР; Схих, ЈХ; ет ал. Кратки курс ИЛ-15 који се даје као континуирана инфузија довео је до масовне експанзије ефикасних НК ћелија: Импликације за комбиновану терапију са антитуморним антителима. Ј. Иммунотхер. Рак 2021, 9, е002193. [ЦроссРеф]

33. Цонлон, КЦ; Поттер, ЕЛ; Питталуга, С.; Лее, Ц.-ЦР; Миљковић, др.мед.; Флеисхер, ТА; Дубоис, С.; Бриант, БР; Петрус, М.; Перера, ЛП; ет ал. ИЛ15 континуираном интравенском инфузијом одраслим пацијентима са солидним туморима у драматичној подскупини НК-ћелија изазваној у фази И испитивања. Цлин. Цанцер Рес. 2019, 25, 4945–4954. [ЦроссРеф]

34. Ромее, Р.; Цоолеи, С.; Берриен-Еллиотт, ММ; Вестервелт, П.; Вернерис, МР; Вагнер, ЈЕ; Веисдорф, ДЈ; Блазар, БР; Устун, Ц.; ДеФор, ТЕ; ет ал. Прва клиничка студија фазе 1 ИЛ-15 суперагонистичког комплекса АЛТ-803 код људи за лечење релапса након трансплантације. Блоод Ам. Ј. Хематол. 2018, 131, 2515–2527. [ЦроссРеф] [ПубМед]

35. Миллер, ЈС; Давис, ЗБ; Хелгесон, Е.; Реилли, Ц.; Тхоркелсон, А.; Андерсон, Ј.; Лима, НС; Јорстад, С.; Харт, ГТ; Лее, ЈХ; ет ал. Безбедност и виролошки утицај ИЛ-15 суперагониста Н-803 код људи који живе са ХИВ-ом: испитивање фазе 1. Нат. Мед. 2022, 28, 392–400. [ЦроссРеф] [ПубМед]

36. Беренгуер, Ј.; Риан, П.; Родригуез-Бано, Ј.; Јаррин, И.; Царратала, Ј.; Пацхон, Ј.; Иллесцас, М.; Арриба, ЈР; Муноз, ЕА; Гил Дивассон, П.; ет ал. Карактеристике и предиктори смрти међу 4035 узастопно хоспитализованих пацијената са ЦОВИД-19 у Шпанији. Цлин. Мицробиол. Инфецт. 2020, 26, 1525–1536. [ЦроссРеф]

37. Гарциа-Перез, Ј.; Санцхез-Паломино, С.; Перез-Олмеда, М.; Фернандез, Б.; Алцами, Ј. Нова стратегија заснована на рекомбинантним вирусима као алату за процену осетљивости на лекове вируса хумане имунодефицијенције типа 1. Ј. Мед. Вирол. 2007, 79, 127–137. [ЦроссРеф] [ПубМед]

38. Оу, Кс.; Лиу, И.; Леи, Кс.; Ли, П.; Ми, Д.; Рен, Л.; Гуо, Л.; Гуо, Р.; Цхен, Т.; Ху, Ј.; ет ал. Карактеризација шиљастог гликопротеина САРС-ЦоВ-2 при уласку вируса и његове имунолошке унакрсне реактивности са САРС-ЦоВ. Нат. Цоммун. 2020, 11, 1–12. [ЦроссРеф] [ПубМед]

39. Волз, Е.; Хилл, В.; МцЦроне, ЈТ; Прице, А.; Јоргенсен, Д.; О'Тооле, А.; Соутхгате, Ј.; Јохнсон, Р.; Јацксон, Б.; Насцименто, ФФ; ет ал. Процена ефеката САРС-ЦоВ-2 спике мутације Д614Г на преносивост и патогеност. Целл 2021, 184, 64–75. [ЦроссРеф]

40. Корбер, Б.; Фисцхер, ВМ; Гнанакаран, С.; Иоон, Х.; Тхеилер, Ј.; Абфалтерер, В.; Хенгартнер, Н.; Гиорги, ЕЕ; Бхаттацхариа, Т.; Фолеи, Б.; ет ал. Праћење промена у порасту САРС-ЦоВ-2: Доказ да Д614Г повећава инфективност вируса ЦОВИД-19. Целл 2020, 182, 812–827. [ЦроссРеф]

41. Нандагопал, Н.; Али, АК; Комал, АК; Лее, С.-Х. Критична улога пута ИЛ-15–ПИ3К–мТОР у ефекторским функцијама природних ћелија убица. Фронт. Иммунол. 2014, 5, 187. [ЦроссРеф]

42. Росентхал, Р.; Гроепер, Ц.; Брацци, Л.; Адамина, М.; Федер-Менгус, Ц.; Зајац, П.; Иеззи, Г.; Болли, М.; Вебер, ВП; Фреи, ДМ; ет ал. Диференцијална реакција на ИЛ-2, ИЛ-7 и ИЛ-15 цитокине заједничког рецепторског ланца наивне или меморијске цитотоксичне ЦД8+ Т ћелије наивне периферне крви специфичних за антиген од здравих донора и Пацијенти са меланомом. Ј. Иммунотхер. 2009, 32, 252–261. [ЦроссРеф]

43. Цорман, ВМ; Ландт, О.; Каисер, М.; Моленкамп, Р.; Меијер, А.; Цху, ДКВ; Блеицкер, Т.; Брунинк, С.; Сцхнеидер, Ј.; Сцхмидт, МЛ; ет ал. Откривање новог коронавируса из 2019. (2019-нЦоВ) помоћу РТ-ПЦР у реалном времену. Еуросурвеилланце 2020, 25, 2000045. [ЦроссРеф] [ПубМед]

44. ВХО. Дијагностичко тестирање за САРС-ЦоВ-2: Привремени водич, 11. септембар 2020.; Светска здравствена организација: Женева, Швајцарска, 2020.

45. Бецкер, ЛА Еффецт Сизе (ЕС); Универзитет Колорадо Колорадо Спрингс: Колорадо Спрингс, Колорадо, САД, 2000.

46. ​​Цохен, Ј. Статистицал Повер Аналисис фор тхе Бехавиорал Сциенцес; Роутледге: Абингдон, УК, 1988. [ЦроссРеф]

47. Морено-Перез, О.; Рибес, И.; Боик, В.; Мартинез-Гарсија, М.; Отеро-Родригуез, С.; Реус, С.; Санцхез-Мартинез, Р.; Рамос, ЈМ; Цхицо-Санцхез, П.; Мерино, Е. Хоспитализовани пацијенти са продором ЦОВИД-19: клиничке карактеристике и лоши предиктори исхода. Инт. Ј. Инфецт. Дис. 2022, 118, 89–94. [ЦроссРеф] [ПубМед]

48. Лее, ЦМ; Лее, Е.; Парк, ВБ; Цхое, ПГ; Сонг, К.-Х.; Ким, ЕС; Парк, С.-В. Продор ЦОВИД-19 инфекције током доминантног периода Делта варијанте: потребна је индивидуална нега заснована на статусу вакцинације. Ј. Кореан Мед. Сци. 2022, 37, е252. [ЦроссРеф] [ПубМед]

49. Ејаз, Х.; Алсрхани, А.; Зафар, А.; Јавед, Х.; Јунаид, К.; Абдалла, АЕ; Абосалиф, КО; Ахмед, З.; Иоунас, С. ЦОВИД-19 и коморбидитети: Штетан утицај на заражене пацијенте. Ј. Инфецт. Јавно здравље 2020, 13, 1833–1839. [ЦроссРеф] [ПубМед]

50. Азеведо, РБ; Ботелхо, БГ; де Холланда, ЈВГ; Ферреира, ЛВЛ; де Андраде, ЛЗЈ; Оеи, ССМЛ; Мелло, ТДС; Мукфелдт, ЕС ЦОВИД-19 и кардиоваскуларни систем: свеобухватан преглед. Ј. Хум. Хипертензије. 2021, 35, 4–11. [ЦроссРеф]

51. Зханг, ЈЈ; Лее, КС; Анг, ЛВ; Лео, ИС; Иоунг, БЕ Фактори ризика за тешку болест и ефикасност лечења код пацијената заражених ЦОВИД-19: систематски преглед, мета-анализа и метарегресиона анализа. Цлин. Инфецт. Дис. 2020, 71, 2199–2206. [ЦроссРеф]

52. Кермали, М.; Кхалса, РК; Пиллаи, К.; Исмаил, З.; Харки, А. Улога биомаркера у дијагнози ЦОВИД-19 – систематски преглед. Лифе Сци. 2020, 254, 117788. [ЦроссРеф]

53. Малик, П.; Пател, У.; Мехта, Д.; Пател, Н.; Келкар, Р.; Акрмах, М.; Габрилове, ЈЛ; Сацкс, Х. Биомаркери и исходи ЦОВИД-19 хоспитализација: систематски преглед и мета-анализа. БМЈ Евид. Басед Мед. 2021, 26, 107–108. [ЦроссРеф]

54. Ли, И.; Сцхнеидер, АМ; Мехта, А.; Саде-Фелдман, М.; Каис, КР; Гентили, М.; Цхарланд, НЦ; Гоние, АЛ; Гуштерова, И.; Кханна, ХК; ет ал. САРС-ЦоВ-2 виремија је повезана са различитим протеомским путевима и предвиђа исходе ЦОВИД-19. Ј. Цлин. Инвестиг. 2021, 131, е148635. [ЦроссРеф]

55. Родригуез-Серрано, ДА; Рои-Валлејо, Е.; Цруз, НДЗ; Рамирез, АМ; Родригез-Гарсија, СЦ; Аревалилло-Фернандез, Н.; Галван-Роман, ЈМ; Гарсија-Родриго, ЛФ; Вега-Пирис, Л.; Ллано, МЦ; ет ал. Откривање САРС-ЦоВ-2 РНК у серуму повезано је са повећаним ризиком од смртности код хоспитализованих пацијената са ЦОВИД-19. Сци. Реп. 2021, 11, 13134. [ЦроссРеф]

57. Серафим, РБ; Повоа, П.; Соуза-Дантас, В.; Калил, АЦ; Саллух, ЈИ Клинички ток и исходи критично болесних пацијената са ЦОВИД-19 инфекцијом: систематски преглед. Цлин. Мицробиол. Инфецт. 2021, 27, 47–54. [ЦроссРеф] [ПубМед]

57. Лиу, Кс.; Зхоу, Х.; Зхоу, И.; Ву, Кс.; Зхао, И.; Лу, И.; Тан, В.; Иуан, М.; Динг, Кс.; Зоу, Ј.; ет ал. Фактори ризика повезани са озбиљношћу болести и дужином боравка у болници код пацијената са ЦОВИД-19. Ј. Инфецт. 2020, 81, е95–е97. [ЦроссРеф]

58. Луо, КСХ; Зху, И.; Мао, Ј.; Ду, Имунобиологија РЦ Т ћелија и цитокинска олуја ЦОВИД-19. Сцанд. Ј. Иммунол. 2021, 93, е12989. [ЦроссРеф] [ПубМед]

59. Харвоод, О.; О'Цоннор, С. Терапијски потенцијал ИЛ-15 и Н-803 код ХИВ/СИВ инфекције. Вируси 2021, 13, 1750. [ЦроссРеф] [ПубМед]

60. Схин, Х.; Вхерри, ЕЈ ЦД8 Т ћелијска дисфункција током хроничне вирусне инфекције. Цурр. Опин. Иммунол. 2007, 19, 408–415. [ЦроссРеф]

61. МцМахан, К.; Иу, Ј.; Мерцадо, НБ; Лоос, Ц.; Тостаноски, ЛХ; Цхандрасхекар, А.; Лиу, Ј.; Петар, Л.; Атиео, Ц.; Зху, А.; ет ал. Корелати заштите од САРС-ЦоВ-2 код резус макака. Природа 2021, 590, 630–634. [ЦроссРеф]

62. Зхуанг, З.; Лаи, Кс.; Сун, Ј.; Цхен, З.; Зханг, З.; Даи, Ј.; Лиу, Д.; Ли, И.; Ли, Ф.; Ванг, И.; ет ал. Мапирање и улога одговора Т ћелија код мишева заражених САРС-ЦоВ-2. Ј. Екп. Мед. 2021, 218, е20202187. [ЦроссРеф]

63. Вестмеиер, Ј.; Панискаки, ​​К.; Каракосе, З.; Вернер, Т.; Суттер, К.; Долфф, С.; Овербецк, М.; Лиммер, А.; Лиу, Ј.; Зхенг, Кс.; ет ал. Поремећај цитотоксичног одговора ЦД8+ Т ћелија код старијих ЦОВИД-19 пацијената. МБио 2020, 11, е02243-20. [ЦроссРеф]

64. Лаинг, АГ; Лоренц, А.; дел Баррио, ИДМ; Дас, А.; Фисх, М.; Монин, Л.; Муноз-Руиз, М.; МцКензие, ДР; Хаидаи, ТС; Францос Куијорна, И.; ет ал. Динамични ЦОВИД-19 имуни потпис укључује повезаност са лошом прогнозом. Нат. Мед. 2020, 26, 1623–1635. [ЦроссРеф]

65. Кури-Цервантес, Л.; Пампена, МБ; Менг, В.; Росенфелд, АМ; Иттнер, ЦАГ; Веисман, АР; Агиекум, РС; Матхев, Д.; Бактер, АЕ; Велла, ЛА; ет ал. Свеобухватно мапирање имунолошких поремећаја повезаних са тешким ЦОВИД-ом-19. Сци. Иммунол. 2020, 5, еабд7114. [ЦроссРеф]

66. Актас, Е.; Куцуксезер, УЦ; Билгиц, С.; Ертен, Г.; Дениз, Г. Веза између експресије ЦД107а и цитотоксичне активности. Ћелија. Иммунол. 2009, 254, 149–154. [ЦроссРеф]

67. Бјоркстром, НК; Струнз, Б.; Љунггрен, Х.-Г. Природне ћелије убице у антивирусном имунитету. Нат. Рев. Иммунол. 2022, 22, 112–123. [ЦроссРеф] [ПубМед]

68. Би, Ј. Дисфункција НК ћелија код пацијената са ЦОВИД-19. Ћелија. Мол. Иммунол. 2022, 19, 127–129. [ЦроссРеф] [ПубМед]

69. Алтер, Г.; Маленфант, ЈМ; Алтфелд, М. ЦД107а као функционални маркер за идентификацију активности природних ћелија убица. Ј. Иммунол. Методе 2004, 294, 15–22. [ЦроссРеф] [ПубМед]

71. Густине, ЈН; Јонес, Д. Иммунопатхологи оф Хиперинфламматион ин ЦОВИД-19. Сам. Ј. Цлин. Патхол. 2021, 191, 4–17. [ЦроссРеф] [ПубМед]

71. Хе, Ц.; Зхоу, И.; Ли, З.; Фароок, МА; Ајмал, И.; Зханг, Х.; Зханг, Л.; Тао, Л.; Иао, Ј.; Ду, Б.; ет ал. Коекспресија ИЛ-7 побољшава терапију ЦАР Т ћелија засновану на НКГ2Д код рака простате тако што повећава експанзију и инхибира апоптозу и исцрпљеност. Ракови 2020, 12, 1969. [ЦроссРеф]