Синергистички антиинфламаторни ефекти Ламинариа Јапоница Фуцоидан и екстракта Цистанцхе Тубулоса
Mar 03, 2022
Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com
Апстрактан
Тхеантиинфламаторноефекти фукоидана иЦистанцхе тубулоса (ЦТ) екстракт је испитиван у Витро систему културе макрофага и ин виво моделу запаљења ваздушних врећица изазваних карагенаном.Цистанцхе Тубулосаекстракт је инхибирао производњу азотног оксида из активираних ћелија макрофага РАВ 264.7, док је фукоидан био неактиван. Ин виво модел запаљења ваздушних врећица, васкуларна ексудација изазвана карагенаном и повећане концентрације азотног оксида и простагландина Е2 у ексудатима су синергистички потиснуте истовременом применом фукоидана илиЦистанцхе Ттубулосаекстракт. Штавише, запаљење ткива је значајно ублажено комбинованом терапијом. Међутим, није било синергијског ефекта противинфламаторноћелијска инфилтрација, иако фукоидан и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)Екстракт сваког значајно смањио број ћелија. Стога се предлаже да фукоидан блокира инфилтрацијуинфламаторноћелије, док ЦТ(Цистанцхе тубулоса) екстракт инхибира активацију ћелија, те да би њихов комбиновани третман могао бити обећавајући кандидат за ублажавање различитих врста упала.
Кључне речи: карагенан, запаљење, фукоидан, екстракт Цистанцхе тубулоса.
Као имуни одговор против страних антигена, макрофаги ослобађају проинфламаторне цитокине као што су фактор некрозе тумора- (ТНФ-), интерлеукин-1 (ИЛ-1), ИЛ-6 и други [1,2]. Такви цитокини индукују хемотактички прилив гранулоцита, моноцита, лимфоцита и мастоцита у оштећено ткиво што промовише уклањање антигена и опоравак ткива [3,4]. Међутим, прекомерна инфилтрација и активација ћелија погоршавају повреде ткива, што доводи до едема (васкуларне ексудације) и болова који су добро познати феномени упале.
ТНФ- је важан фактор за изазивање експресије гена синтазе азот-оксида (иНОС) у неколико ћелијских линија. Активација иНОС-а доводи до производње азот-оксида (НО)[5-7] која не само да модулира неколико физиолошких функција као што су бактерицидна и вазодилатација али и изазива запаљење [8,9]. Након повреде ткива, деградацијом фосфолипаза фосфолипида ћелијске мембране настаје арахидонска киселина. Арахидонска киселина се даље разлаже циклооксигеназом (ЦОКС) до простагландина (ПГ) [10]. Прекомерна количина ПГЕ2 коју формира ЦОКС-ИИ индукује неколико цитокина за упалу. Пошто и НО и ПГЕ2 делују као главни фактори за упалу и индукцију бола, ТНФ- и ЦОКС-ИИ-ПГЕ2 путеви су главни токови инфламаторног процеса, који су инхибирани кортикостероидима и нестероиднимантиинфламаторнолекови (НСАИД), респективно [10,11].
Иако постоји неколико стероида и НСАИЛ за терапију инфламаторних болести, ови лекови могу изазвати штетне ефекте на имуни систем, гастроинтестинални тракт, бубреге, јетру, централни нервни систем, крвни притисак и кардиоваскуларни систем [12-14 ]. Због тога је неопходно минимизирати штетне ефекте хемијских терапеутика заменом или употребом у комбинацији са природним производима.
Фукоидан, комплекс сулфатног полисахарида из морских алги као што су Ламинариа јапоница и Цладосипхонокамуранус широко распрострањен у многим земљама, дуго се користио као терапеутика у оријенталној медицини. У претходним студијама је показано да фукоидан има антиоксидативно, антикоагулативно, антиканцерогено иантиинфламаторноактивности [15,16]. Сходно томе, благотворно дејство фукоидана на инфламаторне болести, исхемију, имунолошку дисфункцију и туморе привлаче пажњу истраживача [17,18]. С друге стране,Цистанцхе тубулоса(ЦТ) се такође широко користи за традиционалне лекове у Кини. Пријављено је да ЦТ екстракт смањује производњу ТНФ-а и ИЛ-4 који су главни фактори за производњу НО у инфламаторном путу [19].
Такви претходни налази су нас навели да истражимо комбиновану ефикасност фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт на 2 главна пута упале. Да бисмо разјаснили механизам деловања, анализирали смо НО и ПГЕ2 у ексудатима услед запаљења ваздушних кесица изазваних карагенаном [20].
Материјали и методе
Материјали
Полупречишћени фукоидан и водени екстракт ЦТ(Цистанцхе тубулоса)су добијени од Мисуба РТецх Цо., Лтд. (Асан, Кореја). Фукоидан и ЦТ екстракт су држани на 4оЦ, помешани (1:3) и растворени у пречишћеној води пре употребе, и орално давани у запремини од 5 мЛ/кг
Ћелијска култура и квантификација НО
Ћелијска линија мишјих макрофага РАВ 264.7 је купљена од Америцан Типе Цултуре Цоллецтион (Манассас, САД) и култивисана је у Дулбеццовом модификованом медијуму орла (Сигма, Ст. Лоуис, САД) који садржи 10 процената феталног говеђег серума и антибиотика [100 У/мЛ пеницилина ( Сигма) и 100 µг/мЛ стрептомицина (Сигма)]. Ћелије су инкубиране у влажној атмосфери са 5% ЦО2 на 37оЦ.
За процену ефеката фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт на секрецију НО, РАВ 264,7 ћелије (1×106 ћелија/мЛ) су инкубиране са фукоиданом или ЦТ екстрактом (1–320 µг/мЛ) током 5 минута, а затим интерфероном- (ИФН- , 10 У/мЛ) и липополисахарида (ЛПС, 10 µг/мЛ) током 24 сата. У нашим прелиминарним студијама, потврђено је да третман са ИФН- плус ЛПС за активацију ћелија РАВ 264.7 није утицао на виталност ћелија до 24 сата и да фукоидан и ЦТ екстракт нису били цитотоксични до 1 мг/мЛ. Као индикатор НО мерена је концентрација нитрита(НО2–), оксидованог производа НО. Медијум за културу је помешан са једнаком запремином Грисовог реагенса (1 проценат сулфаниламида, 0,1 проценат нафтилетилендиамид у 2,5 процената фосфорне киселине) [21], и инкубиран на собној температури 10 мин. Концентрација нитрита је анализирана на 540 нм, где је НаНО2 коришћен за генерисање стандардне криве.
Животиње и лечење
Мужјаци ИЦР мишева (стари 7 недеља) су купљени од Даехан Биолинк (Еумсеонг, Кореја) и смештени у просторији са константним условима животне средине (22±2ºЦ;40-70 проценат релативне влажности; 12-часовно осветљење). -тамни циклус;150-300 лук осветљеност). Храна за пелете и пречишћена вода били су доступни ад либитум. Све експерименте на животињама одобрио је Институционални комитет за негу и употребу животиња (ИАЦУЦ) Националног универзитета Цхунгбук (ЦБНУ), Кореја, и спроведени су у складу са Стандардним оперативним процедурама (СОП) Лабораторијског центра за истраживање животиња, ЦБНУ.
Мишеви (н=8/група) су орално третирани фукоиданом (18 или 54 мг/кг), ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракта (54 или 162 мг/кг), или њихове мешавине (18 плус 54, 54 плус 162 или 90 плус 270 мг/кг) једном дневно током 7 дана. Ниске дозе фукоидана (18 мг/кг) и ЦТ екстракта (54 мг/кг) су добијене од процењених доза за људе од 100 мг/телу (70 кг) и 300 мг/телу након транслације телесне тежине површине (Км{{14) }} за човека/Км=3 за миша), респективно. Високе дозе фукоидана и ЦТ екстракта су постављене на 3 пута, саме или у мешавини, а мешавина највише дозе је фиксирана на 5 пута да би се проценили максимални синергистички ефекти.
1. дана фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)третман екстрактом, мишевима је субкутано убризгано 10 мЛ стерилног ваздуха у задњу страну да би се формирала кесица [22,23]. После 2 и 5 дана, у кесицу је поново убризгано 5 мЛ ваздуха. Један сат након завршног третмана, 1 мЛ карагенана (1 проценат у физиолошком раствору; Сигма) или његов носач (физиолошки раствор) је убризган у врећицу.
Анализе ексудата
Ваздушна врећица је испрана са 1 мЛ хладног физиолошког раствора 6 сати након ињекције карагенана и забележена је нето запремина течности за испирање. Укупан број инфламаторних ћелија, неутрофила, моноцита и лимфоцита одређен је помоћу колтер бројача. Концентрације НО и ПГЕ2 су одређене Грисовим реагенсом (Сигма) и ензимским имуноесејем (ЕИА) коришћењем корелативног ЕИА комплета (Ассаи Десигнс, Анн Арбор, АннАрбоУСА), респективно.
Хистопатолошки преглед
Ткиво које облаже врећицу је уклоњено и фиксирано у неутралном раствору формалина. Ставке ткива уграђене у парафин су обојене хематоксилин-еозином и прегледане под светлосним микроскопом на инфламаторне лезије.
Статистичка анализа
Резултати су представљени као средња вредност±СЕ. Поређења експерименталних група вршена су једносмерном анализом варијансе праћеном корекцијом Тукеи-овог теста. П-вредност<0.05 was="" considered="" statistically="">
Резултати
Ин витро третман ћелијске културе РАВ 264.7, ИФН- и ЛПС-а значајно је повећао производњу НО (Слика 1). Предтретман фукоиданом (1–320 µг/мЛ) није утицао на ослобађање НО из ћелијске линије макрофага (Слика 1А). За поређење, ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (32–320 µг/мЛ) значајно потиснуо производњу НО, што указује наантиинфламаторноактивност (слика 1Б).
Ињекција карагенана у ваздушну врећицу миша значајно је повећала запремину ексудата унутар врећице (Слика 2). Таква повећана ексудација је ослабљена третманом са фукоиданом (18 мг/кг) и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (54 и 162 мг/кг). Посебно, комбиновани третман фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт је додатно смањио запремину ексудата, у поређењу са појединачним ефектима, иако комбинације виших доза (54 плус 162 мг/кг и 90 плус 270 мг/кг) нису показале додатну ефикасност у односу на комбинацију најниже дозе (18 плус 54 мг/кг) (Слика 2А). Садржај НО у врећици се такође драстично повећао након ињекције карагенана (слика 2Б). У поређењу са благим дејством фукоидана, ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт значајно снизио концентрацију НО. Комбиновани третман фукоидана и ЦТ екстракта додатно је смањио ниво НО на начин који зависи од дозе. Слично, повећани садржај ПГЕ2 је синергистички потиснут комбинованом терапијом фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (Слика 2Ц). Паралелно са инфламаторним медијаторима у врећици, број инфламаторних ћелија се драстично повећао ињекцијом карагенана: 37,8, 4,8 и 24,1 пута контролних нивоа за неутрофиле, моноците и лимфоците, респективно (табела 11). . Међутим, фукоидан и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт значајно смањио инфилтрацију инфламаторних ћелија, у којој је фукоидан био нешто бољи од ЦТ екстракта. Неочекивано, истовременом применом фукоидана и ЦТ није постигнут никакав синергистички ефекат у инфилтрацији инфламаторних ћелија.(Цистанцхе тубулоса)екстракт.
Као што се закључује из инфилтрације инфилтрације инфламаторних ћелија у ексудатима, поткожно ткиво које окружује ваздушне врећице показало је тешке инфламаторне лезије (Слика 3). Примећено је огромно много ћелија у задебљаном поткожном ткиву изложеном карагенану (слика 3Б), у поређењу са скоро нормалним карактеристикама код контролних животиња (слика 3А). Такве инфламаторне лезије су значајно ублажене третманом фукоиданом (Слике 3Ц и 3Д) или ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (Слике 3Е и 3Ф). Приметно је да су већи антиинфламаторни ефекти постигнути комбинованом терапијом са фукоиданом и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (Слике 3Г-3И)
Дискусија
Користећи ин виво модел запаљења ваздушних кеса изазваних карагенаном, убризгавање ваздуха у леђа глодара изазива пролиферацију ћелија које се раслојавају на површини шупљине да би формирале структуру сличну синовијуму. У овом моделу, ињекција инфилтрације инфламаторних ћелија изазвана карагенаном повећала је ексудат, што указује на васкуларно цурење. Ваздушна кеса служи као резервоар инфламаторних ћелија и медијатора који се лако могу мерити у течности која се акумулира локално.
Међу различитим инфламаторним медијаторима који могу индуковати васкуларну пермеабилност, добро је познато да су НО и ПГЕ2 главни фактори укључени у патогенезу многих инфламаторних болести [24,25]. Такође су познати као посредници индукције и перцепције бола[10,11]. иНОС, који се експримира и активира у различитим типовима ћелија стимулацијом са ТНФ- и/или ЛПС током упале, производи високе, упорне концентрације НО [3,5-7]. НО је важан регулаторни молекул у различитим физиолошким функцијама, као што је вазодилатација која доводи до васкуларног цурења [8,9]. ПГЕ2, који се генерише из арахидонске киселине преко кокса, доприноси развоју многих инфламаторних болести [26,27], и прекомерна производња ПГЕ2 као одговор на различите инфламаторне стимулације повезана је са повећањем нивоа ЦОКС-ИИ и прогресијом упале [28]. Стога се путеви ТНФ- -НО и ЦОКС-ИИ-ПГЕ2 сматрају два главна тока инфламаторних процеса, који су блокирани инхибиторима иНОС (кортикостероиди) и ЦОКС (НСАИД), респективно [22,29].
У овој студији, истовремена примена фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт је смањио запремину ексудата у кесици, што сугерише да поседују супресивну активност против васкуларног цурења (Слика 2А). У поређењу са појединачним ефектима сваког фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт, комбиновани третман се даље повећао, што имплицира да ова два једињења делују синергистички. Такви синергистички ефекти између фукоидана и ЦТ екстракта су подржани њиховим активностима на нивоима НО и ПГЕ2 у ексудату (Слике 3Б и 2Ц).
Занимљиво је, међутим, да је потврђено да фукоидан не инхибира директно активацију макрофага инвитро тестом (слика 1А). Слично томе, инхибиторни потенцијал фукоидана на акумулацију НО и ПГЕ2 у биолошком тесту био је релативно нижи него код ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт (Слике 2Б и 2Ц). Такав механизам деловања фукоидана разликује се од директне инактивације ћелија ЦТ екстрактом (Слика 1Б). Поређења ради, фукоидан је показао високу ефикасност у инхибицији инфилтрације инфламаторних ћелија у кесицама (Табела 1). Фукоидан је био бољи од ЦТ екстракта у блокирању миграције неутрофила, моноцита и лимфоцита на места оштећења ткива изазвана карагенаном. Занимљиво је да није било синергистичког антимиграционог ефекта, што указује на различите механизме деловања између фукоидана и ЦТ екстракта: тј. фукоидан блокира инфилтрацију инфламаторних ћелија, док ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт инхибира активацију ћелија.
Полиморфонуклеарне ћелије, посебно неутрофили, су главне ћелијске компоненте регрутоване на акутна инфламаторна места изазвана карагенаном. Поред тога, инфламаторне ћелије као што су макрофаги и лимфоцити такође играју централну улогу у инфламаторном процесу тако што луче цитокине [22,30,31]. Када се претходно третира фукоиданом или ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракта, број белих крвних зрнаца који су мигрирали у ваздушне кесе убризгане карагенаном је значајно потиснут. Овај резултат је био у складу са ефектом који би постигли кортикостероиди као што је дексаметазон, али не и НСАИЛ укључујући индометацин [23,30]. Стога се претпоставља да су фукоидан и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт има делимично својство стероида.
Поред блокирајућег дејства на хемотаксу инфламаторних ћелија, ЦТ(Цистанцхе тубулоса)изгледа да екстракт потискује активацију макрофага. Ово је потврђено његовим инхибиторним деловањем на НО ин витро и ин виво, који је главни инфламаторни медијатор који производе макрофаги. Дакле, ефекат ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт на макрофагима може бити последица супресије експресије мРНК и/или директне инхибиције иНОС активности у овим ћелијама.
ПГЕ2 је такође један од главних инфламаторних медијатора. Повећава се паралелно са едемом ткива, који сузбијају НСАИЛ, инхибитори ЦОКС [21,22]. Карагенан може повећати производњу ПГЕ2 индукцијом ЦОКС-ИИ мРНА и ЦОКС-ИИ протеина у ексудату врећице [32]. У овом моделу, карагенан је значајно повећао количину ПГЕ2 и био је значајно потиснут ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт. Занимљиво је приметити да је овај резултат био у складу са ефектом који би се постигао од стране НСАИД индометацина [23]. Стога се из резултата закључује да ЦТ екстракт има додатну особину НСАИЛ. Узето заједно, верује се да ЦТ(Цистанцхе тубулоса)Екстракт је показао и кортикостероидне и НСАИД-лике ефекте у моделу инфламације изазване карагенаном, а тај фукоидан је побољшаоантиинфламаторноефекти ЦТ екстракта блокирањем инфилтрације инфламаторних ћелија.
Иако дефинисање тачног механизма деловања захтева даље проучавање, мешавина фукоидана и ЦТ(Цистанцхе тубулоса) екстраховати значајно ослабљене инфламаторне знаке блокирањем путева ТНФ--НО и ЦОКС-ИИ-ПГЕ2 у запаљењу ваздушних кесица изазваних карагенаном. Ови налази пружају доказе да је комбиновано лечење фукоиданом и ЦТ(Цистанцхе тубулоса)екстракт може бити обећавајући кандидат за ублажавање различитих врста упала које реагују на кортикостероиде или НСАИЛ.
Референце
1. Дан Р. Нежељене реакције на ТНФ- инхибиторе код реуматоидног артритиса. Ланцет 2002; 359(9306): 540-541.
2. Фелдманн М, Бреннан ФМ, Маини РН. Улога цитокина у реуматоидном артритису. Анну Рев Иммунол 1996; 14: 397-400.
3. Еиглер А, Синха Б, Хартманн Г, Ендрес С. Таминг ТНФ: стратегије за обуздавање овог проинфламаторног цитокина. Иммунол Тодаи 1997;18(10): 487-492.
4. Ерсхлер ВБ, Келлер ЕТ. Повећана експресија гена за интерлеукин{2}, повезана са узрастом, болести касног живота и слабост. Анну Рев Мед2000; 51: 245-270.
5. Адамс В, Нехрхофф Б, Спате У, Линке А, Сцхулзе ПЦ, Баур А, Гиелен С, Хамбрецхт Р, Сцхулер Г. Индукција експресије иНОС у скелетним мишићима помоћу ИЛ-1 и НФκБ активације: ин витро андин виво студија. Цардиовасц Рес 2002; 54(1): 95-104.
6. Ксие КВ, Вхиснант Р, Натхан Ц. Промотор мишјег гена који кодира калцијум независну азот оксид синтазу даје индуцибилност интерфероном и бактеријским липополисахаридом. Ј ЕкпМед 1993; 177(6): 1779-1784.
7. Иуи И, Хаттори Р, Косуга К, Аизава Х, Хики К, Каваи Ц. Пречишћавање синтазе азот оксида из макрофага пацова. Ј БиолЦхем 1991; 266(19): 12544-12547.
8. Марлетта МА, Иоон ПС, Ииенгар Р, Леаф ЦД, Висхнок ЈС. Макрофагна оксидација Л-аргинина до нитрита и нитрата: азот оксид је интермедијер. Биоцхемистри 1998; 27(24): 8706-8711.
9. Монцада С, Палмер РМ, Хиггс ЕА. Азот оксид: физиологија, патофизиологија и фармакологија. Пхармацол Рев 1991; 43(2):109-142.
10. Панг Л, Холт ЈР. Цитотоксичност на макрофаге тетрандрина, алкалоида против силикозе, праћена прекомерном производњом простагландина. Биоцхем Пхармацол 1997; 53(6): 773-782.
11. Хунскаар С, Холе К. Формалински тест код мишева: дисоцијација између инфламаторног и неинфламаторног бола. Паин 1987; 30:103-114.
12. Лестер РС, Кновлес СР, Схеар НХ. Ризици системске употребе кортикостероида. Дерматол Цлин 1998; 16(2): 277-288.
13. Лицхтенстеин ДР, Сингал С, Волфе ММ. Нестероидниантиинфламаторнолекови и гастроинтестинални тракт. Мач са две оштрице. Артхритис Рхеум 1995; 38(1): 5-18.
14. Мукхерјее Д, Ниссен СЕ, Топол ЕЈ. Ризик од кардиоваскуларних догађаја повезаних са селективним инхибиторима ЦОКС{1}}. ЈАМА 2001; 286(8):954-959.
15. Фелдман СЦ, Реиналди С, Стортз ЦА, Церезо АС, Дамонт ЕБ. Антивирусна својства фукоидан фракција из Леатхесиадифформис. Пхитомедицине 1999; 6(5): 335-340.
16. Ванг Ј, Зханг К, Зханг З, Сонг Х, Ли П. Потенцијални антиоксидативни и антикоагулантни капацитет фракција фукоида мале молекулске тежине екстрахованих из Ламинариа јапоница. Инт Ј Биол Мацромол2010; 46(1): 6-12.
17. Бојаковски К, Абрамцзик П, Бојаковска М, Зволинска А, Прзибилски Ј, Гационг З. Фуцоидан побољшава ренални проток крви у раној фази бубрежне исхемије/реперфузије код пацова. ЈПхисиол Пхармацол 2001; 52(1): 137-143.
18. Ли Н, Зханг К, Сонг Ј. Токсиколошка процена фукоидана екстрахованог из Ламинариа јапоница код пацова Вистар. Фоод ЦхемТокицол 2005; 43(3): 421-426.
19. Иамада П, Иијима Р, Хан Ј, Схигемори Х, Иокота С, Исода Х. Инхибиторни ефекат актеозида изолованог из Цистанцхе тубулоса на ослобађање хемијског медијатора и производњу инфламаторних цитокина од стране РБЛ-2Х3 и КУ812 ћелија. Планта Мед 2010; 76(14): 1512-1518.
20. Схин С, Јеон ЈХ, Парк Д, Јанг ЈИ, Јоо СС, Хванг БИ, Цхое СИ, Ким ИБ.Анти-инфламаторноефекти етанолног екстракта ангелике гигас у моделу инфламације карагенан-ваздушне врећице. Екп Аним 2009; 58(4): 431-436.
21. Хевел ЈМ, Марлетта МА. Анализа азот-оксид синтазе. МетходсЕнзимол 1994; 233: 250-258.
22. Романо М, Фаггиони Р, Сирони М, Саццо С, Ецхтенацхер Б, ДиСанто Е, Салмона М, Гхеззи П. Карагенан је изазвао акутну упалу у синовијалном моделу ваздушне врећице миша. Улога фактора туморске некрозе. Медиаторс Инфламм 1997; 6(1): 32-38.
23. Валлаце ЈЛ, Цхапман К, МцКнигхт В. Лимитедантиинфламаторноефикасност инхибиције циклооксигеназе-2 у запаљењу карагенан-ваздушних врећица. Бр Ј Пхармацол 1999; 126(5): 1200-1204.
24. Гусланди М. Азот оксид и инфламаторне болести црева. Еур Ј Цлин Инвест 1998; 28(11): 904-907.
25. Ритцхлин ЦТ, Хаас-Смитх СА, Ли П, Хицкс ДГ, Сцхварз ЕМ. Механизми ТНФ- - и РАНКЛ-посредоване остеокластогенезе и ресорпције костију код псориатичног артритиса. Ј Цлин Инвест 2003;111(6): 821-831.
26. Мингхетти Л. Цицлоокигенасе-2 (ЦОКС-2) у инфламаторним и дегенеративним болестима мозга. Ј Неуропатхол Екп Неурол 2004;63(9): 901-910.
27. Ст-Онге М, Фламанд Н, Биарц Ј, Пицард С, Боуцхард Л, ДуссаултАА, Лафламме Ц, Јамес МЈ, Цаугхеи ГЕ, Цлеланд ЛГ, БоргеатП, Поулиот М. Карактеризација генерације простагландина Е2 кроз циклооксигеназу (ЦОКС){ {3}} пут у људским неутрофилима.Биоцхим Биопхис Ацта 2007; 1771(9): 1235-1245.
28. Цхои ИХ, Парк ХИ.Анти-инфламаторноефекти спермидина у БВ2 микроглијалним ћелијама стимулисаним липополисахаридом. Ј Биомед Сци2012; 19: 31.
29. Валлаце ЈЛ, Цхапман К, МцКнигхт В. Лимитедантиинфламаторноефикасност инхибиције циклооксигеназе-2 у запаљењу карагенан-ваздушних врећица. Бр Ј Пхармацол 1999; 126(5): 1200-1204.
30. Оливеира де Мело Ј, да Цонцеицао Торрадо Труити М, Мусцара МН, Болонхеис СМ, Дантас ЈА, Цапарроз-Ассеф СМ, Цуман РК, Берсани-Амадо ЦА.Анти-инфламаторноактивност сировог екстракта и фракција листова Нецтандра фалцифолиа. Биол Пхарм Булл2006; 29(11): 2241-2245.
31. Занардо РЦ, Бранцалеоне В, Диструтти Е, Фиоруцци С, Цирино Г, Валлаце ЈЛ. Водоник сулфид је ендогени модулатор упале посредоване леукоцитима. ФАСЕБ Ј 2006; 20(12): 2118-2120.
32. Масферрер ЈЛ, Звеифел БС, Маннинг ПТ, Хаусер СД, Леахи КМ, Смитх ВГ, Исаксон ПЦ, Сеиберт К. Селективна инхибиција индуцибилне циклооксигеназе 2 ин виво јеантиинфламаторнои неулк ерогена. Проц Натл Ацад Сци УСА 1994; 91(8): 3228-3232.
