Ефекти Ксиаоиаосана на ЦАМП сигнални пут у можданој кори код депресивних пацова
Nov 26, 2025
Абстрацт
Циљ:За процену промена у серуму простагландина Е2 (ПГЕ2) и супстанце П (СП) и експресије мРНА цикличног аденозин монофосфата (цАМП) и протеина 1 који везује елемент одговора цАМП (ЦРЕБ1) у церебралном кортексу депресивних пацова и да истражи молекуларни механизам којим Ксиаоиаосан делује антидепресивно.
Методе: Четрдесет осам мушких СД пацова је насумично распоређено у четири групе (н=12 свака): нормална, модел, Ксиаоиаосан и флуоксетин. Модел депресије је успостављен коришћењем хроничног имобилизационог стреса (ЦИС). Ксиаоиаосан је даван гаважом 30 минута пре дневног моделирања током 21 дана. Ефекти слични антидепресивима процењени су макроскопским посматрањем понашања, тестом преференције сахарозе, тестом на отвореном пољу и тестом присилног пливања. Нивои кортикалног цАМП и ЦРЕБ1 мРНА су квантификовани помоћу кПЦР флуоресценције у реалном времену. Серумски ПГЕ2 и СП су мерени ензимским имуносорбентним тестом (ЕЛИСА).
Резултати: У поређењу са моделном групом, и Ксиаоиаосан и флуоксетин значајно су ослабили понашање налик депресији; повећана потрошња сахарозе, број вертикалног узгоја, хоризонтална укрштања и дотеривање у тесту на отвореном терену; и смањено кумулативно време непокретности у тесту принудног пливања. Оба третмана су побољшала кортикалну хистопатологију, повећану експресију мРНА цАМП и ЦРЕБ1 у можданој кори и смањила нивое ПГЕ2 и СП у серуму (П < 0,01).
Закључак:Ксиаоиаосан испољава јасне антидепресивне ефекте код депресивних пацова, потенцијално путем регулације кортикалног цАМП сигналног пута.
Кључне речи: Ксиаоиаосан; Депресија; цАМП; ЦРЕБ1; простагландин Е2 (ПГЕ2); Супстанца П (СП)
Увод
Депресија је водећи узрок морбидитета и инвалидитета широм света, који дубоко нарушава квалитет живота. Ксиаоиаосан, класична формула традиционалне кинеске медицине са више биљака (ТЦМ), показала је клиничку корисност у свим уобичајеним депресивним презентацијама, подржавајући њен континуирани развој као ботаничке терапије.
Механички, цАМП-протеин киназа А (ПКА)-ЦРЕБ сигнална каскада је централна за регулацију расположења и афективног понашања. Смањење регулације овог пута може изазвати депресивне фенотипове. ЦРЕБ је укључен у патофизиологију депресије, а активација цАМП-ом појачава транскрипцију низводних гена; полиморфизми и функционалне редукције ове осе сматрају се факторима осетљивости на депресију.
Инфламаторни медијатори такође доприносе депресији. Простагландин Е2 (ПГЕ2) посредује у инфламаторним одговорима, а повишени ПГЕ2 може изазвати депресивно понашање. Супстанца П (СП), неуропептид повезан са стресом и афектом, често је повишен у серуму пацијената са депресијом. Према томе, измењена експресија цАМП и ЦРЕБ1 мРНА у кортиксу заједно са повишеним серумским ПГЕ2 и СП може представљати молекуларни механизам који лежи у основи кортикалне повреде у депресији.
Иако су бројне формуле ТЦМ једињења истражене за антидепресивне механизме, утицај већине формула на цАМП пут остаје нејасан. Користећи парадигму хроничног имобилизационог стреса (ЦИС) за изазивање понашања налик депресији код пацова, ова студија даље истражује антидепресивни механизам Ксиаоиаосана и упоређује га са флуоксетином, са циљем да информише будући развој ботаничке терапије и пружи корисне увиде за људе који траже помоћ за депресију.
КАКО ТЦМ БИЉНИ ДОДАТКИ ЛЕКАЈУ СИМПТОМЕ ПРОСТАТИСА
Материјали
Животиње
Четрдесет осам здравих одраслих мужјака Спрагуе-Давлеи пацова СПФ-класе (старих 8 недеља, 200–220 г) купљено је од Пекинг Витон Лихуа Екпериментал Анимал Тецхнологи Цо., Лтд. [Број лиценце: СЦКСК (Пекинг) 2016-0006]. Пацови су смештени у објекту за животиње са баријером на Универзитету традиционалне кинеске медицине Гуизхоу на 22 ± 2 степена, релативна влажност 35%-55%, 12 х светлости/12 х таме (7:00-19:00), четири пацова по кавезу, са 7 дана аклиматизације. Етичко одобрење: Универзитет Гуизхоу ТЦМ (бр.. 20210142).
КАКО ТЦМ БИЉНИ ДОДАТКИ ЛЕКАЈУ СИМПТОМЕ ПРОСТАТИСА
ТЦМ ДОДАЦИ БИЉА НА ПРОДАЈУ
Дроге
Формула Ксиаоиаосан следила је пропорције Таипинг Хуимин Хеји Ју Фанг. Сирово биље је купљено од Пекинга Тонгрентанг (Бозхоу) Децоцтион Пиецес Цо., Лтд.: Буплеурум (Цхаиху), Бели божур (Баисхао), Ангелица синенсис (Данггуи), Пржени Атрацтилодес (Баизху), Пориа (Фулинг), Мед пржени ГицаБохе (Зхиа Фресх Лицорице), и Мен (Схенгјианг), комбиновано у односу 5:5:5:5:5:4:1:5. Декокција и концентрација припремљени су у складу са издањем Фармакопеје Народне Републике Кине из 2020. од Хунан Јиузхитанга, служећи као интервенција ТЦМ. Дозе су конвертоване за пацове, растворене у дејонизованој води и припремљене као суспензија.
Флуоксетин хидрохлорид капсуле (Патхеон Француска; паковање од стране Ели Лилли Сузхоу Пхармацеутицал Цо., Лтд.; серија бр.. 6663Б; 20 мг/капсула) коришћене су као референтни антидепресив.
Реагенси
ЕкТак (ТАКАРА, Цат. ДРР100А); СИБР Греен/Флуоресцеин кПЦР Мастер Мик (2×) (Ферментас, Кат. #К0242); прајмери (Кингке Био); Пацов ПГЕ2 и СП ЕЛИСА комплети (Схангхаи Иуању Биотецхнологи Центер, Цат. CK-E30697 и CK-E30122).
Инструменти
7900 кПЦР систем за флуоресценцију у реалном времену (Апплиед Биосистемс, САД); микропипете (Еппендорф); парафински микротом (ХИ1508, Јинхуа Хуииоу); Акуапро систем ултрачисте воде (AJY-0501, Аикепу).
Методе
Груписање и моделовање
Пацови су насумично распоређени у нормалне, моделне, Ксиаоиаосан и флуоксетин групе (н=12 свака). Осим нормалне групе, све групе су биле подвргнуте ЦИС-у у трајању од 3 х дневно у рандомизованим временима током 21 дана. Нормални пацови нису били спутани, али су били ускраћени за храну и воду током истог временског периода да би одговарали руковању.
Администрација лекова
На основу претходних студија, Ксиаоиаосан је даван гаважом у количини од 2,22 г сировог лека·кг-1·дан-1; флуоксетин у дози од 2,0 мг·кг-1·дан-1. Лекови су растворени у дејонизованој води. Дозе су израчунате конверзијом површине тела; запремина сонде је била 10 мЛ/кг, дата 30 минута пре сваке дневне сесије обуздавања. Нормалне и моделне групе су добиле једнаке количине дејонизоване воде.
Мере и процедуре исхода
3.1 Макроскопска запажања
Дневна посматрања бележе ментални статус, кретање и општи изглед.
3.2 Sucrose preference test
Пацови су обучени 3 дана. Дан 1: две боце 1% сахарозе по кавезу. Дан 2: једна боца замењена двоструко дестилованом водом једнаке запремине. Након 24 сата без хране и воде, сваки пацов је добио једну боцу 1% сахарозе и једну двоструко дестиловану воду током 1 сата. Боце су извагане да би се израчунала преференција сахарозе (%): унос сахарозе / (сахароза + унос воде) × 100%.
3.3 Тест на отвореном терену
У тихој просторији коришћено је отворено поље са црним зидовима (125 цм × 125 цм × 50 цм). Пацови су постављени у центар; током 5 минута, забележено је вертикално одгајање, хоризонтална мрежа укрштања и догађаји дотеривања. Арена је између покушаја очишћена са 75% етанола и воде.
3.4 Тест присилног пливања
Пацови су појединачно стављени у стаклене цилиндре са 35 цм воде на 20 ± 2 степена. Од потапања, понашање је забележено 5 минута камером високе резолуције. Измерено је кумулативно време непокретности у трајању од 5 минута (непокретност дефинисана као минимално кретање да би се нос држао изнад воде, благо савијање тела ради равнотеже). Вода се мењала између животиња.
3.5 Хистопатологија
Пацови су анестезирани са 3% натријум пентобарбитала (0,15 мЛ/100 г). Шест пацова по групи је подвргнуто транскардијалној перфузији са 4% параформалдехида, а затим 0,9% физиолошким раствором за фиксацију, декапитацију и екстракцију мозга. Мозгови су потопљени у 4% параформалдехида (4 степена) током 72 х, уграђени у парафин, обрезани и исечени на ~5 μм. Секције су плутане на 48 степени, монтиране, печене на 60 степени 4 х, депарафинизоване и рехидриране, обојене хематоксилином, диференциране, испране, контраобојене еозином, дехидриране, очишћене и прекривене за микроскопски преглед. Преосталих шест пацова по групи је еутаназирано; церебрални кортекс је брзо сециран на леду и чуван на -80 степени за екстракцију РНК.
3.6 Квантификација мРНА
Циљне секвенце су преузете из НЦБИ и прајмера дизајнираних са Примером 6.0.
цАМП: Напред 5′-ЦЦГТГЦТГТГГАТГАЦТТЦААЦЦ-3′; Реверс 5′-АГТЦТЦЦТТЦАЦТЦЦГГААЦЦТЦА-3′; 133 бп.
ЦРЕБ1: Напред 5′-ГГАГЦАГАЦААЦЦАГЦАГАГТГ-3′; Реверс 5′-ГГАТАЦЦТГГГЦТААТГТГГЦА-3′; 105 бп.
ГАПДХ: Напред 5′-ААГГГЦТЦАТГАЦЦАЦАГТЦ-3′; Реверс 5′-ГГАТГЦАГГГАТГАТГТТЦТ-3′; 116 бп.
кПЦР услови: пре-денатурација 90 степени током 30 с; 45 циклуса од 95 степени 10 с, 60 степени 30 с, 72 степена 30 с. Анализа криве топљења: 95 степени 1 мин, 55 степени 1 мин, 95 степени 1 мин.
3.7 Серумски инфламаторни фактори
За ЕЛИСА: (и) поставити стандарде и узорке; додати 50 μЛ стандарда у степенованим концентрацијама у стандардне јажице; (ии) додати 40 μЛ разблаживача узорка у празне и отворе за узорке, затим 10 μЛ узорка и промешати; (иии) додати 100 μЛ ензимског коњугата у све осим слепих; (ив) затворити и инкубирати на 37 степени 1 х; (в) разблажен концентровани пуфер за испирање 1:20; (ви) опрати 5 пута и осушити; (вии) додати 50 μЛ супстрата А затим 50 μЛ супстрата Б, инкубирати на 37 степени заштићено од светлости 15 мин; (виии) додати раствор за заустављање; (ик) очитати апсорбанцију на 450 нм са празним местима постављеним на нулу.
Статистичка анализа
Подаци су анализирани у СПСС 26.0 и изражени као средња вредност ± СД. Након потврђивања нормалности и хомогености варијансе, коришћена је једносмерна АНОВА. П < 0,05 се сматра статистички значајним.
Напомена читаоца за практичаре и људе који траже помоћ
За програмере ботаничких/ТЦМ антидепресива: Студија повезује класичну формулу са специфичним неуробиолошким путем (цАМП–ЦРЕБ) и инфламаторним медијаторима (ПГЕ2, СП). Таква двострука модулација – сигнализација неуропластичности плус запаљење – усклађује се са савременом биологијом депресије и може водити оптимизацију формуле, одабир биомаркера и стратегије комбиновања са ССРИ као што је флуоксетин.
За појединце који истражују помоћ за депресију: Претклинички резултати не могу заменити медицинску негу, али сугеришу да Ксиаоиаосан може побољшати депресивно понашање нормализацијом сигнализације мозга и смањењем упалних сигнала. Ако разматрате биљне опције, консултујте се са квалификованим клиничаром, посебно ако сте на антидепресивима, да бисте избегли интеракције и осигурали дозирање и контролу квалитета.
Транситионал такеаваи
Ксиаоиаосан је побољшао понашање, хистологију мозга и молекуларне маркере код депресивних пацова изазваних ЦИС-ом, вероватно преко регулације кортикалне цАМП/ЦРЕБ сигнализације уз снижавање периферних ПГЕ2 и СП. Надовезујући се на ово, следећа студија ће сецирати узводне регулаторе цАМП-а (нпр. изоформе аденилил циклазе и фосфодиестеразе) и утврдити да ли Ксиаоиаосан директно модулира ове циљеве или делује првенствено кроз антиинфламаторне путеве који се приближавају ЦРЕБ-у.
