Кључне улоге ТРПМ6 у циркадијалној регулацији крвног притиска

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791

Значај реналног јонског канала ТРПМ6 у циркадијалној секрецији ренина за подизање крвног притиска

Јошуке Фунато, Даисуке Јамазаки, Даисуке Окузаки, Нобухико Јамамото и Хироаки Мики

Крвни притисакима дневни образац, са вишим вредностима у активном периоду. Његово повишење на почетку активног периода значајно повећава ризик од фаталних кардиоваскуларних догађаја. Секреција ренина стимулисана бубрежним симпатичким неуронима се сматра суштинском за овај процес; међутим, његов регулаторни механизам остаје углавном непознат. Овде показујемо важностпролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6 (ТРПМ6), Мг2 плус -пермеабилни катјонски канал, у повећању секреције ренина у активном периоду.ТРПМ6експресија је значајно смањена у дисталном увијеном тубулу код хипотензивних мишева са недостатком Цннм{0}}. Ми генеришемо специфичне за бубрегеТРПМ6-недостатак мишева и приметити смањење укрвни притисаки нестанак његове циркадијалне варијације. Конзистентно, секреција ренина није повећана у активном периоду. Штавише, секреција ренина након фармаколошке активације -адренорецептора, циља неуронске стимулације, је поништена, а експресија рецептора је смањена у ћелијама које луче ренин. Ови резултати указују на кључне улогеТРПМ6 у циркадијалној регулацијикрвни притисак.

Процењује се да око милијарду људи широм света има хипертензију, што значајно повећава ризик од разних болести, укључујући потенцијално фаталне болести, као што су исхемијска болест срца и мождани удар. Познато је да се ови фатални инциденти повезани са хипертензијом често дешавају у раним јутарњим часовима, на почетку активног периода кадаblood притисакнагло расте. Сматра се да лучење ренина које покрећу бубрежни симпатички неурони игра кључну улогу у овомкрвни притисакелевације, али њен регулаторни механизам није добро схваћен².

цистанцхе бодибуилдинг

Опште је прихваћено да неки минерали у исхрани, посебно натријум и калијум, играју важну улогу у контроликрвпритисак. Магнезијум је главни есенцијални елемент укључен у различите биолошке активности. Епидемиолошке студије су показале значајну инверзну везу између нивоа магнезијума у ​​исхрани и ризика од хипертензије3-6. Штавише, излучивање магнезијума урином, за које се претпоставља да је у приближној равнотежи са апсорпцијом магнезијума у ​​цревима, у обрнутој је корелацији са ризиком од хипертензије. Ови налази указују на блиску повезаност између хомеостазе магнезијума у ​​​​организму икрвни притисакрегулације, наглашавајући значај Мг2 плус канала и/или транспортера у регулацијикрвни притисак.

Велика количина магнезијума се стално реапсорбује у бубрезима. Већина магнезијума у ​​гломеруларном филтрату се реапсорбује у дебелом узлазном делу Хенлеове петље, али последњи корак реапсорпције се дешава у дисталном увијеном тубулу (ДЦТ)8. Последњи процес је строго регулисан како би се количина реапсорпције подесила на ниво који је прикладан за одржавање хомеостазе магнезијума. Геномске анализе урођених болести са симптомима хипомагнезијемије откриле су неколико кључних молекула укључених у овај процесТРПМ6, кодирањепролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6(ТРПМ6), који је мутиран код пацијената са рецесивном хипомагнеземијом са секундарном хипокалцемијом2,10.ТРПМ6формира Мг2 плус -пермеабилни јонски канал локализован на апикалној мембрани ДЦТ ћелија и посредује у уносу Мг2 плус из тубуларног лумена1. Други кључни молекул је циклин М2 (ЦННМ2) и Мг2 плус транспортер локализован на базолатералној мембрани ДЦТ ћелија12,13. Цннм2 ​​мутације изазивају породичну доминантну хипомагнеземију, коју карактеришу дефекти у реапсорпцији магнезијума у ​​бубрезима2. Мишеви са недостатком Цнмм2- показују сличне симптоме хипомагнезијемије са губитком магнезијума у ​​бубрезима4. Прецизна молекуларна улога ЦННМ2 је још увек контроверзна, али неколико линија доказа сугерише да он посредује Мг2 плус ефлукс из ДЦТ ћелија кроз базолатералну мембрану5, чиме доприноси реапсорпцији магнезијума. Даље анализе мишева са недостатком Цннм{16} су откриле да ови мишеви такође имају знатно нижекрвпритисакнего контролни мишеви4. Међутим, детаљи механизма и умешаност других Мг2 плус канала/транспортера у овокрвпритисакрегулатива остаје непозната.

Такође је познато да бубрежни ДЦТ игра кључну улогу укрвпритисакрегулација јер значајно реапсорбује натријум и регулише запремину телесних течности6. Бројни катјонски канали/транспортери, као што су На-Цл ко-транспортер (НЦЦ), епителни натријум канал (ЕНаЦ) и На плус /Х плус измењивач 2 (НХЕ2), експримирани су на ДЦТ апикалној мембрани и неки од ови протеини посредују у уносу На плус у ДЦТ ћелије из тубуларног лумена. Интрацелуларни На плус се затим екструдира из ћелија кроз базолатералну мембрану помоћу На плус /К плус -АТПазе да би се постигла његова реапсорпција. Осим директног учешћа у регулисању запремине телесне течности, ДЦТ се налази у близини мацула денса, која контролише лучење ренина, хормона који има главну улогу у оркестрирању.крвни притисакпропис17,18. Осећајући нивое Цл у урину, ћелије мацула денса стимулишу оближње јукста-гломеруларне (ЈГ) ћелије да луче ренин.

У овом раду вршимо анализу транскриптома са бубрезима хипотензивних мишева са недостатком Цннм{0}}. Налазимо значајно смањење уТрпм6, што нас наводи да генеришемо специфичне за бубрегеТрпм6-дефицитарни мишеви. Неочекивано, анализе овог соја мишева откривају фенотип који се квалитативно разликује од фенотипа Цннм2-дефицијенције: губитак циркадијалне варијацијекрвпритисак. Такође налазимо да је овај фенотип узрокован поремећеним лучењем ренина, акрвни притисак-хормон подизања чији је ниво у крви нормално повишен током активне фазе.

цистанцхе бодибуилдинг

Резултати

Смањење регулацијеТРПМ6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)израз код мишева са недостатком Цннм2- Да истражите молекуларни механизамкрвни притисаксмањење код мишева са недостатком Цннм2-, извршили смо анализу ДНК микромрежа да бисмо истражили промене експресије гена у бубрегу Цннм2ф/ил; Шест2-Цре мишева, којима недостају оба алела Цннм2 ​​у бубрегу4. Међу диференцијално експримираним генима (Табела 1), одабрали смо анализу Пвалб иТрпм6, а оба су изражена у ДЦТ919. Квантитативне ПЦР(кПЦР) анализе су то открилеТрпм6експресија је на сличан начин смањена у бубрезима оба Цннм2фи; Шест2-Цре и Цннм2 ​​плус / мишеви. Пошто и Цннм2 ​​плус /А и Цннм2фи/; Шест2-Цре мишева је било хипотензивно4, анализирали смоТРПМ6 детаљније изражавање. Имуноблотинг анализе лизата бубрега потврдиле су значајно смањењеТРПМ6на нивоу протеина услед недостатка Цннм2-, док нивои НЦЦ и фосфорилисаног НЦЦ (активни облик) нису били значајно погођени, експресија ЦННМ2 је потврђена узастопним имунопреципитацијом и имуноблотинг анализама). Смањење одТРПМ6у бубрезима Цннм2ф/и; Шест2-Цре мишева је такође потврђено имунофлуоресцентном анализом.

Такође смо испиталиТРПМ6експресија код мишева којима недостаје ЦННМ4, који такође показују симптоме хипомагнезијемије20, али су повишеникрвни притисак4. Имуноблотинг и имунофлуоресцентне анализе су показале даТРПМ6експресија је повећана у ДЦТ ћелијама мишева са недостатком Цннм{0}}, што сугерише даТРПМ6израз је уско повезан сакрвни притисаквредности, али није директно повезан са нивоом магнезијума у ​​крви.

Регулатива оТРПМ6експресија интрацелуларним Мг2 плус у ДЦТ ћелијама. За карактеризацију молекуларног механизмаТРПМ6 смањење регулације код мишева са недостатком Цннм{0}}, користили смо ћелијску линију МДЦТ21 изведену из ДЦТ-а, која међу генима породице Цннм изражава доминантно Цннм2 ​​и умерено Цннм3 и Цннм4. Како ЦННМ2 и ЦННМ4 имају снажну активност Мг2 плус ефлукса, док ЦННМ3 нема Мг2 плус активност ефлукса15, ми смо извели рушење Цннм2, Цннм4 или оба, посредовано РНК (сиРНА) посредовано малим интерференцијама. Нокдаун Цннм2 ​​је повећао интрацелуларне нивое Мг плус ([Мг плус ]), а истовремено обарање Цннм4 довело је до благог повећања просечног [Мг2]; вредност, која није била статистички значајна. Следеће смо испиталиТрпм6експресије помоћу кПЦР-а и открили су значајно смањење након обарања Цннм2 ​​и много веће смањење након двоструког обарања Цннм2 ​​и Цннм4. дакле,Трпм6изгледа да је експресија негативно регулисана интрацелуларним нивоима Мг2 плус, што је у складу са претходним извештајима23. Да бисмо директно испитали важност Мг2 плус, узгајали смо МДЦТ ћелије у медијуму са различитим концентрацијама Мг2 плус .1х, смањење екстрацелуларне концентрације Мг2 плус довело је до смањења интрацелуларног Мг2 плус нивоа и повећањаТрпм6експресија, што сугерише супресивну улогу Мг2 плус. У случају двоструког нокдауна (Цннм2/Цннм4) ​​МДЦТ ћелија,Трпм6експресија је потиснута са смањењем Мг2 плус

плус концентрације до 0.2 мм, али даља смањења су поништила супресивни ефекат; и интрацелуларни Мг2 плус иТрпм6нивои се нису значајно разликовали од контролних ћелија трансфицираних сиРНА у условима 0.1 и 0.02 мМ. Ови резултати указују на регулаторни механизам зависан од Мг2 плусТрпм6израз, који објашњаваТрпм6смањење регулације у бубрезима мишева са недостатком Цннм{0}}.

Условно ометањеТрпм6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)у бубрегу. Затим смо имали за циљ да генеришемоТрпм6-недостатак мишева за даље истраживање важностиТРПМ6у регулацији одкрвни притисак. Користили смо клон ембрионалне матичне (ЕС) ћелије који носи рекомбинантТрпм6алел (Трпм6-) који садржи секвенцу акцептора спајања, што доводи до прераног спајања мРНК и резултира мРНК скраћеном после ексона 6. Химерни хетерозиготни мишеви су добијени ињекцијом бластоциста у ЕС ћелије и рекомбинација је потврђена ПЦР-ом. Укрстили смо овеТрпм6плус /- мишеви, али неТрпм6-/--офф_пролеће су добијене. Овај резултат је у складу са претходним извештајима који показују смртност ембриона уТрпм6-дефицитарни мишеви24,25

Због тога смо извршили условни поремећај који је специфичан за бубрегеТрпм6користећи Сик2-Цре, који омогућава ефикасну и специфичну експресију Цре рекомбиназе фузионисане са ГФП-ом у ембрионалном бубрегу.Трпм6фл/, Сик2-Цре мишеви (специфични за бубрегеТрпм6-дефицитарни мишеви) рођени су у очекиваном Менделовом односу. За одређивање израза наТРПМ6, извршили смо имуноблотинг анализе користећи анти-ТРПМ6антитело.ТРПМ6нивои протеина су у великој мери смањени у бубрезимаТрпм6фл/фл, Сик2-Цре мишеви, али нису примећене значајне промене у другим органима. Имунофлуоресцентне анализе бојења такође нису показале експресијуТРПМ6у НЦЦ-позитивним ДЦТ ћелијама. Нисмо приметили ништа значајноТРПМ6-позитиван сигнал у више од 100 таквих кластера НЦЦ-позитивних ћелија, што сугерише даТРПМ6експресија је скоро потпуно потиснута у ДЦТ ћелијама Трпмфи/; Шест2-Цре мишева. Ови резултати потврђују успешну генерацију специфичних за бубрегеТрпм6-дефицитарни мишеви.

Прво смо испитали ефекат специфичног за бубрегеТрпм6-недостатак на хомеостази магнезијума. Држали смо мишеве у метаболичким кавезима и сакупљали узорке урина и серума, који су затим подвргнути колориметријској квантитацији нивоа магнезијума коришћењем Ксилидил Блуе-И. Нивои магнезијума у ​​серуму су били значајно нижи уТрпм6л/л; Шест2-Цре мишева у поређењу са онима у контролиТрпм6плус / плус ; Шест2-Цре мишева, док су нивои магнезијума у ​​урину били виши. Такође смо извршили анализе емисионе спектроскопије индуктивно спрегнуте плазме (ИЦП-ЕС) да бисмо измерили неколико главних металних елемената у серуму и открили да су само нивои магнезијума значајно погођени у Трпмд/; Шест2-Цре мишева. Ови резултати јасно указују на то да мишеви са недостатком Трпм6- специфичног за бубреге имају хипомагнеземију са губитком магнезијума у ​​бубрезима, као што је примећено код мицела са недостатком Цннм2-4 за бубреге.

Недостатак циркадијалне варијацијекрвпритисаки активност ренина. Затим смо подвргнутиТрпм6И л; Шест2-Цре мишева докрвпритисакмерења помоћу радиотелеметрије. Систолни и дијастолникрвни притисаквредности су обе биле знатно ниже уТрпм6л/; Шест2-Цре мишева него код контролних мишева. Важно је напоменути да уобичајена циркадијална варијацијакрвни притисак, са високим вредностима током мрачног периода и ниским вредностима током светлосног периода код мишева, није примећено уТрпм6ф/л; Шест2-Цре мишева. Да бисмо испитали да ли се циркадијални ритам одвија нормално, користили смо радиотелеметрију за мерење локомотивне активности мишева и потврдили врло јасну циркадијалну варијацију уТрпм6л/; Шест{{0}}Цре мишева. Такође смо испитали нивое вазопресина (АВП) у крви и нивое мРНК два гена сата Бмалл и Пер2 у мозгу и бубрезима; познато је да сви показују типичне циркадијалне варијације27,28. Анализирали смо у шест различитих временских тачака (на 0,4,8 зеитгебер времена (ЗТ) за светлосни период и на 12,16,20 ЗТ за тамни период). Контролни мишеви показују јасне циркадијалне обрасце њихове експресије као што је раније објављено28, и опет, нисмо пронашли значајне абнормалности уТрпм6/И л; Шест2-Цре мишева. Такође смо проверили ниво експресије Трпм7, који кодира Мг2 плус -пропусни канал уско повезан саТРПМ6, у бубрегу. Обрасци изражавања су били веома слични код обаТрпм6плус / плус ; Сик2-Цре и Трпм6ф/; Шест2-Цре мишева и нису показивали јасне циркадијалне обрасце. Колективно закључујемо да се циркадијални ритам одвија нормалноТрпм6и; Шест2-Цре мишева. Сматрало се дакрвпритисакелевација током активног периода (тамни период за мишеве и светли период за људе) и код људи и код мишева се јавља као одговор на повећање секреције ренина у крв2. Измерили смо активност ренина у узорцима крви прикупљеним у шест различитих временских тачака описаних горе. Јасно повећање активности ренина у крви примећено је током мрачних периода у узорцима контролних мишева, али није примећено значајно повећање у узорцима изТрпм6/лШест2-Цре мишеви. Такође смо измерили ниво норадреналина у крви, за чије ослобађање је познато да је стимулисано активацијом ренин-ангиотензин система29,30. Као што се очекивало, њихова циркадијална варијација је такође несталаТрпм6, шест2-Цре мишева. У међувремену, ниво протеина ангиотензиногена у крви (АГТ), другог молекула који ограничава брзину за активирање система ренин-ангиотензин код мишева31, није био под утицајемТрпм6 недостатак. Резултати сугеришу да је поремећена циркадијална варијација ренина важна за губитак циркадијалне варијације ренина.крвпритисакод странеТрпм6-недостатак.

БлизинаТРПМ6-изражавање ћелија у ћелије које луче ренин. Ренин се експримира и излучује из ЈГ ћелија у бубрегу17,18. ЈГ ћелије су у директном контакту са мацула денса, која се налази поред ДЦТ и стимулише секрецију ренина из ЈГ ћелија као одговор на смањење нивоа Цл у урину18. Имунофлуоресцентно бојење за ренин и неуронску синтазу азот оксида (нНОС), маркер мацула денса, није показало абнормалности ни у обрасцу ни у интензитету позитивних сигнала уочених у близини гломерула уТрпм6ф/; Шест2-Цре мишева. Стога се чини да ћелије директно укључене у лучење ренина и његову регулацију не утичу значајноТрпм6недостатак. КаоТРПМ6је ко-експримиран са НЦЦ у ДЦТ-у, затим смо испитали просторни однос измеђуТРПМ6/НЦЦ-експресирајуће ћелије (ДЦТ) и мацула денса или ЈГ ћелије. Конфокалне слике сагиталних ДЦТ пресека показале су скоро потпуно преклапањеТРПМ6и НЦЦ сигнале кроз ДЦТ. Затим смо обојени за нНОС и НЦЦ, и открили да су области позитивне на нНОС и НЦЦ повезане, без икаквог преклапања сигнала. Поред тога, двоструко бојење за ренин иТРПМ6/НЦЦ је открио да некиТРПМ6/НЦЦ-експресирајуће ћелије су у близини ЈГ ћелија које експримирају ренин, што сугерише даТРПМ6Ћелије које експримирају /НЦЦ, као и мацула денса, могу имати значајан утицај на лучење ренина.

Оштећено лучење ренина одТрпм6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)недостатак. Генерално, аутономни нервни систем игра кључну улогу у оркестрирању прогресије циркадијалног ритма. Сматра се да је лучење ренина из ЈГ ћелија током активног периода стимулисано норадреналином који се излучује из бубрежних симпатичких неурона32. Да бисмо директно истражили ефекат такве стимулације на секрецију ренина, припремили смо кришке бубрега и стимулисали их изопротеренолом, агонистом -адренорецептора (АР). Резултати су показали врло јасно смањење ренин-позитивног сигнала који је остао у резу након стимулације изопротеренолом током 30 минута. Квантитативне анализе су показале да се проценат гломерула окружених ренин-позитивним сигналом смањио са приближно 80 процената на 30 процената након стимулације изопротеренолом, што указује на појаву масивног лучења ренина. Међутим, нисмо приметили значајан ефекат стимулације изопротеренолом на сигнал ренина у резовима бубрега одТрпм6/1; Шест2-Цре мишева. Да бисмо потврдили резултат, такође смо измерили активност ренина у крви након примене изопротеренола. Резултати показују да је значајно повећање активности ренина у крви примећено само код контролних мишева, док је повећање срчане фреквенције уобичајено примећено код оба соја. Ови резултати имплицирају да ЈГ ћелије које луче ренин не могу да реагују на стимулацију бубрежних симпатичких неурона, што је у складу са нестанком циркадијалног повећања укрвпритисаки активност ренина уТрпм6л/фл; Шест2-Цре мишева.

ЈГ ћелије се такође могу стимулисати да луче ренин као одговор на простагландине, међу којима се простагландин Е2(ПГЕ2) сматра најзначајнијим јер га физиолошки луче ћелије мацула денса када се нивои Цл-а у урину смање17,18. Штавише, такође је познато да ПГЕ, третман резова бубрега може ефикасно стимулисати лучење ренина33. Стимулација ЈГ ћелија са ПГЕ2 и изопротеренолом обично активира производњу цАМП, што на крају изазива лучење ренина. Стога смо такође тестирали ефекат ПГЕ и аналога цАМП пропусног за мембрану, дибутилил-цАМП(дб-цАМП). ПГЕ2 и дб-цАМП су успешно стимулисали лучење ренина у резовима бубрега из Трпмди/А, Сик2- Цре мишеви и контролни мишеви. Ово указује на тоТрпм6 недостатак не поништава општу машинерију укључену у откривање спољашњих знакова, преношење интрацелуларних сигнала и извршавање секреције ренина, али посебно утиче на одговор на -АР.

Смањена експресија -АР у ЈГ ћелијама заТрпм6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)недостатак. Оштећен одговор -АР рецептораТрпм6л/л; Шест2-Цре мишева нас је навело да истражимо статус експресије -АР рецептора, и тако смо извршили имунофлуоресценцију 1-АР, главног -АР подтипа експримираног у ЈГ ћелијама34. Као што је раније објављено34, пронашли смо образац бојења у облику траке у бубрежним деловима и контролних и Трпмди/л, Сик2-Цре мишева. Познато је да је 1-АР снажно изражен иу крвним судовима иу ЈГ ћелијама34, и доследно, 1-АР-позитивне ћелије на крају тракастог бојења у контролном бубрегу миша су такође биле позитивне за бојење ренином (приказано врхом стрелице). Насупрот томе, бојење Трпм6л/фл; Шест2-Кре мишји бубрег је показао мањи број 1-АР/ренин двоструко позитивних ћелија, што сугерише да је 1-АР експресија смањена у ЈГ ћелијама. Да бисмо потврдили овај налаз, изоловали смо ЈГ ћелије коришћењем Перцолл методе центрифугирања градијента густине према претходном извештају35. Имуноблотинг анализе су откриле да су ренин-позитивне ЈГ ћелије обогаћене фракцијом траке 3, што је у складу са њиховим извештајем35, а 1-АР експресија у овој фракцији опсега 3 била је посебно много нижа у Трпмди/1; Шест2-Цре мишева. Заједно, открили смо тоТрпм6недостатак смањује ниво експресије 1-АР у ЈГ ћелијама, што је у складу са поремећеном секрецијом ренина.

Ефекат вештачке интервенције на циркадијанкрвпритисакваријација. У завршном сету експеримената тестирали смо ефекат различитих интервенција на циркадијанкрвпритисакваријација. Да бисмо потврдили важност ренина, дали смо клинички доступни инхибитор ренина алискирен36 мишевима дивљег типа. КаоТрпм6аблација, примена алискирена хируршким имплантацијом осмотске мини пумпе значајно је потиснула циркадијалникрвпритисакваријација. Затим смо извршили операције денервације бубрега, пошто је активација -АР на ЈГ ћелијама кроз симпатички нервни систем главни пут за стимулацију лучења ренина на циркадијански начин2. Опет смо установили да је интервенција потиснулакрвпритисакваријација. Ови резултати су у сагласности са нашим моделом да су дефекти у -АР одговору и секрецији ренина одговорни за губитаккрвни притисакваријација у Трпмдл/л; Шест2-Цре мишева.

Такође смо тестирали ефекат повећања садржаја магнезијума у ​​исхрани. У ту сврху, мишеви дивљег типа су храњени храном са високим садржајем Мг која је садржала 0.6 процената (нормална исхрана:0.3 процената магнезијума) током 1 месеца. Као што се очекивало, ти мишеви су показали повишене нивое Мг у крви. Затим смо проверили ниво експресијеТРПМ6ат ДЦТ; драстично се смањио храњењем исхраном са високим садржајем магнезијума, а степен се смањиоТРПМ6експресија је била већа од аблације Цннм2 ​​бубрега. Када смо измериликрвни притисаккод ових мишева смо открили да су мишеви храњени исхраном са високим садржајем Мг показали значајно мањекрвпритисакваријација негоТрпм6-дефицитарни мишеви, што је у складу са нашим схватањем да бубрежниТРПМ6је важно за циркадијанкрвни притисакваријација.

Табела 1. Гени који су били појачано или ниже регулисани у бубрезима Цннм2флфл/флфл; Шест2-Цре мишева.

Дискусија

У овој студији смо показали важностТРПМ6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)у регулацији одкрвни притисак. Конкретно, показујемо скоро потпуни нестанак циркадијалне варијацијекрвни притисаккод специфичних за бубрегеТрпм6-дефицитарни мишеви. Такође смо открили да је секреција ренина, кључног хормона који управља крвним притиском, озбиљно укинута уТрпм6-дефицитарни мишеви, што је у складу са уоченимкрвни притисакфенотип. Неколико извештаја је показало да је ТРПМ7, још један Мг2 плус -пропусни канал, веома сличанТРПМ6, такође утиче на крвни притисак37,38. ТРПМ7 спречава повећањекрвни притисакнакон примене ангиотензина ИИ супресијом одговора васкуларних ендотелних ћелија на ангиотензин ИИ37. Напротив, недавно је објављено да ТРПМ7 такође олакшава подизањекрвни притисакнакон примене лептина посредовањем Мг2 плус прилива у ћелије каротидног тела38. Дакле, улога ТРПМ7 укрвни притисакрегулатива је двосмислена. Међутим, будући да ниво експресије ТРПМ7 у бубрезима није био под утицајем бубрегаТрпм6аблације (додатна слика 5), чини се да ТРПМ7 није директно укључен у фенотипове уочене у овој студији.

Као што је примећено код мишева са недостатком Цннм{0},крвни притисаквредности су смањене уТрпм6-дефицитарни мишеви(Сл.2)14. Међутим, треба напоменути да је постојала јасна разлика између ових мишева. Поремећај Цннм2 ​​је генерално смањенкрвни притисак, али су циркадијалне варијације и даље биле јасно видљиве. Насупрот томе, ова варијација је нестала уТрпм6-дефицитарни мишеви. Таква квалитативна разлика је такође у складу са нашим запажањем да је циркадијална варијација ренина очувана код мишева са недостатком Цннм2- (допунска слика 9). Треба напоменути да и ЦННМ2 иТРПМ6сматра се да су важни за бубрежну реапсорпцију Мг2 плус посредовањем векторског транспорта Мг2 плус кроз ДЦТ, и заиста, мишеви са недостатком било ког гена су показали идентичан фенотип реналног Мг2 плус -губљења (Слика 1 и реф. 39). Квалитативна разлика одкрвни притисакфенотип између Цннм2-иТрпм6Мишеви са недостатком сугеришу да транспорт Мг2 плус у ДЦТ, заједничка функција два молекула, није директно укључен у циркадијалну варијацијукрвни притисаки секреције ренина, што сугерише да ЦННМ2-независна улогаТРПМ6лежи у основи ових интригантних фенотипова.

Неколико механизама ради на стимулисању секреције ренина из ЈГ ћелија за одржавањекрвни притисак. Међу њима, сматра се да улаз од бубрежних симпатичких неурона игра главну улогу у повећањукрвни притисактоком активног периода циркадијалне варијације32. Ови неурони луче норадреналин, који се везује за и активира -АР на ЈГ ћелијама да би стимулисао производњу цАМП, што на крају доводи до секреције ренина1732. У нашим експериментима користимо кришке бубрега добијене одТрпм6Мишеви са дефицитом, стимулација изопротеренолом, агонистом -АР, није показала никакав ефекат на секрецију ренина, док је стимулација са ПГЕ2 или дб-цАМП ефикасно повећала секрецију ренина (слика 4). ПГЕ2 лучи мацула денса као одговор на ниске нивое Цл- у урину и он активира ЕП2 и ЕП4 рецепторе на ЈГ ћелијама, што, попут -АР активације, на крају стимулише производњу цАМП40. Стога, ови резултати имплицирају да је -АР сигнализација селективно укинута у ЈГ ћелијамаТрпм6- мишеви са недостатком, без утицаја на низводни сигнални пут посредован цАМП-ом. Конзистентно, имунофлуоресценција секција бубрега миша и имуноблотирање изолованих ЈГ ћелија открили су да је експресија -АР значајно смањена у ЈГ ћелијамаТрпм6-дефицитарни мишеви (слика 5). Таква смањена експресија -АР би требало да учини ЈГ ћелије неспособним да луче ренин као одговор на стимулацију симпатичког нерва током активног периода, чиме би се елиминисале циркадијалне варијације нивоа ренина у крви икрвни притисак. Треба напоменути да постоји студија која користи 1/ 2-АР нокаут мишеве, која је показала смањен циркадијалникрвни притисакваријација каоТрпм6-дефицитарни мишеви41. Они су то приписали смањеној локомоторној активности, али остаје могуће да смањена циркадијална варијација активности ренина доприноси смањеној циркадијалној варијацијикрвни притисакe. Алтернативно, необична позадина њихових мишева (мешовита позадина Ц57БЛ6/Ј, 129 и ВФБ; користили смо чисту позадину Ц57БЛ6/) могла би прикрити ефекат -АР накрвни притисакваријација; генетска позадина је критична за циркадијални периодкрвни притисакваријација42.

цистанцхе бодибуилдинг

Како губитакТРПМ6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)у ДЦТ ћелијама доводи до смањене експресије -АР у ЈГ ћелијама је остала неухватљива. Експерименти са другим типовима ћелија су показали да експресију -АР регулишу различити молекули за које је познато да посредују у међућелијској сигнализацији: Додавање глукокортикоида у медијум културе ћелијске линије ДДТ1 МФ-2 изведене из вас деференса повећава експресију -АР43. Такође, објављено је да азот оксид(НО) потискује деградацију -АР у срчаним ћелијама путем С-нитрозилације ГРК24. Међу овим молекулима, вреди напоменути да се НО лучи из бубрежних мацула денса ћелија, стимулишући ЈГ ћелије на паракрини начин да повећају секрецију ренина45. Док је експресија нНОС, ензима који производи НО у бубрезима, ограничена на ћелије мацула денса, оне су у директном контакту са ДЦТ ћелијама, следећим сегментом бубрежног тубула6. Дакле, могуће је даТрпм6-недостатак у ДЦТ ћелијама доводи до смањене експресије -АР у ЈГ ћелијама утичући на производњу или ослобађање НО из суседних ћелија мацула денса.

Познато је да ЈГ ћелије такође комуницирају са другим ћелијама тако што формирају празнине са околним ћелијама, као што су мезангијалне ћелије, и примају Ца2 плус за сузбијање секреције ренина7. Иако ЈГ ћелије и ДЦТ ћелије не долазе у директан контакт једна са другом, оне су и даље уско лоциране (реф. 46 и слика 3) и могуће је да ове ћелије користе комуникацију међусобне везе кроз ћелије које се налазе у интервенцији, као што су мезангијалне ћелије; сва три типа ћелија наводно експримирају Цк3747,48, изоформу конексина која олигомеризује и чини празнине. Даља анализа може да идентификује молекул и пут одговоран за међућелијску сигнализацију између ДЦТ и ЈГ ћелија, што је важно за откривање целокупног механизма поремећеног циркадијанакрвни притисакваријација поТрпм6-недостатак.

ИнТрпм6- код мишева са недостатком, циркадијална варијација нивоа у крви не само ренина већ и норадреналина је нестала. Активација ренин-ангиотензин система стимулише ослобађање норадреналина у крвоток29,30, па се чини разумним да ефекатТрпм6 (пролазни потенцијал рецептора повезан са меластатином 6)аблација на нивоима ренина и норадреналина у крви била је слична. Пошто норадреналин такође делује на -АР ћелија ЈГ да би подстакао секрецију ренина, претпоставља се да ова два молекула чине позитивну повратну петљу, стимулишући секрецију један другог. Међутим, треба напоменути да резултати експеримената са применом изопротеренола експлицитно показују дефект у секрецији ренина (Сл.4), па се чини да је то примарни узрок губитка циркадијалне варијације и ренина и норадреналина.

До сада су развијени и коришћени различити ефикасни лекови за лечење хипертензивних пацијената. Међутим, значајан број пацијената показује резистенцију на конвенционалне третмане који користе комбинацију главних антихипертензивних лекова различитих функционалних механизама4. Хируршка денервација бубрежних симпатичких неурона коришћењем ендоваскуларних катетера спроведена је на пробној основи за лечење такве резистентне хипертензије50. Његова практична ефикасност у побољшањукрвни притисакконтрола је била контроверзна51,52, али недавно објављене студије су показале значајно смањење укрвни притисаку поређењу са лажним контролама53,54. Такође постоје различити резултати о утицају реналне денервације на циркадијалне варијацијекрвни притисак. Неки извештаји су показали да је обимкрвни притисаксмањење бубрежне денервације било је веће током активних периода53, али други су пријавили да нема промене у циркадијалној варијацијикрвни притисак55,56. У анализи помоћу лабораторијских животиња, наше операције бубрежне денервације против мишева потиснуле су циркадијалну варијацијукрвни притисак(Сл.6). Сличне операције су такође рађене против пацова, али чак ни контролни пацови дивљег типа не показују скоро никакав циркадијанкрвни притисакваријација на првом месту57,58, што отежава процену ефекта операције. Потребно је више студија да би се разјаснио утицај реналне денервације на циркадијални периодкрвни притисакваријације, што би нам такође помогло да разумемо детаљнији механизамкрвни притисакдисрегулација од странеТрпм6-недостатак.

Телеметријска мерења одкрвни притисак, откуцаја срца и локомоторне активности. Телеметријска мерења одкрвни притисакизведени су на следећи начин4.Крвни притисактрансдуктори (ТАл1ПА-Ц10, Дата Сциенцес Интернатионал) су хируршки убачени у леву заједничку каротидну артерију 2- до 3-месечних мишева под анестезијом (интраперитонеалном применом 0,3 мг/ кг медетомидина, 4 мг/кг мидазолама и 5 мг/кг буторфанола). После 3 недеље опоравка, систолни и дијастолникрвни притисаквредности су забележене са 2-мин планираним узорковањем сваких 60 минута коришћењем Датакуест АРТ софтвера (Дата Сциенцес Интернатионал). Записи су добијени за најмање пет узастопних дана, а просеци мерења обављени у исто време сваког дана су одређени за сваког миша и коришћени за даље статистичке анализе, осим за додатну слику 4. На основу Накаморија и сар.68, бубрежни денервација је обављена 2 недеље пре уметањакрвни притисакпретварачи на следећи начин. Бубрези су откривени резом на абдомену, а везивно ткиво око бубрежних судова је сецирано. Затим су бубрежни судови уроњени у 95-постотни етанол током 2 минута, а затим у ПБС током 2 минута. Лажна операција је изведена коришћењем еквивалентне процедуре без потапања етанолом. Алискирен је даван у дози од 25 мг/кг/дан супкутаном уградњом осмотске пумпе (1004, АЛЗЕТ), а снимање је започето од дана након увођења пумпе. За суплементацију магнезијумом, мишеви су храњени исхраном обогаћеном магнезијумом која садржи 0,6 процената магнезијума (ЦЛЕА Јапан) 1 месец прекрвни притисакмерење.

Пулс је мерен истим радиотелеметријским системом, осим што је снимање обављено са 30- заказаним узорковањем сваког минута, а једно мерење је коришћено за даљу анализу.

Локомоторне активности су процењене коришћењем истог радиотелеметријског система, праћењем промена јачине сигнала са претварача услед кретања животиње. У овом случају, трансдуктори су хируршки уметнути у поткожни простор у десном боку. Снимања су вршена у истим временским интервалима као што је горе описано.

цистанцхе бодибуилдинг

Референце

1. Гилес, ТДЦирцадиан ритам офкрвни притисаки однос према кардиоваскуларним догађајима.Ј. Хипертензије. 24, С{1}}С16 (2006).

2. Смоленски, МХ, Порталуппи, Ф. & Хермида, РЦ инКрвни притисакМониторинг у кардиоваскуларној медицини и терапији, 3рд ЕДТ. (едс Вхите, ВБ) Парт ИИ, Цх.6, 105-128(Спрингер,2016).

3. Виттеман, ЈЦет ал. Проспективна студија фактора исхране и хипертензије међу женама у САД. Тираж 80,1320-1327(1989).

4. Асцхерио, А.ет ал. Проспективна студија фактора исхране и хипертензије међу америчким мушкарцима. Тираж 86,1475-1484(1992).

5. Асцхерио, А.ет ал. Проспективна студија нутритивних фактора,крвни притисаки хипертензија међу женама у САД. Хипертензија 27,1065-1072(1996).

Белешка:горе наведено није потпуна листа референци