Ефекат оксидативног стреса и интерлеукина-1 унакрсног разговора на хроничну упалу код ЕАП пацова и интервенција Анемоне Томентоса
Dec 09, 2025
Абстрацт
Циљеви: Истражити улогу оксидативног стреса и интерлеукина-1 (ИЛ-1) унакрсног разговора у хроничној упали простате код експерименталних пацова са аутоимуним простатитисом (ЕАП) и разјаснити механизам којим Анемоне томентоса лечи ЕАП пацове. Методе: Тридесет Вистар пацова је насумично распоређено у пет група (н=6 свака): нормална, модел, Анемоне томентоса са ниском дозом, Анемоне томентоса са средњом дозом и Анемоне томентоса са високом дозом. После интервенције лека, Вестерн блоттинг је коришћен за откривање протеина ТЛР-4, ИРАК1 и пНФ-κБ п65 у ткиву простате. Серумска супероксид дисмутаза (СОД), глутатион пероксидаза (ГСХ‑Пк) и малондиалдехид (МДА) мерени су коришћењем комплета за анализу. Инфламаторни цитокини, укључујући интерлеукин-1 и интерлеукин-10, мерени су ЕЛИСА тестом. Резултати: У поређењу са нормалном групом, експресија протеина ТЛР‑4, ИРАК1 и пНФ‑κБ п65 у простати моделне групе је значајно повећана (П < 0,01). Нивои СОД и ГСХ-Пк у серуму су смањени (П < 0,01), док су нивои МДА и интерлеукина-1 повећани (П < 0,01). У поређењу са моделном групом, интервенција Анемоне томентоса је значајно смањила експресију протеина ТЛР-4, ИРАК1 и пНФ-κБ п65 у простати ЕАП пацова (П <0,01). Серумски СОД, ГСХ-Пк и интерлеукин-10 су били значајно повишени (П < 0,01 или П < 0,05), док су МДА и интерлеукин-1 били смањени (П < 0,01 или П < 0,05). Хистологија је показала да су повреда простате и инфилтрација инфламаторних ћелија побољшани након третмана са Анемоне томентоса. Закључак: ИРАК1 може бити кључни чвор који посредује у унакрсном разговору између оксидативног стреса и ИЛ-1 током упале код ЕАП пацова. Анти-инфламаторни механизам Анемоне томентоса код ЕАП пацова може укључивати смањење оксидативног стреса и ИЛ-1 регулацијом ТЛР-4/ИРАК1/НФ-κБ п65 сигналног пута.
Херб Цистанцхе суплементи
Кључне речи
Хронични простатитис; експериментални аутоимуни простатитис (ЕАП); оксидативни стрес; интерлеукин-1 (ИЛ-1); ИРАК1; ТЛР‑4/ИРАК1/НФ‑κБ п65 сигнални пут; СОД; ГСХ‑Пк; МДА; ЕЛИСА; Вестерн блот; Анемоне томентоса; Дахуоцао (Зхуанг медицина); традиционална кинеска медицина; ТЦМ биљка за простатитис; кинеска етномедицина; анти-инфламаторно; антиоксидативна терапија
Хронични простатитис (ЦП)је једна од најчешћих болести у урологији и андрологији. У Кини, пријављена преваленција ЦП креће се од 6,0% до 32,9% [1]. Клинички, карактерише га углавном хронични бол у карлици и може бити праћен различитим степеном уринарних симптома и сексуалне дисфункције, што озбиљно утиче на квалитет живота пацијената. Према извештајима истраживања [2], патогенеза ЦП може бити повезана са инфекцијом патогена, оксидативним стресом, рефлуксом урина, променама нивоа полних хормона, неуроендокрином дисбалансом и имуно-инфламаторним одговорима. Актуелне студије указују да се у инфламаторном стању простате производи велика количина реактивних врста кисеоника (РОС); микроокружење са високим РОС изазива оксидативни стрес и учествује у настанку и развоју ЦП [3]. Цитокини су регулаторни протеински полипептиди који играју важну улогу у настанку и развоју ЦП; Тежина болести корелира са нивоом интерлеукина-1 (ИЛ-1) у секрету простате [4], што представља потенцијални терапијски приступ. С обзиром на сложену патофизиологију, савремени медицински третмани ЦП имају одређена ограничења [5]. Последњих година, традиционална кинеска медицина (ТЦМ) је показала повољну ефикасност у лечењу ЦП, ублажавању болова и уринарних симптома и демонстрирајући карактеристичне предности.
Из перспективе ТКМ, етиологија и патогенеза ове болести укључују недостатак бубрега, влажну топлоту и застој крви [6]. Зхуанг етномедицинска биљка Дахуоцао (Анемоне томентоса; опор, благо горак, неутралан у својству) има функцију чишћења топлоте и распршивања влаге, промовише диурезу за ублажавање странгурије, тонизира чи и јача бубреге [7]. Клиничка запажања сугеришу да Дахуоцао може побољшати симптоме ЦП [8] и регулисати секрецију инфламаторних цитокина код пацова модела ЦП [9]. Његов механизам може бити везан за пут микроРНА-146а/Толл-лике рецептор-4 (ТЛР-4)/нуклеарни транскрипциони фактор-κБ (НФ-κБ) који потиче из амилацеа простате [10]. На основу овога, ова студија је посматрала улогу унакрсне интеракције између оксидативног стреса и ИЛ-1 у хроничној упали простате у експерименталном моделу аутоимуног простатитиса (ЕАП) пацова и истраживала интервентни ефекат Дахуоцао декокције.
Материјали
1.1 Експерименталне животиње
Тридесет мужјака Вистар пацова купљено је од Цхангсха Тианкин Биотецхнологи Цо., Лтд. (бр. лиценце: СЦКСК2019‑0013), старости 8 недеља, телесне тежине 200 ± 17 г. Одобрење за етику животиња бр.: ДВ20220926‑202, Универзитет кинеске медицине Гуангки. Животиње су смештене у кључну лабораторију за молекуларну биологију за превенцију и лечење у ТЦМ, Гуангки.
1.2 Главни инструменти и реагенси
Апарат за електрофорезу (Беијинг Лиуии, ДИЦЗ‑24ДН), квантификатор нуклеинске киселине/протеина (Деновик ДС‑11), полусуви трансфер систем (АТТО ВСЕ‑4040, АЕ6675Л). Комплетан Фројндов помоћник (Сигма-Алдрицх, Ф5881). ТЛР-4 антитело (Афинитет, АФ7017), антитело повезано са киназом-1 (ИРАК1) рецептором за интерлеукин-1 (Аффинити, АФ4742), фосфо-НФ-κБ п65 антитело (Аффинити, АФ2006). ГСХ‑Пк комплет (Нањинг Јианцхенг, А005‑1), СОД комплет (Нањинг Јианцхенг, А001‑1), МДА комплет (Нањинг Јианцхенг, А003‑1). ИЛ-1 ЕЛИСА (Лианке Био, ЕК301БХС), ИЛ-10 ЕЛИСА (Лианке Био, ЕК310).
Методе
2.1 Припрема модела ЕАП пацова
Припрема пречишћених протеина простате пацова следила је претходне методе [10]. Моделирање имунизације [10–11] је спроведено према утврђеним протоколима. Успешно моделовање је назначено нестанком слузокоже у каналима простате, непотпуним ацинусима, стромалним едемом и инфламаторном ћелијском инфилтрацијом [12].
2.2 Припрема Дахуоцао децокције
Декокција Дахуоцао (Анемоне томентоса) припремљена је према претходним експерименталним поступцима [10].
2.3 Груписање и примена лекова
Тридесет пацова је насумично додељено табелом случајних бројева у нормалне, моделне и групе Дахуоцао са ниским, средњим и високим дозама (н=6 по групи). Након успешног моделирања, групе са ниским, средњим и високим дозама су примале Дахуоцао декокцију путем сонде у концентрацијама од 1,46 г/мЛ, 2,92 г/мЛ, односно 5,84 г/мЛ (4 мЛ/кг·д). Нормалне и моделне групе су добиле физиолошки раствор (4 мЛ/кг·д). Третмани су давани једном дневно током 4 недеље.
2.4 Хистопатологија простате (Х&Е бојење)
Ткива простате су фиксирана, уграђена и пресечена; пресеци су обојени хематоксилин-еозином и прегледани светлосном микроскопијом да би се процениле ацинарне структурне промене и инфилтрација инфламаторних ћелија.
2.5 Серумски маркери оксидативног стреса: СОД, МДА, ГСХ‑Пк
Нивои СОД, МДА и ГСХ‑Пк у серуму су мерени стриктно према упутствима одговарајућег комплета.
2.6 ЕЛИСА детекција серумских ИЛ‑1 и ИЛ‑10
Концентрације ИЛ-1 и ИЛ-10 у серуму мерене су стриктно према протоколима ЕЛИСА комплета.
2.7 Вестерн блот детекција ТЛР‑4, ИРАК1 и пНФ‑κБ п65 у простати
Приближно 50 мг ткива простате је млевено у фини прах у течном азоту, подељено на аликвоте и лизирано у РИПА пуферу. Протеини су раздвојени електрофорезом, пребачени, блокирани, инкубирани са примарним антителима, испрани, инкубирани са секундарним антителима, испрани и снимљени. Експресија протеина је квантификована као циљне/кућне вредности сиве траке.
2.8 Статистичка анализа
Подаци су анализирани коришћењем СПСС 22.0. Нормално распоређени подаци са хомогеношћу варијансе су представљени као средња вредност ± СД и анализирани једносмерном АНОВА са ЛСД‑т пост хоц тестовима. Ненормални или хетероскедастични подаци су представљени као М (КР) и анализирани непараметарским тестовима. Двострани П < 0,05 сматран је статистички значајним.
Резултати (сажето понављање ради јасноће)
У поређењу са нормалним: ТЛР‑4 простате, ИРАК1 и пНФ‑κБ п65↑ (П < 0,01); серум СОД и ГСХ‑Пк↓ (П < 0,01); МДА и ИЛ‑1 ↑ (П < 0,01).
У поређењу са моделом: Анемоне томентоса (Дахуоцао) је смањио ТЛР‑4/ИРАК1/пНФ‑κБ п65 (П < 0,01); повећан СОД, ГСХ‑Пк и ИЛ‑10 (П < 0,01 или П < 0,05); смањен МДА и ИЛ-1 (П < 0,01 или П < 0,05). Хистологија је показала олакшану повреду жлезде и инфламаторну инфилтрацију.
Закључак
ИРАК1 може представљати кључни чвор у унакрсном разговору између оксидативног стреса и ИЛ-1 током хроничне упале простате код ЕАП пацова. Анемоне томентоса (Дахуоцао), ТЦМ/Зхуанг етномедицинска биљка за простатитис, може инхибирати хроничну упалу смањењем оксидативног стреса и ИЛ-1 кроз регулацију ТЛР-4/ИРАК1/НФ-κБ п65 сигналног пута.
Напомене о ауторитету и изворима
Епидемиологија и биомедицински контекст су утемељени у националној литератури за урологију/андрологију [1–6].
Идентитет, својства и ТЦМ индикације Анемоне томентоса (Дахуоцао) упућују на кинески компендијум Материа Медица Државне управе ТЦМ-а [7], ауторитативни извор.
Клиничка опсервација и механичке студије на животињама на Дахуоцаоу за ЦП/ЦНП су подржане рецензираним кинеским часописима и стандардизованим експерименталним смерницама [8–12], чиме се повећава кредибилитет употребе ТЦМ биљке за простатитис.
Референце
[1] Ми Х, Чен К, Мо ЗН. Епидемиолошке карактеристике хроничног простатитиса у Кини. Цхин Ј Андрол. 2012;18(7):579‑582.
[2] Зхенг КСТ, Цхен СХ, Иао ВЛ, ет ал. Напредак у етиологији и патогенези хроничног простатитиса. Модерна дијагноза и лечење. 2019;30(11):1810-1813.
[3] Паулис Г. Инфламаторни механизми и оксидативни стрес код простатитиса: могућа улога антиоксидативне терапије. Рес Реп Урол. 2018;10:75‑87.
[4] Канг СВ, Парк ЈХ, Сеок Х, ет ал. Ефекти корејског црвеног гинсенга на инфламаторне цитокине и апоптозу у моделу хроничног небактеријског простатитиса пацова. Биомед Рес Инт. 2019;2019:2462561.
[5] Ксуе И, Дуан И, Гонг Кс, ет ал. Традиционална кинеска медицина за хронични простатитис/синдром хроничног карличног бола: систематски преглед и мета-анализа. Медицина (Балтиморе). 2019;98(26):е16136.
[6] Сун ЗКС, Ли ПЦ. ТЦМ дијагностичко и терапијско размишљање за хронични простатитис. Лиаонинг Ј Традит Цхин Мед. 2019;46(2):268‑269.
[7] Уредништво кинеске Материа Медица, Државна управа ТЦМ. Кинеска Материа Медица. Шангај: Шангајска штампа за науку и технологију; 1999: 1768, 3166.
[8] Лу ЛКС, Ву ЈИ, Хуанг ЗМ, ет ал. Клиничко посматрање ретенционог клистирања са Дахуоцао (Зхуанг медицина) у 60 случајева хроничног простатитиса. Хунан Ј Традит Цхин Мед. 2019;35(6):55‑56. дои:10.16808/ј.цнки.иссн1003‑7705.2019.06.024.
[9] Ванг ВЈ, Схи Х, Зханг Ј, ет ал. Дахуоцао инхибира инфламаторне одговоре у моделу пацова са небактеријским простатитисом. Модерна имунологија. 2021;41(6):504-508. дои:10.35541/цјд.20201030.
[10] Лу ЛКС, Схи Х, Хуанг ЗМ, ет ал. Улога пута миРНА-146а/ТЛР-4/НФ-κБ простатичних цорпора амилацеа у хроничној упали ЕАП пацова и интервенција Дахуоцаоа. Цхин Ген Працт. 2023;26(20):2518‑2524.
[11] Киан И, Киан КСК, Гонг ДВ, ет ал. Интервенција ресвератрола на цитокине у ткиву простате модела простатитис пацова. Цхин Ј Андрол. 2017;31(3):14-18.
[12] Стручни комитет за експерименталну фармакологију ТЦМ, Кинеско удружење кинеске медицине. Нацрт спецификације за припрему животињских модела хроничног простатитиса. Цхин Ј Екп Традит Мед Формулае. 2018;24(19):10‑14.
Опционе ауторске кључне речи за индексирање (ради откривања)
традиционална кинеска медицина; Џуанг етномедицина; Дахуоцао; Анемоне томентоса Маким.; простатитис; синдром хроничног карличног бола; ТЛР4; ИРАК1; НФ‑κБ; оксидативни стрес; антиоксидативни ензими; цитокини; ЕЛИСА; Вестерн блот; модел пацова; ЕАП; биљни антиинфламаторни; ТЦМ биљка за простатитис.
