Терапијски ефекат фенилетаноидних гликозида на дисзооспермију код мишева изазвану циклопфосфамидом и њен механизам

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

ЗХАО Донг-хаил, ЗХАНГ Леи?, ЗХАНГ Иан², КИ Линг', ЗОУ Ксианг-минг'

Апстракт: Циљ Истражити терапеутски ефекат фенилетаноидних гликозида на дисзооспермију код мишева изазвану циклофосфамидом(ЦТКС) и прелиминарно разјаснити механизме укључене у процес. Методе Фенилетаноид гликозид је екстрахован екстракцијом етанолом, четрдесет мужјака БАЛБ/Ц мишева је насумично подељено у контролну групу, групу модела, групу са ниском дозом фенилетаноидних гликозида (50 мг·кг-И) и високом дозом фенилетаноидних гликозида (100 мг). ·кг-). Осим за контролну групу, модел миша са дисзооспермијом је успостављен перитонеалном ињекцијом ЦТКС у дневној дози од 80 мг· кг-и, једном дневно током узастопних 5 дана. Након моделирања, фенилетаноидни гликозиди су давани интрагастрично у одговарајућим дозама свакој групи фенилетаноидних гликозида. Једнака запремина нормалног физиолошког раствора је дата мишевима у контролној групи и групи модела гастрогаважом. Сви лекови су примењивани једном дневно током узастопних 30 дана. Ткиво тестиса је добијено 24 х након последње интрагастричне примене. Ниво тестостерона у хомогенату ткива тестиса одређен је ензимским имуносорбентним тестом. Упоређен је број сперматозоида, стопа покретљивости и стопе тератозооспермије у различитим групама. Морфолошке промене ткива тестиса су примећене коришћењем ХЕ бојења. Резултати У поређењу са контролном групом, смањен је број сперматозоида и брзина покретљивости, повећана је стопа тератозооспермије, а смањен је ниво тестостерона у хомогенату ткива тестиса у групи модела (П<0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" counts="" and="" the="" motility="" rates="" were="" increased,="" the="" teratozoospermia="" rates="" were="" decreased,="" and="" the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testis="" tissue="" homogenate="" were="" increased="" in="" phenylethanoid="" glycosides=""><0.05 or=""><0,01). the="" histological="" results="" showed="" atrophy="" and="" degeneration="" of="" seminiferous="" tubule,="" thicker="" seminiferous="" epithelium,="" and="" azoospermic="" lumina="" in="" the="" model="" group;="" the="" number="" of="" seminiferous="" epithelial="" layers="" was="" increased="" and="" the="" seminiferous="" cells="" orderly="" arranged,="" and="" many="" sperms="" were="" found="" in="" the="" tubules="" in="" phenylethanoid="" glycosides="" groups.="" conclusion="" phenylethanoid="" glycosides="" have="" obviously="" therapeutical="" effects="" on="" ctx-induced="" dyszoospermia="" in="" mice,="" and="" their="" mechanisms="" might="" be="" correlated="" with="" recovering="" the="" testosterone="">

Кључне речи: фенилетаноидни гликозиди; циклофосфамид; сперматогено оштећење; мишеви, БАЛБ/Ц

Цистанцхе десертицола има много ефеката, кликните овде да бисте сазнали више

Због убрзања друштвеног ритма, лоших животних навика и загађења животне средине и других фактора, абнормални квалитет сперме као што су олигоспермија и астеноспермија постао је главни узрок мушке неплодности [1]. Тренутно постоји мање лекова за лечење олигоспермије и астеноспермије, а терапеутски ефекат није очигледан. Рецепти традиционалне кинеске медицине или активни састојци имају добре ефекте у побољшању мушке репродуктивне функције [2-6]. Међутим, због широког спектра лекова који се издају на рецепт, однос између фармаколошких ефеката и ефективних састојака лека није јасан, што ограничава промоцију и примену сперматогених лекова. Истраживање и развој ефикасних састојака традиционалне кинеске медицине и проучавање њених терапеутских ефеката код репродуктивних повреда имају добру примену. Тхефенилетаноидни гликозидиин Цистанцхе цистанцхе су један од најважнијих активних састојака у Цистанцхе. Обично су природни гликозиди који садрже естарске и оксо-гликозидне везе са -глукозом као језгром. Они су широко присутни у дикотиледоним биљкама 7]. Студије [8] су показале да Цистанцхе фенетанол гликозиди могу заштитити сперму пацова од оксидативног оштећења ин витро, али нема извештаја о њеној сперматогенези. Овај експеримент проучава терапеутске ефекте Цистанцхеафенилетаноидни гликозидио сперматогенези мишева са сперматогенезом изазваном циклофосфамидом и даје експерименталну и теоријску основу за примену гликозида фенетил алкохола Цистанцхе у лечењу поремећаја сперматогенезе.

1 Материјал и методе

1.1 Експерименталне животиње, главни реагенси и инструменти

40 СПФ одраслих БАЛБ/Ц мишева, стари 6-8 недеља, тежине 20-22 г, купљени од Експерименталног центра за животиње Школе основне медицине Универзитета Јилин, број сертификата за животиње: СЦКСК (Киргистан) {{3} }. Мишеви су узгајани адаптивно 5 дана пре експеримента. Услови храњења: 22 степена -25 степена, циркадијални ритам (12 х/12 х), бесплатна вода за пиће и храна. Цистанцхе је производ компаније Ксињианг Даканг Традинг Цомпани, циклофосфамид за ињекције је купљен од Јиангсу Хенгруи Пхармацеутицал Цо., Лтд. (бр. серије 11061921), хомогенат ткива тестиса тестостерон ензимски имуноесејни комплет је купљен од компаније Медицален Биогинеерингу Лтд. (број серије 20120812), сви остали реагенси су аналитичке класе домаће производње. ПЛУС384 читач микроплоча (МДЦ, САД), ТЕ2000У инвертни микроскоп (Никон, Јапан), Ј-26КСП центрифуга (Нанодроп, САД).

1.2 Припрема цистанцхефенилетаноидни гликозиди

10 г одЦистанцхе тубулосапрах је рефлуксован са 70 процената етанола, два пута, сваки пут по 2 сата да би се добилофенилетаноидни гликозидконцентрисати. Концентровани раствор је подвргнут хроматографији на колони Д101 макропорозне смоле и елуиран са 70 процената етанола да би се добиоЦистанцхе фенилетаноидни гликозидалкохол. УВ спектрофотометар је идентификовао екстракт на таласној дужини од 333 нм.

1.3 Припрема животињског модела и методе примене

40 мужјака БАЛБ/Ц мишева је адаптивно храњено током 5 дана, а мишеви су насумично подељени у 4 групе (10 мишева у свакој групи): контролна група, модел група, Цистанцхе цистанцхе ниска доза фенилетаноидних гликозида и висока доза Цистанцхе фенетил алкохола група гликозида. Осим контролне групе, остале три групе мишева су добиле интраперитонеалну ињекцију циклофосфамида 80 мг·кг-1 за сваког миша током 5 узастопних дана да би се припремили животињски модели поремећаја сперматогенезе. Након што је модел припремљен, мишеви у групама ниских и високих дозаЦистанцхе фенилетаноидсу дате 50 и 100 мг·кг-'·д-'. , 1 пут дневно током 30 узастопних дана. Сви мишеви су жртвовани 24 сата након последње примене и обављени су билатерални тестови. Десни тестис је фиксиран у формалдехиду. Епидидимис и тестис су узети са леве стране. Тестис је хомогенизован и центрифугиран на 3,000 р·мин током 10 мин. Супернатант је узет и чуван у фрижидеру на 20 степени ради тестирања. Леви епидидимис је тестиран на густину сперматозоида, покретљивост сперматозоида и стопу деформитета.

1.4 Одређивање густине сперматозоида, покретљивости сперматозоида и стопе деформитета

Ставите епрувету са 10 мЛ хранљивог раствора сперме у водено купатило са константном температуром да се претходно загреје на 37 степени, уклоните везивно ткиво и масноћу са једне стране епидидимиса, исеците ткиво и ставите га у епрувету на 37 степени. за 10 мин. Након што се сперма потпуно ослободи, узмите 1 кап на плочу за бројање крвних зрнаца и израчунајте густину сперме према методи бројања ћелија. Резултат се изражава као број сперматозоида по милилитру; поред тога, узмите 5 μЛ суспензије сперме из епрувете и помешајте је са истом количином Еосин-И равномерно, ставите на собну температуру 10 минута, додајте поклопно стакло и посматрајте светлосним микроскопом. Мртви сперматозоиди су обојени ружичасто, а живи сперматозоиди нису обојени, али је цитоплазма провидна. Избројите 200 сперматозоида по узорку, израчунајте одрживост сперматозоида, а резултат је изражен као проценат, одрживост сперме=број живих сперматозоида/укупан број сперматозоида × 100 процената. Још 5 μЛ суспензије сперме је фиксирано у метанолу 5 минута, осушено и обојено 2 процентним воденим раствором еозина 1 сат, испрано и сушено феном. Потражите делове са мање преклапања сперматозоида под микроскопом мале снаге и користите микроскоп велике снаге да проверите морфологију сперме у низу. Сваки миш је прегледао 1000 комплетних сперматозоида. Главе сперме су биле откачене, у облику банане, аморфне, дебелоглаве, двоглаве итд. оцењене су као деформитети. Израчуната је стопа деформитета сперме, а резултати су изражени у процентима. Стопа деформитета сперме=број деформисаних сперматозоида/укупан број сперматозоида × 100 процената.

1.5 Одређивање репродуктивних хормона

Тестис је огуљен и стављен у посуду за бочице, а претходно охлађени медијум за хомогенизацију (0.01 мол·Л-сахароза, 0.01 мол·Л{{ 6}}Трис-ХЦл, 0,1 ммол· Л-1ЕДТА-Наз раствори, пХ 7,4), исећи ткиво тестиса офталмолошким маказама, сипати у стаклену епрувету за хомогенизацију и хомогенизовати, центрифугирати на 4 000 ×г током 10 мин на ниској температури, узмите супернатант и употребите реагенс имуног ензима везаног за ензиме. Ниво тестостерона у хомогенату ткива тестиса је одређен кутијом, а за сваки узорак су тестирана 3 паралелна узорка. Експериментални кораци и методе су завршени у складу са упутствима за комплет.

1.6 Морфолошко посматрање ткива тестиса

Узмите парафинске делове тестиса миша, ХЕ мрље и посматрајте дистрибуцију сперматогоније и сперматогених ћелија у ткиву тестиса под светлосним микроскопом.

1.7 Статистичка анализа

Статистичка анализа је извршена коришћењем СПСС 17.{1}} статистичког софтвера. Густина сперматозоида, брзина покретљивости сперматозоида, стопа деформитета сперматозоида и ниво тестостерона у тестисима код мишева у свакој групи су изражени као з±с, а поређење између група је извршено једносмерном анализом варијансе.

2. резултати

2.1 Густина сперматозоида, одрживост сперме и стопа деформитета сперме сваке групе мишева

У поређењу са контролном групом, смањена је густина сперматозоида и брзина покретљивости сперматозоида моделне групе (П<0.01), and="" the="" sperm="" deformity="" rate="" increased=""><0.01). compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" sperm="" density="" and="" sperm="" motility="" rate="" of="" mice="" in="" each="" dose="" group="" of="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" increased=""><0.05 or=""><0.01), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><0.05 and=""><0.01). compared="" with="" the="" low-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group,="" the="" high-dose="">Цистанцхе фенетил алкохол гликозидгрупа повећана густина сперматозоида и покретљивост сперматозоида (П<0.05), and="" the="" rate="" of="" sperm="" deformity="" decreased=""><>

2.2 Нивои тестостерона у ткивима тестиса мишева у свакој групи

Нивои тестостерона у хомогенатима ткива тестиса контролне групе и групе модела били су (10,26±0},57) и (5,33±0,84) нмол·Л-', респективно. Ниво тестостерона у моделној групи био је значајно нижи него у контролној групи (П<0.01). the="" testosterone="" levels="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" low-dose="">Цистанцхе фенилетаноид гликозидгрупа су биле (7,55±1,21) и (10,35±0,94) нмол·Л-1. Нивои тестостерона ниских и високих доза Цистанцхеафенилетаноидни гликозидгрупе су биле значајно веће од оних у групи модела (П<0.05 or=""><0.01). the="" level="" of="" testosterone="" in="" the="" testicular="" tissue="" homogenate="" of="" the="" high-dose="" cistanche="" phenethyl="" alcohol="" glycoside="" group="" was="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" low-dose="" group=""><>

2.3 Морфологија тестиса миша у свакој групи

Посматрано светлосним микроскопом; сперматогени тубули у тестисима нормалне групе су густо распоређени, ниво и број заметних ћелија је велики, епител семена је уредно распоређен, а семиниферни тубули су сви формирани од сперматозоида. У моделној групи, семиниферни тубули у тестисима мишева су атрофирани и дегенерисани, епител семена је значајно истањив, број епителних слојева је смањен, распоред поремећен, а број сперматозоида у шупљини смањен. У поређењу са моделном групом, број семиниферних тубула и слојева семиниферног епитела у ниским дозамаЦистанцхе фенилетаноид гликозидгрупа повећана, распоред епитела је правилнији, а оштећење семиниферних тубула значајно побољшано; висока дозаЦистанцхе фенилетаноид гликозидгрупа је значајно побољшала структуру семиниферних тубула, значајно је повећан број и број семиниферних епитела, уредно су распоређени, у семенским тубулима има зрелих сперматозоида, а структура се у основи вратила у нормалу. Погледајте слику 1 (уметак 6).