Ефекат смањења мокраћне киселине и механизам актеозида и ехинацозида екстрахован са цистанце тубулозе
Mar 03, 2025
Сажетак:Циљ је истраживање мокраћних киселина за снижавање ефеката и механизме актеозида (као) и ецхинацозида (Ецх) издвојено изЦистанцхе Тубулоса.
МетодеДиректан за пацов (Хуа) је успостављен помоћу калијум оксоната (1,5 г · кг -1 · Д -1) у комбинацији са аденином (100 мг · кг -1 · Д -1). The HUA model rats were randomly divided into a model control group, an allopurinol group (30 mg·kg-1·d-1 ), AS low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups, and ECH low and high (50, 100 mg·kg-1·d-1 ) dose groups. Претходно је успостављена нормална контролна група. Након четири недеље администрације, анализатор биохемије крви коришћен је за откривање Суареа, Цреате, Аденосине деаминазе (АДА) и Нивоквица (УУА) нивоа у урину. Ензим повезан имуносорбентни тест коришћен је за откривање нивоа ксантхине оксидазе (код) у серуму. Прикупљено је ткиво бубрега, а коефицијент бубрега је извагао и израчунато. ХОМАТОКСИЛИН ЕОСИН (ХЕ) обојени је за посматрање бубрежних патолошких промена. Имунохистохемија (ИХЦ) и ПЦР у реалном времену коришћени су за откривање нивоа експресије протеина и мРНА-а за транспортер 1 (УРАТ1), транспортер Глукозе 9 (ГлуцС), органски анионски транспортер 1 (ОАРДИОН АНИОН Транспортер 3 (ОАТС3) у бубрежном ткиву. Резултати као и ЕЦХ могло би побољшати бубрежне функције у Хуа модел пацова, смањити ниво мокраће крви, промовишу се излучивање мокраћне киселине, смањити ниво серума АДА и КСОД и регулишете протеине и мРНА израз УРАТ1 и ГЛУТ9 у бубрежном ткиву.
Закључци фенилетаноидни гликозиди као и ЕЦХ са цистанце тубулоса могу да изврше ефекте с смањењем мокраћних киселина побољшавајући бубрежну функцију у ХУА моделима пацова, смањујући АДА и КСОД нивоа и регулисању експресије УРАТ1, Глут9, Оат1 и Оат3.
Кључне речи: цистанце тубулоса; глупан; ехинацосид; Хиперурицемија; смањење мокраћне киселине; механизам
Екстракт цистанце тубулоса са 16% Ацтеосидом
Хиперурицемија (ХУА) је метаболичка болест узрокована неуређеним метаболизмом пурине у људском телу, што је довело до нивоа повишене крвне мокраћне киселине [1]. Обично се дијагностикује када ниво мокраће крви прелазе 7. 0 МГ · ДЛ⁻¹ (416. 0 у мушкарце и 6. 0 МГ · ДЛ⁻¹ (357. 0 у женској [2]. Развој хиперурикемије првенствено се односи на факторе као што су дијета са високим пуринама, хронична потрошња алкохола, употреба лекова и хипотиреозизам. Не само да повећава ризик од кардиоваскуларних болести, дијабетеса и хипертензије [3-4, али такође значајно утиче на здравље пацијената.
Тренутно клинички третмани хиперурикемије углавном укључују лекове који инхибирају производњу мокраћне киселине и промовишу излучивање мокраћне киселине. Међутим, ови третмани имају одређена ограничења пацијената са оштећеном функцијом јетре или бубрега [5-6]. Стога је истраживање ефикасних лекова са ниским нуспојавама од великог значаја за превенцију и лечење хиперурикемије.
Цистанцхе Тубулоса (Сцхенк) Р. Вигхт, који се обично користи у традиционалној кинеској медицини као биљка за тонирање бубрега, користи се за третирање услова попут импотенције, неплодности, недостатка суштине и крви, слабост у доњем делу леђа и колена, слабости мишића и затвор због цревне сувоће [7]. Студије су то показалеЦистанцхе ТубулосаПосједује неуропротективне [8], противупално [9], регулисање метаболизма костију [10] и ефекти за побољшање ефикасности у хемотерапији пацијената са раком [11]. Међу различитим активним компонентама, фенилетаноидни гликозиди су најобилнији.
Ацтеосиде (као) и ехинацозид (ЕЦХ), два фенилетаноидна гликозида са високим садржајем уЦистанцхе Тубулоса, показује снажне биолошке активности и одржати значајан потенцијал за развој и примену. Сходно томе, наша истраживачка група изабрала је и ецх за даљу студију. Кроз мрежне фармаколошко предвиђања и превести експерименте у мишевима открили смо да фенилетаноидни гликозидни екстракти изЦистанцхе Тубулосаможе имати одређени мокраћно кисели ефекат. Међутим, путеви и механизми ових ефеката остају нејасни.
Стога, користећи механизме производње мокраћне киселине и његових основних путовања излучивања као и истраживачки фокус, истражили смо мокраћне киселине-снижавање ефеката екстраката фенилетаноидног гликозида као и ЕЦХ. Ова студија има за циљ да избегне путеве и механизме преко којих и ецх врше своје мокраће киселине.
1 материјали
1.1 Експерименталне животиње
Седамдесет мушких СПРАГУЕ-ДАВЛЕИ (СД) пацова, тежине 150-180 г, купљено је од експерименталног центра за животиње Ксињианг Медицински универзитет. Број лиценце за производњу животиња: СККСК (КСИН) 2023-0001. Овај експеримент је одобрио Одбор за животињску етику Ксињианг аутономне регије Уигур Институт за медицину, са бројем одобрења за животиње: ИАЦУЦ- (ЗХУН) -2024-009.
1.2 Дрога и реагенси
Ектекти фенилетаноидног гликозида (као и ЕЦХ)одЦистанцхе Тубулоса (purity >98%, верификовано течном хроматографијом високих перформанси) је извучено, пречишћено и припрема и припрема кључна лабораторија науке о формулацији УИГУР-а, Ксињианг аутономне регије Уигур Институт за истраживање медицине. Бројеви серија: 20220617 (Ас) и 20220526 (ЕЦХ).
Алопуринол таблете, серија: 62208726, произвођач Јиангсу Ванбанг Биохемијска фармацеутска група Цо, Лтд.
Калијум оксонатиаденински, БАЦЦХ бројеви: И2130050 и Ц2202255, купљени од Шангаја Аладдин Биоцхемиал Тецхнологи Цо, Лтд.
Цреа (креатинин), УА (мокраћна киселина), уреа и Ада (аденозин деаминаза) сет сетови, бројеви серија: 141123010, 141223004, 141323008 и 043624005, купљено од Схензхен Миндраи Био-Медицал Елецтроницс Цо., Лтд.
КСОД (Ксантхине оксидаза) Комплет за испитивање активности, БАТЦХ БРОЈ: И10001219, купљено од Шангаја МАЦКЛИН Биоцхемицал Тецхнологи Цо, Лтд.
Антитела (УРАТ1, Глут9, Оат1, Оат3), бројеви серија: 3И5723 0, 92Ф0296 / 4, 0Ф33081 / 2И44618, купљени од биоскона афинитета.
ХРП-обележени козји анти-зец ИгГ, серијски број: 245440113, купљено од ЗСГБ-био.
Решење за бојење хематоксилина, БАЦЦХ БРОЈ: 24135741Х, купљено од Пекинга Лањике Тецхнологи Цо, Лтд.
Даб хромогени реагенс кит, серијски број: 240010512, купљен од ЗСГБ-био.
ДЕПЦ (диетил пирокарбонат), Каталошки број: Д 60029-500 мл, купљено од Амресца (САД).
М5 ХИЦЛЕАР ДЛ2000 ДНК маркер, Каталошки број: МФ025, купљено од Беијинге Геномицс Биотецхнологи Цо, Лтд.
Тризол ™ реагенс, Каталошки број: 15596026, купљено од Сциентифиц Тхермо Фисхер (САД).
5к алл-ин-оне РТ МастермикиЕвагреен Екпресс 2 × КПЦР Мастермик-Лов Рок, Бројеви у каталогу: Г492 и Г891, и купљени од примењених биолошких материјала Инц. (АБМ).
2 методе
2.1 Модел Оснивање и груписање
Седамдесет мушких Спрагуе-Давлеи (СД) пацова је на аклиматизовано и подељено у две групе: нормална контролна група (1 {3}} пацова) и контролна група модела (60 пацова). Нормална контролна група је примењена 0,5% ЦМЦ-НА путем гаваге. Група за контролу модела примењена је калијум оксонат (1,5 г · кг "у комбинацији са Аденином (100 мг · кг) на дози од 10 мЛ · кг, једном дневно током 14 узастопних дана. Модел се сматра да је успешно успостављен када се нивои уреа, Цреате и Суа значајно повећавају, мерено биохемијским анализатором.
Акуруски пацови хиперурицемије даље су подељени у следеће групе засноване на нивоима Суа, урее, а Цреате: Алопуринол Гроуп (3 {12}} Мг · кг), ниско доза као група (50 мг · кг), са високом дозом и групи (100 мг · кг) и групност са високом дозом (100 мг · кг ". мг · кг⁻¹), са 10 пацова у свакој групи. Да би се одржала стабилна хиперурицемија, све групе осим уобичајене контролне групе примењене калијум оксонат (500 мг · кг "у комбинацији са аденином (100 мг · кг", а затим гаража ујутро, а затим администрација одговарајућих лекова у свакој групи за лечење поподне. Нормална контролна група је ујутро примила 0,5% ЦМЦ-НА раствор ујутро и пиће поподне у дози од 10 мЛ · кг, једном дневно током 14 узастопних дана. Након тога заустављен је давање средстава за моделирање, а дотични лекови се непрестано примењују свакодневно током додатних 14 дана.
2.2 Колекција узорка
Након коначне дозе, пацови су уграђени преко ноћи (вода није била ограничена). Урин из сваке групе је сакупљен за тестирање мокраћне киселине. Тело тежина је мерена након постења, а узорци крви су прикупљени под анестезијом. Серум је одвојен центрифугирањем и чува се за будућу употребу. Скидање бубрега су сакупљане и одмериле. Један бубрег је фиксиран у 4% параформалдехид раствору, док је остала замрзнута у течном азоту за даљу анализу.
2.3 Мерење мокраћне киселине у урину пацова
Узорци урина из сваке групе су центрифугирани (3, 000 р · мин, 10 мин, центрифугирање радијуса 14 цм), а супернатант је сакупљен. Узорци урина су разблажени 1: 9 са физиолошком отопином и анализирани за садржај мокраћне киселине користећи биохемијски анализатор.
2.4 Мерење Аде, уреа, Цреате и Суа у серуму пацова
Узорци крви у свакој групи су центрифугирани (3, 000 р · мин, 10 мин, центрифугирање радијуса 14 цм), а серум је сакупљен. Ада, уреа, креација и нивои суа у серуму мерени су коришћењем биохемијског анализатора.
2.5 Мерење КСОД-а у серуму штакора
Промјене у нивоима КСОД-а у серуму пацова мерени су коришћењем ензимског испитивања у складу са упутствима произвођача. Забиљежени су иницијална апсорбанција (а ") и коначна апсорбанција (а") на 290 нМ, а ΔА (ΔА {= а₂ - а₁) је израчунато. ΔА је замењен у формулу:
Код (нмолу · мин⁻¹ · мЛ⁻¹)=Реакциони систем Укупни јачина звука ÷ (Моларни коефицијент морнарице мокраћне киселине × оптичке стазе) × 10⁹] ÷ Количина о узорку ÷ Време=4262 × ÷ Вријеме=4262 × ÷,
Да бисте израчунали количину мокраћне киселине катализована у минути по милилитру серума.
2.6 Мерење коефицијента бубрега
Сакупљане су ткива бубрега, испрана физиолошком отопином, а вишак воде је уклоњено. Тежина је тежина органа, а коефицијент бубрега је израчунат на следећи начин:
Коефицијент бубрега=Тежина бубрега (мг) / телесна тежина (г).
2.7 Хистопатолошко посматрање бубрежног ткива од бојом
Тканина бубрега фиксне у 4% параформалдехид раствору су дехидриране концентрацијом оцењених етанола, очишћених киленом, уграђеним у парафин и пресјечене у кришке 4- μм. Одсеци су били депарифинизовани ксилен, хидрираним са оцењеним етанолом, обојеним хематоксилом и еозином (он) и запечаћеним неутралним гумом. Морфолошке промене у бубрежном ткиву примећене су под светлосним микроскопом, а слике су заробљене на увећању 400 ×.
2.8 Откривање израза протеина УРАТ1, Глут9, Оат1 и Оат3 у ткиву бубрега од стране ИХЦ-а
Тканина бубрега фиксне у 4% параформалдехид раствору су дехидриране концентрацијом оцјениле етанола, очишћене са ксиленом, уграђеним у парафин и одсечене. Извршени су блокирање проналажења антигена и козје серума. Примарна антитела (УРАТ1, ГЛУТ9, ОАТ1, ОАТ3) су додани у разблаживању од 1: 200 и инкубирају се преко ноћи у 4 степени. Следећег дана, одељци су испрани ПБС, осушени ваздухом и инкубирају се са козјем за борбу против биотина и козметиком у 37 степени током 30 минута. Секције су испране ПБС-ом и инкубиране са Даб хромогеним реагенсом 10 минута, а затим испирањем ПБС-а, бојиње хематоксилина на 3 минута, диференцијација са хлороводоничном киселином етанол раствором, дехидрација са градиционим етанолом, чишћењем ксилена и заптивача са неутралном гумом, праћено рунсинг, а хемалолорско киселиште етанол, дехидрата са градиционим гумом.
За сваког пацова изабрано је два насумична 4 0 0 × поља бубрежних одељења. Анализирана је позитивно обојење (смеђе-жуте), а интегрисана оптичка густина (ИОД) сваке области мерена је помоћу слике-Про плус 6.0 за статистичку анализу.
