Пацијенти са васкуларном хирургијом са повишеним односом неутрофила и лимфоцита имају смањену експресију РНК комплемента неутрофила

Повишен однос неутрофила и лимфоцита (НЛР) код пацијената који су подвргнути елективној васкуларној хирургији (ЕВС) има повећан морталитет независно од периоперативних хируршких исхода. Да бисмо разумели зашто је висок НЛР повезан са већом смртношћу, истражили смо експресију транскриптома неутрофила и лимфоцита код пацијената који су подвргнути ЕВС-у. Узорци крви су прикупљени од пацијената који су подвргнути ЕВС-у и здравих давалаца за прорачун НЛР. Узорци РНК су изоловани из неутрофила и лимфоцита пацијената и подељени на НЛР_Лов (<3) and NLR_High (≥3) groups (n = 6 each). Paired samples with the highest RNA integrity number (mean = 9.8 ± 0.4) were sequenced and analyzed for differential expression. Normalized data were inputted for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). There was no clinical difference between the patient groups about clinical diagnosis, age, sex, history of hypertension, lipid abnormalities, diabetes mellitus, smoking, or statin use. The mean NLR was 4.37 ± 0.27 SEM in the NLR_High and 1.88 ± 0.16 for the NLR_Low groups. Significantly differentially expressed gene sets identified in the RNA sequence data were enriched highly (P = 1E-24) in the humoral immunity and complement systems. Neutrophils from NLR_High patients downregulated complement genes (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, CR2, C3AR1, C3, C8G, and C9 and complement regulatory genes CD59, SERPING1, C4BPA, CFH, and CFI). Downregulation of gene expressions of humoral immunity and complement within the neutrophils are associated with elevated NLR. It remains to be determined whether and how these changes contribute to increased late mortality previously observed in patients undergoing EVS.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Увод

Кардиоваскуларне болести (КВБ) су водећи узрок смрти широм света. То је великим делом последица атерогенезе и атеросклерозе које, поред индивидуалне генетике и исхране, посредују инфламаторни и имуни механизми.{0}} Недавно је у фокусу био диференцијални број леукоцита (неутрофили и лимфоцити). за предвиђање кардиоваскуларних (ЦВ) исхода. Однос апсолутног броја неутрофила и лимфоцита (НЛР) је препознат као предиктор укупног морталитета у вишеструким малим студијама акутних коронарних интервенција,4-6 хипертензије,7,8 и срчане инсуфицијенције.9

Табела 1. Клиничке карактеристике пацијената елективне васкуларне хирургије испитиваних РНА-сек

Претходна истраживања су такође показала да је НЛР предиктор дугорочних исхода код пацијената са периферном васкуларном болешћу.10-13 Наше ретроспективне студије пацијената са васкуларном хирургијом подржавају овај закључак. У једној студији од 108 пацијената са елективном ендоваскуларном поправком анеуризме абдоминалне аорте, није било разлике у 30-дневном постоперативном морталитету између НЛР-а<4 and an NLR of >4 (P = .507). However, the 1-year, 3-year, and 5-year mortality between the groups were 4.2% vs 28.1%, 15.1% vs 64.9%, and 24% vs 90%, respectively.14 In a second study of 290 asymptomatic patients undergoing prophylactic carotid endarterectomy, the risk for stroke was noted to be significantly higher (P < .0001) in patients with an NLR of >3 (н=116 пацијената, 42,6% ризик од можданог удара) од оних са НЛР од<3 (n = 174 patients, 9.3% stroke risk).15 In a third study with 488 patients who underwent percutaneous interventions of femoropopliteal arteries, the 30-day mortality rates increased significantly (P = .005) with increasing NLR (1.4%, 4.3%, and 7.0% for low [<3], mid [3-4], and high [>4] НЛР групе, респективно).16 Пацијенти са нижим преоперативним НЛР постигли су значајно веће преживљавање без ампутације током 4- године праћења (низак НЛР 65,5%, средњи НЛР, 37,5% и висок НЛР, 17,6 % [П < .0001]).16

У овој студији, извршили смо секвенцирање РНК (РНА-сек) неутрофила и лимфоцита од пацијената који су се квалификовали за елективну поправку васкуларне хирургије (ЕВС) да бисмо утврдили потенцијалне механизме за повишени НЛР. Студије су испитале да ли постоји молекуларна основа за повишени НЛР. Наша истраживања откривају да се пацијенти са повишеним НЛР-ом који су имали поправку ЕВС-а одликују високо значајном смањеном регулацијом имуноглобулина и гена комплемента у неутрофилима.

цистанцхе користи-јача имуни систем

Методе

Пацијенти

Blood samples were collected from candidate patients for EVS procedures and healthy volunteers for NLR calculation and RNA sequence studies of neutrophils and lymphocytes. In screening patients for participation, any individual with an active local or systemic infection or obvious inflammatory disease was excluded from participation. Peripheral blood collection was approved by the institutional review board of University Hospitals Cleveland Medical Center (#01-06-02). Informed consent was obtained from each patient and healthy volunteer. All patients for EVS seen in the outpatient department were eligible. Patients in the study were characterized for the type of vascular surgery, age, sex, hypertension (blood pressure >130/80 mm Hg), diabetes mellitus (fasting blood glucose >100 мг/дЛ), пушачки статус, лечење статинима, анамнеза хроничне опструктивне болести плућа, рака, хроничне бубрежне болести, коронарне артеријске болести (ЦАД), болести периферних артерија, цереброваскуларне болести и хроничне срчане инсуфицијенције. Сви пацијенти су имали комплетну крвну слику са диференцијалним бројем белих крвних зрнаца. Пацијенти су подељени на низак НЛР (НЛР_Лов [<3]) and high NLR (NLR_High [≥3]) groups (n = 6 each) and healthy volunteers aged 18 to 71 years (n = 6). Eleven of 12 patients' blood was drawn before surgery. One patient had blood drawn 4 months after surgery. 

Одвајање крви

Цела крв (20 мЛ по пацијенту) је сакупљена у 10 мЛ вакутаинер епрувете са антикоагулацијом са ЕДТА, а крв је одвојена у року од сат времена од сакупљања. Популације ћелија неутрофила и лимфоцита су изоловане из 8 мЛ крви коришћењем ЕасиСеп комплета за директну изолацију људских ћелија (СТЕМЦЕЛЛ Тецхнологиес, ​​Ванкувер, Канада) и магнета Биг ЕасиСеп (СТЕМЦЕЛЛ Тецхнологиес, ​​Ванкувер, Канада) у складу са протоколима произвођача. Магнет је претходно охлађен на леду, а крвне ћелије и реагенси су нежно помешани окретањем епрувете за разлику од пипетирања. Односи реагенса су такође подешени на следећи начин да би се оптимизовао опоравак: 400 мЛ мешавине антитела, 400 мЛ магнетних перли и 4 мЛ физиолошког раствора пуферованог фосфатом је додато у крв пре првог одвајања, а затим 200 мЛ антитела. мешавине и 400 мЛ перли пре другог одвајања и 200 мЛ перли пре трећег и коначног одвајања. Мали аликвот од 200 мЛ је узет из коначних запремина за опоравак за бројање ћелија и припрему стакалца. Остатак запремине за опоравак је центрифугиран на 1000 обртаја у минути током 7 минута да би се ћелије пелетирале.

Слика 1. Целокупни транскриптом РНК из неутрофила и лимфоцита прикупљених од пацијената са НЛР, високим (НЛР_Хигх), ниским (НЛР_Лов) или контролним (НЛР_Цонтрол) . Словни код "Н" или "Л" у називу узорка значи да су или неутрофили или лимфоцити били извор РНК. У свакој категорији било је по 6 пацијената. Плави=смањен ниво експресије; црвена=висок ниво експресије.

Бројање ћелија и припрема стакалца

Ћелије ресуспендоване у физиолошком раствору пуферованом фосфатом су даље аликвоте, помешане са трипан плавим и ручно избројане помоћу хемоцитометра. Типично, по узорку је изоловано 9 × 106 до 15 × 106 неутрофила и 3 × 106 до 10 × 106 лимфоцита. Слајдови изолованих ћелија су припремљени коришћењем цитоцентрифуге, центрифугирани на 600 обртаја у минути током 3 минута, а затим обојени Вригхт-Гиемса бојом. Чистоћа сваке ћелијске популације је одређена ручним пребројавањем, у којем је издвојено најмање 1000 ћелија по слајду. Просечне чистоће одвајања неутрофила и лимфоцита бројањем ћелија биле су 98,3% и 96,2%, респективно. Проточна цитометрија је урађена на 1 узорку пара неутрофила и лимфоцита и показала је чистоћу од 90,6%, односно 92,2%. Остале ћелије у препарату неутрофила су разбијене на лимфоците (4%), моноците (2%), еозинофиле (2,3%) и базофиле (0,3%). У препарату лимфоцита остале ћелије су неутрофили (1,2%), моноцити (1,4%), еозинофили (1,2%) и базофили (1,8%). Групни РНА-сек подаци из свих појединачних узорака су такође коришћени за одређивање степена контаминације моноцита у ћелијским препаратима утврђивањем да ли су неутрофили или лимфоцити из НЛР_високог или НЛР_ниског узорка значајно повећали ЦД14 , ЦД68, ЦД83 или ЦД163. Независно, РНА-сек подаци су унети у процену пропорције имуних ћелија и ћелија рака (ЕПИЦ), програм дизајниран да процени удео имуних ћелија и ћелија рака у масовним подацима о експресији гена.17 Коришћени референтни профил је обезбедио ЕПИЦ за имуне ћелије које циркулишу у крви и садржи профил за Б ћелије, ЦД4 и ЦД8 Т ћелије, моноците, неутрофиле и природне ћелије убице. Пријављени излаз је дат као фракције ћелија по узорку.

Слика 2. Значајно диференцијално експримирани гени из неутрофила и лимфоцита. (А) Број значајно различито експримираних гена у неутрофилима (плави) и лимфоцити (наранџасти). (Б) Графикон анализе главне компоненте значајно различито експримираних гена у неутрофилима (зелени и љубичасти) и лимфоцитима (црвени и плави) у НЛР_високом (кругови) и НЛР_ниском (квадрати). (Ц) Топлотна мапа значајно различито експримираних гена из НЛР_високе наспрам НЛР_ниске неутрофилне РНК. (Д) Топлотна мапа значајно различито експримираних гена из НЛР_високе наспрам НЛР_ниске лимфоцитне РНК.

РНА-сек и статистичка анализа

Детаљне методе за екстракцију и секвенцирање РНК су представљене у додатним методама. Квалитет очитавања секвенцирања је процењен, а адаптер је исечен коришћењем ТримГалоре! (Бабрахам Институте), омотач скрипте за ФастКЦ и ЦутАдапт. Очитавања која пролазе контролу квалитета су усклађена са људским референтним геномом ГРЦх38 помоћу софтвера СТАР за поравнавање. Поравнана очитавања су обрађена коришћењем Цуффлинкс верзије 2.2.1 за анализу диференцијалне експресије користећи напомену гена ГЕНЦОДЕ за ГРЦх38, а подаци о експресији на нивоу гена су пријављени у фрагментима по килобазном транскрипту на милион читања мапираних.18 Гени са значајно диференцијалном експресијом идентификовани су коришћењем лажног гранична вредност стопе открића П вредност од<.05, after the Benjamini-Hochberg correction for multiple testing. Normalized fold-change and P values for all expressed genes were then used as input for downstream analysis using iPathwayGuide (AdvaitaBio) and gene set enrichment analysis (GSEA) using GenePattern and MSigDB (Broad Institute). Additional figures including heat maps and scatterplots were generated in R and ClustVis.

Резултати

Карактеристике пацијената

Изабрано је шест парова узорака пацијената од 7 НЛР_високих и 9 НЛР_ниских на основу највишег квалитета РНК у пару процењеног бројем интегритета РНК (РИН) (Табела 1 ). Прегледано је и шест контрола од 8 здравих донора. Код пацијената укључених у студију, средња вредност ± стандардна девијација НЛР за НЛР_висока је била 4,37 ± 0,66 у односу на НЛР_ниска, 1,87 ± 0. 39 (П < .0001). Средња ± стандардна девијација старости пацијената била је 61,0 ± 17,0 година за НЛР_висок и 64,5 ± 7,5 година за НЛР_низак (П= .68). Сви осим 1 пацијента су имали анеуризматичну болест аорте, 9 је било торакално/торакоабдоминално, а 2 су били абдоминални. Оба пацијента са анеуризмом абдоминалне аорте била су у НЛР_ниској групи. Једанаест од 12 пацијената имало је историју хипертензије. Четири од 6 пацијената у обе групе НЛР_високе или НЛР_ниске групе имале су медицинску историју абнормалности липида. Четири пацијента у НЛР_високим и 3 пацијента у НЛР_ниским групама били су бивши пушачи. Један пацијент у НЛР_Лов групи био је активан пушач. Пет пацијената у НЛР_високим и 4 у НЛР_ниским групама су били на статинима. Само 3 пацијента у обе групе су била дијабетичара. Један пацијент у свакој групи имао је историју ЦАД, а 2 пацијента у НЛР_ниској групи имала су болест периферних артерија.

Слика 3. Подаци РНА-сек у овом истраживању коришћени су као независно средство за одређивање друге контаминације ћелија у препаратима неутрофила и лимфоцита. Приказани су само подаци из неутрофила. Урађена је ЕПИЦ анализа да би се проценио удео имуних ћелија и ћелија рака у подацима о експресији гена. Ова анализа је дала проценат неутрофила, моноцита, Б ћелија, ЦД4 Т ћелија, ЦД8 Т ћелија, природних ћелија убица (НК) и других ћелија у препарату неутрофила.

Цео транскриптом

Приметили смо глобалне разлике у целом транскриптому када смо упоређивали профиле експресије гена између неутрофила и лимфоцита (Слика 1). Овај налаз није био изненађујући јер је експресија гена специфична за ћелијски тип раније била окарактерисана као различита.19 У делу неутрофила, међу пацијентима у НЛР_високом, НЛР_ниском и НЛР{{ 4}}Контролне групе, било је много гена са повећаном регулацијом који очигледно нису били повећани у делу лимфоцита и обрнуто. На нивоу целог транскриптома, ћелијске разлике између неутрофила и лимфоцита биле су јасне и доминантне без обзира на НЛР или да ли је пацијент или контрола. Међутим, при ближем испитивању, разлике су почеле да се појављују. Графикон анализе главне компоненте је показао да се НЛР_контрола за било неутрофиле или лимфоците преклапа са НЛР_високим и НЛР_ниским у обе ћелије (додатна слика 1). Истраживања су затим настојала да пронађу додатне разлике између НЛР_високих и НЛР_ниских група у генима који се значајно разликују у експресији. Уочено је да је 900 (74,5%) значајно различито експримираних гена уочено у неутрофилима у НЛР_високим наспрам НЛР_ниским групама (слика 2А). За поређење, лимфоцити су имали само 190 (15,7%) значајно различито експримираних гена. Графикон анализе главне компоненте НЛР_високих гена наспрам НЛР_ниских гена у неутрофилима и лимфоцитима открио је да је група НЛР_високих наспрам НЛР_ниских гена у неутрофили су сегрегирали у 2 различита подручја, док су се гени НЛР_високих и НЛР_ниских лимфоцита преклапали (слика 2Б). Опет, као и код свих података о транскриптому, НЛР_контрола се преклапала са НРЛ_високим и НЛР_ниским значајно различито експримираним генима у неутрофилима и лимфоцитима (додатна слика 2). Већина значајно различито експримираних гена у НЛР_високим неутрофилима је смањена са НЛР_ниског (слика 2Ц). Сличан, али много мањи број гена је смањен у НЛР_високом броју лимфоцита него код неутрофила (слика 2Д). Ови подаци сугеришу да су нивои НЛР углавном повезани са измењеном експресијом гена у неутрофилима. Штавише, требало га је упоредити са пацијентима из његове групе болести НЛР_низак, а не НЛР-контрола, јер се прва група јасно одвојила од НЛР_високе, али не и НЛР_контроле ( Слика 2Б; додатна слика 2).

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

Пре испитивања диференцијалне експресије гена и обогаћивања генског скупа, додатне студије су карактерисале степен контаминације моноцита у препарату неутрофила. Користећи РНА-сек податке, приметили смо да се експресија моноцитних маркера ЦД14, ЦД68, ЦД83 и ЦД163 у НЛР_високим наспрам НЛР_ниским неутрофилима или препаратима лимфоцита није значајно разликовала. ЕПИЦ анализа неутрофилних РНА-сек података показала је да су неимуне ћелије („друге ћелије“) и ЦД4 Т ћелије биле главни загађивачи у препаратима неутрофила (Слика 3). Осим НЛР{{10}ниских ЦД4 Т ћелија и Б ћелија, ниједна од других контаминирајућих ћелија није се значајно разликовала у НЛР_ниским неутрофилима у односу на НЛР_високе неутрофиле . У препарату неутрофила, контаминација моноцита ЕПИЦ анализом била је само 0,17% ± 0.05% за НЛР_Ниска наспрам 0,1% ± 0,033% за тхе НЛР_Високе припреме (П=.12). Ова вредност указује да је контаминација моноцита била за ред величине нижа када је одређена анализом РНА-сек података у односу на проточну цитометрију.

Слика 4. Графикон расејања значајно изражених категорија скупа ГО гена за биолошке процесе између НЛР_високог и НЛР_ниског. Однос к:К на апсциси је број гена који су значајно различито изражени (к) у поређењу са укупним бројем гена у категорији (К). Ордината је значај обогаћења изражен као лог (П вредност). (А) ГО сетови гена изведени из неутрофилне РНА-секве упоређујући НЛР_висок са НЛР_низак. (Б) ГО генски сетови изведени из лимфоцитне РНК-секв. Скупови гена у доњем левом углу обе графике су најмање значајни. Најзначајнији су скупови гена у горњем десном углу обе плохе.

Слика 4 (наставак)

Да бисмо испитали природу различито експримираних гена, извршили смо ГСЕА са категоријама онтологије гена (ГО) за биолошке процесе користећи значајно диференцијално експримиране скупове гена између НЛР_високог и НЛР_ниског. Резултати су приказани на дијаграмима мехурића (слика 4). Сегрегација генских скупова у горњем десном углу сваке од дијаграма показује (1) висок проценат гена у генским скуповима који су значајно промењени и (2) висок степен значаја за обогаћивање генског скупа. У нашем узорку, дијаграми распршених мехурића су показали обогаћивање ГО категорија комплемента и хуморалног одговора независно и за неутрофиле и за лимфоците. Код неутрофила, генски сетови за класични пут активације комплемента, регулација каскаде активације протеина и хуморални имуни одговор посредован циркулишућим имуноглобулином су били најзначајнији са највећим процентом чланова скупа гена значајно промењеним (Слика 4А). Независно, примећено је да идентични сетови гена у лимфоцитима имају висок однос значајно измењених гена и степен значаја као у студијама неутрофила (Слика 4Б).

Табела 2. Имунолошки скупови гена у неутрофилима и лимфоцитима

Табела 2 наводи најзначајније измењене имунолошке групе гена код неутрофила (Табела 2, Панел А) и лимфоцита (Табела 2, Панел Б). Ова студија је упоредила експресију гена у неутрофилима или лимфоцитима између НЛР_високих узорака и НЛР_ниских узорака. Здрави НЛР_Контролни узорци нису упоређени јер су се њихови нивои експресије преклапали са НЛР_високим и НЛР_ниским узорцима пацијената иу целом транскриптому иу значајно диференцијално експримираним скуповима гена. Поред тога, здрави НЛР_контролни узорци нису се подударали у погледу старости, болести и хируршког стања (додатне слике 1 и 2). И код неутрофила (Табела 2) и код лимфоцита (Табела 2), подаци су указивали на то да је експресија скупова гена везаних за имуни систем била веома значајно различита када је НЛР_Висока упоређена са НЛР_Ниском . На РНК секвенци, сваки тип ћелије има исте налазе као и други тип ћелије. У оба панела, нивои значајности главних скупова гена су максимизирани на П < 1Е-24. Ови подаци су били веома значајни без обзира да ли су испитивани неутрофил или лимфоцит. Да бисмо се фокусирали на област са високим садржајем овог РНА-сек истраживања, испитана је значајно различито експресија гена имуноглобулина. Прво, дијаграм главне компоненте неутрофилних гена је показао да су за НЛР_висок вс НЛР_низак, значајно различито експримирани гени имуноглобулина подељени у 2 групе (додатна слика 3А). Алтернативно, гени лимфоцита НЛР_високог наспрам НЛР_ниског нивоа преклапају се (додатна слика 3А). Затим је комбинована топлотна мапа експресије гена повезане са имунитетом између НЛР_високог са НЛР_ниског упоређена у неутрофилима и лимфоцитима (слика 5). Све у свему, када се испита цела топлотна мапа, постоји очигледна регулација целе породице гена имуноглобулина у неутрофилној НЛР_високој групи у поређењу са НЛР_ниском. Већина гена (69/156, 44%) је била везана за имуноглобулин. Само 12 од 156 (7,7%) гена су били повезани са комплементом: Ц1КА, Ц1КБ, Серпинг1, Ц2, Ц2Р, Ц4БПА, Ц3АР1, ЦР1, ЦР1Л, ЦФХ, ЦФД и ЦД59. У групи лимфоцита такође је дошло до смањења регулације углавном имуноглобулинских гена у НЛР_високој категорији.

Скупови гена комплемента у неутрофилима и лимфоцитима су детаљно приказани у табели 3. И код неутрофила (Табела 3) и лимфоцита (Табела 3), експресија гена у 3 сета гена везаних за систем комплемента била је веома значајно различита (П < 1Е{{ 5}}) када су НЛР_високи узорци упоређени са НЛР_ниским узорцима. Ово запажање је било исто било да је поређење између РНК из неутрофила или лимфоцита. Три генска скупа укључују активацију комплемента, класични пут активације комплемента и регулацију активације комплемента. Графикон анализе главне компоненте гена неутрофила је поново показао да су за НЛР_високи вс НЛР_низак, значајно различито експримирани гени комплемента подељени у 2 групе (додатна слика 3Б). Алтернативно, гени лимфоцита НЛР_високог наспрам НЛР_ниског преклапања (додатна слика 3Б).

Слика 5. Топлотна мапа значајно диференцијално експримираних гена у сету имуноглобулинског гена у неутрофилима (лево) и лимфоцитима (десно). Гени наведени на десној страни сваке топлотне мапе су чланови имуноглобулина

Топлотна мапа неутрофила и експресије лимфоцита скупа гена повезаног са комплементом упоређујући НЛР_висок са НЛР_низак приказан је на слици 6. У неутрофилима, огроман број гена је био смањен у НЛР_Велика популација. У овом скупу гена, слично скуповима имуноглобулинских гена, већина гена (69/ 86, 80%) је била везана за имуноглобулин. Само 12 од 86 (14%) су били компонента комплемента и регулаторни гени (Ц1КА, Ц1КБ, СЕРПИНГ1, Ц2, ЦР2, Ц4БПА, Ц3АР1, ЦР1, ЦР1Л, ЦД59, ЦФХ и ЦФД). У групи лимфоцита свеукупно, било је мање експресије гена комплемента, а гени имуноглобулина су били нешто ниже регулисани у НЛР_високој групи. Пошто постоји веће разумевање гена система комплемента у поређењу са генима имуноглобулинских система, пажња је била усмерена на систем комплемента као потенцијалног кандидата за циљне гене повезане са високим и ниским НЛР. Припремљена је композитна топлотна мапа која упоређује НЛР_Хигх са НЛР_Лов и приказује експресију система комплемента и сродних гена у узорцима неутрофила и лимфоцита (Слика 7). У већини случајева, лимфоцит није систем ћелија резервоара за систем комплемента. Већина гена комплемента није повећана у лимфоцитима. Само су Ц1С, ЦР2, Ц5, Ц8Г, Ц5 и ЦФБ били присутни са разликом у експресији између НЛР_високих и НЛР_ниских лимфоцита (слика 7). ЦД81 у лимфоцитима је тетраспанин Б-ћелије. Чини се да су експресије Ц1С и Ц8Г значајно веће у НЛР лимфоцита_високе од оних код НЛР лимфоцита_ниске, слично КЛКБ1, гену за прекаликреин у плазми.

Насупрот томе, код неутрофила, НЛР_Хигх је показао снижену регулацију гена компоненти комплемента Ц1КА, Ц1КБ, Ц1КЦ, СЕРПИНГ1, Ц1Р, Ц4БПА, Ц3 и Ц3АР1, и њихових регулаторних (инхибиторних) гена ЦД59, ЦФБ и ЦФИ . Само Ц2 и ЦФД гени су појачано регулисани код пацијената са НЛР_високим_Н. ЦД59 и Ц9 су релативно повишени у неутрофилном НЛР_ниском_Н у поређењу са онима код НЛР_високог_Н. ФГФР4 је рецептор фактора раста. ЦФХ је био присутан, али изгледа да није био под утицајем неутрофилног НЛР_високог или НЛР_ниског. Јаче је изражен у лимфоцитима.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Енханце Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

Дискусија

НЛР на диференцијалном броју леукоцита је постао широко коришћен, једноставан маркер за препознавање потенцијалних штетних исхода у широком спектру поремећаја, укључујући КВБ, солидне туморе и инфламаторне поремећаје као што су системски еритематозни лупус и системска склероза. У нашим ретроспективним истраживањима на пацијентима са атеросклеротском КВБ, приметили смо да пацијенти са високим НЛР имају већу касну стопу морталитета након елективне реконструкције анеуризме аорте, вишу стопу касног можданог удара/смрти након профилактичке каротидне ендартеректомије и смањено преживљавање без ампутације након елективна феморално-поплитеална реваскуларизација ако је њихов НЛР повишен.14-16 Садашња истраживања су започета како би се пронашла механичка основа за висок НЛР. лимфом, вишеструки солидни тумори и инфламаторни поремећаји као што су системски еритематозни лупус и системска склероза. У нашим ретроспективним истраживањима на пацијентима са атеросклеротском КВБ, приметили смо да пацијенти са високим НЛР имају већу касну стопу морталитета након елективне реконструкције анеуризме аорте, вишу стопу касног можданог удара/смрти након профилактичке каротидне ендартеректомије и смањено преживљавање без ампутације након елективна феморално-поплитеална реваскуларизација ако је њихов НЛР повишен.14-16 Садашња истраживања су започета да би се пронашла механичка основа за висок НЛР.

Табела 3. Скупови гена комплемента у неутрофилима и лимфоцитима

Да бисмо развили непристрасан приступ у вези са механизмом(има) диференцијалних ефеката НЛР-а на ЦВ исходе, извели смо РНА-сек и на неутрофилима и на лимфоцитима од истих пацијената. За ову студију, сви пацијенти са болешћу аорте су проспективно прикупљени и груписани у НЛР категорије према њиховим резултатима. Последњих 6 узорака у сваком од 2 типа ћелија одабрано је према највишем нивоу њиховог РИН-а у припремљеној РНК упарених узорака неутрофила и лимфоцита без обзира на пол, старост или претходна медицинска стања. Као што се може видети у табели 1, пацијенти у групама НЛР_високе и НЛР_ниске групе били су прилично слични и разликовали су се само по свом НЛР.

Квалитет РНК коришћене у овој студији је приказан РИН и потпуна сегрегација обрасца експресије гена између неутрофила и лимфоцита у свим прикупљеним групама пацијената (висок НЛР, низак НЛР и контроле) (Слика 1). Графикон анализе главне компоненте показује да су НЛР_контролни подаци били ирелевантни у овој истрази јер се НЛР пацијената преклапао са НЛР_високим и НЛР_ниским у популацији неутрофила и лимфоцита пацијената . ГСЕА анализа је пружила сјајан увид у то који скупови гена су обогаћени ГО генским скуповима биолошких процеса, а дијаграм распршених мехурића је то јасно показао тако што је нацртао лог значај наспрам односа броја измењених гена у односу на укупан број гена. у генским скуповима. Када су прегледани, скупови гена који се одвајају од целе листе били су они у хуморалном (имуноглобулинском) имунитету и систему комплемента (Табеле 2 и 3) на основу односа и статистичке значајности у приступу непристрасног откривања.

Са великим бројем укључених гена имуноглобулина хуморалног имунитета тешко је радити јер важне разлике између ових гена нису добро познате. Алтернативно, много више се зна о систему комплемента, а фокус на класичном систему комплемента који се активира имуноглобулином је препознатљива мета за упале и болести повезане са имуноглобулинима. Наши подаци сугеришу да су класични гени компоненте комплемента Ц1КА, Ц1КБ, Ц1Р, ЦР1, Ц1С, СЕРПИНГ1, Ц2, Ц4БПА, Ц3 Ц3АР1, Ц8Г, Ц9 и неколико регулаторних гена (ЦД59, ЦФБ ЦФИ и ЦФХ) смањени у неутрофилима пацијената са високим НЛР (слика 7). Ови налази су упечатљиви из 3 разлога. Прво, укључени гени су углавном они класичног пута комплемента. Друго, код пацијената са високим НЛР, ови гени комплемента су, углавном, смањени у поређењу са онима код пацијената са ниским НЛР. Најзад, више Ф12 је изражено у неутрофилима из НЛР_високих него у НЛР_ниских узорака. Ензимски облици протеинског производа Ф12 (фактор КСИИ [ФКСИИ]) активирају класични пут комплемента и неутрофила.20 Насупрот томе, ПЛГ, ген за плазминоген и активатор ФКСИИ, је смањен у лимфоцитима и неутрофилима код пацијената унутар НЛР{ {21}}Висока, што сугерише да сама активација ФКСИИ може бити регулатор активације комплемента.

Поред тога, показало се да је класични систем комплемента укључен у убрзану КВБ. Компонента комплемента 1к (Ц1к) је почетни фактор пута комплемента, који има важну улогу и у урођеном и у стеченом имунолошком систему.21 Показало се да Ц1к има двоструке улоге, позитивне и негативне ефекте на атеросклерозу.22 У класичном пута комплемента, Ц1к има заштитну улогу у раној фази атеросклерозе регулацијом молекуларног сигнала макрофага путем комплементарно-независног пута, модулацијом преузимања атерогених липопротеина, посредовањем апоптотичких ћелија и елиминацијом ћелијских остатака.23,24 Недавна студија Јиа ет ал23 указује да је смањени Ц1к у серуму повезан са ЦАД. Друга студија коју су спровели Гуо ет ал24 указује да је повећана активност Ц1к повезана са ЦАД. Коначно, недавне студије показују да пацијенти са дијабетесом са смањеним Ц1к имају скраћено преживљавање.25 Ови подаци указују на то да испитивање система комплемента може бити важно у разумевању патогенезе КВБ посредоване упалом.

Слика 6. Топлотна мапа значајно диференцијално експримираних гена у скупу гена комплемента у неутрофилима (лево) и лимфоцитима (десно). Гени наведени на десној страни сваке топлотне мапе су чланови скупа гена комплемента. РНК је од неутрофила или лимфоцита прикупљених од пацијената са високим (НЛР_високим) или ниским (НЛР_ниским) НЛР. Шест појединачних узорака из НЛР_Хигх упоређено је са 6 појединачних узорака из НЛР_Лов из неутрофила и лимфоцита.

Слика 7. Композитна топлотна мапа комплемента и сродних гена из неутрофила или лимфоцита НЛР_Хигх или НЛР_Лов. У свакој категорији, композитна топлотна мапа је припремљена од 6 појединачних РНА-сек узорака из сваког типа ћелије.

Recently, a retrospective investigation of the data from the CANTOS, JUPITER, SPIRE-1, SPIRE-2, and CIRT trials on 60 087 patients was conducted to determine whether NLR predicts major adverse CV events and is modified by anti-inflammatory therapy.26 NLR modestly correlated (ie, r 2 ≤ 0.26) with interleukin 6, C-reactive protein, and fibrinogen levels but minimally with lipids.25 In all 5 trials, NLR predicted incident CV events and death in patients with NLR >3.08.26 Иако снижавање липида није имало утицаја на НЛР, антиинфламаторна терапија канакинумабом, инхибитором интерлеукина 1, снизила је НЛР (П < .0001).26 Ови подаци сугеришу да НЛР може бити маркер за КВБ независно од липида и утицај статина. Ова ад хоц анализа вишеструких проспективних рандомизованих студија сугерише да НЛР може бити независни фактор ризика за смртност код КВБ.

У овој студији постоје нека ограничења. Наши препарати неутрофила имали су 4% контаминацију лимфоцита и 2% моноцита проточном цитометријом. Пошто није познато да неутрофили синтетишу имуноглобулин, промене гена неутрофилног имуноглобина могу бити последица контаминације Б ћелија. У ЕПИЦ анализи, дошло је до значајног повећања контаминације Б-ћелија узорака НЛР-Лов. Ово запажање сугерише да повећање нивоа имуноглобулинских гена у НЛР_узорцима са ниским неутрофилом може настати услед контаминације Б-ћелија. Дакле, смањени гени имуноглобулина у НЛР_високим узорцима могу бити последица повећаних Б ћелија у НЛР_ниским узорцима и не нужно смањених нивоа гена имуноглобулина у НЛР_високим узорцима. Исто тако, није познато да су неутрофили ћелије које производе комплемент. Два процента контаминације моноцитима могу бити извор гена комплемента. Међутим, користећи податке о секвенци РНК, приметили смо да нема значајне разлике у контаминацији моноцита препарата неутрофила између НЛР_ниског и НЛР_високог. Штавише, извођење ЕПИЦ анализе РНА-сек података показује да је контаминација моноцита била<0.1% (<1:1000) of the neutrophil preparations, indicating that the RNA-seq was unlikely influenced by contaminating monocytes (Figure 3). The contaminating B cells in the NLR_Low samples do not influence the complement data observed. Finally, even now, it is not known that the changes we observed in complement and immunoglobulin genes are specific to vascular surgery patients with high NLR or older patients in general. NLR and genetic studies need to be performed on healthy age- and sex-matched patients without CVD.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Укратко, кардинални налаз у овој истрази је да су, у високим НЛР државама, многи гени компоненти комплемента и неки од њихових регулатора смањени у неутрофилима. Нејасно је укупно значење и стање активације идентификованих гена комплемента са смањеном регулацијом. Пошто су скупови гена комплемента упадљиво смањени, спекулишемо да особе са НЛР_високим и скраћеним постоперативним преживљавањем имају губитак главних ЦВ заштитних механизама које обезбеђују системи комплемента. Ову процену треба проспективно испитати у клиничким испитивањима за основни механизам(е) за овај исход.

Референце

1. Росс Р. Атеросклероза–инфламаторна болест. Н Енгл Ј Мед. 1999;340(2):115-126.

2. Гетз ГС. Серија тематских прегледа: имуни систем и атерогенеза. Функција имунитета у атерогенези. Ј Липид Рес. 2005;46(1):1-10.

3. Ханссон ГК, Херманссон А. Имуни систем код атеросклерозе. Нат Иммунол. 2011;12(3):204-212.

4. Дуффи БК, Гурм ХС, Рајагопал В, Гупта Р, Еллис СГ, Бхатт ДЛ. Корисност повишеног односа неутрофила и лимфоцита у предвиђању дугорочног морталитета након перкутане коронарне интервенције. Ам Ј Цардиол. 2006;97(7):993-996.

5. Тамхане УУ, Анеја С, Монтгомери Д, Рогерс ЕК, Еагле КА, Гурм ХС. Повезаност односа пријемних неутрофила и лимфоцита и исхода код пацијената са акутним коронарним синдромом. Ам Ј Цардиол. 2008;102(6):653-657.

6. Гибсон ПХ, Цроал БЛ, Цутхбертсон БХ, ет ал. Преоперативни однос неутрофила и лимфоцита и исход коронарне артеријске премоснице. Ам Хеарт Ј. 2007;154(5):995-1002.

7. Фици Ф, Целик Т, Балта С, ет ал. Упоредни ефекти небиволола и метопролола на ширину дистрибуције црвених крвних зрнаца и однос неутрофила/лимфоцита код пацијената са новодијагностикованом есенцијалном хипертензијом. Ј Цардиовасц Пхармацол. 2013;62(4):388-393.

8. Караман М, Балта С, Аи СА, ет ал. Упоредни ефекти валсартана и амлодипина на нивое вВф и однос Н/Л код пацијената са новодијагностикованом хипертензијом. Цлин Екп Хипертенс. 2013;35(7):516-522.

9. Утхамалингам С, Патвардхан ЕА, Субраманиан С, ет ал. Корисност односа неутрофила и лимфоцита у предвиђању дугорочних исхода код акутне декомпензоване срчане инсуфицијенције. Ам Ј Цардиол. 2011;107(3):433-438.

10. Бхат ТМ, Афари МЕ, Гарциа ЛА. Однос неутрофилних лимфоцита у периферној васкуларној болести: преглед. Екперт Рев Цардиовасц Тхер. 2016;14(7):871-875.

11. Бхутта Х, Агха Р, Вонг Ј, Танг ТИ, Вилсон ИГ, Валсх СР. Однос неутрофила и лимфоцита предвиђа средњорочно преживљавање након елективне велике васкуларне хирургије: студија попречног пресека. Васц Ендовасц Сург. 2011;45(3):227-231.

12. Апплетон НД, Баилеи ДМ, Моррис-Стифф Г, Левис МХ. Однос неутрофила и лимфоцита предвиђа периоперативни морталитет након отворене елективне санације анеуризме абдоминалне аорте. Васц Ендовасц Сург. 2014;48(4):311-316.

13. Батх Ј, Смитх ЈБ, Крусе РЛ, Вогел ТР. Однос неутрофила и лимфоцита предвиђа тежину болести и исход након процедура на доњим екстремитетима. Ј Васц Сург. 2020;72(2):622-631.

14. Кинг АХ, Сцхмаиер АХ, Хартх КЦ, ет ал. Повишен однос неутрофила и лимфоцита предвиђа смртност након елективне реконструкције ендоваскуларне анеуризме. Ј Васц Сург. 2020;72(1):129-137.

15. Кинг АХ, Ким АХ, Кван С, ет ал. Повишен однос неутрофила и лимфоцита је повезан са лошијим исходима након каротидне ендартеректомије код асимптоматских пацијената. Ј Строке Церебровасц Дис. 2021;30(12):106120.

16. Кинг АХ, Кван С, Сцхмаиер АХ, ет ал. Повишен однос неутрофила и лимфоцита повезан је са смањеним преживљавањем без ампутације након феморопоплитеалне перкутане реваскуларизације. Инт Ангиол. 2021;40(5):442-449.

17. Рацле Ј, де Јонге К, Баумгаертнер П, Спеисер ДЕ, Гфеллер Д. Симултано набрајање типова канцера и имуних ћелија из масовних података о експресији гена тумора. Елифе. 2017;6:е26476.

18. Трапнелл Ц, Робертс А, Гофф Л, ет ал. Диференцијална анализа експресије гена и транскрипта РНА-сек експеримената са ТопХат и Цуффлинкс. Нат Протоц. 2012;7(3):562-578.

19. Палмер Ц, Диехн М, Ализадех АА, Бровн ПО. Профили експресије гена специфичних за ћелијски тип леукоцита у хуманој периферној крви. БМЦ Геномицс. 2006;7:115.

20. Ставроу ЕКС, Фанг Ц, Бане КЛ, ет ал. Фактор КСИИ и уПАР појачавају функције неутрофила да утичу на зарастање рана. Ј Цлин Инвест. 2018;128(3): 944-959.

21. Дункелбергер ЈР, Сонг ВЦ. Комплемент и његова улога у урођеним и адаптивним имуним одговорима. Целл Рес. 2010;20(1):34-50.

22. Спеидл ВС, Кастл СП, Хубер К, Војта Ј. Комплемент у атеросклерози: пријатељ или непријатељ? Ј Тхромб Хаемост. 2011;9(3):428-440.

23. Јиа И, Вен В, Ианг И, ет ал. Клиничка улога комбинованог серума Ц1к и хсЦРП у предвиђању болести коронарне артерије. Цлин Биоцхем. 2021;93:50-58.

24. Гуо С, Мао Кс, Ли Кс, Оуианг Х, Гао И, Минг Л. Активност серумског комплемента Ц1к је повезана са опструктивном болешћу коронарне артерије. Фронт Цардиовасц Мед. 2021;8:618173.

25. Цавусоглу Е, Кассотис ЈТ, Анвар А, ет ал. Корисност комплемента Ц1к за предвиђање 10-годишње смртности код мушкараца са дијабетес мелитусом упућених на коронарографију. Ам Ј Цардиол. 2018;122(1):33-38.

26. Адамстеин НХ, МацФадиен ЈГ, Росе ЛМ, ет ал. Однос неутрофила и лимфоцита и инцидентни атеросклеротски догађаји: анализе из пет савремених рандомизованих студија. Еур Хеарт Ј. 2021;42(9):896-903.