Које су предности Цистанцхе полисахарида на имунолошку функцију

Контакт: emily.li@wecistanche.com

Имунолошка активност и механизам полисахарида Цистанцхе

Зенг Кунли, Зхенг Иифан, Лу Зхилианг

[Апстрактан]Циљ: Проучитиимуниактивност одЦистанцхеПолисахарид(ЦДПС) и механизам његовогимунирегулација ин витро. Методе: Тиазол плава колориметријска метода (МТТ) је коришћена да се посматра регулациони ефекат ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) на ИКС ДЕКС ТНФ који инхибира пролиферацију тимусних лимфоцита миша ин витро; ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) је коришћен за извођење анализе ћелијског циклуса и ћелијског циклуса коришћењем проточне цитометрије. Одређивање интрацелуларног Ца2. Резултати: ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) у вишој концентрацији може да се одупре инхибиторном ефекту ИСКДЕКС-а на пролиферацију лимфоцита и инхибиторном ефекту високе концентрације ТНФ-а на пролиферацију лимфоцита, и синергизује ефекат промоције пролиферације ТН Ф ниске концентрације на лимфоците; 100 уг/мл 200 уг/мл ЦДПСЦистанцхе Полисаццхариде) може значајно повећати ћелије у фази деобе; већа концентрација (100 уг/мл) ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) може значајно повећати концентрацију Ца јона у тимоцитима миша. Закључак: ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) може да подстакне ћелије да уђу у фазу деобе, и закључује се да је његов промотивни ефекат на пролиферацију тимусних лимфоцита миша повезан са промоцијом ослобађања калцијума у ​​тимусним лимфоцитима миша.

Цистанцхе(ЦистанцхеДесертицолаИЦ Ма) је редак и драгоцен кинески медицински материјал у мојој земљи. Наведен је као највиша оцена у „Схен Нонг’с Материа Медица“.Цистанцхеима функцију исхране крви, храњења бубрега и помоћи јангу, влажења црева и одлагања старења. Савремена фармаколошка истраживања то показујуЦистанцхеПолисахаридможе побољшати телоимунифункција, промовишу синтезу ДНК, јачају физичку снагу, побољшавају интелигенцију и има очигледне ефекте против старења [1]. Аутор је проучавао регулацију ЦДПС-а(Цистанцхе полисахарид), полисахаридну компонентуЦистанцхе, наимунифункцијамишјих лимфоцита.

Цистанцхе Полисаццхаридепромовисањепролиферација одлимфоцити

1 Материјал и методе

1.1 Реагенси и лекови.

РПМ, И 1640 средњи: ГИБ-ЦО; ХЕПЕС: ФАРЦО; Л-глутамин: Шангајска фабрика реагенса Донгфенг; Пеницилин и стрептомицин: Северна кинеска фармацеутска фабрика; Цонцанавалин (ЦонА), МТТ: Компанија СИГМ А; Фитохемаглутинин (ПХА): Шангајска медицинска лабораторија; Изопротеренол (ИСО): Шангајска фабрика лекова Тианфенг; Меркаптоетанол: Компанија Флука; Серум новорођенчета: Сијикинг Биоенгинееринг Цомпани; Дексаметазон (ДЕКС) је представио др Ма Лианг, Прва придружена болница Медицинског факултета Универзитета Џеђианг; Фактор супресора тумора (ТНФ) обезбедио је Иу Иуехан, професор на Одсеку за ћелије Школе природних наука Универзитета Џеђианг; Сви остали реагенси су домаће производње аналитичке класе.

1.2 Експерименталне животиње.

ИЦР мишеви, мужјаци, стари 68 недеља, тежине 18-20г, 22, купљени су од Зхејианг центра за експерименталне животиње.

1.3 Екстракција полисахарида Цистанцхе [2]:

ЦистанцхеПолисахаридекстрахује наша лабораторија! Након дробљења сирове дрогеЦистанцхе, потопи се у врући етанол, екстрахује у кључалу воду и исталожи у етанолу. Неутрални ензим у комбинацији са Севаг методом за депротеинизацију, ањонска ДЕАЕ-Сепхадек А- 50 хроматографија размене и Сепхацри С-200 гел филтрациона хроматографија да би се добила једна компонента ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде)). Држите сувим, користите непотпуни РПМИ1640 да бисте направили одређену концентрацију пре употребе и стерилишите ултрафилтрацијом

1.4 Припрема лимфоцита слезине и тимуса [3]:

The mice were sacrificed by neck removal. The spleen or thymus was taken aseptically and sieved through a 200-mesh steel mesh. The Hanks solution containing porridge newborn calf serum was used to prepare a single-cell suspension. After centrifugation at 1500 r/min for 10 min, red blood cells were lysed with 0.01 mol/L Tris-NHCl hypotonic solution for 1 min, and then washed with Hanks liquid centrifugation. Finally, the cells were suspended in RPMI1640 containing 10% fresh calf serum for complete culture Solution (containing 2 mmol/LL glutamine, 100 mmol/L sodium pyruvate, 1 mmol/L mercaptoethanol, add penicillin 100 U/ml and streptomycin 100 μg/ml just before use), trypan blue count, live For cells>93, подесите концентрацију ћелија слезине на Кс 10 /мл и концентрацију тимоцита на × 10 степени /мл

1.5 Реакција пролиферације лимфоцита:Према Мосманмн методи [4] Побољшање: 96-плоча за културу ћелија бунара, додати 10/мл суспензије ћелија слезине или воде 10/мл суспензије тимоцита 100М1 и различите концентрације лекова 10041 у сваки бунар. Култивисати у ЦО2.37Ц инкубатору 72 сата. 4 сата пре краја културе, додајте 8 μ1 МТТ (5 мг/мл) у сваки бунар. На крају културе, аспирирајте 150"1 супернатанта из сваке јажице и додајте 0,5Н изопропанол хидрохлорид 150М1. Лагано протресите на микро шејкеру да би се плави кристали потпуно растворили. Измерите ОД570 на читачу микроплоче. Поставите сваки експериментални тачка као три реплицирана бунара.

1.6 Одређивање утицаја на ћелијски циклус [5]:

{{0}}плоча са ћелијском културом, додати 4 10 степен/мл суспензије тимоцита 1мл у сваки бунар, додати различите реагенсе и раствор полисахарида у 2мл у јаким ЦО, 37 инкубатора После култивисања 72х, центрифугирати на 1500р/мин током 15 минута, баците супернатант, додајте 7 етанола да фиксирате преципитиране ћелије, чувајте на 4Ц за тестирање у стању приправности, исперите ћелије два пута са ПБС, центрифугирајте на 1500р/мин током 15 минута, одбаците супернатант, и додати Након што је 0,5 мл 0,1 РНасеА дигестирана на 4°Ц током 30 минута, 50 уг/мл бромоацетата је обојено 30 минута на 4°Ц, а интензитет флуоресценције узорака ћелија је мерен на ФАЦСцан проточном цитометру. 10,000 тест тачака ћелија је прикупљено за сваки узорак, а подаци су коришћени за анализу софтвера за више трицикла.

1.7 Одређивање интрацелуларне концентрације јона калцијума [6]

Узмите мишје тимоците на исти начин као горе. Суспендујте у непотпуном медијуму за културу РПМИл640 и подесите концентрацију ћелија на × 10'/мл. Додајте 1 мл суспензије тимоцита и 1 μМ у сваку експерименталну епрувету Флуо{4}}АМ раствор за бојење 5μ1, 2 процента Ф-275μ1, након инкубације на 37 °Ц током 30 минута, исперите два пута непотпуним РПМ1640, 1500р/ мин, центрифугирати 10 мин, одбацити супернатант и додати различите концентрације полисахарида и полисахарида у преципитиране ћелије Након ЦонА, интензитет флуоресценције је мерен на ФАЦСцан проточном цитометру. Подаци за 10,{16}} тест тачака ћелија су прикупљени за сваки узорак и анализирани помоћу ЦЕЛЛКУЕСТ софтвера. 1.8 Статистичке методе су коришћене за анализу варијансе, а ћелијски циклус и мерење јона калцијума анализирани су софтвером проточног цитометра.

Цистанцхе полисахарид из цистанцхе десертицола

2 Ресултс

2.1 Цистанцхе полисахарид ин витро инхибира пролиферацију тимусних лимфоцита миша помоћу ИСО ДЕКС ТНФ-а

Агонист -адренергичких рецептора изопротеренол (ИСО) и класа хормона коре надбубрежне жлезде дексаметазон (ДЕКС) инхибирају пролиферацију лимфоцита ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) у вишој концентрацији (75 125уг/мл) може да се одупре инхибиторном ефекту ИСО ДЕКС-а на пролиферацију лимфоцита (П<0.01) as="" shown="" in="" figure="" 1.="" tumor="" necrosis="" factor="" (tnf="" β)="" on="" lymphocytes="" at="" high="" concentration="" cdps="">Цистанцхе Полисахарид) (125 уг/мл) у вишој концентрацији може да се одупре инхибиторном ефекту ТНФ-а и синергистички промовише пролиферацију лимфоцита са ниском концентрацијом ТНФ-а (Слика 2)

2.2 Цистанцхе Полисахаридна регулација циклуса лимфоцита тимуса

ЦДПС (ЦистанцхеПолисахарид) 25уг/мл 100уг/мл 200#г/мл три концентрације су деловале на тимусне лимфоците миша током 72 сата, садржај ДНК у ћелијама је мерен помоћу ФАЦС и израчунат је индекс пролиферације (ПИ). према формули. Резултати показују да и 100уг/мл и 200уг/мл могу значајно повећати ћелије у фази деобе, а индекс пролиферације (68,0 процената, 56,6) обе је значајно већи од контролне групе (44,6), а индекс пролиферације од 200 уг/мл група је нешто нижа од 100 уг/мл групе јер је при концентрацији од 200 уг/мл њен ефекат на ћелијску пролиферацију постао силазни тренд [7]. Вредност ПИ (47,5 процената) у групи од 25 уг/мл није била значајно виша од оне у контролној групи.

2.3 Утицај полисахарида Цистанцхе на концентрацију јона калцијума у ​​тимоцитима миша

Експериментални резултати показују да је већа концентрација (100 уг/мл) ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) може значајно подстаћи повећање концентрације јона калцијума у ​​тимоцитима миша У поређењу са контролном групом, постоји значајна разлика (П<0.01), and="" there="" is="" a="" certain="" effect="" relationship="" with="" the="" action="" time="" (figure="">

3 Дискусија

Цистанцхе, опште познат као„пустињски гинсенг“, је сува, љускава месната стабљикаЦистанцхе.Цистанцхеима функције храњења јанга бубрега, хранљиве есенције, крви и црева. Спада у неку врсту узбуђења хипофизно-надбубрежног кортекса или има хормонски ефекат сличан кортексу надбубрежне жлезде. Вредан кинески лек који може регулисатиимунифункцијатела. Наши досадашњи резултати истраживања показују да ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) ин витро може да подстакне пролиферацију тимусних Т лимфоцита који нису активирани или активирани ЦонА ПХА. У комбинацији са ЦонА ПХА, постоје две врсте стимулатора Т ћелија, верујемо да ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) је бадјувант за Т ћелије, а такође смо открили да ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) може значајно повећати лучење лимфоцита слезине миша у већим концентрацијама [8]

Неке студије су откриле да рекомбинантни ТНФ може да изазове апоптозу нормалних мишјих и хуманих кластера Т лимфоцита ин витро, а овај ефекат може бити потенцијално инхибиран ИИЛ-2 ИЛ-1 ИФН и ИИЛ-4 са дексаметазоном (ДЕКС) Може инхибирати пролиферацију лимфоцита инхибирањем експресије лимфоцита и секреције ИЛ-2 и смањењем производње ИЛ-2Р високог афинитета. Овај експеримент је открио да је већа концентрација ЦДПС (ЦистанцхеПолисахарид) може да се супротстави ефектима високе концентрације ТН Ф на пролиферацију лимфоцита. Инхибиција, синергистичка са ниском концентрацијом ТНФ-а за промоцију пролиферације лимфоцита, и може се супротставити инхибиторном ефекту ИСК ДЕКС-а на пролиферацију лимфоцита. Ови ефекти су управо кроз ЦДПС (ЦистанцхеПолисахарид) да промовише пролиферацију Т лимфоцита и аутокрини су од стране Т ћелија ИЛ-2 и других цитокина за завршетак.

Последњих година било је много студија о имунофармаколошким ефектима биљних полисахарида, али мало студија оимунимеханизам регулације полисахарида, посебно пут трансдукције сигнала полисахарида који делују на лимфоците са Ца2 као другим гласником. Нема извештаја. Овај експеримент је спровео прелиминарна истраживања у овој области. Интрацелуларни сигнални молекули укључују цАМ Р Ца“, ИП3 ДГ цГМП итд., међу којима Ца“ има изузетно важан физиолошки ефекат на ћелије. Повећање интрацелуларне концентрације Ца² је важан феномен у раној фази активације и пролиферације лимфоцита. Овај процес се углавном дешава у првим десетинама секунди до минута када се ћелије активирају стимулаторима. Класичан начин активације Т ћелија је фосфатидилинозитол (ПИБ) за метаболизам фосфатидил мишића. Метаболит алкохола 1,45-иноситол трифосфат (ИП3) може да подстакне ослобађање Ца" ускладиштеног у унутрашњој мрежи везивањем за рецепторе унутрашње мреже, повећавајући ниво интрацелуларног Ца2 и концентрацију интрацелуларног Ца * повећава. Висок може подстаћи производњу НФ-АТ (нудеични фактор активиране Т ћелије), потоњи има ефекат промовисања експресије ИИЛ-2 гена. Експериментални резултати показују да већа концентрација (100 уг/мл ) ЦДПС (ЦистанцхеПолисахарид) је ефикасан током 5 10 мин Време има значајан утицај на повећање концентрације Ца* у тимоцитима миша и има синергистички ефекат са ЦонА. Стога спекулишемо да ЦДПС (Цистанцхе Полисаццхариде) промовише ослобађање калцијума у ​​тимусним лимфоцитима миша како би се повећала концентрација интрацелуларних јона калцијума. Повећање промовише експресију ИЛ-2 гена и доводи до пролиферације Т ћелија, што је једна од теоријских основаЦистанцхеПолисахаридирегулаторни ефекат на тело

Цистанцхе Полисаццхариде

Референце

1. ИН КсиуХин, СУ Иуке (Општа ситуација фармаколошких истраживања наЦистанцхеСка 【Ј】. Кинески традиционални и биљни лекови ((кинеска биљна медицина). 1993.24(10. 550-552(на кинеском))

2. ЗХАНГ Веијиее ( Биохемијска техника полисахарида једињења [М]. Хангзхоу Зхејианг Университи Пресс (Зхејианг Университи Пресс), 1994.16-17 (на кинеском)

3. МА Бо- (Ма Баоли). Имунологи техникуе【М1. Шангајски медицински универзитет Прес (Схангхаи Медицал Университи Пресс), 1984 188-190. (Н Кине))

4. Мосманн Т. Рапилоимерни тест за лакши раст и примену преживљавања на уклањање пролиферације и цитотоксичности [ЈЈ Иммун Метх.1983,6 55- 58.

5. ВУ ис-хи, ВУ схаилинг, Ацаи-н, ет ал (Ву Јиахуи, Ву Схуибинг. Ли Цариан, итд.), Утицај зина на пролиферацију цикличних ћелија уимунианализа органа помоћу проточне цитометрије [Ј]. Кинеска имунологија (Цхинесе Јоурнал оф Иммунологи), 1994, 10Кс5: 278-281. (на кинеском)

6. ТАО акин. ЈИИонг-ионг, ГАО Ки-ронг, ет ал (Тао Јиакиан, Ји Ионгпу Гао Киронг, итд.). ФАЦС анализа промена интрацелуларног Ц2 током елактивације[Ј] Кинески имунолошки часопис (Цхина Јоурнал оф Иммунологи), 1993, 9 (2): 97-10Л. (на кинеском)

7. ЗЕНГКу-ли.МАО Јум-хао, ЛУ сучијанг; Пречишћавање д полисадарида одЦистанцхеДесертицолаИЦ Мфа и његови имуномодулаторни ефекти на Теллфунцтион[Ј].бурнал Медицинског универзитета Зхејианг (Јоурнал оф Зхејианг Медицал Университи), 1998.27 (3: 108-111. (на кинеском)

8. Сарин А, Мицхелле Ц Ц. Перре АХ Цитотоксични ефекат ТНФ-а и лимфотоксин на Т Лимпхоблак. Ј Иммунол, 1995, 1553716-3721.