Ефекат уролитина А против старења на говеђе ооците ин витро 2

Контактирајтеoscar.xiao@wecistanche.comза више информација

2.8.Статистичка анализа

Подаци из производње ембриона и сесија квалитета су анализирани коришћењем Проц Глиммик-а из САС-а (Статистицал Аналисис Системс, САС Инст., Инц., Цари, НЦ, УСА), користећи бинарну дистрибуцију и логит као функције везе. Генерализовани линеарни мешовити модел укључивао је третман (дозе УА, ефекат старења и женско доба и њихову интеракцију) као фиксни ефекат и реплицирање као насумични ефекат. Поред тога, израчунате су средње вредности за сваки третман, а поређења између група су обављена коришћењем ПДИФФ теста. ЈЦ-1 подаци, нивои транскрипта иРНК и број копија мт-ДНК анализирани су коришћењем Проц Микед-а САС-а са моделом који укључује третман (УА ефекат, ефекат старења и/или женско доба и њихова интеракција) као фиксни ефекат. Седница се сматрала случајним ефектом. Подаци о хромозомским конфигурацијама упоређени су између група коришћењем тачног Фишеровог теста, у табели контингентности 2 к 2. Анализа резултата се сматрала статистички значајном када је п<>

Кликните овде да бисте сазнали више

3. Резултати

3.1. Претходни тест—студија доза-одговор

Статус сазревања ооцита примећен током студије дозе-одговора УА са додатком медијума за сазревање представљен је на Слици 1. Ова суплементација је значајно утицала на фазе сазревања језгре ооцита. Група 50 УА (38,9±0,5 процената) открила је већу стопу ооцита у статусу АИ/ТИ фазе у поређењу са контролном (10,8±{{ 15}}.5 процената ,П=0.03)и 10 УА(0.0±0.{{ 45}} процената ,п=0.0006). У овој фази, већа стопа у групи 25 УА (17,2±0,5 процената,п=0.05) у поређењу са идентификована је и група 10 УА. Штавише, утврђен је тренд између групе од 50 УА и 1 УА (14,3±2,0 процената ,п=0.08). Највећа доза је такође показала штетан ефекат, смањујући број ооцита класификованих у Метафази-ИИ (МИИ) стадијум (50 УА, 44,4 ±2,0 процената) у поређењу са контролном (86,5±7,0 процената,п=0.003),1 УА(82,1±2,5 процената,п{{ 53}}.01), 10 УА(89,3±6,5 процената ,п=0.002) и 25УА(82,8±9,0 процената,п=0.01) група. Нису примећене разлике између преосталих фазе сазревања ооцита. Фазе сазревања ГВ и ЦЦл нису приказане на слици 1, пошто у овим категоријама нису процењене ооците.

Тест доза-одговор није показао значајан утицај концентрација УА на стопу цепања и излегања ембриона. Међутим, на брзину ембриона произведених 7. дана утицале су различите концентрације УА. Група 50 УА (7,2±2,7 процената) имала је нижу стопу ембриона на дан 7 у поређењу са 1 УА (28,5±4,8 процената, п=0.004),10 УА ​​(20,4±4,0 процената , п=0.03) и 25 УА(18,5±4,7 процената,п=0.05) група. Иако нису нађене значајне разлике између контролне и 50 УА група, идентификован је тренд (п=0.06). Штавише, стопе ембриона 7 дана имају тенденцију (п =0.07) да буду веће након додавања дозе од 1 УА у поређењу са контролом. Штавише, група 1 УА је удвостручила број одличног/доброг квалитета ембриона (68,9 процената ембриона 1 степена,н=20) у поређењу са контролном (34,6 процената,н=10) и 10 УА ​​(26,8 проценат ,н=10).Мали број ембриона степена 1 је добијен уз веће дозе: 25УАгроуп (15,4 процента,н=4) и 50УА (35,4 процента,н=3). На основу горе наведених резултата, 1 уМ УА је изабран да настави са следећим студијама.

3.2. Експеримент 1——Квалитет јајних ћелија и развојни потенцијал остарелих и физиолошки зрелих јајних ћелија

3.2.1. Нуклеарно сазревање

Истраживали смо ефекат суплементације УА на статус хромозомског сазревања старих и физиолошки зрелих ооцита прикупљених од препубертетских и одраслих женки. Независно од ефекта УА, старење јајних ћелија и старење жена изазвали су значајан штетан утицај на сазревање. Веће стопе МИИ фазе су идентификоване у контролним ооцитима у поређењу са старијим (22х=93.2±5,4 процента наспрам 30х=77.6±4,1 процената, п {{11 }}.02). Штавише, кашњење у напредовању сазревања идентификовано је код старијих полних ћелија и препубертетских женки са више ооцита у АИ/ТИ фази (22х=3.4±0,5 процената наспрам 30х =17.9±0.6 процената ,п=0.01 и препубертета=21.1±1.1 процената наспрам одраслих=6.8±0.7 процената п =0.03). Штавише, идентификован је већи број дегенерисаних јајних ћелија после 30 х ИВМ у односу на после 22 х (7,1 ±1,39 процената наспрам 4,1±0,89 процената, п =0.02) . Старост жена и суплементација УА нису ометали (п 0,05) број дегенерисаних ооцита.

И старење ин витро и суплементација УА медијуму за сазревање значајно су утицали на хромозомску конфигурацију ооцита код препубертета и одраслих жена (п<0.05, figure="" 2).="" on="" the="" al/ti="" phase="" of="" the="" maturation="" status,="" higher="" rates="" of="" oocytes="" were="" found="" in="" this="" stage="" in="" the="" control="" aged="" 30="" h="" prepubertal="" group="" (46.7±0.5%)="" when="" compared="" to="" control="" prepubertal="" (0.0±0.0%,p="0.05)" and="" ua="" aged="" 30h="" prepubertal="" (0.0="" ±0.0%,p="0.02),and" both="" adult="" control="" (5.6±0.5%,p="0.01" and="" ua="" adult,0.0±0.0%,="" p="0.0002)and" control="" aged="" 30h="" adult="" (9.1±10%,p="0.02)groups." a="" trend="" was="" also="" identified="" between="" ua="" adults="" and="" ua="" aged="" 30="" h="" adult="" (p="">

Што се тиче МИИ фазе која одговара потпуном нуклеарном сазревању, такође су нађене значајне разлике између група (Слика 2). Ниже стопе ооцита на МИИ стадијуму су нађене у контролној доби од 30 х пре пубертета (53,3±2.0 процента) у поређењу са контролном препубертетском (10{{2{ {27}}}}.0±1,5 процената ,п=0.05), УА узраста 30 сати пре пубертета (100,0±2,5 процената , п=0.02) и УА одрасли (100,0 ±10,5 процената ,п=0.0002) и контролне групе од 30 година (86.0±5,5 процената п =0.056). Штавише, група одраслих са УА је показала веће стопе зрелих ооцита (МИИ) у поређењу са одраслом популацијом од 30 сати (76,2±11,3 процената, п=0.01), контролном одраслом особом од 30 сати (86). 0±5,5 процената ,п=0.08)и контролна одрасла особа (83,3±4,5 процената,п=0.057).

Нису уочене разлике између преосталих фаза сазревања ооцита.флавоноиди,Укратко, суплементација УА је побољшала прогресију сазревања ин витро у ооцитима подвргнутим процесу старења, посебно код жена у препубертетском периоду. Тако је идентификован важан ефекат УА против старења.

3.2.2. Потенцијал митохондријалне мембране

У циљу анализе учешћа митохондријалне дисфункције у ооцитима старе жене и утицаја УА и старости мајке, процењен је потенцијал митохондријалне мембране (ММП) у ооцитима различитих група.

Цистанцхе може против старења

Независно од старости жена и ефеката УА, старење јајних ћелија је имало значајан штетан утицај на ММП процењен као однос измерене црвене и зелене флуоресценције (однос од 22 сата =0.54±1,8 процената наспрам 30хратио{{6} }.47±1.5 процената, п=0.002).

Комбинација женског узраста, ефекта старења и суплементације УА током сазревања значајно је (п{{0}}.{{10}}0}7) утицала на ММП (слика 3). Као што је примећено на слици 3, веће стопе ММП су добијене у групама УА препубертета (однос=0.55±0.04) и УА одраслих (однос=0.63±0.04) где су ооцити сазревали 22 сата , у поређењу са контролном одраслом особом од 30 х (однос=0.45±0.04, п=0.04 и п=0.0007, респективно) и УА узрастом од 30 х (однос{ {23}}.45±0.03,п=0.03 и п=0.0003, респективно) групе.хесперидин користиШтавише, значајно повећање односа ЈЦ{{0}} агрегата/мономера, што указује на значајно повећање ММП, примећено је у групи одраслих УА у поређењу са контролном одраслом особом (однос =0.47 ±0.04,п =0.0031),контрола пре пубертета (однос=0.52±0.04, п=0. 03), контролна одрасла особа старости 30 х (однос=0.48±0.03,п=0.003) и УА узраста 30х одрасла особа (однос=0.47±0.03,п{{25) }}.001)групе. Такође је идентификован тренд између УА препубертета и УА старости 30 х препубертета (п=0.07).

Укратко, УА је побољшао ММП током физиолошког сазревања, али није био способан да превазиђе негативан ефекат старења и у препубертетским и у одраслим ооцитима.

3.2.3.Ембрионални развој

Ембрионални развојни потенцијал је процењен кроз стопе цепања, Д7 и излежених ембриона, добијене различитим третманима (старење и суплементација УА) примењеним на ЦОЦ у препубертету и одраслим женкама током сазревања. Независно од старости жена и ефеката УА, старење јајних ћелија је имало значајан штетан утицај на цепање (22х=79.5±1.7 процената наспрам 30х=68.6±2.0 процената, п=0.0001)и стопе Д7ембриона (22х=18.6±1.9 процената

наспрам 30х=12.1±1,7 процената ,п=0.01). Показало се и да суплементација УА побољшава стопе Д7 ембриона (контрола{ {8}}.1±1.5 процената наспрам УА=20.0±2.0 процената,п=0.0009).

Комбинација женског узраста, ефекта старења и суплементације УА током сазревања значајно је (п {{0}}.{{30}}}1) утицала на развој ембриона, односно на цепање и Стопе Д7 ембриона (Табела 2). Веће стопе цепања су постигнуте када су одрасле јајне ћелије сазревале 22 х са или без додатка УА (контролна одрасла особа=1.4±3,2 процента и УА одрасла особа=80). 9±3,4 процента) и препуберталне ооците сазревале су 22 х уз додатак УА (УА препубертал=80.6±3,2 процента), у поређењу са УА у доби од 30одрасле (66,5±4,2 процента, п Мање од или једнако 0,01), контролне групе узраста од 30 х препубертета (66,9±3,9 процената, п Мање или једнако 0,02) и УА узраста од 30 сати препубертета (67,2±4,0 процената, п Мање или једнако 0,01) (Табела 2). Такође је идентификован тренд (п=0.09) између контролне одрасле особе и контролне групе одраслих од 30 х.

Another parameter that was significantly (p=0.01) influenced by the combination of the female age, the supplementation with UA, and COCs aging was the rate of embryos produced at day 7(Table 2). Exceptions were made for the UA prepubertal and UA 30 h prepubertal groups, the UA adult group presented the highest rates of the embryo at day7 (26.8±4.3%,p≤0.05). Moreover, lower D7 embryo rates were produced from aged oocytes from both adult and prepubertal females without the supplementation of UA (control aged 30hprepubertal=7.7±2.6% and control aged 30h adult=7.7±2.6%)compared to those that were supplemented with UA, respectively (UA aged 30 h prepubertal=18.9±4.0%,p=0.03 and UA aged 30 h adult=15.9±4.0%,p=0.09). The supplementation of UA to the maturation medium did not significantly (p>0.05) утичу на стопе квалитета произведених ембриона степена 1,2 и 3, као ни ефекат старења или сви проучавани ефекти заједно (Табела 3). Међутим, удвостручио се број ембриона одличног/доброг квалитета који су произведени када су УА допуњене јајним ћелијама које су сазревале током 22 х (Табела 3).

3.3. Експеримент 2

3.3.1. Нивои експресије гена

Да би се проучавао ефекат УА и утицај старости мајке на сигнални пут Нрф2, анализа нивоа експресије гена НФЕ2Л2 и НКО1 у култури ГЦс код крава у препубертетском и одраслом добу је процењена помоћу РТ-кПЦР. Независно од других проучаваних фактора, старосна доб жена значајно је утицала на експресију гена НФЕ2Л2, што се огледа у вишем нивоу транскрипата НФЕ2Л2 у ГЦ код жена у препубертетском периоду (ниво мРНК препубертета=0.00015 ±0,0012 процената у односу на одрасле=0.00011±0,0012,п=0.048).

The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly(p>0.05) утичу на нивое експресије гена НФЕ2Л2, НКОл и мт-НД5. Слика 4 представља нивое експресије ових гена који су нормализовани са одговарајућом контролом, иу препубертетском и одраслом ГЦ-у третираном УА.

3.3.2.мт-ДНК број копије

Analysis of mt-ND5 DNA content in GC culture from prepubertal and adult cows was assessed by qPCR. The supplementation of UA to the culture medium of GCs, both independently and considering female age, did not significantly (p>0.05) утичу на број копија гена мт-НД5.изгубљено царство цистанцхеСлика 5 представља број копија овог гена нормализован са одговарајућим контролама, како у препубертетском тако иу ГЦ за одрасле који су третирани УА.

4. Дискусија

Последњих деценија примећена је све већа потражња за применом АРТ у сточарству [8,46,47]. Поред тога, одложено рађање повезано са поодмаклом старошћу мајке сада је постало главни фактор који наводи жене да прибегну АРТ [5]. Квалитет јајних ћелија је кључан за успешно зачеће, а старење женских полних ћелија је главна брига за успех АРТ-а. Упркос све већем напретку у овој области, примењене технологије још увек нису у стању да поврате плодност, враћајући биолошки сат [7]. У овом раду развијен је модел за проучавање старосне неплодности у ооцитима говеда. Због сличности са људском трудноћом, фоликуларним и ендокриним догађајима[48,49], овај модел такође може бити користан за људска истраживања, избегавајући етичка и физичка ограничења која ометају ове студије на људским ооцитима. Наш модел за старење женских полних ћелија показао се веома ефикасним и погодним за проучавање различитих проблема повезаних са репродуктивним старењем и оштећењем плодности, тренутно једним од најкритичнијих изазова у свету. Штавише, потрага за новим надолазећим антиоксидативним терапијама са потенцијалом да спрече неплодност изазвану старењем женских полних ћелија, као што је проучавано у овом раду, подједнако је од највеће важности.

Представљени резултати су по први пут известили о благотворном ефекту УА на исходе АРТ. УА је метаболит хране способан да спречи акумулацију дисфункционалних митохондрија повезаних са старењем индукујући њихову митофагију и продужени животни век ћелија [28]. Пошто УА никада раније није тестиран у репродукцији говеда, коришћене су дозе које су успешно примењене у различитим ћелијским линијама које показују његове антиканцерогене, антиинфламаторне и анти-агинг ефекте [28,35,39]. У нашој студији, претходна доза- спроведен је тест одговора и концентрација 1 уМ УА је јасно идентификована као најперспективнија. Штавише, штетан ефекат се показао при већим дозама, посебно при дози од 50 уМ УА, што је штетило прогресији нуклеарног сазревања до МИИ. Овај ефекат се одразио на оштећење ембрионалног развоја. Сходно томе, Лиу и колеге (2019) су приметили значајно смањену виталност ћелија и пролиферацију фибробласта људске старе коже, при концентрацији УА од 50 уМ. Они су навели да високе дозе УА доводе до смањене виталности ћелија повећавајући број ћелија заустављених у Г/М ћелијском циклусу [35]. Напротив, веће стопе ембриона су произведене 7. дана након додавања 1 уМ УА у медијум за сазревање у поређењу са другим дозама. Да би се даље истражили потенцијални механизми деловања УА у репродукцији жена, спроведена је студија током старења ооцита и коришћење женки различите старости као донора ооцита. Иамамото и сарадници (2010) су известили о смањењу стопе оплодње старих крава у зависности од старости, показујући да су ове јајне ћелије биле склоније обнављању прве мејотске деобе током сазревања и често су већ започеле мејотичко сазревање приликом сакупљања јајних ћелија [50] Ови подаци сугеришу да су ооцити старијих крава имали бржу прогресију нуклеарног сазревања и брже достигли МИИ фазу од ооцита младих женки због ниже компетенције ооцита [51]. Сходно томе, наша студија открива да старост донора и процес старења јајних ћелија значајно утичу на хромозомску конфигурацију ооцита у току сазревања. У ствари, ооцити крава у препубертетском периоду показали су већу стопу одложених стадијума, као што су Ал/ТИ фазе (препубертални=21.1 проценат у односу на одрасле =6.8 процената), откривајући спорије напредовање нуклеарног сазревање, што може бити последица ниже компетенције ооцита како су предложили Сото-Херас и колеге (2018). Остареле јајне ћелије такође имају ниже стопе ооцита које су достигле МИИ фазу током периода од 30 сати (7,6 процената) у поређењу са физиолошким периодом (93,2 процената). Штавише, позитиван ефекат је идентификован са третманом УА током процеса физиолошког сазревања, као и ефекти против старења и код препубертета и код одраслих жена.

У складу са нашим налазима, студија је показала да суплементација мелатонина током ин оитро сазревања може стимулисати обнављање мејозе у говеђим ЦОЦ, док су контролне ооците узгајане без хормона имале спорије стопе обнављања мејозе [52]. Напротив, суплементација другим антиоксидативним агенсима, као што су кверцетин, витамин Ц или ресвератрол, није показала никакав ефекат на стопе сазревања језгре, чак и када су примећени смањени нивои РОС или повећани ензимски нивои антиоксиданса [53,54].микронизована пречишћена фракција флавоноида 1000 мг користиСупротно томе, наши резултати показују да би УА могао спасити ооците од ефеката старења и код старијих одраслих и препубертетских жена, које представљају нижу компетенцију, побољшавајући стопе сазревања.

Један од главних фактора који доприносе лошим исходима плодности који утичу на квалитет ооцита је повезан са митохондријалним функцијама, које постају компромитоване са поодмаклом старошћу мајке и старењем након овулације [21,55]. ММП је широко проучаван на различитим моделима, откривајући да обе старе гамете након овулације и старење мајке изазивају губитак митохондријалне функције [56]. Сходно томе, губитак ММП се негативно одразио на развој ооцита и ембриона [26,57]. Према овим налазима, у нашој студији, смањени однос ММП је пронађен у старим ооцитима и препубертетских и одраслих крава. Штавише, суплементација УА медијуму културе изазвала је повећање ММП препуберталних и одраслих ооцита које су сазревале 22 х, што је одјекнуло у већим стопама цепања. Ови подаци су у сагласности са резултатима које су пронашли Лианг и сарадници (2017) који су приметили повећање ММП-а када су говеђе ооците допуњене мелатонином током 22 сата [26]. Међутим, такође смо идентификовали смањење ММП-а у старим ооцитима допуњеним УА, што указује да УА можда неће моћи да преокрене негативан ефекат старења у ММП. Уочени су различити резултати у вези са ММП након суплементације остарјелим јајним ћелијама антиоксидативним једињењима. Заиста, неколико аутора је пријавило веће нивое ММП у ооцитима након суплементације мелатонином [26] и ламинарином [21], док су други приметили супротно, смањени ММП код остарелих ооцита третираних Л-карнитином [58] и мелатонином [38]. Поред тога, Риу и колеге (2016) су показали смањење ММП у миобластима мишева култивисаним са УА [28]. Што се тиче наших резултата, треба се посветити даљим студијама како би се продубило знање о механизму деловања УА у митохондријама ооцита и објаснили идентификовани диференцијални ефекти на старе и физиолошки зреле ооците.

Интринзични квалитет ооцита је нашироко пријављен као главна детерминанта каснијег ембрионалног развоја. Акумулирани докази су открили да се неколико ћелијских и молекуларних абнормалности јавља током продужених периода сазревања ин витро, као и током ин оиво постовулаторног старења [57]. Штавише, ове абнормалности могу имати релевантан утицај на квалитет ооцита који одјекује на производњу ембриона [52]. Да бисмо показали да УА може деловати као једињење против старења и побољшати квалитет јајних ћелија, одлажући старење ооцита, истражили смо развојни капацитет остарелих ооцита након ин витро оплодње. У нашој студији, примећен је значајан (п мањи од или једнак 0.01) штетан ефекат старења гамета на цепање и стопе производње ембриона 7. дана. Сходно томе, неколико аутора наводи да старе женке имају опадање репродуктивних капацитета у зависности од старости, што се огледа у нижој стопи плодности и лошем квалитету ембриона [44,55]. С друге стране, претходне студије које су тестирале друге молекуле антиоксиданса за спасавање остарелих јајних ћелија пријавиле су благотворан ефекат неколико ових једињења током ин витро сазревања на развој ембриона остарелих женки различитих врста, као што су говеда [58], свиње [ 38] и мишеви [6]. На пример, Л-карнитин је тестиран на ооцитима старих говеда и нису нађене значајне разлике у добијеним стопама цепања. Међутим, идентификовано је значајно повећање стопе развоја зигота до стадијума бластоцисте, у поређењу са остарелим ооцитима без Л-карнитина [59] Наши резултати такође показују да је суплементација УА током физиолошког сазревања побољшала стопу цепања код препубертетских и одраслих жена. Иако се стопе цепања јајних ћелија старости УА нису значајно разликовале од ооцита контролног узраста, веће стопе ембриона Д7 су идентификоване у ооцитима старих УА и код препубертетских и код одраслих женки. Ови резултати су указали да је ефекат против старења УА претходно идентификован у различитим ћелијским културама [28,35] валидан за ооците и ембрионе. Старење јајних ћелија је мултифакторски процес који нарушава развој ембриона, а враћање развојног капацитета остарелих јајних ћелија је важан циљ који је постигнут у овој студији.

Поред тога, такође смо проценили превентивну улогу УА у погоршању квалитета ембриона у вези са старењем. Иако у овој студији нису нађене значајне разлике у стопама квалитета ембриона, ооцити са додатком УА повећали су број преносивих ембриона у поређењу са нетретираним. Претходна студија је известила да третман Л-карнитином може побољшати квалитет ембриона развијених из остарелих говеђих ооцита кроз смањење нивоа РОС и виших нивоа глутатиона, као и других антиоксидативних ензима [58]. Разлике између ових и наших резултата могу бити последица различитих техника примењених за процену квалитета ембриона. Морфолошка процена квалитета ембриона остаје субјективна метода која зависи од искуства посматрача. У будућности би се требало бавити више студија коришћењем других техника за тачну процену квалитета ембриона.

Опште је познато да оксидативни стрес игра кључну улогу у смањењу плодности у вези са годинама. Оксидативни стрес је један од главних фактора који доприноси ниској ефикасности сазревања јајних ћелија и погоршању квалитета јајних ћелија, што нарушава каснији развој ембриона [11]. Међућелијска комуникација између гамете и соматских ћелија је кључна за правилан развој висококвалитетних ооцита. Пријављене су промене у микроокружењу остарелих јајника, као што је смањена ензимска активност антиоксиданса која доводи до смањене ефикасности чишћења РОС-а.отефлавоноидШтавише, показало се да ГЦ од младих и старијих женки имају различито експримиране гене повезане са антиоксидативним активностима и старошћу мајке [2,13]. Стога је од велике важности да пронађени механизми управљају оксидативним стресом како би се ооците спасиле од старења и превазишле проблеме неплодности. Нрф2-Кеапл пут је опширно проучаван због његовог капацитета да се носи са штетним ефектима оксидативног стреса и испољи својства антиоксиданата [60]Да бисмо даље проучавали активацију Нрф2 сигналног пута у ГЦ-овима говеда, проценили смо ниво експресије мРНА НФЕ2Л2 и његовог низводног антиоксиданса (НКО1). Наши резултати су показали значајан утицај женског узраста на ниво транскрипата НФЕ2Л2, који опада са годинама. Заиста, већи нивои експресије мРНА су примећени код крава у препубертетском периоду у поређењу са одраслима. Ово је у сагласности са претходним студијама које су пријавиле високо изражен ниво Нрф2 протеина и мРНА на ткивима јајника младих мишева који рађају и жена од 22 до 49 година, док је код старијих мишева и жена пронађена нижа експресија. Претпоставља се да смањена експресија Нрф2 може бити укључена у опадање репродуктивног капацитета старијих жена и да његова контрола може имати важне импликације у одлагању старења јајника[15,61]. Штавише, Акино и сарадници (2019) су показали да активација Нрф2-Кеапл пута применом диметил фумарата може смањити нивое РОС и довести до одложене неплодности [18]. Пријављени су слични резултати у вези са ефектом УА на смањење РОС-а у старим фибробластима људске коже. Када су ове ћелије третиране са УА, пријављено је значајно повећање експресије мРНА Нрф2 циљаних гена, као што су СОД1, НК01, ГЦЛЦ и ХМОКС1. [35]. У нашој студији, приметили смо да ниво експресије НФЕ2Л2 и НКО1 гена у ГЦ није значајно утицао суплементација УА. Међутим, треба се позабавити даљим студијама како би се потврдило смањење РОС-а и накнадно побољшање произведене бластоцисте, као и ефекат УА на експресију мРНК горе поменутих гена на остарелим ооцитима.

Поред оштећења митохондријалне ДНК (мт-ДНК) [25,57], показало се и да поремећај експресије митохондријалних гена доприноси митохондријалној дисфункцији са годинама. Зханг и колеге (2019) су известили да су неки гени укључени у ОКСПХОС, наиме мт-НД2, мт-НД3, мт-НД4, мт-НД4Л и мт-НД5, значајно смањени у ГВ стадијуму ооцита остарелих мишева, у поређењу са онима код младих мишева[62]. У нашој студији, није пронађена значајна разлика у експресији мт-НД5 мРНК, између ГЦ добијених од препубертетских и одраслих крава. Штавише, проценили смо и број копија мт-ДНК, јер је садржај мт-ДНК у ГЦ позитивно повезан са квалитетом ооцита и развојем ембриона [63,64]. Иако у нашој студији нису идентификоване значајне разлике између броја копија мт-ДНК у ГЦ од препубертетских и одраслих крава, или када су третиране УА, приметили смо већи број ооцита који су се развили до стадијума бластоцисте, у поређењу са нетретираним групама. Поред тога, Риу и сарадници (2016) су известили да се садржај мт-ДНК и ниво протеина из респираторних комплекса нису променили у миобластима мишева са додатком УА[28]. Требало би спровести даље студије како би се открио механизам деловања УА у побољшању плодности код жена.

5. Закључци

Резултати добијени у овој студији потврдили су штетан утицај старења ооцита на њену развојну компетенцију. Штавише, наш модел за старење женских полних ћелија показао се веома ефикасним и корисним за проучавање различитих проблема повезаних са репродуктивним старењем и последичним оштећењем плодности. Поред тога, додатак УА током процеса сазревања остарелих јајних ћелија побољшао је стопе сазревања и произвео ембрионе. Због тога је први пут идентификован анти-агинг ефекат УА у спасавању остарелих гамета, побољшавајући развој бластоциста, што доводи до повећаног броја ембриона за трансфер на женке примаоце. Такође је идентификован позитиван ефекат УА на физиолошко сазревање, ММП и ембрионални развој. У закључку, УА третман пружа нови терапијски приступ за спречавање или одлагање старења гамета и побољшање каснијег формирања бластоциста и исхода плодности у АРТ-у.

Овај чланак је преузет из Анималс 2021, 11, 2048. хттпс://дои.орг/10.3390/ани11072048 хттпс://ввв.мдпи.цом/јоурнал/анималс