Антиоксидативни и антикоагулантни ефекти фенилпропаноидних гликозида
Mar 18, 2022
за више информација:ali.ma@wecistanche.com
Бартош Скалски и др
Апстрактан
Холопаразитске биљке Оробанцхацеае, укључујући Цистанцхе, Оробанцхе и Пхелипанцхе спп, познате су по свом богатствуфенилпропаноидгликозиди(ППГ). Утврђено је да многа ППГ једињења поседују широк спектар активности, као што су антимикробна, антиинфламаторна, антиоксидативна и побољшавају памћење. Да бисмо боље истражили потенцијал биоактивности европске метлице (О. Цариопхиллацеае – ОЦ, П. Аренариа – ПА, П. рамоса – ПР) и десет појединачних изолованих фенилпропаноидних састојака, истражили смо њихово антирадикално дејство, заштитни ефекат од оксидације у плазми ин витро систему. , и утицај на параметре коагулације. Тестирани екстракти су показали активност чишћења од 50–70 процената Тролок-ове моћи. Екстракт ОЦ, богат актеозидом, имао је преко 20 процената бољи антирадикални потенцијал од ПР екстракта који је једини садржао ППГ без Б-прстена катехолног дела у ацил јединици. Штавише, утврђено је да је само осам тестираних ППГ-ова(pхенилпропаноидгликозиди)показао антиоксидативни потенцијал у људској плазми третираној са Х2О2/Фе; међутим, три тестирана ППГ-а(pхенилпропаноидгликозиди)поседовао антикоагулантни потенцијал поред антиоксидативних својстава. Чини се да је структура ППГ, посебно присуство ацилних и катехолних делова, углавном повезана са њиховим антиоксидативним својствима. Антикоагулантни потенцијал ових једињења је такође повезан са њиховом хемијском структуром. Одабрани ППГ показују потенцијал за лечење кардиоваскуларних болести повезаних саоксидативностреса.
Кључне речи:Броомрапе, фенилпропаноидни гликозиди, оксидативни стрес, плазма хемостаза
ЦистанцхеимаПхенилпропаноидгликозиди
1. Представљање
Оксидативностресаје надалеко познат по свом негативном утицају на здравље живих организама, укључујући убрзано старење и неке врсте рака. Појава офоксидативностресаје повезан са поремећеном равнотежом између оксидативних и антиоксидативних механизама (укључујући ензимску (каталаза, глутатион пероксидаза) и неензимску (глутатион) одбрану) у ћелијама тела [1]. Прекомерна производња реактивних врста кисеоника (РОС), укључујући оксидирајуће радикале и врсте затворене љуске, један је од главних механизама иза формирања оксидативног стреса. Међутим, биолошки ефекат изазван РОС у великој мери зависи од концентрације, времена излагања и локације. У нормалним условима (ниска концентрација), радикали кисеоник/азот могу да играју улогу секундарних гласника, али на вишем нивоу могу да почну да реагују са биолошким структурама, као што су ћелијске мембране [2]. Међу свим врстама РОС, хидроксилни радикал (ХО.) изазиваОксидативнонапрезањапознато је да игра важну улогу у низу болести, укључујући кардиоваскуларне. Поремећаји крвног система су у корелацији и/или претходили променама различитих параметара хемостазе и биомаркера у плазми [1,3].
С друге стране, многе природне супстанце, као што су полифеноли и полинезасићене масне киселине, идентификоване су као моћни антиоксиданси способни да спрече стварање и/или смање реактивне врсте кисеоника. Једињења са таквим својствима налазе се у многим прехрамбеним производима и фармацеутским препаратима биљног порекла. Исхрана обогаћена свежим поврћем и воћем и антиоксидативне терапије засноване на природним антиоксидансима се стога широко препоручују јер могу да смање нивооксидативностресаи спречавају различите патофизиолошке процесе [4,5]. Биљни полифеноли су разноврсна група секундарних метаболита, међу којима значајно место заузимају фенолне киселине, пошто су широко распрострањене и испољавају разноврсна биолошка дејства, као што су антимикробна, антиоксидативна и антиинфламаторна.Пхенилпропаноидгликозиди(ППГ) су естарски деривати хидроксициметне киселине и они су главна/једина класа секундарних метаболита присутних у холопаразитским биљкама Оробанцхацеае, укључујући Цистанцхе, Оробанцхе и Пхелипанцхе спп. Неколико врста ове породице су озбиљне штеточине усева којих фармери желе да се отарасе на њивама (пример Пхелипанцхе рамоса), неколико се користи у фармакологији, док је већина од малог значаја за људе. Херба Цистанцхе се у великој мери користи у азијској традиционалној медицини у лечењу недостатка бубрега и као средство за побољшање имунитета и памћења, против старења и против умора [6]. Фитокемијске анализе различитих истраживачких група су то показалефенилпропаноидгликозиди, као што су актеозид, ехинакозид и подијумска страна, један су од главних активних састојака Херба Цистанцхе [7]. Недавна студија о неколико врста метлића пронађених у Пољској од стране Једрејек ет ал. [8] је показао да овај биљни материјал има сличан квалитативни састав (доминација ППГ)(pхенилпропаноидгликозиди), штавише, једнак је или чак превазилази Цистанцхе спп. у погледу садржаја активних супстанци [8]
Ова студија је имала за циљ да процени антирадикални и антиоксидативни потенцијал, као и утицај на параметре хемостазе три екстракта метличке репице (Оробанцхе цариопхиллацеа – ОЦ, Пхелипанцхе Аренариа – ПА и П. рамоса – ПР) богата различитим фенилпропаноидима, као нпр. као и њихови појединачни ППГ састојци. Антирадикални капацитет је мерен коришћењем 2,2′-азинобис-3-етилбензтиазолин-6-сулфонске киселине/Тролок еквивалента (АБТС/ТЕ) и 2,2-дифенил-1-пикрилхидразила (ДППХ ) тестови. Тхеоксидативностресау плазма тест систему је индукован хидроксил радикалом (Х2О2/Фе), затим липидна пероксидација (тест реактивних врста тиобарбитурне киселине (ТБАРС)) и мерен је ниво протеинских карбонилних и тиолних група. Међу утврђеним параметрима хемостазе били су: активирано парцијално тромбопластинско време (АПТТ), протромбинско време (ПТ) и тромбинско време (ТТ).
ЦистанцхеимаПхенилпропаноидгликозиди
2. Материјал и методе
2.1. хемикалије
2,2-дифенил-1-пикрилхидразил радикал (ДППХ), 2,2′-азинобис-3-етилбензтиазолин-6-сулфонска киселина (АБТС), калијум персулфат, 6- хидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоксилна киселина (Тролок), диметилсулфоксид (ДМСО), тиобарбитурна киселина (ТБА), мравља киселина (ЛЦ-МС квалитета) и Х2О2 купљени су од Сигма-Алдрицх (Сент Луис, МО, САД). Метанол (ХПЛЦ градијент квалитета) и ацетонитрил (ЛЦ-МС граде) су набављени од Мерцк (Дармстадт, Немачка). Десет фенилпропаноидних једињења тестираних у овом раду, укључујући 2′-О-ацетилактеозид (97 процената), 2′-О-ацетилполиумозид (98 процената), 3-О-метилполиумозид (96 процената), актеозид (99 процената), арена унутра (97 процената), кренатозид (98 процената), тенипозид (99 процената), полиумозид (99 процената), тубулозид А (96 процената) и виеде маниосиде Д (96 процената) смо претходно изоловали из доле наведене биљке материјал [8]. Чистоћа једињења је процењена коришћењем УХПЛЦ-ПДА-МС анализе. Ултрачиста вода је припремљена у компанији користећи Милли-К систем за пречишћавање воде (Миллипоре Цо.). Остали реагенси су били аналитичког квалитета и обезбеђени су од домаћих комерцијалних добављача.
2.2. Садни материјал
Цвјетне биљке три врсте метличке репице, укључујући Оробанцхе Цариопхиллацеае См., Пхелипанцхе Аренариа Помел и П. рамоса (Л.) Помел идентификовао је проф. Рената Пивоварцзик (Универзитет Јан Коцхановски, Киелце, Пољска) и сакупљена из природног извора у Пољској. Ваучерски примерци (О. Цариопхиллацеае – Цхоментовек ´ (50.3349◦Н, 20.4000◦Е), ксеротермни травњак, паразити Галиум бореале, мај 2014; П. Аренариа – Звиерзиниец), Артемисиа цампестрис, јун 2014; П. рамоса – Сзевце (50,3553◦Н, 22,3038◦Е), поље, паразити Соланум Лицоперсицум, септембар 2014) депоновани су у Хербаријуму Универзитета Јан Коцхановски у Киелцеу (КТЦ). Биљни материјал је лиофилизован и фино млевен пре екстракције.
2.3. Припрема екстракта метлића
Биљни материјал у праху (О. Цариопхиллацеае (ОЦ) – 2 г, П. Аренариа (ПА) – 3 г и П. рамоса (ПР) – 3 г) екстрахован је са 80 процената МеОХ на 40 ◦Ц и 1500 пси (притисак растварача ) коришћењем АСЕ 200 убрзаног екстрактора растварача (Дионек, Суннивале, ЦА, УСА). Екстракти су упарени и осушени замрзавањем (Гамма 2–16 ЛСЦ замрзивач за сушење, Цхрист, Немачка). Ефикасност екстракције за ОЦ, ПА и ПР била је 55 процената, 37 процената и 43 процента по тежини биљног материјала, респективно. Због високог садржаја угљених хидрата (подаци нису приказани), сирови екстракти су даље пречишћени екстракцијом чврсте фазе (СПЕ) на Оасис ХЛБ микро колони (500 мг; Ватерс, Милфорд, МА, САД). Шећери су уклоњени са 1% МеОХ, а затим су једињења од интереса елуирана са 80% МеОХ. Након уклањања растварача, екстракти ОЦ, ПА и ПР су лиофилизовани (Гамма 2–16 ЛСЦ сушач смрзавањем), а приноси пречишћавања СПЕ били су 53 процента (ОЦ), 67 процената (ПА) и 51 проценат (ПР) .
2.4. Фитокемијске карактеристике екстракта метличке репице
Квалитативне и квантитативне анализе екстракта метличке репице вршене су коришћењем АЦКУИТИ УПЛЦ система (Ватерс) повезаног са детектором фотодиодног низа (ПДА) и тандем квадруполним масеним спектрометром (ТКД-МС/МС). Лиофилизирани ОЦ, ПА и ПР екстракти растворени су у 50 процентном метанолу у концентрацији од 0.50 мг/мЛ и затим хроматографисани на БЕХ Ц18 колони (1{ {21}}0 × 2,1 мм, 1,7 µм, Ватерс). Услови хроматографије су били следећи: температура пећнице – 25 ◦Ц, линеарни градијент 10→25 процената мобилне фазе Б (0,1 проценат мравља киселина у ацетонитрилу) у мобилној фази А (0,1 проценат мравље киселине у Х2О) током 12 мин, брзина протока – 0,4 мЛ/мин, запремина убризгавања – 2 μЛ, УВ опсег – 190–490 нм (резолуција 3,6 нм). МС анализа је изведена у режиму негативних јона са електроспреј јонизацијом (ЕСИ), уз коришћење следећих подешавања: опсег скенирања 100–1200 м/з; капиларни напон 2,8 кВ; напон конуса 35 В; температура извора 150 ◦Ц; температура десолватације 450 ◦Ц; проток десолватационог гаса 900 Л/х, а проток конусног гаса 100 Л/х. Прикупљање и обрада података обављени су коришћењем софтвера Ватерс МассЛинк 4.1.
Пикови фенилпропаноидног гликозида (ППГ) идентификовани су поређењем добијених ЛЦ-МС података са претходно изолованим једињењима [8]. Квантификација ППГ-ова(pхенилпропаноидгликозиди)у екстрактима метличке репице засновано је на УПЛЦ-УВ методи са детекцијом на 330 нм, и екстерном стандардном калибрацијом коришћењем актеозида (Сигма-Алдрицх, веће или једнако 99 процената, ХПЛЦ) као групног стандарда. Линеарна калибрациона крива је припремљена у шест концентрација у опсегу од 1–200 уг/мЛ и показала је добру линеарност (Р2 већи или једнак 0,999). Квантитативни резултати представљају средњу вредност ± СД за три ињекције и изражени су у милиграма актеозидних еквивалената (екв.) по граму екстракта (мг актеозид ек/г).
ЦистанцхеимаПхенилпропаноидгликозиди
2.5. Антирадикална активност ин витро
2.5.1. АБТС тест уклањања радикала
АБТС антирадикални тест је спроведен коришћењем методе коју су описали Контек ет ал. [9], са малим модификацијама као што следи: 20% МеОХ је коришћено за припрему реагенса (7 мМ АБТС и 4,9 мМ калијум персулфата); раствори екстракта ОЦ, ПА и ПР, у четири нивоа концентрације у опсегу од 100−400 уг/мЛ, и раствори Тролок, на шест нивоа концентрација у опсегу од 10−250 уг/мЛ, припремљени су са 50 одсто. МеОХ. Пропорција узорка према АБТС плус радном раствору била је 1:25 (в/в). Апсорбанца на 734 нм је измерена након 30 мин инкубације у мраку помоћу УВ-вис спектрофотометра (Еволутион 260 Био, Тхермо Фисхер Сциентифиц Инц., Валтхам, МА, УСА).
Инхибиција апсорпције ( проценат ) је израчуната на следећи начин: [(Абсцонтрол–Абссампле)/Абсцонтрол] ×100.
Тролок еквиваленти (ТЕ) екстраката метличке репице су израчунати коришћењем формуле ТЕ {{0}} узорак/стандард, где је м нагиб праволинијских кривих (инхибиција апсорпције наспрам концентрације). ТЕ вредност узорка описује његову нормализовану активност против Тролок-а (ТЕстандард =1.0). ИЦ50 вредности за ОЦ, ПА, и ПР екстракте и Тролок су достигнуте експериментално, затим су израчунате из њихових праволинијских кривих (инхибиција апсорпције у односу на концентрацију) и изражене у уг/мЛ.
Тест је изведен у три примерка, а резултати су представљени као средње вредности ± стандардне девијације (СД).
2.5.2. ДППХ тест уклањања радикала
ДППХ антирадикални тест је спроведен методом коју су описали Једрејек ет ал. [8] и Бранд-Виллиамс ет ал. [10], са малим модификацијама и то: раствори екстракта ОЦ, ПА и ПР, у четири нивоа концентрације у опсегу од 50−250 уг/мЛ, и Тролок раствори, на шест нивоа концентрација у опсегу од 10− 250 уг/мЛ, припремљени су са 50% МеОХ. Однос узорка према ДППХ био је 1:19 (в/в). Апсорбанција на 517 нм је измерена након 30 мин инкубације у мраку коришћењем УВ-вис спектрофотометра (Еволутион 260 Био).
Инхибиција апсорпције ( проценат ) је израчуната на следећи начин: [(Абсцонтрол–Абссампле)/Абсцонтрол] ×100.
Вредности Тролок еквивалента (ТЕ) и ИЦ50 тестних узорака су израчунате на исти начин као у АБТС тесту (одељак 2.5.1). Тест је изведен у три примерка, а резултати су представљени као средња вредност ± СД.
2.6. Основни раствори тестираних биљних једињења и екстраката за експерименте са људском плазмом
Основни раствори тестираних једињења и биљних екстраката припремљени су у 50 процената ДМСО. Коначна концентрација ДМСО у испитиваним узорцима била је нижа од 0,05 одсто и њени ефекти су утврђени у свим експериментима.
2.7. Изолација људске плазме
Људска крв, односно плазма, добијена је од шест редовних давалаца (мушкараца и жена непушача) у банци крви (Лођ, Пољска) и медицинском центру (Лођ, Пољска). Крв је сакупљена као ЦПД раствор (цитрат/фосфат/декстроза; 9:1; в/в крв/ЦПД) или раствор ЦПДА (цитрат/фосфат/декстроза/аденин; 8,5:1; в/в; крв/ЦПДА). Донатори нису узимали никакве лекове или супстанце које изазивају зависност (укључујући дуван, алкохол и додатке антиоксидансима) најмање две недеље пре донације. Наша анализа узорака крви обављена је у складу са смерницама Хелсиншке декларације за људска истраживања и одобрена од стране Комитета за етику истраживања у експериментисању на људима на Универзитету у Лођу. Плазма је припремљена центрифугирањем свеже људске крви на 4500к г током 25 минута на собној температури. Концентрација протеина је израчуната мерењем апсорбанције испитиваних узорака на 280 нм, према процедури Вхитакер и Гранум [11].
ЦистанцхеимаПхенилпропаноидгликозиди
2.8. Маркери оксидативног стреса у људској плазми
2.8.1. Мерење липидне пероксидације
Пероксидација липида у плазми је квантификована мерењем концентрације реактивних супстанци тиобарбитурне киселине (ТБАРС). Концентрација ТБАРС је израчуната коришћењем коефицијента моларне екстинкције (ε =156, 000 М− 1цм− 1). Метода је детаљније описана на другом месту [12,13].
2.8.2. Мерење карбонилних група
Ниво карбонил група је израчунат коришћењем коефицијента моларне екстинкције (ε=22, 000 М− 1 цм− 1) и изражен је као нмол карбонил група/мг протеина плазме, према Бартошу [13]. ] и Левине ет ал. [14].
2.8.3. Одређивање тиолне групе
Садржај тиолне групе у протеинима плазме мерен је спектрофотометријски коришћењем СПЕЦТРОстар Нано Мицроплате Реадер-а (БМГ ЛАБТЕЦХ, Немачка) апсорбанцијом на 412 нм са 5,5′-дитиол-бис-(2- нитробензојевом киселином). Метода је детаљније описана на другом месту [15–17].
2.9. Параметри хемостазе
2.9.1. Мерење протромбинског времена (ПТ)
ПТ је одређен коагулометријски коришћењем оптичког анализатора коагулације (модел К-3002, Кселмед, Грудзиадз, Пољска) према Малиновска ет ал. [18].
2.9.2. Мерење тромбинског времена (ТТ)
ТТ је одређен коагулометријски коришћењем оптичког анализатора коагулације (модел К-3002, Кселмед, Грудзиадз, Пољска), према методи коју су описали Малиновска ет ал. [18].
2.9.3. Мерење активираног парцијалног тромбопластинског времена (АПТТ)
АПТТ је одређен коагулометријски коришћењем К-3002 оптичког анализатора коагулације (Кселмед, Грудзиадз, Пољска) према Малиновској ет ал. [18].
2.10. Анализа података
К-Дикон тест је спроведен да би се елиминисали несигурни подаци. Подаци су тестирани на нормалну дистрибуцију Шапиро-Вилковим тестом и једнакост варијансе Левеновим тестом. Статистички значајне разлике су идентификоване коришћењем АНОВА, праћене Тукеијевим тестом вишеструких поређења или Крускал-Валлисовим тестом. Поређења су сматрана значајним при п < 0.05.="" вредности="" су="" представљене="" као="" средње="" вредности="">
3. Резултати и дискусија
Десет смо претходно изоловалифенилпропаноидгликозиди[8], укључујући 2′-О-ацетилактеозид, 2′-О-ацетилполиумозид, 3-О-метилполиумозид, актеозид, унутрашњу арену, кренатозид, фелипозид, страну подијума, тубулозид А и видеманиозид Д, заједно са три Екстракти метле репице (Оробанцхе Цариопхиллацеае (ОЦ), Пхелипанцхе аре нариа (ПА) и П. рамоса (ПР)) су тренутно проучавани за ублажавањеоксидативностресаи антикоагулантна својства у систему људске плазме. Хемијске структуре тестираних фенилпропаноида су представљене на слици 1, и, као што се може видети, сви су изграђени по сличном обрасцу, са истим/сличним подјединицама: хидрокситирозол, моносахариди (глукоза, рамноза и/или ксилоза) и хидроксициметна киселина. Већина испитиваних ППГ једињења је замењена кафеинском киселином, али она може бити замењена или кумаринском или феруличном киселином.
Осим појединачних ППГ једињења, три екстракта брумрапе – ОЦ, ПА и ПР, који су мешавине неколико ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)и који су претходно служили као почетни материјал за изолацију једињења, такође су укључени у биолошку студију. Други разлог за одабир три различите врсте била је велика разлика у фитокемијском профилу међу њима, као што се може видети на слици 2. Детаљније поређење ОЦ, ПА и ПР екстраката, укључујући квантитативне податке, представљено је у табели. 1. Актеозид је био главни састојак екстракта О. Цариопхиллацеае (690 мг/г), тенипосид и арена изнутра су доминирали код П. Аренариа (заједно 550 мг/г), док су полиумозид и његов ацетиловани дериват били најважнији метаболити у Екстракт П. рамоса (заједно 640 мг/г). Испитани екстракти су се разликовали и по укупном садржају фенилпропаноида, највећа количина је нађена у ОЦ (810 мг/г), нешто нижа у ПР (795 мг/г), а мања у ПА (685 мг/г). Штавише, вреди напоменути да је присуство ППГ-ова са другим деловима осим кофеоила, као што су кумароил или ферулоил, откривено само у екстракту П. рамоса, где су ова једињења чинила око једне шестине укупних ППГ-ова (око 120 мг/ г) (Табела 1).
Претходне студије антирадикалне активностифенилпропаноидгликозидиод Хеилманн ет ал. [19] и Једрејек и др. [8], укључујући око 30 различитих ППГ-ова(pхенилпропаноидгликозиди)као што су актеозид, изоактеозид и кренатозид, открили су његову снажну везу са структуром ацилних делова (фенолна киселина и тирозол). Генерално, модификација или супституција катехолног дела ацилне јединице је резултирала значајним смањењем активности уклањања реактивних врста кисеоника (РОС) и ДППХ радикала. У тренутној студији, антирадикални ин витро потенцијал три екстракта брумрапеа (ОЦ, ПА и ПР) испитан је помоћу АБТС и ДППХ тестова, а резултати су упоређени како једни са другима, тако и са активношћу појединачних фенилпропаноидних компоненти измерених у наша претходна студија [8]. Резултати су изражени као Тролок еквиваленти (ТЕ) и ИЦ50 вредности (Табела 2). Генерално, сва три екстракта су била добри чистачи и АБТС и ДППХ радикала, али су такође примећене разлике међу тестираним узорцима (процењени ТЕ је био у опсегу од 0.5–0,7; 1.0 је био еквивалент Тролок-у). Активност антирадикалног чишћења узорака била је у следећем редоследу: Тролок > ОЦ > ПА > ПР. Екстракт Оробанцхе Цариопхиллацеае (ИЦ50=155–275 µг/мЛ) имао је преко 20 процената већу активност од екстракта Пхелипанцхе рамоса (ИЦ50=200–320 µг/мЛ).
Пријављена највећа активност уклањања радикала екстракта ОЦ може се објаснити највишим ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)садржаја у овом узорку, као и на унос актеозида, његовог доминантног састојка, који је према претходним истраживањима [8,19] један од најјачих хватача слободних радикала међу метаболитима из ове групе (ТЕДППХ=0 .87; [4]). Међутим, с обзиром на међусобни однос антирадикалне активности и садржаја фенилпропаноида у екстрактима ОЦ, ПА и ПР, није пронађена једноставна корелација између ова два фактора (р < 0.5),="" што="" указује="" на="" значајан="" унос="" квалитативни="" профил.="" ово="" се="" углавном="" односи="" на="" екстракт="" п.="" рамоса,="" који="" упркос="" високом="" нивоу="">(pхенилпропаноидгликозиди)({{0}}.8 г/г) карактерисала је најнижа биолошка активност међу испитиваним узорцима (ТЕ ~ 0.5). Екстракт ПР, као што је горе поменуто, био је једини узорак који је поседовао фенилпропаноиде са кумаринском или ферулном киселином, супстанцама којима недостаје катехолна група Б-прстена, за које је пријављено да имају смањен антиоксидативни потенцијал. Четири ППГ једињења која имају модификовану кафеинску киселину, укључујући 3-О-метилполиумозид, рамозу А и видеманиозид Д, која смо претходно тестирали, имала су ТЕДППХ од око 0,3 [8]. Дакле, тренутни резултати су у складу са и потврђују налазе претходних антирадикалних ин витро експеримената на фенилпропаноидима.
Како Цхен ет ал. [20] описано је повезано са већом способношћу донирања Х-а или стабилизацијом радикала различитим функционалним групама смеше једињења. Идентификовано је неколико структурних елемената који повећавају директну антиоксидативну активност полифенола, посебно оних који су повезани са бројем и положајем хидроксилних група. Верује се да се активност уклањања слободних радикала повећава са повећањем броја –ОХ група. Међутим, положај ових група, у молекулу, има још већи утицај на испољену активност. Релативно стабилна потентна једињења су она која поседују 3,4-дихидрокси део у својим структурама, као и она која поседују више од две хидроксилне групе [21]. Хемијска структура антиоксидативне супстанце омогућава разумевање механизма реакције антиоксиданса. Лопез-Мунгуиа и др. [22] на основу прорачуна теорије функционалне густине (ДФТ) утврђено је да ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)антиоксидативни механизам се одвија кроз секвенцијални губитак протона пренос једног електрона (СПЛЕТ). Међутим, Ли и др. [23] покушавају да истраже механизме фенолних фенилпропаноидних антиоксиданата, закључили су да ППГ (актеозид, форзитозид Б и полиумозид) могу бити укључени у више путева за испољавање антиоксидативног дејства, што је појачало улогу остатака шећера.
Истраживања су показала да су антиоксиданси биљног порекла ефикасни модулатори хемостазе код кардиоваскуларних болести [24–26]. Различите биљке које се користе у традиционалној медицини садрже значајне нивое ППГ [27,28]. Поред тога, ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)познато је да имају низ биолошких активности, укључујући антиинфламаторна, антинефритичка и антихепатоксична својства [29–33].
У својој недавној студији, Једрејек ет ал. [8] описао је изолацију ППГ-ова(pхенилпропаноидгликозиди)од три пољске метлице и проценили њихову антиоксидативну активност ДППХ тестом. На основу тога, ова студија процењује да ли би десет одабраних ППГ изолованих из ових биљака могло да смањеоксидативностресау људској плазми третираној јаким биолошким оксидантом, тј. донором хидроксилних радикала Х2О2/Фе, и модулирају коагулациона својства плазме ин витро. Антиоксидативна својства десет изолованих ППГ су одређена према одабраним параметримаоксидативностреса: Ниво ТБАРС као маркер пероксидације липида, заједно са нивоима карбонил групе и тиол групе, као маркери оксидативног оштећења протеина.
И нивои пероксидације липида у плазми и нивои карбонилације протеина у плазми изазвани Х2О2/Фе су значајно смањени у присуству осам тестираних једињења, тј. актеозид, кренатозид, 2′-О-ацетилактеозид, фелипозид, арена унутра, тубулозид А, полиумозид и 3- О-метилполимуозид, у свим испитиваним концентрацијама (1, 5 и 50 µг/мЛ); међутим, ниједан ефекат није примећен за два од тестираних једињења, тј. 2′-О-ацетилполиумозид и видеманиозид Д, или било који од тестираних екстраката у било којој концентрацији (1, 5 и 50 µг/мЛ). Поред тога, није утврђено да ниједно од тестираних једињења или тестираних екстраката штити плазму од Х2О2/Фе – индуковане оксидације тиол групе у протеинима (слике 3–5). Међутим, тестирани екстракти могу бити извор једињења са различитим биолошким својствима.
Први пут резултати ове студије указују на то да је осам тестираних ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)демонстрирају антиоксидативни потенцијал у људској плазми у присуству егзогених реактивних врста кисеоника инхибирањем пероксидације липида и карбонилације протеина у плазми третираној са Х2О2/Фе. Поред тога, 2′-О-ацетилполиумозид и видеманиозид Д нису показали такав ефекат. Генерално, наши налази су у складу са претходним ин витро експериментима на ППГ. Хеилманн ет ал. [19] и Једрејек и др. [8] наводе корелацију између хемијске структуре ППГ и њихове активности. Антиоксидативна својства ППГ(pхенилпропаноидгликозиди)изгледа да су првенствено повезани са структуром њихових ацилних делова, тј. јединице фенолне киселине и фенилпропаноида, укључујући присуство и/или модификацију катехолног дела. На пример, откривено је да видеманиозид Д губи свој антиоксидативни потенцијал према плазми третираној са Х2О2/Фе након замене његовог дела кафеоила са ферулоилном.
Промене у процесу коагулације често су резултатоксидативностреса; ове промене могу да модулишу функције кардиоваскуларног система и могу довести до развоја кардиоваскуларних болести [1]. Од десет биљних једињења и три биљних екстракта тестираних у овој студији, тубулозид, страна подијума и 3-О-метилполиумозид и сви тестирани екстракти показали су да значајно продужавају тромбинско време при свим тестираним концентрацијама, тј. 1, 5 и 50 µг/мЛ (слика 6Б). Међутим, ниједан од ових екстраката, нити било које од тестираних једињења, није променио ПТ или АПТТ (Слике 6А и Ц).
Слика 6. Ефекти тестираних једињења (актеозид, кренатозид, 2′-О-ацетилактеозид, фелипозид, аренариозид, тубулозид А, полиумозид, 3-О-метилполиумозид, 2′-О-цетилполимуозид, виед) и биљке екстракти (екстракт П. аренариа - ПА, екстракт П. рамоса - ПР и екстракт О. цариопхиллацеа - ОЦ) (1–50 µг/мЛ) на одабраним хемостатским параметрима плазме: ПТ (А), ТТн (Б) и АПТТ (Ц). Подаци представљају средње вредности ± СЕМ шест независних експеримената.н* п < 0.05="" (у="" односу="" на="" контролу),="" нс="" –="" п=""> 0.05 (у односу на контролу).
Табела 3 упоређује ефекте ППГ (5 µг/мЛ) на биомаркереоксидативностресау плазми третираној са Х2О2/Фе и њихов утицај на коагулацију. Осам тестираних ППГ-ова(pхенилпропаноидгликозиди)показао антиоксидативни потенцијал само у третираној људској плазми; међутим, утврђено је да три тестирана ППГ-а поседују и антиоксидативна својства и антикоагулантни потенцијал. Занимљиво је да се резултати ДППХ теста нису поклапали са онима добијеним у биолошком моделу коришћењем људске плазме третиране са Х2О2/Фе: антиоксидативни потенцијал тестираних екстраката може бити блокиран одређеним једињењима присутним у плазми.
У закључку, наши садашњи налази бацају ново светло на антиоксидативни потенцијал и антикоагулантна својства ППГ-а(pхенилпропаноидгликозиди). Чини се да је структура ППГ(pхенилпропаноидгликозиди), посебно присуство ацилних и катехолних делова, углавном је повезано са њиховим антиоксидативним и антикоагулансним својствима. Одабрани ППГ могу имати потенцијал за лечење кардиоваскуларних болести повезаних саоксидативностреса. Међутим, потребни су даљи експерименти да би се одредиле концентрације ових једињења потребних за ин виво моделе.
Изјава о сукобу интереса
Аутори изјављују да немају познатих супротстављених финансијских интереса или личних односа који би могли утицати на рад приказан у овом раду.
Референце
[1] А. Даибер, С. Цхлопицки, Ревиситинг пхармацологи офоксидативностресаи ендотелна дисфункција код кардиоваскуларних болести: докази за терапије засноване на редокс-у, Фрее Радиц. Биол. Мед. 157 (2020) 15–37.
[2] Ј.-Ј. Сауваин, А. Сетиан, П. Вилд, П. Таццхини, Г. Лаггер, Ф. Сторти, С. Десларзес, МЈ Гуиллемин, М. Росси, М. Риедикер, Биомаркерс офоксидативностресаи његова повезаност са капацитетом смањења мокраће код радника на одржавању аутобуса, Ј. Оццупат. Мед. Токицол. 6 (2011) 18–23.
[3] П. Новак, Б. Олас, Б. Вацховицз,Оксидативностресаи хемостаза, Пост. Биоцхем. 56 (2010) 239–247.
[4] М. Мартинез-Уеламо, Ј. Родригуез-Морато, А. Боронат, Р. де ла Торре, Модулација Нрф2 полифенолима маслиновог уља и вина и неуропротекција, Антиоксиданси 6 (2017) 73.
[5] С. Амор, П. Цхалонс, В. Аирес, Д. Делмас, Екстракти полифенола из црног вина и винове лозе: потенцијални ефекти на рак, Болести 6 (2018) 1–12.
[6] З. Ли, Х. Лин, Л. Гу, Ј. Гао, ЦМ Тзенг, Херба Цистанцхе (Роу Цонг-Ронг): један од најбољих фармацеутских дарова традиционалне кинеске медицине, Фронт. Пхармацол. 7 (2016) 41–49.
[7] И. Јианг, П.-Ф. Ту, Преглед: анализа хемијских састојака у врстама Цистанцхе, Ј. Цхроматогр. 1216 (2009) 1970–1979.
[8] Д. Једрејек, С. Павелец, Р. Пивоварцзик, Л. Прецио, А. Стоцхмал, Идентификација и појава фенилетаноидних и иридоидних гликозида у шест пољских огрлица (Оробанцхе спп. и Пхелипанцхе спп., Оробанцхацеае), Пхитоцхемис 2020), 112189.
[9] Б. Контек, Д. Једрејек, В. Олесзек, Б. Олас, Антирадикална и антиоксидативна активност ин витро екстраката добијених од хмеља богатих горким киселинама и ксантохумолом, Инд. Цропс Прод. 161 (2021) 1–9.
[10] В. Бранд-Виллиамс, МЕ Цувелиер, Ц. Берсет, Употреба методе слободних радикала за процену антиоксидативне активности, Лебенсм. Висс. Тецхнол. 28 (1995) 25–30.
[11] ЈР Вхитакер, ПЕ Гранум, Апсолутна метода за одређивање протеина заснована на разлици у апсорпцији на 235 и 280 нм, Анал. Биоцхем. 109 (1980) 156–159.
[12] Б. Вацховицз, Аденински нуклеотиди у тромбоцитима птица, Целл Биоцхем. Фунцт. 2 (1984) 167–170.
[13] Г. Бартош, Друга тварз тлену, Варсз. ПВН 1 (2008) 7.
[14] РЛ Левине, Д. Гарланд, ЦН Оливер, А. Амици, И. Цлимент, АГ Ленз, БВ Аху, С. Схалтиер, ЕР Стадтман, Одређивање садржаја карбонила у оксидативно модификованим протеинима, Метходс Ензим. 186 (1990) 464–478.
[15] ДМ Јоел, Ј. Грессел, Љ (Уредници), Мусселман, Параситиц Оробанцхацеае: Параситиц Мецханисмс анд Цонтрол Стратегиес, Спрингер, Хеиделберг, Немачка, 2013, стр. 1–10.
[16] И. Андо, М. Стеинер, Сулпхидрил и дисулфидне групе тромбоцитних мембрана: одређивање дисулфидних група, Биоцхим. Биопхис. Ацта 311 (1973) 26–37.
[17] И. Андо, М. Стеинер, Сулпхидрил и дисулфидне групе тромбоцитних мембрана: одређивање сулфхидрилних група, Биоцхим. Биопхис. Ацта 311 (1973) 38–44.
[18] Ј. Малиновска, Ј. Коłодзиејцзик-Цзепас, М. Мониусзко-Сзајвај, И. Ковалска, В. Олесзек, А. Стоцхмал, Б. Олас, Фенолне фракције из Трифолиум паллидум и Трифолиум сцабрум надземних делова штите од људске плазме промене изазване хиперхомоцистеинемијом, Фоод Цхем. Токицол. 50 (2012) 4023–4027.
[19] Ј. Хеилманн, И. Цалис, Х. Кирмизибекмез, В. Сцхухли, С. Харпут, О. Стихер, Радицал сцавенгер ацтивити оффенилпропаноидгликозидиу ФМЛП стимулисаним полиморфонуклеарним леукоцитима: односи структуре и активности, Планта Мед. 66 (2000) 746–748.
[20] Х. Цхен, И. Зхоу, И. Схао, Ф. Цхен, Слободне фенолне киселине у сирћету у Сханки старом: промене током старења и синергистичке антиоксидативне активности, Инт. Ј. Фоод Проп. 19 (2015) 1183–1193.
[21] ЦА Рице-Еванс, Њ Миллер, Г. Паганга, Односи између структуре и антиоксидативне активности флавоноида и фенолних киселина, Слободни радикал. Биол. Мед. 20 (1996) 933–956.
[22] А. Лопез-Мунгуиа, ´ И. Хернандез-Ромеро, ´ Ј. Педраза-Цхаверри, ´ Ј. Педраза-Цхаверри, А. МирандаМолина, И. Регла, А. Мартинез, Е. Цастилло, аналози фенилпропаноидних гликозида: ензимска синтеза, антиоксидативна активност и теоријска студија њиховог механизма уклањања слободних радикала, ПлоС Оне 6 (2011) 20115.
[23] Кс. Ли, И. Ксие, К. Ли, А. Ву, Х. Ксие, К. Гуо, П. Ксуе, И. Малесхибек, В. Зхао, Ј. Гуо, Д. Цхен, Антиоксидација и цитопротекција актеозида и његових деривата: поређење и механичка хемија, Молекули 23 (2018) 498.
[24] СЕ Куллинг, ХМ Равел, Цхокеберри (Арониа меланоцарпа) – преглед карактеристичних компоненти и потенцијалних ефеката на здравље, Планта Мед. 74 (2008) 1625–1634.
[25] БЈ Мц Евен, Утицај исхране и хранљивих материја на функцију тромбоцита, Семин. Тхромб. Хемост. 40 (2008) 214–226.
[26] Б. Олас, Мултифункционалност бобица према крвним плочицама и улога фенола бобица у кардиоваскуларним поремећајима, Тромбоцити 5 (2016) 1–10.
[27] УБ Исмаилоглу, И. Сарацоглу, УС Харпут, И. Сахин-Ередемли, Ефекти фенилпропаноидних и иридоидних гликозида на оштећење ендотелијум-зависне релаксације у прстеновима аорте пацова изазвано слободним радикалима, Ј. Етхнопхармацол. 79 (2002) 193–197.
[28] ЗФ Баи, И. Лиу, КСК Ванг, Истраживање етничких лековитих биљака Оробанцхе, Цистанцхе и Босцхниакиа, Зхонггуо Зхонг Иао Зхи 93 (2014) 4548–4552.
[29] К. Хаиасхи, Т. Нагаматсу, М. Ито, Х. Иагита, И. Сузуки, Ацтеосиде, компонента Стацхис сиеболдии МИК, може бити обећавајуће антинефритично средство (3): ефекат ацетонида на експресију на међућелијском адхезиони молекул-1 у експерименталним нефритичним гломерулима код пацова и култивисаним ендотелним ћелијама, Јпн. Ј. Пхармацол. 70 (1996) 157–168.
[30] К. Ксионг, К. Хасе, И. Тезука, Т. Тани, Т. Намба, С. Кадота, Хепатопротективна активност фенилпропаноида из Цистанцхе десертицола, Планта Мед. 64 (1998) 120–125.
[31] ВФ Цхиоу, ЛЦ Лин, ЦФ Цхен, Ацтеосиде штити ендотелне ћелије од слободних радикала изазванихоксидативностреса, Ј. Пхарм. Пхарм. 56 (2004) 743–748.
[32] С. Сахпаз, Н. Гарбацки, М. Титс, Ф. Баиллеул, Изолација и фармаколошка активност фенилпропаноидних естара из Маррубиум вулгаре, Ј. Етхнопхармацол. 79 (2002) 389–392.
[33] Л. Лие-Цхвен, В. Иеа-Хвеи, Х. Иу-Цханг, Цх Схиоу, Л. Куо-Тонг, Цх Иуех-Цхинг, В. Вен-Иен, С. Иох-Цхианг, Инхибицијски ефекат оффенилпропаноидгликозидии иридоидни глукозиди на производњу слободних радикала и експресију 2 интегрина у људским леукоцитима, Ј. Пхарм. Пхармацол. 58 (2006) 129–135.
