Истраживање Цистанцхе полисахарида који уклањају слободне радикале

За више информација:ali.ma@wecistanche.com

Ванг Гуовеј Жао Фанг

(Школа за хемију и хемијско инжењерство, Универзитет Схихези, Беиси Роад, Схихези Цити, Ксињианг 832000)

Кључне речи: Цистанцхе; Цистанцхе полисахарид,полисахаридафром цистанцхе; слободни радикал

У процесу оксидативног метаболизма животних активности тело континуирано производи различите реактивне радикале кисеоника (РОС), који су интермедијарни производи настали редокс реакцијом аеробног метаболизма људског тела. Студије су откриле тај вишакслободни радикалиће напасти животне макромолекуларне супстанце и различите органеле, узрокујући различита оштећења тела на нивоу молекуларних, ћелијских и ткивних органа, убрзавајући процес старења тела и изазивајући стварање крвних угрушака, дијабетес и атеросклерозу. , Тумори и друге болести [1]. Како су хемијски синтетисани антиоксиданси токсични за људско тело, потрага за природним антиоксидансима високе ефикасности и ниске токсичности који могу да уклоне слободне радикале кисеоника је последњих година постала врућа тачка у области медицине, хране и хемијског инжењерства.

Цистанцхе [Цистанцхе десертицола (ИЦ Ма.)]углавном паразитира на коренима Тамариск, Нитрариа и Халокилон аммодендрона. То је ретка кинеска медицина у мојој земљи и позната је као"пустињски гинсенг"[2]. Цистанцхе цистанцхе полисахарид је једна од главних биолошки функционално активних компонентицистанцхе, али није саопштено да ли јецистанцхе полисахарид има ефекат уклањања слободних радикала. У овом раду је за одређивање коришћена метода спектралне анализеефекат чишћења полисахарида Цистанцхе на слободне радикале супероксида ањона, слободне хидроксил радикале, Д ППХ радикале и синглет слободне радикале кисеоника, као ида процени његову антиоксидативну активност. Искористите у потпуности овај природни ресурс да бисте обезбедили научну основу.

Кликните на стабљику Цистанцхе за слободне радикале

Ово истраживање проучаваЦистанцхе полисаццхаридеин витроантиоксидансактивност. Узимајући аскорбинску киселину као контролу, реакција слична Фентону производи хидроксил слободне радикале, аутооксидација допамина производи супероксид ањонслободни радикали, реакција натријум хипохлорита и водоник пероксида за производњу синглетног кисеоника, радикала дифенил горког хидразина као експерименталног модела, користећи ултраљубичасту 2Видљиву спектрофотометрију и метод анализе хемилуминисценције, по први пут да би се одредио ефекат чишћењаЦистанцхе полисахаридае на слободне радикале супероксид ањона, хидроксил слободни радикали, Д ППХ ·слободни радикали(дифенил хидразино радикали) и синглет кисеоник.Резултати су показали да полисахариди Цистанцхеа имају очигледне ефекте уклањања наведених слободних радикала, а ефекти чишћења су у позитивној корелацији са концентрацијом полисахарида.

Апарати и реагенси: УВ 22401 ултраљубичасти-видљиви спектрофотометар (Схимадзу Цорпоратион, Јапан); Лум ат ЛБ9507 ултра-осетљиви цевни луминометар (Бертхолд Тецхнологиес, ​​Немачка); Р Е252ЦС ротациони испаривач (Схангхаи Иаронг Биоцхемицал Цо., Лтд.) Фабрика инструмената); ХВ 2СИ електронски лонац воденог купатила са константном температуром (Фабрика инструмената Јинтан Ксинханг); пХ С23Ц мерач киселости (Схангхаи Прецисион Сциентифиц Инструмент Цо., Лтд.); Д ЗФ26020 пећница за вакуумско сушење (Схангхаи Иихенг Тецхнологи Цо., Лтд.).

Екстракт Цистанцхеје купљен од Куитун Медицинал Материалс Цорпоратион. Луминол (Луминол, Сигма, САД), допамин (Кинески национални институт за контролу фармацеутских и биолошких производа), ФеСО 4, ЕД ТА, витамин Ц, Х 2О 2, НаЦлО, На2ЦО 3, НаХЦО 3 итд. домаћи аналитички реагенс. Експериментална вода је дестилована вода са јонском изменом.

Тхеeктрацтион метход офЦистанцхе полисаццхаридес: Узмите 30 гцистанцхе прахи ставите је у ерленмајерску тиквицу од 500мЛ и потопите у петролетер (60-90 степен), етар и запремински удео од 80 процената врућег раствора етанола (30 степени) током 6 сати, а остатак ће се испарити до сува. . Остатак филтера је натопљен у води у односу чврста материја-течност од 1:10 током 24 сата, и загреван на 30 степени да би се екстраховао 100 мин. Након што је екстракција завршена, супернатант је добијен центрифугирањем. Супернатант је концентрован под сниженим притиском, а затим преципитиран додавањем 3 пута запремине 95 процената етанола, стајањем 24 сата на 4 степена, сакупљањем талога након центрифугирања и сушењем у вакууму да би се добио сирови полисахарид Цистанцхе цистанцхе. Измерити 1.00 г сировог полисахарида, растворити га у води и разблажити у волуметријској тиквици од 50 мЛ и оставити за испитивање.

Тест оф цистанцхе полисахарид на супероксид слободни радикал (O) способност чишћења: употреба аутооксидације допамина за производњу супероксида за тестирање слободних радикалацистанцхе полисахарид на уклањање слободних радикала супероксидаспособност [3]. Додајте 0.1мм олоЛ пХ=10.12 у суву и градуисану епрувету у низу, 3.0мЛ карбонатног пуфера, 3.0мЛ воде, и 0.5 мЛ раствора узорка полисахарида различитих концентрација и ставите га у водено купатило од 30 степена ради претходног загревања 5 минута. Додајте 1.0мЛ од 2.0мм олоЛ допамина загрејаног у воденом купатилу на 30 степена, одмах промешајте, држите реакцију на 30 степени 5 минута и одмах зауставити реакцију са 2 капи 10 молол ХЦл. Користите пуфер као референцу, измерите апсорбанцију на 221 нм (узорак А), група слепог узорка замењује узорак са 0,5 мЛ воде (А слепа слика), а контролна група замењује узорак са 0,5 мЛ аскорбинске киселине. Сваки узорак се тестира паралелно 3 пута и узима своју просечну вредност. О брзина уклањања супероксидних радикала (проценти)=(А бланк-А узорак) оА бланк × 100 процената.

Експериментишите са способношћу чишћења полисахарида Цистанцхе на ·ОХ слободним радикалима

Систем ЕДТА 2Фе (Е) 2 метилен плаво 2Х 2О 2 коришћен је за испитивање способностиЦистанцхе полисаццхаридеда уклони хидроксил слободне радикале. Принцип је да реакција слична Фетону између ЕД ТА 2Фе(Е) и водоник пероксида производи ·ОХ радикале, што смањује карактеристичан апсорпциони пик раствора метилен плавог на 660нм. У серију епрувета од 10мЛ са чеповима додајте 5мм оЛоЛ ФеСО 4 раствор 1.{{20}}мЛ, 5мм оЛоЛ ЕДТА раствор 1,2мЛ, 0.{101} {29}}3мол Н аХ 2 ПО 4 2Н а2Х ПО 4 (пХ=7.4) пуферски раствор 2,0 мЛ, 20 мм олоЛ раствор водоник пероксида 1,3 мЛ, након протресања додати 0,2 мм олоЛ метилена плави раствор 0,7мЛ, а затим додајте различите концентрације тест раствора, витамин Ц 1,0мЛ и разблажите водом до 10. 00мЛ, након мешања, инкубирајте на 37 степени 30 минута, измерите апсорбанцију сваког раствора на 660 нм, и заменити раствор узорка водом у слепој групи. Сваки узорак је тестиран 3 пута паралелно и узета је просечна вредност. Стопа уклањања ОХ радикала узорка ( проценат )=[(А 2-А 1) о(А 0-А 1) × 100 процената. У формули: А 0 - вредност апсорпције неоштећене цеви; А 1 - вредност апсорпције оштећене цеви; Вредност апсорпције 2 - након додавања узорка.

Експериментирајте са способношћу чишћења полисахарида Цистанцхе на слободним радикалима Д ППХ

Узмите {{0}}.1 мЛ раствора полисахарида Цистанцхе десертицола и додајте га у 5.0 мЛ раствора Д ППХ ·, брзо промешајте и након стајања 10 минута на собној температури, мерена је промена апсорпције на таласној дужини од 517 нм [4]. Сваки узорак је тестиран 3 пута паралелно и узета је просечна вредност. Стопа чишћења узорка од Д ППХ · ( проценат )=1- [(АБ) оА 0] × 100 процената.

У формули: А 0 - вредност апсорпције Д ППХ без додавања узорка (1,9 мЛ Д ППХ плус 0, 1 мЛ 50 процената етанола); А - вредност апсорпције након реакције између узорка и Д ППХ; Б - бланк Вредност апсорпције узорка (узорак 0.1мЛ плус 1.9мЛ 50% етанола).

Тест хватања синглетног кисеоника 1О 2 полисахарида Цистанцхе

Синглетни кисеоник (1О 2) настаје хемијском реакцијом између НаЦлО и Х 2О 2 на 37 степени [5]. Раствор који се користи за одређивање 1О 2 је 100Л 2. 8мм олоЛ раствора НаЦлО, 400Л 5мм олоЛ раствора НаОХ, 300Л 10мм олоЛ Х 2О2 раствора, 50Л 1мм олоЛ раствора Луминола. Током реакције, реакциони раствор се додаје раствору узорка, а хемилуминисцентни анализатор аутоматски бележи процес реакције у исто време. Узмите НаЦлО 2Х 2О 2 2Н НаОХ 2 Луминол као празну контролу. Започните реакцију и додајте реакциони раствор из резервоара хемилуминисцентног инструмента у епрувету за узорке према количини која је подешена програмом. Након тога, интензитет хемилуминисценције реакционе смеше је забележен на папиру за снимање сваких 5с, а сваки узорак је мерен паралелно 3 пута и узета је просечна вредност. Стопа клиренса се израчунава према следећој формули: стопа клиренса ( проценат )=(контролни интензитет светлости-светлосни интензитет узорка) о контролни интензитет светлости × 100 процената 3.

Ефекат чишћења цистанцхе полисахарида на слободне супероксидне радикале

Хемијска природа супероксидних слободних радикала је активна, што може проузроковати да масне киселине на биофилму производе пероксиде, који заузврат уништавају ћелије [6]. У овом раду је коришћена метода допамина за одређивање способности уклањања супероксидних слободних радикала. Погледајте слику 1 заспособност чишћења Цистанцхеа од слободних супероксидних радикала.Резултати су показали да:Цистанцхе полисахариди могу инхибирати стварање слободних радикала супероксидааутооксидацијом допамина, и унутар измереног опсега концентрације (0-8м гомЛ), повећава се са повећањем концентрације, али је способност чишћења нижа од способности аскорбинске киселине.

Ефекат чишћења слободних радикала полисахарида цистанхе ОХ супероксида

ОХ супероксидни радикал је један од најактивнијих слободних радикала кисеоника у активном кисеонику. Може да реагује са готово било којим биолошким макромолекулом у живим ћелијама, што може довести до липидне пероксидације телесних ткива, полимеризације и деполимеризације протеина, фрагментације нуклеинске киселине итд. Биохемијски процес покреће патологију ћелија ткива, што доводи до појаве различитих болести и убрзање старења организма [7]. Слика 2 показује способност чишћења цистанцхе полисахарида на ОХ супероксидне слободне радикале. Експериментални резултати то показујуполисахарид Цистанцхеа има добар ефекат чишћења на ·ОХслободни радикали,а повећава се са повећањем концентрације.

Способност чишћења полисахарида Цистанцхе цистанцхе на слободним радикалима Д ППХ

Д ППХ радикал (дифенил-горки хидразино радикал) је стабилан слободни радикал, који је љубичасти у органским растварачима и има јаку апсорпцију близу 517 нм. Након додавања антиоксиданата, део слободних радикала ће бити елиминисан и апсорпција ће бити ослабљена, што се може користити за процену антиоксидативне активности супстанце [8]. Способност чишћења полисахарида Цистанцхе на слободне радикале Д ППХ приказана је на слици 3. Експериментални резултати показују да је способност чишћења полисахарида Цистанцхе десертицола на Д ППХ слободне радикале у позитивној корелацији са његовом концентрацијом, а способност уклањања је већа од способности аскорбинска киселина.

Способност чишћења цистанх полисахарида на 1О 2 слободне радикале

Синглетни кисеоник је побуђени молекуларни кисеоник са активним хемијским својствима. Пошто неспарени електрони имају тенденцију упаривања, слободни радикали показују активнија хемијска својства [9]. Слика 4 показује способност чишћења полисахарида Цистанцхе десертицола на 1О 2 слободне радикале. Експериментални резултати показују да је способностЦистанцхе полисаццхаридесза уклањање синглетног кисеоника је нижа од оне аскорбинске киселине у опсегу од {{0}}.0м гомЛ. Када је концентрација већа од 4,0 м гмЛ, способност уклањања Цистанцхе цистанцхе полисахарида је већа од оне аскорбинске киселине.

Закључно: Кроз различите реактивне системе без радикала, ин витро, детаљно је проучавана антиоксидативна активност Цистанцхе полисахарида. Из експерименталних резултата се може видети да у опсегу тестираних концентрација екстракт полисахарида Цистанцхе има ефекте уклањања супероксидних слободних радикала О, ОХ супероксидних слободних радикала, Д ППХ слободних радикала и 1 О 2 слободних радикала. Ефекти нису исти. Резултати су показали да је полисахарид Цистанцхе ефикасан егзогени природни антиоксиданс, који је вредан даљег истраживања, развоја и свеобухватне употребе.

референце

[1] Линг Гуантинг. Антиоксидативна храна и здравље [М]. Пекинг: Цхемицал Индустри Пресс, 2004. 1-58.

[2] Гао Минг, Тиан Зииу, Цаи Хонгмеи, итд. Алкална екстракција и хемијска анализа полисахарида Цистанцхе десертицола [Ј]. Пољопривредна прехрамбена наука и технологија, 2008, 2 (3): 32-34.

[3] Схи Схуангкун, Сонг Ксинфанг. Аутооксидација допамина [Ј]. Јоурнал оф Хебеи Нормал Университи, 1997, 21(4): 387-389.

[4] Зханг Зхикинг, Тиан Јингјуан, Зханг Јинг. Студија о антиоксидативној активности радикс полисахарида [Ј]. Цхинесе Материа Медица, 2008, 31(2): 268-271.

[5] Ли Хаипинг, Џанг Шухај, Џанг Чуншен. Студија о антиоксидативној активности полисахарида из Плеуротус остреатус [Ј]. Истраживање и развој хране, 2008, 29(4): 56-60.

[6] Мо Јиан. Увод у биологију медицинских слободних радикала [М]. Пекинг: Народна медицинска издавачка кућа, 1989. 21-25.

[7] Ф Фредерик В Л. Слободни радикали [Ј]. Клиничка хемија, 1993, 65 (12): 374—377.

[8] М ат суда М, Н агахам а И, Сато Т и др. ДМ И је специфичан ген ДМ домена неопходан за развој мужјака у риби Медака [Ј]. Натуре, 2002, 30: 559—563.

[9] Канофски Ј Р. Синглетна производња кисеоника помоћу Л актопероксидазе[Ј]. Јоурнал оф Биологицал Цхемистри, 1983, 258 (10): 5991—5993.