Хемијски састојци листова Цистанцхе

Апстракт: ЦистанцхеЛистови се дуго користе као традиционална медициналечењеисхемијски мождани удар, ангина, ихипертензијаи као здрав напитак икозметика запротив старења. Ова студија је имала за циљ да изолује што више једињења из екстракта етанолалистова персимона за идентификацију биолошки активних једињења. Антиоксидативни ефекатслоја етил ацетата из етанолног екстракта листова персимона демонстрирано је помоћу2,2-дифенил-1-пикрилхидразил (ДППХ) тест и онлајн течна хроматографија високих перформанси-2,20 -казино-бис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонска киселина) (ХПЛЦ-АБТС) анализа. Нови флавоноид,кемферол{0}}O- -D-2"-кумароилгалактозид (1), и ново природно једињење, кемпферол-3-O- -D-2"-ферулоилглукозид (3) су изоловани из слоја етил ацетата, заједно са 25 претходнопозната једињења, укључујућичетрнаест флавоноида, један јонон, два кумарина, седам тритерпеноида,и један ацетофенон. Интерпретацијом спектрометријских и спектроскопских података утврђена је њихова структура. Сва изолована једињења су брзо процењена коришћењем онлајнХПЛЦ-АБТСесеј, а од ових једињења4–8, 11, 13, 15, и16 јасно показаоантиоксидативни ефекти. Тхеколичина ових једињења је била {{0}}.3–0,65 процената екстракта.

Кључне речи:Диоспирос каки; листови персимона; флавоноид; антиоксиданс

Кликните овде да бисте Цистанцхе обогатили флавоноидима за козметичко средство против старења

1. Представљање

Диоспирос какиТхунб. (персиммон) припада породици Ебенацеае и широко је распрострањендистрибуиран у Кореји, Кини и Јапану. Њени плодови се једу свеже или суве, док листови имајудуго се користи као традиционална медицина за лечење исхемијског можданог удара, ангине, хипертензије,атеросклероза и заразне болести [1]. Штавише, искоришћени су његови листовикао здрава пића и козметика због својих својстава против старења и способности дапомаже у спречавању акумулације холестерола и меланина [1]. Недавно истраживање је сугерисалода екстракти листова персимона поседују широк спектар биолошких својстава,укључујући уклањање радикала, неуропротекцију, инхибицију тромбозе, анти-атеросклерозу,и против алергија [2–6]. Претходно фитокемијско истраживање сугерисало је да различитаврстефлавоноидиа терпеноиди су главни састојци [7], и неколико танина,такође су пријављени нафтокинони, кумарини, јонони и масне киселине [8–12]. Реактивне врсте кисеоника (РОС) су реактивни молекули произведени у биолошким системима,а равнотежа између стварања и елиминације РОС-а је добро контролисана у нормалном стањућелијска физиологија [13]. Међутим, прекомерно стварање РОС изазива оксидативна оштећења,и заузврат, старење и болести повезане са старењем, укључујући рак, дијабетес и Паркинсонову болестболест [14]. Дакле, откривање антиоксиданата као што су флавоноиди и фенолна једињењаможе бити обећавајућа стратегија за лечење ових болести.

Као део нашег континуираног пројекта проналажења биолошки активних једињења [15], тхеантиоксидативно дејство екстракта етанола (ЕтОХ) и преграда растварача из персимоналистови су процењени коришћењем 2,2-дифенил-1-пикрилхидразил (ДППХ) теста и онлајн високих перформанситечна хроматографија-2,20 -казино-бис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонска киселина)(ХПЛЦ-АБТС) анализа. Фитокемијска студија на листовима персимона довела је до изолацијеједног новог флавоноида (1), једно ново природно једињење (3), и25 ранијепозната једињења. Структуре су карактерисале примена спектроскопских и спектрометријских метода. Сва изолована једињења су брзо тестирана на њиховуантиоксидативни ефекти коришћењем онлајн ХПЛЦ-АБТС. Надаље, квантитативна анализасва изолована једињења су спроведена у овој студији.

2. Резултати и дискусија

2.1. Антиоксидативни ефекат листова персимона

Процењено је антиоксидативно дејство етанолног (ЕтОХ) екстракта листова персимоназа прелиминарни скрининг преко ДППХ (Слика1А). 0.125 мг/мЛекстракт је уклонио приближно 80 процената ДППХ радикала, док је 0,025 мг/мЛ аскорбинакиселина је чинила 94 посто радикала. Онлине ХПЛЦ-АБТС тест је изведен брзообезбедити поузданост ових резултата (Слика1Д). Као интерно коришћени су гална киселина и тролоксстандарди. Хроматограм на 734 нм (негативни пик) сугерише да је приближнодевет састојака би могло имати антиоксидативно дејство. гална киселина и тролокс (6-хидрокси- 2,5,7,8-тетраметил хроман-2-карбоксилна киселинаацид) коришћени су као интерни стандарди за обезбеђивањепоузданост резултата. Закључено је да су већина ових пикова били деривати флфлавоноидакао што су флавоноидни гликозид и флаванол, на основу извршене анализе дерепликацијепоређењем ултраљубичастог (УВ) и масеног спектра једињења са објављенимподатака. Фракционисање вођено биолошким тестом сугерише да су ова антиоксидативна једињењау изобиљу у слоју етил ацетата (ЕтОАц), док вода (Х2О) слој је показао слабактивност (слика1B,C). 

Слика 1. Ефекти уклањања ДППХ екстракта ЕтОХ (А), ЕтОАц слоја (Б) и ХО слоја (Ц) ХхО слоја листова персимона: (Д) онлајн АБТС-ХПЛЦ хроматограм ЕтОХ екстракта.

2.2. Пхитоцхемицал Инвестигатион

За идентификацију ових антиоксидативних једињења, различити хроматографски и спектроскопскиспроведене су методе за изолацију и структурну карактеризацијуједињења. Нови флавоноид (1) и ново природно једињење (3) су добијени одетилацетатни слој екстракта етанола, заједно са 25 раније пријављених једињења,наиме кемпферол-3-O- -2"-кумароилглукозид (2) [16], ( плус )-катехин (4) [17], хиперозид(5) [17], изокверцитрин (6) [18], кверцетин-3-O- -2"-галоилгалактозид (7) [19], кверцетин-3-O- -2"-галоилглукозид (8) [20], трифолин (9) [18], астрагалин (10) [18], кемпферол-3-O- - 2"-галоилгалактозид (11) [21], кемпферол-3-O- -арабинозид (12) [22], кемпферол-3-O- - 2"-галоилглукозид (13) [23], кверцетин-3-O- -2"-кумароилглукозид (14) [24], кверцетин(15) [15], кемпферол (16) [25], (6S,9S)-розеозид (17) [26], скополетин (18) [27], умбеллиферон(19) [28], 1-(2,4-дихидрокси-6-метилфенил)етанон (20) [29], барбинервинска киселина (21) [30], диоспирична киселина Б (22) [7], ротунгенска киселина (23) [31], помолна киселина (24) [32], сијарезинолна киселина(25) [33], олеанолна киселина (26) [25], и урсолна киселина (27) [25] коришћењем спектроскопских испектрометријских и физичких података у поређењу са објављеним подацима и такође са танкиманализа слојне хроматографије (ТЛЦ) (слике2 и3). Међу њима, једињења2, 16, 17, 19, 20, и24 прво су били изоловани одД. каки. 

Једињење 1 је добијено као жути прах, у коме је молекулска формула утврђена као Ц3олО3 на основу података масене спектрометрије високе резолуције (ХРМС). Спектар је показао апсорпционе траке на 207 и 315 нм, што указује да једињење 1 има флавонолну кичму. Подаци 'Х нуклеарне магнетне резонанце (НМР) (Табела 1, Слика С1) показали су типичан образац кумароилираног флавонол гликозида, показујући два сета сигнала типа АА'ББ' ({{10}}.{11 }} (2Х, д, Ј= 8.5 Хз, Х-2' и Х-6),6,87 (2Х, д, Ј{{20}} .5 ХзХ-3' и Х-5')) у Б прстену кемпферола као и сигнали (0 7.45 (2Х, д, Ј=8. 5 ХзХ-2 и Х{{3{{104}}}}"), 6,81 (2Х, д, Ј=8,5 Хз, Х-3 и Х-5 процената) у ароматичном прстену кумароил групе Два дублет сигнала (8Х 7,65 (1Х, д, Ј=15.5 Хз, Х-7") и 6,35 (1Хд, Ј=16.0 Хз, Х-8") су уочени, што указује на транс-олефинске протоне групе земаља. Поред тога, аномерни протонски сигнал (0Х 5,57 (1Х, д, Ј=8.0 Хз, Х-1) уочено је у региону шећера, што сугерише присуство цикличне групе шећера конфигурисане Б. Побољшање 13Ц и без изобличења путем поларизационог преноса НМР података (Иабле 1Слика С2) је показала 30 резонанција које се састоје од два транс-олефинска угљеника, десет ароматичних угљеника и шест угљеника глукозилног дела и десет не-протонираних угљеника укључујући два карбонилна угљеника. Конкретно, хемијски помаци на Ц-2, Ц-3 и Ц-4 (8ц 158.1, 134.9 и 179.2) били су карактеристични сигнали флавонол3-0-гликозида. Поред тога, сигнал карбонилног угљеника на Ц-1" (8ц 168.7) и два транс-олефинска сигнала угљеника на Ц-2'" и Ц-3"(6 146.9 , 115.2) били су типични хемијски помаци кумароил групе. Аномерни сигнал угљеника на Ц-1(6Ц 100.4) и други сигнали за гликозилни део од Ц-2" до Ц-6" ' (6ц74.3, 73.4, 70.5, 77.4 и 62.0). Ови једнодимензионални (1Д) НМР подаци су се преклапали са онима за кемпферол-3-0-Б-2"-кумароилглукозид (2) (16). Међутим, пажљиво поређење 13Ц НМР података између два једињења сугерише да једињење 1 има део галактозе, што је даље демонстрирано НМР подацима нуклеарне Оверхаусерове спектроскопије (НОЕСИ) (Слика С6). Док НОЕС корелација између Х-2 и Х-4 је примећен у једињењу 2, није било корелације између ових протона у једињењу 1. Генерално, тумачење 13Ц НМР и НОЕСИНМР података је ефикасан метод за одређивање типа гликозилног дела Закључено је да је локација галактозног дела на Ц-3 према померању на ниже поље Ц-2и Ц-4, што даље доказује корелација хетеронуклеарних вишеструких веза (ХМБЦ између Х{ {123}}" и Ц-3 (Слика С5). Показано је да је позиција кумароил групе на Ц-2" на основу померања на ниже поље (0 5.36 (1Х, дд, Ј=10.0, 8.0 Хз, Х{ {134}}")) и ХМБЦ корелацију између Х-2' и Ц-1. Као резултат тога, структура једињења 1 је одређена као кемпферол-3-0-Б-2"-кумароилгалактозид. Иако је једињење 2 раније изоловано из различитих извора, укључујући Оуерцус субер (16] и Аллиумпоррум (34), једињење 1 је по први пут изоловано и структурно окарактерисано.

Цомпоунд3 је изолован као жути прах, а молекулска формула је успостављенакао Ц31H28O14 анализом података ХРМС. УВ спектар је показао УВапсорпција на 210 и 327 нм због истог агликона са једињењима1 и2. Тхе1H НМР подаци (табела1, Слика С10) били су слични онима једињења2, али сложено3 имао ферулоил групу уместо кумароил групе, о чему сведочи присуство андодатна метокси група (δH 3.91 (3H, s, 3000 -ОЦХ3)). Додатно, аномерни протонсигнал (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Хз, Х-100 )), што указује да је гликозилна везабила-конфигурација, и сигнал померен на ниже поље (5,03 (1Х, т,J = 8.5 Хз, Х-200 )) је приказано у региону шећера, као код једињења1. Тхе13Ц НМР подаци (табела1, ФигураС11) показао је 31 резонанцију од којих су дветранс-олефински угљени, десет квартарних угљеника,десет ароматичних угљеника, шест угљеника глукозилног дела и један метокси угљеник и десет непротониранихугљеника, укључујући два карбонилна угљеника која одговарају кемпферолу, ферулоилу,и групе глукозе. Конкретно, угљенични сигнали из Ц-200 до Ц-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 и 62.5) сугерише присуство глукозног дела. Локације глукозног делаи ферулоил група су додељене корелацијама ХМБЦ дугог домета између Х-100 иC-3 (δC 134.8) и Х-200 и Ц-1000 (δC 168.4) (Слика С14). Положај додатногметокси група је одређена кључном корелацијом између 3000 -ОЦХ3 и Ц-3000 (δC 149.4). Горе наведени резултати сугеришу структуру једињења3 као кемпферол-3-O- - 2"-ферулоил глукозид. Колико је нама познато, једињење3 је само пријављен као апроизвод хидролизе 3-O- -(2-O-ферулоил)-глукозил-7,40 -ди-О- -глукозил кемпферол, изолован одАллиум туберосум[35]. Дакле, структура од3 био је расветљен као новприродно једињење.

Цомпоунд11 је изолован као жути прах. Тхе1Х НМР подаци (слика С19)приказао скуп АА0 ББ0 -тип сигнала (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Хз, Х-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Хз, H-30, H-50 )) у Б прстену кемпферола и синглет сигнал наδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) галоилног дела у ароматичном региону, што је карактеристичан сигналдодељеног флавонола. Аномерни протонски сигнал (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Хз, Х-100 )) указује да је гликозилна веза а-конфигурација. Штавише, ниже пољепомерени протонски сигнал (5,27 (1Х, т,J = 9.5 Хз, Х-200 )) сугерише да галоил групаје везан за хидроксилну групу Ц-200 јер би се овај помак могао приписатианизотропни утицај наO-галоилни део [21]. Тхе13Ц НМР подаци (слика С20)показао 26 резонанција, што указује на алокацију флавонол гликозида. Угљични сигналиод Ц-200 до Ц-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 и 60.1) указују на присуство галактоземоиети. Дакле, структура једињења11 је потврђено као кемпферол-3-O- -200 - галоилгалактозид. Иако сложен11 раније изолован из разних извора,укључујућиД. каки[21,36], само1Х НМР и МС подаци су претходно пријављени. Тако,тхе13Ц НМР подаци су први пут пријављени у овој студији

2.3. Антиоксидативне активности изолованих једињења

Сва изолована једињења су процењена на њихов антиоксидативни ефекат коришћењем брзог онлинијска ХПЛЦ-АБТС анализа да би се утврдило која једињења доприносе антиоксидативном деловањуефекат листова персимона. Једињења4–8, 11, 13, 15, и16 показао снажан антиоксидативне активности (Сл4). Већина ових једињења били су кемпферол и кверцетиндеривати, али неки деривати (1–3, 9, 10, 12, и14) није показао активности. Тхеоднос структура-активност није у потпуности утврђен али је делимично откривен. Инпосебно, кверцетин и кемпферол са галоил деловима (7, 8, 11, и13) утврђено је даимају снажне активности, али оне са кумароил или ферулоил деловима (1–3 и16) нијепоказати било какве активности.

Слика 4.Активности уклањања радикала изолованих једињења (4–8, 11, 13, 15, и16) су процењени на мрежиХПЛЦ-АБТС тест.

2.4. Квантитативна анализа изолованих једињења

Квантитативна анализа свих изолованих једињења у екстракту растворљивом у ЕтОАцизвршено је да се потврди да би антиоксидативни ефекти листова персимона могли битиизазвана овим активним једињењима. Специфична ХПЛЦ метода са детекцијом низа диода иевапоративни детектор расејања светлости развијен је за симултано одређивањеод 27 једињења. Садржај свих изолованих тритерпеноида био је приближно 5,9 проценатаекстракт, а од њих, они сијарезинолне киселине (25), олеанолна киселина (26), и урсолицкиселина (27) представља значајан део, као што је објављено у претходним студијама [7]. Тхесадржај флавоноида био је око 5,4 одсто, а од тога активних једињењабили 3,2 одсто (таб2). Конкретно, садржај каемпферола-3-O- -200 -галоилгалактозид(9), кемпферол-3-O- -2"-галоилглукозид (10), изокверцитрин (13) и кверцетин-3-O- -2"- галоилглукозид (15) били су више од 0.3 процента . Аналитичка метода је верификована коришћењем аједноставан поступак валидације како би се осигурала релевантност методе, која је показала адекватнуспецифичност, линеарност, тачност и прецизност.

Тражи више:

Имејл:wallence.suen@wecistanche.com Вхатсапп плус 86 15292862950