Мрежна фармакологија и експериментална валидација откривају механичку улогу фенилетаноидних гликозида Цистанцхе у лечењу НАФЛД путем TNF/PI3K/Акт путање
Oct 29, 2025
3. Резултати
3.1 Мрежна фармакологија
3.1.1 Активна једињења и потенцијални циљеви
На основу претходних истраживања пројектног тима и информација из база података и литературе, одабрано је десет репрезентативних једињења са фармаколошком активношћу [10–11]:вербаскозид, изовербаскозид, ехинакозид, 2′-ацетил-вербаскозид, цистанозид А, цистанозид Б, салидрозид, изокренатозид ИИ, цистанхе гликозид А и цистанхе гликозид Ф.
Екстракт вербаскозида (актеозида) Цистанцхе са високим садржајем за лечење липида у крви
Листа спецификација екстракта Цистанцхе
КоришћењеСвиссТаргетПредицтион, добијена су 44 циља;НетИнферпредвидео првих 20 циљева, дајући 45 циљева;СуперПреддао 118 циљева. Након спајања и уклањања дупликата,195 јединствених метабили идентификовани.
Фром тхеGSE89632скуп података, који је укључивао 39 узорака НАФЛД и 24 нормална узорка,589 различито изражених генабили екранизовани. Комбиновање података изГенеЦардсиДисГеНЕТ, 2.315 гена за болести повезаних са НАФЛДсу добијене након дедупликације (слике 1А–1Б). Укрштањем циљева повезаних са једињењем са циљевима болести,77 циљева који се преклапајуидентификовани су као потенцијалне терапеутске мете Цистанцхе фенилетаноидних гликозида против НАФЛД (Слика 1Ц).
Ови циљеви су увезени уСТРИНГ database with an interaction threshold >0.400. Изоловани чворови су уклоњени, а мрежа је визуелизована прекоЦитосцапе, што резултира аППИ мрежа са 75 чворова и 408 ивица(Слика 1Д). Користећи функцију „Анализе Нетворк“ у Цитосцапе-у, 10 најбољих циљева на основу вредности степена идентификовано је као основни циљеви:ТНФ, НФКБ1, ТЛР4, ХСП90АА1, ЕСР1, ХИФ1А, СТАТ1, АПП, ПРКАЦА, СМАД3.
3.1.2 ГО, КЕГГ и ДО анализе обогаћивања
Анализа обогаћивања ГО открила је 93 појма замолекуларна функција (МФ), 38 форћелијска компонента (ЦЦ), и 989 форбиолошки процес (БП). Визуелизовано је 10 најбољих уноса у свакој категорији (Слика 2). Резултати су показали да Цистанцхе фенилетаноидни гликозиди могу да испоље анти-НАФЛД ефекте путем путева повезаних сазапаљење, цитокини, метаболизам и имуни одговор.
ДО обогаћивање идентификовано833 болестиповезане са циљевима, са 25 најбољих визуелизованих (Слика 4), укључујућиметаболичке, имунолошке, кардиоваскуларне, болести повезане са гојазношћу и болести јетре, све уско повезано са НАФЛД.
3.1.3 Мрежа „Сложена – Циљна – Путања“.
На основу резултата обогаћивања КЕГГ, амрежа „сложена–циља–пут“.је изграђен помоћуЦитосцапе 3.9.1. Зелени квадрати представљају активна једињења, плави кругови представљају мете, а наранџасти чворови у облику слова В представљају путеве (Слика 5). Ово илуструје да Цистанцхе фенилетаноидни гликозиди испољавају анти-НАФЛД ефекте крозвише једињења, циљева и путева, саехинакозид и вербаскозидкао најзаступљенија и најбројнија једињења маркера у издању за 2020Кинеска фармакопеја.
3.1.4 Молекуларно спајање
Првих пет кључних циљева у ППИ мрежи (ТНФ, НФКБ1, ТЛР4, ХСП90АА1, ЕСР1) су спојени са активним једињењима и израчунате су њихове минималне енергије везивања (слика 6). Сви резултати пристајања били су мањи од–6 кцал/мол, што указује на јаке афинитете везивања.ТНФ је показао најјачи афинитет. Неки резултати пристајања су визуелизовани помоћуПиМОЛ(слика 7).
3.2 Експерименти са ћелијама
3.2.1 Ефекти ФФА на акумулацију липида у ХепГ2 ћелијама
Као што је приказано уСлика 8, повећање концентрације ФФА од 0,5 до 2 ммол/Л довело је до повећања црвених липидних капљица, које су се спојиле у велике капљице липида, што указује на успешно пуњење липида.
3.2.2 Ефекти ФФА и Цистанцхе фенилетаноидних гликозида на виталност ћелије
Као што је приказано уСлика 9А, ФФА концентрације од1 ммол / Л и исподније имао значајан утицај на виталност ћелија (П > 0,05); дакле,1 ммол/Лизабран је за моделирање. Као што је приказано уСлика 9Б, Цистанцхе фенилетаноидни гликозиди до200 μг/мЛније значајно утицало на одрживост (П > 0,05), али400 μг/мЛзначајно инхибирала виталност (П < 0,01). дакле,25, 50 и 100 μг/мЛсу одабране као ниске, средње и високе дозе за лечење.
3.2.3 Ефекти на акумулацију липида
Као што је приказано уСлика 10, група модела је показала значајну акумулацију црвених липидних капљица у поређењу са контролном групом (П < 0,01), потврђујући успешно моделирање. Третман са50 и 100 μг/мЛфенилетаноидних гликозида Цистанцхе значајно су смањили формирање липидних капљица (П < 0,01). УСлика 11, нивои ТГ и ТЦ су били повишени у моделној групи (П < 0,01), док су све групе које су третиране показале значајно смањене нивое у поређењу са моделном групом (П < 0,01).
3.2.4 Ефекти на оштећење митохондрија
JC-1 боја се акумулира у здравим митохондријама и емитује црвену флуоресценцију; у оштећеним митохондријама остаје у мономерном облику и емитује зелену флуоресценцију. Као што је приказано уСлика 12црвена флуоресценција је доминирала у контролној групи, док је зелена флуоресценција била истакнута у групи модела. Групе за третман су показале смањену зелену флуоресценцију и повећану црвену флуоресценцију, што указује на побољшани потенцијал митохондријалне мембране.
3.2.5 Ефекти на интрацелуларне нивое РОС
Као што је приказано уСлика 13, група модела је показала значајно повећан интензитет флуоресценције (П < 0,01), што указује на повишен РОС. Третман са Цистанцхе фенилетаноидним гликозидима значајно је смањио нивое РОС у свим концентрацијама (П < 0,01).
3.2.6 Ефекти на апоптозу
Хоецхст 33342 боји језгра, са апоптотичним језграма који показују светло плаву, кондензовану или фрагментовану морфологију. Као што се види уСлика 14, контролна група је имала минималну светлу флуоресценцију, док је моделна група показала обиље светло плавих апоптотичких језгара. Групе за третман су показале смањен интензитет флуоресценције, што указује на смањену апоптозу.
3.2.7 Ефекти на TNF/PI3K/Акт сигнални пут и Бак експресију
Као што је приказано уСлика 15, у поређењу са контролном групом, моделна група је показала значајно повишену експресијуТНФ-α, ПИ3К п85, Акт и Бакпротеини (П < 0,05, П < 0,01). Након лечења:
Све групе Цистанцхе фенилетаноидних гликозида показале су смањењеТНФ-αизраз (П < 0,01),
Тхе50 μг/мЛгрупа показала смањенуПИ3К п85израз (П < 0,01),
Тхе100 μг/мЛгрупа показала смањенуАкт и Баксизраз (П < 0,05).
4. Дискусија
НАФЛД је сложено обољење јетре повезано са метаболичким поремећајима, укључујућинеравнотежа метаболизма липида, инсулинска резистенција и оксидативни стрес[12]. Последњих година,традиционална кинеска медицина (ТЦМ)показао значајно обећање у лечењу НАФЛД.
Савремена истраживања су то открилафенилетаноидни гликозиди из Цистанцхеаможе регулисати метаболизам липида и глукозе у јетри и инхибирати оксидативни стрес, упалу и фиброзу [13–15]. Јетра користиβ-оксидацијаза метаболизам масних киселина иЦИП7А1за претварање холестерола у жучне киселине за хомеостазу липида [16–18]. У срединама са високим садржајем масти, метаболички дисбаланс доводи до акумулације липида и НАФЛД-а [19].
Ово истраживање је то потврдилоХепГ2 ћелије изазване ФФАпоказао повећане капљице липида и повишене нивое ТЦ и ТГ. Третман са Цистанцхе фенилетаноидним гликозидима значајно је смањио формирање липидних капљица и нивое ТЦ/ТГ, побољшавајући стеатозу јетре.
Дисфункција митохондрија доводи до смањене β-оксидације, прекомерне производње РОС и пероксидације липида [20]. РОС даље оштећује митохондрије, погоршавајући стеатозу [21]. Наши резултати показују да Цистанцхе фенилетаноидни гликозидисмањити РОС, побољшатипотенцијал митохондријалне мембране, и ублажитиоксидативни стрес, чиме се ублажава накупљање масти.
Мрежна фармакологија је показала да анти-НАФЛД ефекти укључују вишеструкеметаболички и путеви повезани са апоптозом. Молекуларно спајање је показало јаке афинитете везивања између активних једињења и циљева, посебноТНФ, што указује на његову централну улогу.
ТхеТНФ путје критичан у ћелијској сигнализацији. ТНФ-α се везује заТНФР1, активирајући путеве рецептора смрти и индукујући апоптозу [22]. Такође активираПИ3К/Акт путкроз паракрину сигнализацију [23–24]. Абнормална ПИ3К/Акт сигнализација је повезана са акумулацијом липида, упалом и фиброзом код НАФЛД-а [25]. Наши подаци показују да Цистанцхе фенилетаноид гликозидиинхибирају апоптозуи смањити експресијуТНФ-α, ПИ3К, Акт, иБак, у складу са мрежним предвиђањима, потврђујући важностTNF/PI3K/Акт путања.
Закључак
Цистанцхе фенилетаноидни гликозиди регулишу НАФЛД крозвише процеса и путева, укључујући:
Смањење акумулације липида,
Инхибирање оксидативног стреса,
Ублажавање оштећења митохондрија,
Сузбијање апоптозе.
Ови ефекти могу бити уско повезани саTNF/PI3K/Акт сигнални пут. Ова студија пружа не само научну подршку за примену фенилетаноидних гликозида Цистанцхе у лечењу НАФЛД-а, већ и референцу за развој и клиничка истраживања нових терапијских лекова.
