Оптимизација процеса екстракције флавоноида у листовима стабљике панак нотогинсенг и студија антиоксидативне активности и њених ефеката на ћелије меланома Б16 миша
Mar 22, 2022
Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com
Цхун-Иан Даи 1,2,3,4,†, Пенг-Феи Лиу 1,2,3,4,†, Пеи-Ран Лиао 1,2,3,4, Иуан Ку 1,2,3,4 ИД ,Цхенг-Ксиао Ванг 1,2,3,4, Ие Ианг 1,2,3,4,* и Ксиу-Минг Цуи 1,2,3,4,*
Апстрактан:ТхеПанак нотогинсенг(П. нотогинсенг) стабљика листа је богатафлавоноиди. Међутим, због недостатка истраживања процеса екстракције флавоноида и функционалног развоја листа П. нотогинсенгстем, ови делови се одлажу као пољопривредни отпад. Стога, у овој студији, намеравамо да оптимизујемо процес екстракције и развијемо функције избељивања коже екстраката листова стабљике П. нотогинсенг. Процес екстракције стабљике и листа флавоноида П. нотогинсенг (СЛПФ) је оптимизован на основу Бок-Бехнкенове дизајна (ББД) и методологије површине одговора (РСМ). Оптимални услови екстракције СЛПФ-а су следећи: време екстракције, концентрација етанола, садржај натријум додецил сулфата (СДС) и однос течног материјала (в/в, који су 52 мин, 48,7 процената, 1,9 процената и 20 процената). : 1. Под оптималним условима екстракције, просечан укупни садржај СЛПФ је 2,10 процената.антиоксидансактивност и антидепозиција меланина мишјих Б16 ћелијаП. нотогинсенгпроучавају се екстракти листова стабљике. Резултати показују да су ЕЦ50 вредности редукционе активности, активности уклањања слободних радикала 2,2-дифенил-1-пикрилхидразила (ДППХ), способност уклањања супероксиданиона и 2,{{5} Способност уклањања слободних радикала }азино-бис-3-етилбензтиазолин-6-сулфонске киселине (АБТС) износи 7,212, 2,893, 2,949 и 0,855 мг/мЛ, респективно. Вредности ИЦ50 екстраката синтезе тирозиназе и меланина су 0,045 и 0,046 мг/мЛ, респективно. Стога, оптимална технологија обраде за СЛПФ добијена у овој студији не само да повећава његову искоришћеност већ и смањује трошкове материјала. Екстракти из листова стабљике П. нотогинсенг могу се развити као храна или козметички производи.
Кључне речи: антиоксиданс; флавоноиди; ћелије меланома миша Б16; Панак нотогинсенг; површински активно
1. Представљање
Панак нотогинсенг(П. нотогинсенг) (Бурк.) ФХ Цхен је вишегодишња биљка која припада Аралиацеае. Има подземне корене које се суше за употребу као лек и које су укључене у кинеску фармакопеју. Лист стабљике П. нотогинсенг има сличну лековиту вредност као и корен. У Пентс'ао Канг Му се наводи да је лист стабљике погодан за лечење прелома, модрица и крварења. Савремене студије су такође потврдиле да лист стабљике П. нотогинсенг има лековиту вредност сличну оној корена за крвни систем, кардиоваскуларни систем, нервни систем и метаболички систем [1]. Уобичајени производи направљени од листова стабљике П. нотогинсенг укључују КииеСхен'ан Пиан, Јианг Зхи Линг капсуле и Киие Схен'ан капсуле.
Иако је лист стабљике П. нотогинсенг званично сертификован као храна због својих високих нутритивних и високих лековитих вредности (ДБС 53/024-2017) [2], мало пажње је усмерено на промовисање ових биљних делова у исхрани. Прелиминарни статистички подаци су показали да годишња производња стабљичног листа П. нотогинсенг износи 1500 тона и да се користи само 5 процената ове количине [3]. Стога, подстицање развоја ресурса листова стабљике П. нотогинсенг може у великој мери повећати приходП. нотогинсенгпроизвођача и смањити загађење животне средине, чиме се повећавају социо-економске користи.
Најефикаснији активни састојци екстраховани из стабљике П. нотогинсенг су укупни сапонини и флавоноидни гликозиди, који чине 4–6 процената и 0.54–2.49 процената, респективно [4]. Флавоноиди су важни због њихове добро дефинисане фармаколошке активности које укључујуантиоксиданс, заштитне и антитуморске активности јетре [5]. Органски растварачи који се најчешће користе за екстракцију флавоноида су етанол и метанол [6]. На пример, Уисал ет ал. [7]успешно екстраховане компоненте које садрже флавоноиде из Цотонеастер интегерримус коришћењем метанола.Ванг ет ал. [8] је користио 70 посто етанола за екстракцијуфлавоноидииз листова ацер трунцатум. Степен екстракције је био већи, а екстракт се лакше концентрише и осуши. Сматра се да је етанолекстракција боља метода екстракције. Тренутно, само Зханг ет ал. [4,9] екстраховао СЛПФ методом алкалне воде у микроталасној пећници и методом врућег потапања. Међутим, ултразвучна метода може учинити да екстракт настави да шокира, допринесе дифузији раствора, увелико скрати време екстракције и побољша брзину екстракције укупних флавоноида и употребу сировина, што је релативно нова метода за екстракцију флавоноида [6]. Због тога су ефикасна екстракција СЛПФ-а и истраживања о употреби производа у козметичкој и здравственој заштити од великог значаја за даљи развој ове индустрије.
Сурфактанти се широко користе као помоћни у екстракцији активних компоненти; повећавају ефикасност екстракције, скраћују време екстракције и повећавају растворљивост активних састојака нерастворљивих у води у води. Поред тога, примена сурфактаната смањује употребу органских растварача и њихову цену, оптимизује циљне компоненте током процеса екстракције и побољшава чистоћу активних састојака. Већина сурфактаната који се користе за екстракцију су нетоксични. Натријум додецилсулфат (СДС), Тритон Кс-100, Твеен-20, Твеен-80 и Спан-20 су обично коришћени сурфактанти који могу значајно повећати брзину екстракцијефлавоноиди[10–13]. Методологија површине одговора (РСМ) се широко користи за оптимизацију процеса, а Бок–Бехнкен дизајн (ББД) је један статистички модел метода пројектовања површине одзива. ББД представља независни квадратни дизајн који не садржи уграђени факторски или фракционални дизајн. У поређењу са другим методама пројектовања, ББД је лако дизајнирати и анализирати статистички; стога се широко користи у оптимизацији процеса екстракције флавоноида [14]. На пример, варијабле екстракције потпомогнуте микроталасном пећницом оптимизоване су коришћењем РСМ за оптимални опоравак укупног садржаја флавоноида [15]. Поред тога, неки истраживачи су добили боље технолошке услове за екстракцију укупних флавона из семена Флос Попули [16] и Цориандрум сативум [17] коришћењем аББД-а РСМ-а.
Раније су пријављиване методе екстракције флавоноида [18], али до сада процес екстракције СЛПФ-а још није формиран. У овој студији, ултразвучно потпомогнути процес екстракције СЛПФ-а је оптимизован коришћењем ББД-а за одређивање садржаја укупногфлавоноидикао индекс по први пут. Независне варијабле, односно тип сурфактанта, доза, однос течног материјала (в/в, време екстракције и концентрација етанола, постављени су као појединачни фактори. Стога су циљеви овог рада били (и) оптимизација ултразвука- потпомогнути процес екстракције укупних флавоноида, (ии) да се процениантиоксидансактивност екстраката; (иии) да се процени ефекат екстраката на активност Б16 ћелија; (ив) да истражи изводљивост примене СЛПФ-а у козметици, здравственим производима и фармацеутској индустрији; (в) да обезбеди референцу за развојП. нотогинсенгпроизводи екстракта листова стабљике и смањују испуштање пољопривредног отпада у животну средину.
антиоксидант цистанцхе
2. Резултати и дискусија
2.1. Утицај типова сурфактаната на ефикасност екстракције СЛПФ-а
Поред контролне групе (ЦК) (вода уместо сурфактаната), у другим групама су коришћене различите врсте сурфактаната (1,5 процената) одржавајући однос течног материјала (в/в од 15:1 и коришћењем концентрације етанола од 40 процената). Укупни садржај флавоноида је одређен након ултразвучне екстракције на 80 ◦Ц у трајању од 40 мин, резултати су приказани на слици 1. Може се видети да су сурфактанти побољшали ефикасност екстракције СЛПФ-а, а највећи садржај је екстрахован помоћу СДС-а. садржај са СДС је повећан за 12,8 процената у поређењу са ЦК. Стога је СДС коришћен у наредним експериментима.
2.2. Експерименти са једним фактором
Резултат је показао да се ефикасност екстракције СЛПФ повећава са повећањем времена екстракције; при односу течног материјала (в/в) од 15:1, концентрација етанола је била 40 процента, а садржај СДС је био 1,5 процената (Слика 2А). Принос СЛПФ садржаја се смањио када је време екстракције било дуже од 40 мин. Садржај СЛПФ се повећавао када је концентрација етанола порасла са 30 процената на 50 процената, али се постепено смањивао када је концентрација етанола била виша од 50 процената. Највећи принос садржаја СЛПФ био је 23,1 проценат за време екстракције од 40 мин, однос течног материјала (в/в) од 15:1 и садржај СДС од 1,5 процената (Слика 2Б). Када је време екстракције било 40 мин, однос течног материјала (в/в) био је 15:1, а концентрација етанола 40 процената, садржај СЛПФ је наставио да расте са садржајем СДС од 0,5 процената на 2 процента. Када је садржај СДС повећан са 0,5 процената на 2 процента, садржај СЛПФ је повећан за 10 процената (Слика 2Ц). Укупни садржај флавоноида је био највећи када је однос течног материјала (в/в) био 20:1, време екстракције је било 40 мин, концентрација етанола је била 40 процената, а садржај СДС је био 1,5 процената (Слика 2Д). Садржај СЛПФ је био 1,5 пута већи од оног када је коришћен однос течног материјала (в/в) од 5:1 и смањен када је однос течног материјала био већи од 20:1. Стога, за наредне ББД експерименте, време екстракције се креће од 40 до 60 минута, концентрације етанола се крећу од 40 до 60 процената, садржај СДС се креће од 1,5 процената до 2,5 процената, а однос течног материјала (в/в) се креће од 15: Коришћено је 1 до 25:1.
2.3. Прилагођавање модела и оптимизација СЛПФ-а
2.3.1. Модел Фиттинг
Дизајнирана матрица, резултати анализе варијансе, те адекватност и прикладност модела приказани су у табели 1. Анализа вишеструке регресије је спроведена коришћењем софтвера Десигн-Екперт. Однос између варијабле одговора (садржаја СЛПФ) и независних променљивих изражен је следећом полиномском једначином другог реда:
И {{0}} −30.678 плус 0.487А плус 0.304Б плус 4.596Ц плус 0 .853Д − 0.001АБ − 0.020АЦ − 0.005АД плус 0,010БЦ − 0,001БД − 0,076ЦД − 0,003А2 − 0,002Б2 − 0,683Ц2 − 0,010Д2(1)
где је И садржај СЛПФ; А, Б, Ц и Д представљају време екстракције, концентрацију етанола, садржај СДС и однос течног материјала, респективно.
2.3.2. Анализа површине одговора
Анализа резидуала модела оптимизације површине одзива је спроведена коришћењем алата за графичку анализу. Важно је тестирати униформност варијансе грешке модела. Ако се резултати добро уклапају са предвиђеним вредностима, прилагођена крива експерименталних и предвиђених вредности је линеарна. Штавише, важно је проценити да ли је расподела резидуала нормална приликом одређивања тачности модела. Када резидуали имају нормалну расподелу, прилагођена крива тих резидуала је линеарна [19]. Поред тога, ако предиктивне вредности резидуала имају случајну дистрибуцију, хомогеност преостале варијансе је у складу са захтевима оптимизације [20]. У овој студији, квадратни модел је најбоље одговарао подацима (Р2 вредност од 0,9818) (Слика 3А) [21]. Поред тога, дијаграм нормалне вероватноће резидуала (Слика 3Б) и дијаграм остатака наспрам предвиђеног одговора (Слика 3Ц) коришћени су за валидацију адекватности модела . Подаци су показали да тачке у нормалном графикону формирају праву линију (слика 3Б). Ово је указивало да подаци нису показали одступања од нормалности. Поред тога, дијаграм резидуала наспрам предвиђеног одговора показао је случајну расподелу, што је показало да је модел адекватан и да није нарушио претпоставку независности или константне варијансе (Слика 3Ц) [22].
Резултати су показали да је висок удео укупне варијансе објашњен моделом квадратне крегресије (Р2 од 0.982), што указује да је модел погодан за оптимизацију параметара екстракције [23]. Р2Адј од 0.964 био је релативно близак Р2Пред од 0.902, што потврђује да је модел значајан [14]. Вредност односа сигнал-шум (РСН) била је 24,553, што је знатно изнад4. Резултат је показао да се овај модел може користити за дизајн простора. Штавише, коефицијент варијације (ЦВ) је био низак (2,657 процената), што указује да се модел на задовољавајући начин уклапа у експерименталне податке и да се може користити за предвиђање исхода унутар опсега података. Коефицијенти регресије су наведени у табели 2. У СЛПФ моделу, А, Б, Ц, АБ, АЦ, АД, БЦ, ЦД, А2, Б2, Ц2 и Д2 су се значајно разликовали (п < 0.05)="" ,="" али="" д="" и="" бд="" се="" нису="" значајно="" разликовали="" (п=""> 0,05).
3Д графички приказ површине (Слика 4А1–Д1) укупног садржаја флавоноида и контурна крива (Слика 4А2–Д2) две тестиране варијабле су генерисани из коначног модела да би се описали интеракције између независних варијабли и оптималних параметара процеса. Сваки графикон је завршен под условом да су остали фактори сваки пут задржани на одговарајућим нултим нивоима [24]. Ако контурни дијаграм има кружни облик, интеракције између одговарајућих фактора су занемарљиве. Елиптични облик контурног дијаграма указује да интеракције између варијабли доприносе садржају укупногфлавоноидина значајном нивоу [25].На основу података приказаних у табели 2 и слици 4, у моделу СЛПФ ранг ефекта интеракције између независних варијабли од високог до ниског је био ЦД–АД–АБ–АЦ. Ефекти Ц (садржај СДС) и Д (однос течног материјала (в/в)) на садржај СЛПФ приказани су као 3Д дијаграм и придружени контурни графикон. Елиптични облик контурне графике је илустровао значајну (п < 0.0001)="" корелацију="" између="" ц="" и="" д,="" што="" је="" допринело="" различитим="" садржајима="" слпф="" (табела="" 2;="" слика="" 4д1,="" д2).="" садржај="" слпф="" се="" повећао="" (2,13="" процената)="" када="" је="" садржај="" сдс="" повећан="" са="" 1,5="" процената="" на="" 2,0="" процената="" и="" однос="" течног="" материјала="" (в/в)="" је="" повећан="" са="" 15:1="" на="" 20:1="" (слика="" 4д1,="" д2).="" важно="" је="" да="" је="" процес="" екстракције="" економичан="" и="" изводљив,="" а="" приступ="" моделирању="" олакшава="" смањење="" трошкова="" и="" времена="" током="" будуће="" масовне="">
антиоксидативни екстракт цистанче
2.3.3. Валидација модела
За валидацију предложеног модела изабрани су различити реакциони услови унутар опсега варијабли (Табела 3). Оптимални параметри процеса за добијање високог укупног садржаја флавоноида добијени помоћу једначине (1) су време екстракције од 51,84 мин, концентрација етанола од 48,68 процената, садржај СДС од 1,88 процената и однос течног материјала (в/в) од 19,81:1; ово је резултирало укупним садржајем флавоноида од 2,13 одсто. Тачност модела је потврђена на основу три есеја у оптималним условима. Просечан укупан садржај флавоноида био је 2,10 одсто, што није показало значајну разлику од предвиђене вредности. Ово је показало да је експериментална вредност била веома близу предвиђеној вредности, што је показало да су резултати разумни и поуздани; модел једначине (1) је сматран задовољавајућим и тачним за предвиђање садржаја СЛПФ. Овај приступ не само да побољшава ефикасност екстракције, већ и повећава стопу искоришћења П.нотогинсенглист стабљике.
2.4. Антиоксидативна активност екстракта листова стабљике П. нотогинсенг
Смањена способност екстракта листова стабљике П. нотогинсенг је позитивно повезана са његовомантиоксидативна активност; стога се може користити као важан индекс за процену антиоксидативне активности [26]. Способност редукције екстраката и аскорбинске киселине је расла са концентрацијом и показала је значајну позитивну корелацију са концентрацијом (Слика 5А). ЕЦ50 екстраката и аскорбинске киселине износио је 7,212 и 0,0287 мг/мЛ, респективно. Ови резултати су указивали на тоП. нотогинсенгекстракти су ефикасан донор електрона способан да реагује са слободним радикалима како би их претворио у стабилније производе. ДППХ радикал је релативно стабилан слободни радикал и може да прихвати електроне или атоме водоника да формира стабилне молекуле. Хидроксилни радикали поседују највећу способност оксидације и могу оштетити биолошке молекуле. Због тога су ДППХ и хидроксилни радикали широко коришћени као важан индекс за процену антиоксидативне активности [27]. Активности уклањања радикала ДППХ су се повећавале са концентрацијом екстраката и аскорбинске киселине, и сви су показали значајну позитивну корелацију са концентрацијом. Вредности ЕЦ50 екстраката и аскорбинске киселине биле су 2.893 и 0.0938 мг/мЛ, респективно (Слика 5Б). Активности уклањања хидроксилних радикала имале су сличан тренд као ДППХрадицал за третмане екстраката или аскорбинске киселине, а ЕЦ50 вредности екстраката и аскорбинске киселине биле су 1,514 и 0,0902 мг/мЛ, респективно (Слика 5Ц). Ови резултати су показали да је П. екстракти нотогинсенг-а имају високу способност уклањања ДППХ или хидроксилних радикала.
Супероксидни ањони могу довести до појаве пероксида у плазма мембрани [28]. Због тога је способност уклањања супероксидних ањона изузетно важна за антиоксиданс. У овој студији, брзина уклањања супероксидних ањона се повећавала са концентрацијом екстраката и аскорбикацида, а брзина уклањања је такође била у корелацији са концентрацијом (Слика 5Д). Вредности ЕЦ50 екстраката и аскорбинске киселине биле су 2,949 и 0,140 мг/мЛ, респективно, а највеће стопе уклањања биле су 94,90 процената и 93,73 процената, респективно.антиоксидансактивност екстраката се генерално огледа у способности уклањања АБТС плус слободних радикала [29]. Ефекат чишћења екстраката и аскорбинске киселине на АБТС плус слободне радикале повећавао се са концентрацијом (Слика 5Е), а постојала је позитивна корелација између брзине чишћења и концентрације екстраката или аскорбинске киселине. ЕЦ50 вредности П. екстракти нотогинсенг-а и аскорбинска киселина били су 0.855 и 0,205 мг/мЛ, респективно.
Многе студије су то открилефлавоноидипоседовати доброантиоксиданссвојства. Резултати Фаромби ет ал. [30] је показао да је екстракт семена Гарциније коле показао 57% ефекта чишћења супероксида у концентрацији од 1 мг/мЛ, 85% ефекта чишћења водоник пероксида у концентрацији од 1,5 мг/мЛ и 89 процената ефекта чишћења на ДППХ у концентрацији од 2 мг/мЛ. Срисават ет ал. [31] су демонстрирали активности уклањања супероксидних ањонских радикала екстраката пиринча ЕЦ50 вредности у опсегу од 0,6–5 мг/мЛ, што је било слично резултатима ове студије. Све у свему, ово истраживање је такође показало да јеП. нотогинсенгекстракти листова стабљике имају јаку антиоксидативну активност.
2.5. Ефекат екстраката на активност ћелија Б16
БезбедностП. нотогинсенгЕкстракти листова стабљике су изузетно важни у истраживању виталности ћелија, активности ћелијске тирозиназе и нивоа меланина у Б16 ћелијама меланома. Резултати су показали да је виталност ћелије била око 85 процената при концентрацији од 0.032 мг/мЛ и да је ИЦ50 вредност виталности ћелије била {{2{{22} }}}.405 мг/мЛ (Слика 6А). Екстракти листова стабљике П. нотогинсенг нису били посебно цитотоксични за Б16 ћелије. Због тога су концентрације екстракта ниже од 0,032 мг/мЛ коришћене за извођење наредних експеримената. Тирозиназа је регулаторни меланогени ензим који ограничава брзину и који је укључен у пут меланинтезе [32]. Резултати су показали да су екстракти значајно смањили тирозинасеактивност и производњу меланина у мишјим ћелијама на начин који зависи од дозе (Слика 6Б). Постојале су позитивне корелације између екстрахованог садржаја и односа инхибиције синтезе тирозиназе или меланина (Р2=0.9162 и Р2=0.9118). Вредности ИЦ50 за однос инхибиције синтезе тирозиназе и меланина биле су 0,045 мг/мЛ односно 0,046 мг/мЛ (Слика 6Б). Меланин игра одлучујућу улогу у боји коже. Формирање меланина је регулисано тирозиназом, која је главни ензим који ограничава брзину и који је регулисан слободним радикалима. Детаљне студије су то показалефлавоноидису прилично снажни инхибитори и могу директно да инхибирају тирозиназу и делују на дистални део оксидативног пута меланогенезе [33]. Наши резултати су показали да екстракти листова стабљике П. нотогинсенг показују добре перформансе у смањењу активности тирозиназе и производње меланина. Очигледно је да екстракти листова стабљике П. нотогинсенг могу имати велике изгледе као здрава храна и козметички производ због својих одличних перформанси у анти-пигментном таложењу.
3. Материјали и методе
3.1. Биљни материјали
Лист свежег стабљикаП. нотогинсенгје купљен од међународног трговачког центра П. нотогинсенг, Венсханг, провинција Јунан, у октобру 2017. године, а затим испран у дестилованој води, а површинска вода је уклоњена. Свежи лист стабљике П. нотогинсенг је осушен до константне тежине на 60 ◦Ц, а затим испран у прах за даљу употребу.
корист екстракта цистанцхе:против таложења пигмента
3.2. Хемикалије и реагенси
На2ХПО4, НаХ2ПО4, ТЦА (трихлоросирћетна киселина), ФеЦл3, ФеСО4, аскорбинска киселина, пирогалол, Х2О2 су добијени од Синопхарм Цхемицал Реагент Цо., Лтд. (Шангај, Кина) ДППХ (2,2-дифенил {{10} пикрилхидразил), АБТС, -МСХ, Л-ДОПА и МТТ су купљени од Сигма Цхемицал Цо. (Сент Луис, МО, САД), ПБС (Биологицал Индустриес, Беит-Хаемек, Израел), Дулбеццо-ове модификоване ЕаглеМедиум (ДМЕМ) културе и фетални говеђи серум (ФБС; Гибцо, НИ, УСА) и трипсин су добијени од Биологицал Индустриес, Израел. ДМСО и Тритон Кс-100 су добијени од МП Биомедицалс и Амресцо у САД, респективно. Сви остали реагенси су били аналитичког квалитета. Ултрачиста вода је добијена из система Миллипоре (Бедфорд, МА, САД).
3.3. Оптимизација избора услова екстракције
Ултразвуком потпомогнута екстракција тоталфлавоноидиодП. нотогинсенглист стабљике је оптимизован од стране РСМ-а. Садржај СЛПФ-а је постављен као индекс за процену стања екстракције. Према технологији екстракције, површински активни састојци, време екстракције, концентрација етанола, садржај СДС и однос течног материјала су кључни фактори. Највеће вредности у експериментима биле су оптималне централне вредности за садржај СЛПФ. Затим су коришћени за проучавање најбоље технологије процеса екстракције СЛПФ методом РСМ. Третман са једним фактором је био следећи: Лист стабљике П. нотогинсенг је (1) екстрахован коришћењем различитих сурфактаната (Табела 4), ултразвучном екстракцијом у трајању од 40 мин одржавањем односа течног материјала (15:1, в/в) и 40% концентрације етанола; (2) екстрахован ултразвуком у трајању од 10, 20, 30, 40, 50 и 60 минута када је однос течног материјала био 15:1 (в/в), концентрација етанола је била 40 процената, а садржај СДС је био 1,5 процената; (3) екстрахован са 30, 40, 50, 60, 70, 80 и 90 процената етанола током 40 минута када је однос течног материјала био 15:1 (в/в), а садржај СДС је био 1,5 процената; (4) екстрахован са 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5 и 3 процента СДС током 40 мин када је однос течног материјала био 15:1, а садржај етанола 40 процената; (5) екстрахован са различитим омјерима течног материјала (5:1, 10:1, 15:1, 20:1, 25:1 и 30:1; в/в) током 40 минута одржавањем концентрације етанола на 40 процената, а садржај СДС је био 1,5 одсто . Затим је одређен садржај екстракта СЛПФ.
3.4. Експериментални дизајн РСМ
На основу анализе резултата једнофакторских експеримената, услов екстракције СЛПФ изП. нотогинсенглист стабљике је развијен и оптимизован коришћењем тростепеног, четворофакторског ББД-а, у комбинацији са РСМ (Десигн-Екперт Софтваре, пробна верзија 8.1.0; Стат-Еасе Инц., Минеаполис, МН, САД). Свака независна варијабла је кодиран на три нивоа између -1 и плус 1, где је време (А); концентрација етанола (Б); садржај СДС (Ц); и однос течног материјала (Д) су промењени у распонима приказаним у табели 5. Садржај СЛПФ је био променљива одговора. За статистичке прорачуне коришћена је квадратна једначина другог реда на следећи начин: [34].
И= 0 плус 4∑и=1 иКси плус 4∑и=1 ииКс2и плус 3∑и=1.4∑ј=и плус 1 ијКсиКсј плус 4 ∑и=1 иииКс3и(2)
где је И предвиђени одговор, 0 је коефицијент пресека, и је линеарни чланови, ии су термини на квадрат, иј су термини интеракције, а Кси и Ксј представљају кодиране нивое независних променљивих
3.5. Анализа укупног флавоноида
Садржај тоталфлавоноидиодређен је на основу утврђене методе са неким модификацијама, а рутин је изабран као референтни стандард [35]. Осушени рутин је тачно измерен 10 мг, растворен са 20 мЛ етанола и пребачен у волуметријску тиквицу од 100 мЛ додавањем воде до скале. Серија стандардних раствора рутина у опсегу 0.0–6,0 мЛ је прецизно пренета у волуметријске боце од 25 мЛ. Затим је додат 1 мЛ 5% НаНО2; после 6 мин, додато је 1,0 мЛ 10% Ал(НО3)3 и раствор је држан 6 мин на собној температури; 10 мЛ 4% НаОХ је додато у волуметријске балоне. Овај раствор је затим разблажен воденим раствором до 25 мЛ и држан 15 минута на собној температури. Апсорбанца према празном узорку без рутина (А) је мерена на таласној дужини од 510 нм коришћењем УВ-2600 спектрофотометра (СхангхаиИуанки Инструментс Цо. Лтд., Шангај, Кина) да би се добио линеарни одговор (А {{25} }.6971Б − 0.0072,Р2=0.9992). Б је укупан садржај флавоноида (мг) на таласној дужини од 510 нм. Аликвот од 0,1 мЛ узорака је разблажен метанолом до 50 мЛ и затим је одређена концентрација укупних флавоноида на спектрофотометру. Укупан садржај флавоноида је израчунат према следећој једначини: и =м × ВМ× 100 процената (3)
3.6. Статистичка анализа
Сви подаци експеримената су обрађени софтвером Мицрософт Екцел 2010, а криве су опремљене Оригин 8.0. Статистичка анализа је извршена коришћењем СПСС 19.0.
4. Закључци
Екстракција уз помоћ ултразвука побољшала је ефикасност екстракције тоталафлавоноиди.Оптимални услови екстракције СЛПФ-а били су: време екстракције уз помоћ ултразвука од 52 мин, концентрација етанола од 48,7 процената, садржај сурфактанта СДС од 1,9 процената и однос течног материјала (в/воф 20:1; ово је резултирало 2,10 проценат садржаја СЛПФ. Препоручено је да произвођачи прилагоде ове податке за екстракцију СЛПФ на основу специфичних услова како би се постигла обимна и ефикасна производња.П. нотогинсенгекстракти листова стабљике показали су јакуантиоксидансактивност и индуковано смањење синтезе меланина инхибицијом активности тирозиназе. Наши резултати промовишу употребу П. екстракти листова стабљике нотогинсенг-а за козметичке препарате и храну је средство за избељивање коже.
антиоксиданс: цистанцхе етрацт
