Одређивање ехинакозида у воденом екстракту Цистанцхе Херба помоћу ХПЛЦ

Апстракт:

Циљ Установљена је ХПЛЦ метода заодређивање ехинакозидауводени екстракт Цистанцхехерба.

Методе Ехинакозид је одређен ХПЛЦ. Раздвајање је извршено на Инертсил ОДС-СП Ц18 колони са мобилном фазом која се састоји од ацетонитрила(А) и 0.4% раствора фосфорне киселине (Б), елуирањем у градијенту. Таласна дужина детекције је постављена на 333 нм, а температура колоне је била 30 степена. Брзина протока је била 1,0 мЛ·мин-1, а запремина ињекције је била 10 μЛ. Резултати Линеарни однос ехинакозида у опсегу концентрације од 44.939 7-539.276 4 уг ·мЛ- 1 је био добар (р=0.999 8). Опоравак је износио 94,59%-105,31% (РСД= 2,93%,н=9). Садржај ехинакозида у воденим екстрактима Цистанцхе херба био је 15.527,7.347,12.267 мг·г-1. Закључак Установљена ХПЛЦ метода са добром поновљивошћу је тачна, једноставна и изводљива. Погодан је за одређивање ехинакозида у воденом екстракту Цистанцхе херба.

Кључне речи:ХПЛЦ;водени екстракт биљке Цистанцхе херба; ехинакозид; утврђивање садржаја

Цистанцхе десертицола је тоник традиционалне кинеске медицине који се обично користи у клиничкој пракси и познат је као „пустињски гинсенг“ [1]. Цистанцхе десертицола забележена у издању Кинеске фармакопеје из 2015. је осушена месната стабљика са љускавим листовима Цистанцхе десертицола ИЦ Ма или Цистанцхе тубулоса (Сцхенк) Вигхт. Топло је, слатко и слано, враћа се у меридијане бубрега и дебелог црева. Има ефекте храњења јанга бубрега, допуњавања есенције и крви, влажења црева и лаксатива [2]. „Материа Медица из Шен Нонга“, каже да може „тонизирати средину, хранити пет унутрашњих органа, ојачати јин и хранити суштину“. Цистанцхе десертицола углавном садржи фенилетаноидне гликозиде, иридоиде и њихове гликозиде, лигнане и њихове гликозиде, полисахариде, естарска једињења и алкалоиде [3]. Фенилетанол гликозиди су главни активни састојци Цистанцхе десертицола. Међу њима, ехинакозид и вербаскозид су наведени у Цистанцхе десертицола у кинеској фармакопеји.

Индикативне компоненте за идентификацију и одређивање садржаја. Фармаколошке студије [4] показују да Цистанцхе десертицола има различите фармаколошке ефекте као што су лаксатив, заштита јетре, анти-остеопороза, антиоксиданс, против старења и умора. Водени екстракт Цистанцхе десертицола може подстаћи експресију гена коштаног морфогенетског протеина 2 у остеобластима пацова, киселој фосфатази резистентној на тартрат, остеокалцину у серуму мишева са овариектомијом и генима Смад1, мад5, трансформишући фактор раста-, итд. у коштаној сржи. , има ефекте против остеопорозе [5-6].

Ехинацеа може да подстакне пролиферацију остеобласта и да промовише диференцијацију мезенхималних матичних ћелија коштане сржи култивисаних ин витро у остеобласте [7-9]. Последњих година било је много истраживачких извештаја о одређивању садржаја ехинакозида и вербаскозида у етанолном екстракту Цистанцхе десертицола и његовим једињеним препаратима [10-12], али постоји неколико извештаја о одређивању садржаја компоненти индекса у Цистанцхе десертицола водени екстракт. У овој студији, течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) је коришћена за одређивање садржаја ехинацеасиде у воденом екстракту Цистанцхе десертицола.

1 материјал

1.1 Инструменти

ЛЦ-20АТ течна хроматографија високих перформанси, СПД-20А детектор, СИЛ-20А аутосамплер, ЦТО-10АСвп пећ на колони, радна станица за течну хроматографију раствора ЛЦ, Схимадзу Цорпоратион оф Јапан; МЕС125П-ОЦЕ-ДУ електронска аналитичка вага, компанија Сарториус, Немачка; СХЗ-Д (Ⅲ) вишенаменска вакуум пумпа за циркулишућу воду, Хенан Иухуа Инструмент Цо., Лтд.; РЦ2Б СО25 ротациони испаривач циркулациони систем за хлађење, РВ 10 Д С96 ротациони испаривач, ИКА Цомпани, Немачка; ДК-С26

Електрично водено купатило са константном температуром, Схангхаи Јингхонг Екпериментал Екуипмент Цо., Лтд.; Машина за ултрачисту воду серије УПР, Сицхуан Иоупу Ултрапуре Тецхнологи Цо., Лтд.

1.2 Лековити материјали и реагенси

Медицински материјал Цистанцхе десертицола купљен је од Гуангзхоу Линган Традитионал Цхинесе Медицине Пиецес Цо., Лтд., серијски број: 1801001, 1806001, 181001. Ту Ксингминг, главни традиционални кинески фармацеут на Трећој придруженој болници Медиочи Универзитета у Гуангџоу, идентификовао је то као осушена месната стабљика са љускавим листовима Цистанцхе десертицола ИЦМа. Узорак се чува у просторији за тестирање на лекове Треће придружене болнице Универзитета кинеске медицине Гуангџоу; Референтна супстанца гликозида ехинацее, садржај 89,7%, Кинески институт за контролу хране и лекова, број серије: 111670-

201706; ацетонитрил је хроматографски чист (Мерцк, Немачка); метанол и фосфорна киселина су аналитички чисти (Тиањин Фуиу Фине Цхемицал Цо., Лтд.); вода је ултрачиста вода.

2 Методе и резултати

2.1 Припрема воденог екстракта Цистанцхе десертицола

Узмите груби прах лековитог материјала Цистанцхе десертицола, додајте 10 пута већу количину дестиловане воде, загрејте и рефлуксујте за екстракцију два пута, сваки пут по 1 сат, филтрирајте, сједините филтрат и концентрујте филтрат помоћу ротационог испаривача до садржаја сировог лека од 0,100 г·мЛ-1 и чувајте га на 4 степена за каснију употребу.

2.2 Услови хроматографије и прикладност система

Хроматографска колона: Инертсил ОДС СП Ц18 колона (150 мм × 4,6 мм, 5 μм); мобилна фаза: ацетонитрил (А)-0.4% раствор фосфорне киселине (Б), градијент елуирања: 0 ~ 5 мин, 17%

А; 5 ~ 25 мин, 20% А; 25 ~ 30 мин, 17% А; таласна дужина детекције: 333 нм; температура колоне: 30 степени; брзина протока: 1,0 мЛ·мин-1;

Запремина ињекције: 10 μЛ. Под овим хроматографским условима, раздвајање између пикова ехинакозида и суседних компоненти је веће од 1,5, а број теоретских плоча заснованих на пику ехинацеасиде не би требало да буде мањи од 4,000. Хроматограм је приказан на слици 1.

2.3 Припрема раствора

2.3.1 Раствор референтне супстанце Измерити одговарајућу количину референтне супстанце ехинакозида, тачно је измерити, ставите је у волуметријску тиквицу од 10 мЛ, додајте метанол да се раствори и припремите раствор референтне супстанце који садржи 898,794 уг ехинацеасида по мл, 4 степена Сачувајте за каснију употребу.

2.3.2 Тест решење

Прецизно измерите 2.0 мЛ воденог екстракта Цистанцхе десертицола, испарите до сува у воденом купатилу, додајте метанол да се раствори, разблажите до запремине у мерилној посуди од 10 мЛ, добро промућкајте и филтрирајте са да се добије микропорозна мембрана од 0,22 μм.

2.4 Истраживање линеарног односа

Прецизно измерите {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 мЛ референтног раствора под тачком 2.3.1, ставите га у волуметријску тиквицу од 5 мЛ, додајте метанол да допуните запремину и добро промућкајте да добијете концентрацију градијента од 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 уг·мЛ-1 референтни раствор, филтриран кроз микропорозну мембрану од 0,22 μм. Измерити у складу са хроматографским условима под 2.2 и забележити површину пика. Извршите линеарну регресију са концентрацијом масе референтне супстанце као апсцисом (Кс, уг·мЛ-1) и површином врха као ординатом (И) и добија се регресиона једначина: И=13 185 .0Кс-32 273.0, р=0.999 8. Резултати показују да ехинацеа има добар линеарни однос у опсегу концентрације од 44.939 7 ~ 539.276 4 уг·мЛ-1.

2.5 Тест прецизности

Узмите 539.276 4 уг ·мЛ- 1 референтног раствора, убризгајте и мерите 6 пута непрекидно у складу са хроматографским условима под 2.2, и забележите површину пика. Резултати су показали да је РСД површине пика ехинакозида 1,81%, што указује на добру прецизност инструмента.

2.6 Испитивање стабилности

Прецизно одмерити 2.0 мЛ воденог екстракта Цистанцхе десертицола, испарити до сува у воденом купатилу, додати метанол да се раствори, разблажити у мерицу од 10 мЛ, добро промућкати, филтрирати помоћу {{ 7}}.22 μм микропорозне мембране, пратити хроматографске услове под тачком 2.2 и поставити на 0 и 2 респективно. , 4, 8, 12, 24 х мерење ињекције, забележите површину пика. Резултати су показали да је РСД површине пика ехинакозида 1,16%, што указује да је тест раствор имао добру стабилност у року од 24 сата.

2.7 Тест поновљивости

Прецизно измерите 2.0 мЛ воденог екстракта Цистанцхе десертицола и припремите 6 тест раствора паралелно према методи из 2.3.2. Убризгати узорке за мерење у складу са хроматографским условима под 2.2 и забележити површину пика. Резултати су показали да је РСД одехинакозидмасена концентрација је била 1,28%, што указује на добру поновљивост методе.

2.8 Тест повратка узорка

Прецизно измерите 9 порција од 1.0 мЛ воденог екстракта Цистанцхе десертицола, додајте 0.8, 1.0 и 1,2 мЛ референтног раствора (1,552 мг·мЛ{{11 }}) односно испарити до сува у воденом купатилу, додати метанол да се раствори и подесити на 10 мЛ волуметријску посуду; Добро промућкајте и филтрирајте кроз микропорозну мембрану од 0,22 μм да бисте припремили тест растворе високе, средње и ниске концентрације. Припремите 3 копије сваке концентрације паралелно. Измерити према хроматографским условима под 2.2. Забележите површину пика и израчунајте опоравак узорка. Рате. Резултати су приказани у табели 1.

2.9 Одређивање садржаја узорка

Прецизно одмерити 3 порције од 2.0 мЛ воденог екстракта Цистанцхе десертицола, испарити до сува у воденом купатилу, додати метанол да се раствори, разблажити у мерилној посуди од 10 мЛ, добро промућкати, филтрирати са микропорозну мембрану од 0,22 μм и мерити према хроматографским условима под 2.2. Забележите површину врха и израчунајте садржај ехинацеасиде. Резултати су приказани у табели 2.

Табела 1 Резултати тестова опоравка ехинакозида

Табела 2. Резултати одређивања садржаја ехинакозида у воденом екстракту Цистанцхе херба