Ефекат полисахарида Цистанцхе Десертицола на пролиферацију лимфоцита

Ванг Ксиангиан, Ки Иун, Цаи Рунлан, Ли Ксиаохонг, Ианг Меихуа, Схи Иуе

(Институт за лековито биље, Пекинг Унион Медицал Цоллеге, Кинеска академија медицинских наука, Пекинг 100193)

објективанTо проучавати ефекатЦистанцхе десертицола полисахарид(ЦДПС) на пролиферацију лимфоцита код мишева. 

МетодеМТТ тест је коришћен за откривање пролиферације лимфоцита слезине код мишева. Циклофосфамид (Ци) је коришћен за реплицирање животињских модела имунокомпромитованих животиња, а мерени су индекси слезине и тимуса нормалних и имунокомпромитованих животиња. Активност интерлеукина-2 (ИЛ-2) је мерена тестом пролиферације тимоцита. РезултатиЦистанцхе десертицола полисахаридзначајно промовише пролиферацију лимфоцита активираних митогеном (ЦонА и ЛПС) и неактивираних нормалних ћелија и подстиче лучење ИЛ-2 у лимфоцитима. Интраперитонеална примена је то показалаЦистанцхе десертицола полисахаридзначајно повећао индекс слезине нормалних и имунокомпромитованих мишева, а имао је и значајан антагонистички ефекат на смањење индекса тимуса изазвано Ци. ЗакључакЦистанцхе десертицола полисахаридможе значајно да подстакне пролиферацију лимфоцита слезине код мишева, што може бити повезано са његовом промоцијом лучења ИЛ-2.

Пустињски живи цистанцхе

[Кључне речи]Цистанцхе десертицола полисахарид; Индекс слезине; Индекс тимуса; Пролиферација лимфоцита; интерлеукин-2

Биљни полисахариди су привукли широку пажњу због својих широко распрострањених имуномодулаторних ефеката и релативно ниске токсичности [1].Цистанцхе десертицола ма, позната као "пустињски гинсенг", је љускава, сува, месната стабљика Цистанцхе десертицола, биљка Оробацеае, која има опсежна фармаколошка дејства.Његова водена децокција може значајно повећати проценат фагоцита и фагоцитни индекс макрофага.Даља истраживања су показала да је његова материјална основа укупан полисахарид Цистанцхе десертицола[3]. Зенг Кунли и др. [4] су открили да једна компонента одЦистанцхе десертицола полисахаридима значајан пролиферативни ефекат на тимусне лимфоците миша ин витро. ЕфекатЦистанцхе десертицола полисахаридна пролиферацију лимфоцита примећена је ин виво и ин витро.

Молекуларна формула Цистанцхе десертицола

1. Материјал и методе

1.1 Лекови и реагенси

Полисахарид из Цистанцхе десертицола обезбеђује Одељење за биљке и хемикалије Института за медицину и садњу Медицинског факултета. Извлачи се изЦистанцхе екстракт у праху, а садржај полисахарида је 87 одсто .

Цистанцхе екстракт у праху

Пре употребе ин виво експеримената, растворити и разблажити физиолошким раствором до потребне концентрације и прокувати за стерилизацију. Пре употребе ин витро експеримената, медијум за културу РПМИ-1640 је растворен и разблажен и извршена је стерилизација под високим притиском. Липополисахарид (ЛПС), конканавалин (ЦонА), дексаметазон (ДЕКС) и МТТ су сви производи Сигма Цорпоратион. Циклофосфамид, кинеско-америчко заједничко предузеће Сханки Таисхенг Пхармацеутицал Цо., Лтд. Фетални говеђи серум, РПМИ1640 медијум за културу и трипсин су сви Гибцо производи. Остали реагенси су домаћи аналитички реагенси.

1.2 Животиње

Младе мишеве БАЛБ ц (СПФ ниво) обезбеђује Витон Лихуа Екпериментал Анимал Тецхнологи Цо., Лтд. [СЦКСК (Пекинг) 2002-2003]. Животиње СПФ разреда се узгајају у просторији и слободно се хране и пију.

1.3 Апарат

Мултикан Асцент ензимски маркер, производ компаније Тхермо Елецтрон, САД. Леици ПХС-3Б Прецизни пХ метар, Схангхаи Прецисион Сциентифиц Инструмент Цо., Лтд. Напцо 5410 инкубатор угљен-диоксида, НАПЦО, САД. БЦН-1360 Ултра Цлеан Воркбенцх, Беијинг Донглианхар Инструмент Мануфацтуринг Цо., Лтд. КСДС-1Б инвертни микроскоп, Цхонгкинг Оптоелецтрониц Инструмент Цо., Лтд.

1.4 Метод

1.4.1 Утицај на пролиферацију лимфоцита [5]:

Рутинска припрема лимфоцита слезине од БАЛЛ ц мишева, коришћењем РПМИ-1640 за подешавање концентрације ћелија на 1 × 107 мЛ, инокулисаних на плочу за културу са 96 јажица, са 100 суспензија ћелија додатих у сваки бунар μ 50. -култивисан са различитим концентрацијамаЦистанцхе десертицола полисахарид(коначна концентрација одЦистанцхе десертицола полисахаридза пролиферацију неактивираних лимфоцита 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 мг/Л по реду; коначна концентрација одЦистанцхе десертицола полисахаридза пролиферацију ЦонА-активираних Т лимфоцита било је 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 и 62,5 мг/Л по реду; и коначна концентрација одЦистанцхе десертицола полисахаридза пролиферацију ЛПС активираних Б лимфоцита била је 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 и 25 мг/Л по реду), а ЦонА или ЛПС, РПМИ-1640 медијум је коришћен као контрола. Укупна запремина сваке рупе је 200 μЛ, када се додају митоген ЦонА и ЛПС (контрола је РПМИ-1640 која садржи одговарајуће концентрације ЦонА или ЛПС), коначне концентрације оба су 2,5 мг Л и 10 мг Л, редом. Направљене су три паралелне рупе за различите третмане. Поставите плочу за културу у инкубатор са влажношћу од 37 степени, 5 процената ЦО2 засићеног влажношћу на 68 сати, додајте МТТ и наставите са култивисањем 4 сата. Измерите вредност А540 нм помоћу маркера ензима користећи МТТ метод да бисте открили пролиферацију. Када упоредите сваку групу, претворите вредност А540нм у брзину пролиферације лимфоцита према следећој формули:стопа пролиферације лимфоцита=Контрола узорка А × 100 процената .

Ефекти Цистанцхеа—Побољшајте имунитет

1.4.2 Утицај на тежину имуних органа код нормалних мишева [6,7]:

Млади БАЛБ ц мишеви (мужјаци, стари 4-недеља, са телесном тежином од 10-15 г) су насумично подељени у празну контролну групу (физиолошки раствор) и различите групе за дозирање (125 мг (кг · т.м.)) и 250 мг (кг · бв)), са 11 пацова у свакој групи. Лек је даван интраперитонеално једном дневно током 7 узастопних дана. Мишеви су убијени након дислокације грлића материце. Узети су слезина и тимус, уклоњено је масно ткиво и ткиво фасције, а површинска течност је осушена филтер папиром. Након вагања, индекс слезине =100 × тежина слезине (мг) Телесна тежина (мг); Индекс тимуса=100 × Тежина тимуса (мг) Телесна тежина (мг) Израчунајте индекс слезине и индекс тимуса за сваких 100 мг телесне тежине, респективно.

1.4.3 Утицај на тежину имунолошког органа код имунокомпромитованих мишева [7,8]:

Млади БАЛБ ц пацови (мужјаци, стари 6 недеља, телесна тежина 15-20 г) су насумично подељени у 12 група према телесној тежини. Осим нормалне контролне групе (интраперитонеална ињекција еквивалентне запремине физиолошког раствора), осталим групама је интраперитонеално даван Ци 50 мг (кг · бв) дневно, а раствор тестног лека је даван интраперитонеално [125 и 250 Мг (кг · бв)], нормалној контролној групи и моделној групи давана је иста запремина физиолошког раствора током 13 узастопних дана, једном дневно. Током експеримента примећене су промене у тежини животиња. 24 сата након последње примене, мерени су и израчунати индекси слезине и тимуса користећи исти метод као у 1.4.2.

1.4.4 Утицај на активност ИЛ-2:

① Индукција ИЛ-2 [9]: Додајте 50 у сваки бунар на 96-ћелијској плочи μЛ Различите концентрацијеЦистанцхе десертицола полисахарид(коначне концентрације по редоследу: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 мг/Л, додати 50 мг/Л у контролну јажицу μЛ медијум културе) и 50 μЛ ЦонА (коначна концентрација 5 мг/Л), додати Још 1 по бунарчићу × 106 ћелија слезине. Инкубирајте у инкубатору са влажношћу од 37 степени, 5 процената ЦО2 засићеним 24 сата, центрифугирајте 20 минута на 2500 р мин, и узмите ћелијски супернатант и чувајте га на - 20 степени за стање приправности. ② ИЛ-2 детекција активности [9,10]: Основна метода је заснована на литератури [9], а одговарајућа прилагођавања се врше према литератури [10]. Конвенционална припрема БАЛБ ц суспензије тимоцита миша, плоче са ћелијском културом са 96 јажица, 1 инокулација по бунарчићу × 106 тимоцита, уз додавање 50 ћелија по бунарчићу μЛ ЦонА (коначна концентрација 2,5 мг/Л), а затим додати припремљени ИЛ{{34 }} супернатант 50 μЛ (додати 50 у празну контролну рупу μЛ раствор културе), инкубирајте заједно 54 сата, додајте МТТ, наставите са инкубацијом 4 сата, центрифугирајте 10 до 15 минута на 1000 р мин, баците супернатант, и додајте ДМСО 100 по бунарчићу μЛ, протресите микро осцилатором 8 минута и измерите вредност А540 нм помоћу маркера ензима.

1.5 Статистичка анализа

Подаци су изражени као средња вредност и стандардна девијација (к ± с). За сређивање података коришћен је софтвер Мицрософт Екцел, а спроведен је и т-тест. П<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2.Резултати

2.1 Утицај на пролиферацију лимфоцита

Као што се види из табеле 1, додајућиЦистанцхе десертицола полисахариду медијум културе лимфоцита слезине миша култивисани ин витро у концентрацији изнад 25 мг/Л може значајно стимулисати пролиферацију лимфоцита, што указује даЦистанцхе десертицола полисахаридсама има митотички ефекат. Истовремено,може се видети из табеле 2 и табеле 3 да ЦДПС има значајан промотивни ефекат на пролиферацију ЦонА-индукованих Т лимфоцита или ЛПС-индукованих Б лимфоцита.

Таб.1 Утицај одЦистанцхе десертицола полисахаридна пролиферацију неактивираних лимфоцита (к ±с, н =3)

Напомена: у поређењу са контролном групом,＊P <0.05. 

Таб.2 Утицај наЦистанцхе десертицола полисахаридна пролиферацију Тлимфоцита изазвану ЦонА (к ±с, н =3)

Напомена: у поређењу са ЦонА групом,＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Таб.3 Утицај одЦистанцхе десертицола полисахаридна пролиферацију лимфоцита изазвану ЛПС (к ±с, н =3)

Напомена: у поређењу са ЛПС групом,＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 Утицај на тежину имуних органа код нормалних мишева

Као што се може видети из табеле 4,Цистанцхе десертицола полисахаридможе значајно повећати индекс слезине нормалних БАЛБ ц младих пацова, али нема утицаја на тимусну жлезду.

2.3 Утицај на тежину имунолошког органа код имунокомпромитованих мишева

Из табеле 5,може се видети да су индекси органа слезине и тимуса код мишева у Ци имуносупресивној групи нижи од оних у контролној групи, иЦистанцхе десертицола полисахарид(125, 250 мг/кг) може значајно побољшати индексе слезине и тимуса.

2.4 Утицај на активност ИЛ-2

Као што се може видети из табеле 6,када је доза одЦистанцхе десертицола полисахариддостиже 7,82 мг/Л, може значајно повећати ослобађање ИЛ-2 из ћелија слезине миша.

Таб.4 Ефекат одЦистанцхе десертицола полисахаридна тежину имуних органа код нормалних мишева (к ±с, н =11)

Напомена: у поређењу са контролном групом,＊＊P <0.01.

Таб.5 Ефекат одЦистанцхе десертицола полисахаридо тежини имунолошких органа код имунодепресивних мишева (к ±с, н =12)

Напомена: у поређењу са контролном групом,## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Таб.6 Утицај наЦистанцхе десертицола полисахаридна производњу ИЛ-2 од стране лимфоцита слезине код мишева (к ±с, н =3)

Напомена: у поређењу са контролном групом,＊＊P <0.01. 

3. Дискусија

ЦонА и ЛПС-индукована пролиферација лимфоцита слезине код мишева је ин витро експеримент за откривање функције Т и Б лимфоцита и важан је индикатор специфичне имунолошке способности. Студије су показале да када коначна концентрација одЦистанцхе десертицола полисахаридје изнад 25 мг/Л, може значајно да подстакне пролиферацију лимфоцита, што указује да има одређени митотички ефекат. У присуству митогена (ЦонА или ЛПС), мања доза одЦистанцхе десертицола полисахаридможе побољшати имунитет тела, показати значајну пролиферативну активност. Знамо да ЦонА и ЛПС углавном индукују пролиферацију Т лимфоцита или Б лимфоцита, респективно. Студије су показалездравствене предности цистанцхе праха: Цистанцхе десертицола полисахаридможе да промовише и пролиферацију Т лимфоцита и пролиферацију Б лимфоцита, али је његов пролиферативни ефекат на Б лимфоците знатно јачи него на Т лимфоците.

Здравствене предности Цистанцхе праха—импрове имунитет

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Импрове Иммунити

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Тимус и слезина су главни имуни органи код животиња. Имунске ћелије у слезини су углавном зрели Б лимфоцити, док су тимус углавном незрели Т лимфоцити. Индекси тимуса и слезине могу одражавати развој имунолошких органа и функционални статус имуних ћелија. Интраперитонеална ињекција полисахарида Цистанцхе десертицола може значајно повећати индекс слезине нормалних и имуносупресивних мишева и има значајан антагонистички ефекат на атрофију тимуса изазвану Ци код мишева.Цистанцхе десертицола полисахариднема значајан утицај на тимусни индекс код нормалних животиња, што је у складу са резултатима ин витро експеримената у којимаЦистанцхе десертицола полисахаридпромовише пролиферацију Б лимфоцита пре него Т лимфоцита.

Cистанцхе додатак близу мене—Импровеимунитет

ИЛ-2 је цитокин који производе Т лимфоцити од Г1 фазе ћелијског циклуса до С фазе. То је главни фактор раста Т ћелија који делује као аутокрини фактор раста. Поред тога, ИЛ-2 може да подстакне пролиферацију Б ћелија и синтезу антитела [11,12].Цистанцхе десертицола полисахаридпромовише ослобађање ИЛ-2 из лимфоцита, што је очигледно повезано саЦистанцхе десертицола полисахаридподстичући пролиферацију лимфоцита слезине.

Медицинска истраживања показују да Цистанцхе садржи полисахариде,Ехинакозиди и актеозид, који може активирати лимфоците и iммпобољшати имунитет телаи; функционалне компоненте цистанцхе фенилетаноидних гликозида имају значајан утицај на опоравак ћелија након оштећења 60 Цо гама зракама, а такође могу побољшати имунолошку функцију против оштећења радијацијом.Свакодневним узимањем Цистанцхе десертицола додатка може се постићи ефекат побољшања имунитета.

Cистанцхе додатак у мојој близини—Побољшајте имунитет

референца

[1] Сцхепеткин ИА, Куинн МТ .Ботанички полисахариди: имуномодулација макрофага и терапеутски потенцијал [Ј]. Инт Иммунопхармацол, 2006, 6(3):317-333.

[2] Хе Веи, Сху Ксиаофен, Зонг Гуизхен, ет ал. Студија о ефектима Цистанцхе десертицола на тонирање бубрега и промовисање јанга пре и после обраде [Ј]. Кинески часопис за фармацију, 1996, 21 (9): 534-537

[3] Ванг Ксиангиан, Ки Иун, Цаи Рунлан, ет ал. Макрофагна активација полисахарида Цистанцхе десертицола [Ј]. Кинески фармаколошки билтен, 2009, 25 (6): 421-424

[4] Зенг Кунли, Зхенг Иифан, Лв Зхилианг. Имунолошка активност и механизам полисахарида Цистанцхе десертицола [Ј]. Јоурнал оф Зхејианг Университи (Медицинско издање), 2002, 31 (4): 284-287

[5] Ксу Схуиун, Биан Рулиан, Цхен Ксиу. Фармаколошка експериментална методологија [М]. 3. издање, Пекинг: Издавачка кућа народног здравља, 2002, 1427-1428

[6] Зханг Ксу, Зханг Гуоронг, Цхе Веи, ет ал. Ефекат хелата колагенског полипептида хрома (Ⅲ) на имунитет мишева са дијабетесом [Ј]. Кинески часопис за експерименталне животиње, 2008, 16 (1): 10-14

[7] Цхен Ки. Методологија фармаколошког истраживања традиционалне кинеске медицине [М]. Прво издање. Пекинг: Издавачка кућа народног здравља, 1993:779

[8] Гуо Јинг, Ксу Јианнинг, Ванг Куанкаи, ет ал. Ефекат екстракта соје (ЦКБН) на имунолошку функцију код имунокомпромитованих мишева [Ј]. Кинески часопис компаративне медицине, 2008, 18 (12): 45-49

[9] Ксу Схуиун, Биан Рулиан, Цхен Ксиу. Фармаколошка експериментална методологија [М]. 3рд Едитион, Пекинг: Пеопле'с Хеалтх Публисхинг Хоусе, 2002: 1440-1441

[10] Џоу Даохонг, Шен Јуаншан, Џао Манруи. Нова метода за одређивање трансформације лимфоцита и активности интерлеукина 2 миша - МТТ колориметријска анализа [Ј]. Кинески часопис за имунологију, 1986, 2 (1): 39-43

[11] Ванг МК, Гуилберт Љ, Ли Ј, ет ал. Власнички екстракт из северноамеричког гинсенга (Панак куикуефолиум) побољшава производњу ИЛ-2 и ИФН у ћелијама слезине миша изазвану Цон-А [Ј]. Инт Иммунопхармацол, 2002, 4(2):311-315.

[12] Тингјун Х, Ронглианг З. Промоција полисахарида сопхора субпросрате на производњу азотног оксида и интерлеукина-2 у мишјим Т лимфоцитима: имплицирани Ца 2 плус и протеин киназа Ц [Ј] .Инт Иммунопхармацол, 2004, 4(1):109-118.