Ефикасност и механизми једињења влакана Ангелица Синенсис Цистанцхе за ублажавање опстипације

Апстрактан:Затворје распрострањена болест која може значајно утицати на квалитет живота људи и повећати ризик од неких повезаних болести. У овој студији, модел миша са акроничним затвором је успостављен коришћењем лоперамид хидрохлорида. Мишевима је дат једињење Ангелица синенсис Цистанцхе Фибер Цомпоунд, које се састоји од Данг Гуија [Ангелица синенсис (Олив.) Диелс],Роу Цонг Ронг (Цистанцхе десертицолаИ.Ц.Ма), пшенична влакна и ксилан ниске молекулске тежине у високој дози (3,6 г·кг-1, 30пута препоручене дозе за људе) и ниској дози (0,6 г·кг{{8} }, 5 пута већа од препоручене људске дозе) током 14 дана. Студија је проценила терапијску ефикасност једињења посматрањем фекалне морфологије, мерењем садржаја воде и спровођењем експеримената мотилитета танког црева. Поред тога, спроведени су тестови имуносорбента везаних за ензиме (ЕЛИСА) да би се проценили нивои гастроинтестиналних хормона у серуму укључујући мотилин (МТЛ), гастрин (ГАС), инфламаторне факторе интерлеукин-1 (ИЛ-1) и фактор некрозе тумора Сериа: (ТНФ-). Хистопатолошко испитивање са Х&Е бојењем је коришћено за процену оштећења ткива дебелог црева. Поред тога, спроведени су Вестерн блот и имунохистохемијски експерименти да би се испитали нивои експресије аквапорина-3 (АКП3) и ц-Кит у дебелом цреву. Резултати су показали да једињење влакана Ангелица синенсис Цистанцхе може побољшати фекалну морфологију, повећати садржај фекалне воде и повећати брзину проласка кроз танко црево код мишева. Поред тога, дошло је до значајног повећања нивоа гастроинтестиналних хормона у серуму и значајног смањења нивоа инфламаторних фактора. Побољшање хистопатолошког оштећења колона праћено је значајним смањењем експресије АКП3 протеина воденог канала дебелог црева и значајним повећањем експресије ц-Кит. Ови резултати заједно сугеришу присуство односа доза-одговор. Ови налази указују на то да једињење влакана Ангелицасиненсис Цистанцхе ефикасно ублажава затвор код мишева. Његово деловање је повезано са регулацијом експресије протеина АКП3 и ц-Кит канала колона, заједно са модулацијом серумских инфламаторних фактора и гастроинтестиналних хормона. Овај експеримент је одобрио Етички комитет експеримента на животињама Универзитета Јинан.

Кључне речи:затвор; подмазивање црева и олакшање констипације; функционална храна; дебело црево; Традиционална кинеска медицина

КОЛИКО ЈЕ ТРЕБА ДА ЦИСТАНЦХЕ проради?

Затворјеуобичајена гастроинтестинална болест. The global prevalence of constipation in the elderly (>60 година) износи 18,9%[1], а преваленција је често већа код жена[2]. Одликује се тешкоћом дефекације и честим затвором. смањење и стврдњавање фецеса итд., што доводи до физичке нелагодности и гастроинтестиналне дисфункције, па чак и изазивања или погоршања гастроинтестиналних болести, кардиоваскуларних болести [3] итд., што озбиљно утиче на квалитет живота. Рецепти традиционалне кинеске медицине се широко користе за побољшање опстипације и имају добре и јасне клиничке ефекте [4,5]. Једињење влакана Ангелица и Цистанцхе десертицола коришћено у овој студији је припремљено од Цистанцхе десертицола, Ангелица синенсис, пшеничних влакана и ксилоолигосахарида. Цистанцхе десертицола и Ангелица синенсис су два најчешће коришћена традиционална кинеска лека у лаксативима, који утичу на регулисање функције црева и побољшање опстипације. [6-9], два традиционална кинеска лека имају исто порекло као лекови и храна у мојој земљи. Њиховом комбинованом употребом може се постићи ефекат обнављања чи-ја и крви и хармонизације јина и јанга. Пшенична влакна су богата нерастворљивим и растворљивим дијететским влакнима, која могу подстаћи перисталтику црева и дефекацију, а често се користе као помоћни лек за лечење затвора; ксило-олигосахарид је функционални олигосахарид који може регулисати цревну флору, чиме стимулише перисталтику црева. , повећавају влажност фецеса [10], комбинују четири укуса и лече основни узрок болести. Ова студија је имала за циљ да процени ефикасност овог једињења влакана анђелике и цистанцхе десертицола на мишевима са затвором и истражи његов могући механизам деловања.

Материјали и методе

Експерименталне животиње: 40 мушких Кунминг мишева без специфичних патогена (СПФ), старих 4 до 5 недеља, купљено је од Беијинг Веитонг Лихуа Екпериментал Анимал Тецхнологи Цо., Лтд., број лиценце СЦКСК (Гуангдонг) 2021-0011, Тхе температура околине је 22 ± 2 степена, влажност је 50% ± 10%, а дневни и ноћни циклус је 12 х/12 х. Експериментални протоколи и процедуре су у складу са етичким принципима употребе и неге животиња и одобрени су од стране Етичког комитета за експериментисање на животињама Универзитета Јинан.

Испитна супстанца: Препарат влакана Ангелица синенсис и Цистанцхе десертицола је направљен од Ангелица Синенсис и Цистанцхе десертицола, који се екстрахују водом, концентрују, осуше и уситњају да се добије суви прах пасте (принос пасте је 52,95%). Прашак суве пасте се помеша са пшеничним влакнима и ксило-олигосахаридом за каснију употребу. Ангелица синенсис (број серије 230404ЦП108) и Цистанцхе десертицола (број серије 230303ЦП109) су купљени од Хебеи Ванкиу Пхармацеутицал Цо., Лтд. и тестирани су да буду у складу са издањем кинеске фармацеутике из 2020. Ксило-олигосахариди су купљени од Схандонг Баилонг ​​Цхуангиуан Биотецхнологи Цо., Лтд. Број серије је 20210829026, а инспекција је у складу са ГБ/Т35545; пшенично влакно долази од Ј. Реттенмаиер & Сохне ГмбХ + Цо КГ, а серијски број је 07501230126. На основу одрасле особе од 60 кг, препоручена доза једињења анђелике и цистанцхе влакана за људе је 7,118 г·д-1 , од којих је доза пшеничних влакана 3,5 г·д-1. Компатибилност овог једињења је анђелика: цистанцхе: пшенична влакна: ксилоолигосахариди=2:2:3:2 (дозирање комада децокције је засновано на сировом леку). Узмите 30 пута већу препоручену дозу за људе као групу са високим дозама и 5 пута већу од препоручене дозе за људе као групу са ниским дозама, односно 3,6 односно 0,6 г·кг-1·д-1. Припремите суспензију са чистом водом, добро промешајте и оставите на страну.

Лекови и реагенси Лоперамид хидрохлорид (лоперамид, ЛОП), спецификације: Свака таблета садржи лоперамид хидрохлорид

Амин 2 мг, 12 капсула/кутија, број серије производа: МИЈ3102, купљен од Кси'ан Јанссен Пхармацеутицал Цо., Лтд.; Мосаприде Цитрате Таблете (Куали), спецификације: Свака таблета садржи 5 мг Мосаприде Цитрата, 24 таблете/кутији, број серије производа: 25220603, купљен од Лунан Беите Пхармацеутицал Цо., Лтд.; активни угљен у праху, спецификација: 200 месх браон прах, серијски број А805337, купљен од Схангхаи МцЛеан Биоцхемицал Тецхнологи Цо., Лтд.; арапска гума, спецификација: прах, серијски број А108975, купљен од Схангхаи Аладдин Биоцхемицал Тецхнологи Цо., Лтд.

Апсолутни етанол (Тиањин Дамао Цхемицал Реагент Фацтори, 64-17-5); Амонијум персулфат (Схангхаи МцЛеан Биоцхемицал Тецхнологи Цо., Лтд., А6295-500г); Трис-Басе (ФД2010), 5× пуфер за пуњење (ФД002), -актинско антитело (ФД0060), козје анти-зечје секундарно антитело (ФДР007), козје секундарно антитело против миша (ФДМ007) и ЕЦЛ комплет за развој боје (ФД8020) сви су купљени од Хангзхоу Фуде Биотецхнологи Цо., Лтд.; РИПА пуфер за лизу (Схангхаи Бииунтиан Биотецхнологи Цо., Лтд., П0013Б); 4% параформалдехида (Биосхарп Цомпани, БЛ539А); Комплет за имунохистохемију (Јиангсу КГИ Биотецхнологи Цо., Лтд., КГОС60); бицинхонинска киселина (БЦА) комплет за квантификацију протеина (Тхермо Фисхер Сциентифиц, СЛЗ60212); мотилин (МТЛ), гастрин (ГАС) и инфламаторни фактори интерлеукин-1 (ИЛ-1), фактор некрозе тумора (фактор некрозе тумора-, ТНФ-) ЕЛИСА комплет (Схангхаи Ензиме Биотецхнологи Цо., Лтд ., ИЈ201829, ИЈ037432, ИЈ002095, ИЈ301814); антитело на аквапорин 3 (аквапорин 3, АКП3) (Аффинити Цомпани, АФ5222); ц -Кит антитело (Технологија ћелијске сигнализације, 3074С).

Инструмент: Мерач за супер чисту воду (Миллипоре Цомпани, САД, Милли К); Електронски биланс (Сарториус, Немачка)

Компанија, БС224С); Електронска аналитичка вага (Схангхаи Бенпу Инструмент Тецхнологи Цо., Лтд., ФА2204Н); Брза расхладна центрифуга (Сигма Цомпани, Немачка, 3К15); Читач микроплоча (Тхермо Цомпани, САД, Мултискан Мк 3); Парафински микротом (Леица, Немачка) Компанија, РМ2255); Метално купатило са константном температуром (Схангхаи Иихенг Тецхнологи Цо., Лтд., ТУ-100Ц); Потпуно аутоматски брзи млин за узорковање (Схангхаи Јингкин Тецхнологи Цо., Лтд., ЈКСФСТПРП-24); Инструмент за електрофорезу (Беијинг Лиуии Биотецхнологи Цо., Лтд., ДИИ-6Ц); скенирајући микроскоп (Преципоинт Цомпани, Преципоинт М8); систем за хемилуминисценцију (Схангхаи Тианненг Тецхнологи Цо., Лтд., Танон 5200).

Груписање и успостављање модела: 40 мишева је адаптивно узгајано током 5 дана, а затим насумично подељено у негативне контролне групе.

(контрола), група модела (ЛОП), групе високе и ниске дозе једињења (ЛОП+ПФ-Х, ОП+ПФ-Л), позитивна контролна група (мосаприд цитрат, ЛОП+МОС). У 9 до 1{15}} сваког дана, свим групама осим негативне контролне групе давано је 10 мг·кг-1 лоперамид хидрохлорида путем сонде да би се установио модел опстипације код миша, а негативној контролној групи је дато једнака количина чисте воде путем сонде. Од 14 до 15 сати, групама са високим и малим дозама једињења дато је једињење 3,6 и 0,6 г·кг-1 респективно, а позитивној контролној групи дат је мосаприд цитрат (МОС) 5 мг·кг{{ 19}}.

, негативној контролној групи и моделној контролној групи даване су једнаке количине чисте воде путем сонде током 14 узастопних дана.

Статус и карактеристике фецеса мишева су посматрани и забележени током периода интервенције лека. Забележен је основни статус и измет мишева у свакој групи.

Карактери, измерите 3 пута недељно и прилагодите дозу. Дана 3, 7, 10 и 14 након примене, сакупљено је 3 до 4 пелета свежег фецеса од сваког миша, одмах измерено и забележено као мокра тежина, осушено у пећници и забележено као сува тежина, а фекална влага садржај је израчунат. Израчунајте садржај фекалне влаге (%)=(мокра тежина − сува тежина)/мокра тежина × 100%.

Одређивање погонске функције танког црева спроведено је према експерименталним методама које захтевају референтна литература [11] и „Методе за испитивање и оцену функционалних функција здраве хране (2023 издање)“. Након последње дозе, мишеви у свакој групи су 16 сати на гладовању и без воде. Група модела, формула једињења. Групе са високим и ниским дозама и позитивна контролна група добиле су суспензију лоперамид хидрохлорида (10 мг·кг-1) путем сонде, а негативној контролној групи је дато једнака количина чисте воде путем сонде. 0.5 х касније, групама са високим и ниским дозама једињења и позитивној контролној групи дато је мастило (са 5%) које садржи одговарајуће дозе тестног узорка (3,6 г·кг-1, 0,6 г·кг-1, 5 мг·кг-1) респективно. (прашак активног угља, 10% гума арабика) и једнаке количине мастила дате су негативним и моделним групама. Животиње су усмрћене одмах после 0,5 х цервикалним ишчашењем и мерене су „укупна дужина танког црева” и „дужина напредовања мастила”. Израчунајте брзину напредовања мастила=дужину напредовања мастила (цм)/укупну дужину танког црева (цм) × 100%.

Да би се открили нивои МТЛ, ГАС, ТНФ- и ИЛ-1 у серуму, узета је крв из очних јабучица миша, центрифугирана на 4 степена, 3 500 р·мин-1 за 10 минута, горњи серум је узет, а МТЛ и ГАС у мишјем серуму су одређени према ЕЛИСА комплету. и нивои ТНФ-, ИЛ-1.

Х&Е открива патолошке промене у ткиву дебелог црева. Дебело црево мишева је испрано нормалним физиолошким раствором и инкубирано у 4% параформалдехиду.

Они су фиксирани у алдехиду, рутински уграђени након 24 сата, исечени, печени и обојени Х&Е, а патолошке промене ткива дебелог црева су посматране под светлосним микроскопом.

Имунохистохемијска метода је коришћена за детекцију експресије АКП3 и ц-Кит у ткиву дебелог црева. Сакупљена су ткива дебелог црева мишева из сваке групе.

Парафинске секције, депарафинација, хидратација, узимање антигена, блокирање ендогене каталазе, блокирање са 2% козјег серума, додавање АКП3 и ц-Кит антитела, респективно, и инкубација преко ноћи на 4 степена, фосфатно пуферисан физиолошки раствор, ПБС) током 5 мин. дехидратација етанола, провидност ксилена, неутрално заптивање гуме, скенирање под микроскопом за скенирање и коришћење софтвера Имаге Ј за анализу резултата.

Вестерн блот метода је коришћена за детекцију експресије АКП3 и ц-Кит у ткиву дебелог црева. Узмите 10 мг замрзнутог ткива дебелог црева миша и ставите га у епрувету за центрифугирање са 150 μЛ РИПА пуфера за лизу који садржи 1% инхибитор протеазе. Користите брзи млин да хомогенизујете ткиво. , центрифугирајте хомогенат са нискотемпературном центрифугом на 10 000 р·мин-1 10 минута, узмите супернатант, одредите концентрацију протеина методом квантификације БЦА протеина, помешајте га са пуфером за пуњење, денатурирајте протеина и анализирати резултате према сваком узорку. 30 уг протеина је напуњено, подвргнуто СДС-ПАГЕ електрофорези, влажном трансферу на мембрану, а затим блокирано са 5% обраног млека у праху на собној температури током 1,5 х, испрано три пута са ТБСТ, стављено примарно антитело на шејкер и инкубирано преко ноћи 4 степена, затим уклоњен и испран ТБСТ пуфером. Испрати 3 пута раствором, инкубирати са секундарним антителом 1 х на собној температури и затим испрати 3 пута са ТБСТ. ЕЦЛ хемилуминисцентни радни раствор се користи за развој боја, а за развој се користи потпуно аутоматски систем хемилуминисценције. За анализу резултата користи се софтвер Имаге Ј.

Статистичке методе Сви подаци укључени у овај експеримент су изражени у облику средње вредности ± стандардна девијација. ГрапхПад Присм је коришћен за цртање експерименталних података, а поређење између група је извршено коришћењем једносмерне АНОВА или двосмерне АНОВА; када су разлике између група биле статистички значајне, коришћена је метода најмање значајне разлике (ЛСД). ) Направите парна поређења између група, а П < 0.05 се сматра статистички значајном разликом.