Процена антиоксиданата, избељивања и анти-агинг својстава хидролизата пиринчаних протеина

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791

Хуи-Ју Цхен 1,2, Фан-Јхен Даи 2, Цхенг-Иоу Цхен 3, Сиао-Линг Фан 2, Ји-Хонг Зхенг 4, Иу-Цхун Хуанг 2, Цхи-Фаи Цхау 1, Иунг-Схенг Лин 3, 4,5,* и Цхин-Схух Цхен 1,*

Апстрактан:Хидролизати протеина биљног порекла имају потенцијалну примену у исхрани. Протеински хидролизати пиринча (РПХс), одличан извор протеина, привукли су пажњу за развој козмецеутике. Међутим, неколико студија је пријавило потенцијалну примену РПХ у анализи, а ова студија је испитала њиховуантиоксидансактивности и инхибиторне активности ензима старења коже. Резултати су показали да су укупне концентрације фенола и флавоноида биле 2.06 ± 0.13 мг еквивалента галне киселине/г РПХ и 25,96 ± 0,52 µг еквивалента кверцетина/г РПХ, редом. РПХ су показали активност зависно од дозе за уклањање слободних радикала из 1,1-дифенил-2-пикрилхидразила [полу-максимална инхибиторна концентрација (ИЦ50)=42.58 ± 2,1 мг/г РПХс] и 2 ,20-азино-бис (3-етилбензотиазолин-6-сулфонска киселина) (ИЦ50=2.11 ± 0,88 мг/г РПХс), капацитет редукције зависан од дозе (6,95 ± 1,40 мг еквивалента витамина Ц/г РПХ) и капацитет апсорпције радикала кисеоника (473 µмол Тролок еквивалент/г РПХс). Концентрације раствора РПХ потребне за постизање 50 процената инхибиције хијалуронидазе итирозиназеактивности су утврђене на 8,91 и 107,6 мг/мЛ, респективно. Ова студија је показала да РПХ имајуантиоксидансактивности антихиалуронидазе и антитирозиназе за будућу козметичку примену.

Кључне речи:хидролизат пиринчаног протеина;антиоксиданс; хијалуронидаза;тирозиназе; козметички

цистанцхеизбељивањеефекатна кожи даантиоксидација

1. Представљање

Изложеност ултраљубичастом зрачењу је одговорна за фотостарење (или спољашње старење); у супротности, реактивне врсте кисеоника које се производе у ћелијском метаболизму и погоршање биолошких функција одговорни су за унутрашње старење [1,2]. Прерађена храна често садржи природнуантиоксидансикао што су катехини, аскорбинска киселина, токофероли, розмаринска киселина и фенолни екстракти из различитих биљака. Истраживања спроведена о природним антиоксидансима сада узимају у обзир нетрадиционално порекло. Натуралли соурцедантиоксидансису пожељнији него хемијски произведениантиоксидансипошто су неки синтетички антиоксиданси пријављени као канцерогени [3]. Пиринач (Ориза сатива) је главна намирница у исхрани људи широм света, посебно оних који живе у Азији. Годишња производња пиринча у свету износи око 741 милион тона [4]. У азијским земљама, пиринач је наводно извор 75 процената енергетског уноса за преко 2 милијарде људи [5]. Екстензивна производња пиринча резултира одговарајућом количином производње нуспроизвода. Остатак производа из процеса производње пиринча садржи већину протеина зрна (~60–85 процената), али се баца или користи за исхрану животиња [6–8]. Пептиди добијени из различитих хидролизата протеина наводно делују као потенцијалниантиоксиданси[9]. Природни и нетоксични антиоксиданти се стога потенцијално могу екстраховати из хидролизата протеина хране. Бројни научници су користили моделе богате липидима и пријавили хидролизате протеина, као и пептиде протеина млека, зеина и соје који имају кључне антиоксидативне карактеристике, укључујући уклањање слободних радикала, инхибицију хране и пероксидацију липида ин витро, и хелацију прелазних метала [10– 12].

Хијалуронска киселина (ХА) помаже у подмлађивању коже јер повећава вискозитет, садржи влагу и чини екстрацелуларне течности мање пропусним. Због свог одличног капацитета задржавања воде, ХА повећава младост, хидратацију и глаткоћу коже и смањује степен бора [13,14]. Нажалост, ниво ХА у кожи природно опада са годинама. Хијалуронидаза је ензим који уништава ХА, узрокујући губитак снаге, флексибилности и влаге коже, што заузврат доводи до старења коже. Због тога се боре могу третирати инхибицијом хијалуронидазе и одржавањем садржаја ХА у кожи [15,16]. Ензим који производи меланинтирозиназевитално доприноси кораку који ограничава брзину процеса кроз који се производи меланин. Због тога се поремећаји пигментације обично лече, а сјај коже се постиже инхибицијом или смањењемтирозиназеактивност [17,18].

У неколико студија откривено је да хидролизати протеина зрна и пептиди који се из њих могу добити имају антиоксидативно, антихипертензивно и антитуморско дејство [19,20]. Позитиван допринос људском здрављу пептида и протеина који потичу из хране постепено се препознају [21]. Потрошачи све више захтевају да козметичка и здравствена индустрија користе природна биоактивна једињења. Протеински хидролизати пиринча (РПХ) привукли су пажњу као одличан извор протеина. Међутим, неколико студија је известило о карактеризацији и функционалној анализи РПХ. Стога је ова студија проценила антиоксидативну активност и хијалуронидазу итирозиназе-инхибиторне активности РПХ.

2. Резултати и дискусија

2.1. Укупна концентрација фенола (ТПЦ) и укупан садржај флавоноида (ТФЦ)

Стандард у ТПЦ тесту била је гална киселина неколико концентрација. Висока апсорпција указује на виши ТПЦ. ТПЦ узорака РПХ добијен је уношењем вредности оптичке апсорбанције РПХ узорака у калибрационој криву галне киселине. Приказујући концентрацију РПХ у односу на концентрацију фенола (Слика 1а), добијен је просечни ТПЦ од 2.06 ± 0.13 мг ГАЕ/г РПХ. ТФЦ од 25,96 ± 0,52 µг КЕ/гРПХс добијен је применом сличне процедуре (Слика 1б). Слика 1ц даље повезује ТПЦ и ТФЦ узорака РПХ. Открива да се однос између ТПЦ и ТФЦ може изразити као и=0.0121к плус 0,0659, где су к и и ТПЦ и ТФЦ, респективно.

ТПЦ РПХ је укључивао концентрације фенолних амино киселина и фенолних једињења пептида. Интеракција протеин-фенолно једињење генерално укључује ковалентно и нековалентно везивање. Фенолна једињења се ослобађају током ензимске хидролизе. Специфични ензими могу бити најспособнији да униште комплексе протеин-полифенол; то доводи до ослобађања већег броја фенолних једињења и пептида са фенолним групама, као што је тирозин [22]. Пријављена је јака корелација између укупног садржаја полифенола у зрну и њихове биолошке активности. Познато је да полифеноли имају јаке антиоксидативне активности [23]. Иако се налазе у мањој количини, терпени [24] или сескитерпени [25] у пиринчу такође могу допринети антиоксидативним активностима.

2.2. Активност антиоксиданата

2.2.1. Активност уклањања радикала слободних радикала ДППХ

Слика 2 приказује активност уклањања слободних радикала ДППХ у раствору РПХ. Откривено је да већа концентрација раствора доводи до веће активности. Половина максималне инхибиторне концентрације (ИЦ50), која је концентрација екстракта за коју се може уклонити половина свих слободних радикала ДППХ, била је 42,58 ± 2,1 мг/мЛ пиринчаних пептида.

2.2.2. Активност чишћења слободних радикала АБТС

Активност уклањања слободних радикала АБТС РПХс, илустрована на слици 3, била је већа када је коришћена већа концентрација екстракта. ИЦ50 је био 2,11 ± 0,88 мг/мЛ пиринчаних пептида. Овај резултат је показао да РПХ имају јаку активност уклањања слободних радикала АБТС. Амино киселине које садрже сумпор, укључујући Мет и Цис, и хидрофобне аминокиселине, укључујући Ала, Вал, Иле, Леу, Мет, Цис, Тир, Пхе, Три и Про, могу бити важни фактори у погледу слободних радикала АБТС чистачка активност.

У овој студији, ИЦ50 вредност активности уклањања слободних радикала АБТС била је нижа од активности уклањања слободних радикала ДППХ, што се слаже са резултатима љуске и језгра семена Јатропха цурцас Л. [28] и семена и коре плода жижуле [29]. Овај налаз такође одговара извештају хидролизата протеина пиринчаних мекиња са 43,98–66,25 µмоЛ Тролок еквивалента/г узорка и 403,28–430,12 µмоЛ Тролок еквивалента/г узорка за ДППХ слободне радикале, у односу на активност уклањања слободних радикала и АБТС27.

Један од могућих разлога је разлика у растворљивости између слободних радикала ДППХ (растворљивих у уљу) и слободних радикала АБТС (растворљивих у уљу/води) [30,31]. На антиоксидативни потенцијал хидролизата протеина пиринчаних мекиња утицали су њихов профил молекулске тежине, састав аминокиселина и хидрофобност [32].

2.2.3. Редуцтион Цапацити

Налази теста редукционог капацитета за РПХ су представљени на слици 4. Капацитет редукције се повећавао са концентрацијом РПХ. Капацитет редукције је био 6,95 ± 1,40 мг ВЦЕ/г РПХ, што указује да су РПХ ефикасан антиоксиданс.

2.2.4. Капацитет апсорпције радикала кисеоника (ОРАЦ)

ОРАЦ тест има предности у односу на друге приступе одређивању антиоксидативне активности, укључујући реактанте који се користе као перокси радикали са сличним механизмом реакције и редокс потенцијалом као физиолошки оксиданти; укупни набој и протонационо стање са којим сеантиоксидансиреагују сличне онима у људском телу [33]. ОРАЦ метода такође има биолошки значај за ефикасност антиоксиданата у људском телу. Слика 5 приказује резултате ОРАЦ анализе РПХ и Тролок стандарда у различитим концентрацијама. ОРАЦ је изведен из регресионе једначине калибрационе криве која повезује нето АУЦ са концентрацијом Тролок-а. Резултати су показали да РПХ има ОРАЦ од 473 µмол ТЕ/г РПХ.

Антиоксидативни пептиди или амино киселине могу се добити ензимском хидролизом протеина, што резултира високом активношћу против оксиданата [34]. За њихову антиоксидативну активност одговорни су хелација металних јона, инхибиција пероксидације липида и уклањање слободних радикала биолошки активних пептида. Слободни радикали се могу угасити, а експресија протеина и ензима који смањују оксидативни стрес могу се појачати антиоксидативним пептидима. Антиоксидативна ефикасност протеинских хидролизата и пептида наводно зависи од редоследа аминокиселина и величине пептида, на које утичу услови хидролизе, извор протеина и тип протеазе [35]. Према Адебиии ет ал. [36], највећи сварљиви протеин пиринчаних мекиња може се разбити на мање комаде субтилизином, што резултира већим приносом и садржајем протеина. Специфичност ензима може утицати на ТПЦ хидролизата и антиоксидативну активност. Према томе, на антиоксидативну активност пептида могу утицати карактеристике извора протеина, специфичност ензима и ниво хидролизе [37].

Постоје многи извештаји који користе протеазе (као што је Алкалаза, комерцијални назив асубтилизина А из Бациллус врста) за хидролизу протеина биљног порекла да би се добили антиоксидативни пептиди. С тим у вези, сојин протеин је један од протеина који се највише пријављују [38]. Штавише, алкалазна хидролиза протеина пиринчаних мекиња је такође пронађена. У оптималним условима, алкаласехидролиза глутинозних пиринчаних мекиња производи протеинске хидролизате са ИЦ50 вредношћу 0.87 ± 0.02 мг/мЛ у уклањању слободних радикала ДППХ [39]. У нашој студији, ИЦ50 вредност РПХ је била 42,58 ± 2,1 мг/мЛ. Иако вредност ИЦ50 у ДППХ уклањању слободних радикала у овој студији није била тако ефикасна као она из протеина пиринчаних мекиња, АБТС уклањање слободних радикала (ИЦ50=2.11 мг/мЛ) је било ефикасније од хидролизата сојиних протеина добијених алкаласехидролизом ( ИЦ50=2.93 мг/мЛ) [40].

2.3. Инхибициона активност хијалуронидазе

Протеолитички ензим, хијалуронидаза, налази се у дермису и катализује разградњу ХА у екстрацелуларном матриксу [41]. Ова студија је користила танинску киселину као позитивну контролу у сврху поређења. Слика 6 открива да танинска киселина има већу инхибицију активности хијалуронидазе; ИЦ50 је био 0.14 мг/мЛ, слично вредности коју су добили Нисхида ет ал. (0,121 мг/мЛ; 71,1 мМ) [42]. Насупрот томе, за РПХ раствор је израчунат ИЦ50 од 8,91 мг/мЛ. Овај резултат раствора РПХ одговара нашој претходној вредности ИЦ50, 7,61 мг/мЛ [43]. Протеини, полисахариди и синтетичка једињења биљног порекла су међу низом једињења у којима су присутни инхибитори хијалуронидазе. Ови инхибитори помажу у одржавању равнотеже синтезе и разградње ХА [44]. Ниска концентрација ХА у кожи доводи до сувоће и бора. Стога је инхибиција активности хијалуронидазе пут којим се може побољшати морфологија коже и одложити њено старење.

2.4. Тирозиназа-инхибиторна активност

Хидролизати протеина из природних извора имају потенцијал да инхибирајуактивност тирозиназе. Ин витро тест инхибиције тирозиназе се обично користи за процену како средства за избељивање коже директно утичу на активност тирозиназе [45]. Учествујући у кораку ограничавања брзине меланинтезе, тирозиназа катализује хидроксилацију Л-тирозина у Л-ДОПА, а затим оксидацију овог другог у о-допахинон. Када је пожељно спречити биосинтезу меланина, инхибиција активности Л-тирозиназе може бити кључна. овде,тирозиназеје коришћен за мерење активности РПХ антитирозиназе. Као што је приказано на слици 7, концентрација 107,6 мг/мЛ је постигла 50 процената инхибиције активности тирозиназе. Аскорбинска киселина је показала високу активност инхибиције тирозиназе (ИЦ50=0.098 мг/мЛ), која је била слична 0,102 мг/мЛ коју су Сео ет ал. објављено [46].

Хидролизати протеина пиринчаних мекиња су били значајно високитирозиназе-инхибиторна активност [47,48]. Инхибициона активност раствора РПХ на тирозиназу може бити резултат профила аминокиселина пептида. Шуринк и др. описао да је ефикасантирозиназе-инхибиторни пептиди се састоје од остатака аргинина и фенилаланина [49]. Активност инхибиције тирозиназе може се побољшати хидрофобним аминокиселинским остацима (нпр. аланин), а аланин може пореметити производњу меланина [50]. Осим тога, Зханг ет ал. такође је известио да хидролизат пиринчаног протеина може да смањи садржај меланина и активност тирозиназе у моделу ћелије изазване УВБ-ом [51].

цистанцхе бодибуилдинг

2.5. Профили аминокиселина и МВс РПХ

Садржај протеина пиринча након уклањања скроба у овој студији био је 23,56 процената по тежини, а степен хидролизе узорка хидролизованог протеазом био је 9,36 процената. Табела 1 детаљно описује састав аминокиселина у РПХ. У узорку, сваких 100 г је садржало 5,18 г аминокиселина. Што се тиче компоненти аминокиселина, РПХ су били богати аланином, леуцином, аргинином, глутаминском киселином и аспарагинском киселином. Сваких 100 г узорка је садржало укупно 1,73 г хидрофобних аминокиселина (аланин, валин, леуцин, изолеуцин, пролин, фенилаланин и цистеин). Овај резултат је био потпуно другачији од нашег претходног извештаја [43] у раствору амилазе и температури третмана за уклањање скроба. Садржај хидрофобних аминокиселина био је 1,90 пута већи од нашег претходног извештаја. Нижа температура третмана (60 ◦Ц) у овој студији може спречити денатурацију протеина у великим количинама, тако да се активност аминокиселина може боље очувати. Поред тога, сличан закључак се добија и од других гљивичних амилазе и глукоамилазе тосахарификују скроб у белим пиринчаним мекињама [52].

Истраживања су открила да хидрофобне аминокиселине личеантиоксидансиповећањем растворљивости на бази липида у протеинским хидролизатима и пептидима из различитих извора протеина, чиме се промовише интеракција са слободним радикалима [38,53]. Неке аминокиселине су пријавили Цхен ет ал. [54] да уопште будеантиоксиданси; поменуте киселине су укључивале триптофан, цистеин, метионин, тирозин и хистидин. У овој студији, ароматичне аминокиселине (фенилаланин, тирозин и триптофан) су чиниле 0.53 г/100 г РПХ. Стога су ове аминокиселине које потичу из пептида вероватно одговорне за антиоксидативну активност РПХ.

Поред тога, протеини који су хидролизовани у краће пептиде имају другачију МВ дистрибуцију, а неке хидрофобне групе пресавијене у унутрашњости комплетних природних протеинских молекула обично су изложене воденој фази. Ово је повезано са структурним преуређењем протеинских молекула, а самим тим и са функционалним својствима протеина [55,56]. Подаци трицин-СДС-ПАГЕ су показали да је МВ РПХ у опсегу 5–35 кДа (Слика 8а).

Слика 8б приказује релативни садржај различитих МВ у РПХ. Све у свему, 45,24 процената свих протеина било је у главном опсегу (МВ ≈ 2,4 кДа). Слични резултати су добијени у вези са пептидом хидролизата протеина пиринчаних мекиња. Највећа антиоксидативна активност коју су добили Тхамнаратхип ет ал. [37] је то за пептиде МВ=6–50 кДа. Поред тога, постоје везе између функције протеинских хидролизата и дистрибуције МВ и састава аминокиселина [57]. Ово објашњава антиоксидативну активност РПХ уочену у овој студији.

2.6. Тест токсичности ћелија

За будуће примене је потребна ниска токсичност ћелија. Да би се проценила цитотоксичност и биокомпатибилност РПХ, вијабилност ћелија сирових 264,7 ћелија у раствору РПХ мерена је МТТ методом. Као што је приказано на слици 9, виталност ћелија је била изнад 100 процената када се третира са 25–2000 µг/мЛ РПХ током 24 х и 48 х. Резултати указују на изузетно ниску цитотоксичност РПХ. Стога се РПХ потенцијално могу користити као козметичке апликације са веома ниском цитотоксичношћу.

3. Материјали и методе

3.1. Реагенси

Гвожђе(ИИИ) хлорид, 2,20-азино-бис(3-етилбензотиазолин-6-сулфонска киселина) (АБТС), Тролок(6-хидрокси-2,5 ,7,8-тетраметилхроман-2-карбоксилна киселина), л-3,4-дихидроксифенилаланин (Л-ДОПА), 1,1-дифенил{16}} пикрилхидразил (ДППХ) и трихлоросирћетна киселина су набављени од Алфа Аесар (Тевксбури, МА, САД). 2,20-азобис(2-метилпропионамидин) дихидрохлорид (ААПХ), Фолин-Циоцалтеуов фенол реагенс, гална киселина, аскорбинска киселина, печуркетирозиназе, а флуоресцеин натријум је набављен од Сигма-Алдрицх (Ст. Лоуис, МО, САД). Натријум карбонат је добијен од Риедел-де Хаен (Сеелзе, Немачка). Коначно, калијум ферицијанид, натријум хидроген фосфат и натријум дихидроген фосфат су набављени од Схова Цхемицал (Токио, Јапан).

3.2. Припрема РПХ

РПХ су припремљени као што је претходно описано, осим што је гљивична амилаза усвојена да сахарификује скроб у пиринчаном брашну, избегавајући оштећење аминокиселина узроковано хидролизом бактеријамилазе на високим температурама [43,58]. Сто грама пиринчаног брашна је натопљено у 1000 мЛ дестиловане воде која садржи 0,5 процената гљивичне амилазе (Гененцор, НИ, САД); смеша је затим загревана 24 х до 60 ◦Ц ( пХ 4,2), након чега је остављено да се охлади на собну температуру. Центрифугирање је изведено 10 минута на 1968 × г да би се уклонио преостали супернатант. Након што је у нерастворни део додато 20-кратка вода и 2 мЛ 0,1 процентне хидролитичке протеазе (Хеалтхмате, Цхангхуа, Таиван), раствор је протресен и инкубиран 4 х на 55 ◦Ц. Метода пХ-стата је коришћена да би се пХ раствора одржао на оптималном нивоу, а затим је извршено загревање на 85 ◦Ц за 10 мин инактивације форензима. Преостала нерастворљива фракција је уклоњена центрифугирањем током 15 минута на 3075 × г. Лиофилизација је извршена на супернатанту, који је пре употребе чуван на -20 ◦Ц.

3.3. Антиоксидативна активност РПХ

3.3.1. Укупна концентрација фенола (ТПЦ)

Примењена је Фолин-Циоцалтеуова метода за откривање ТПЦ-а РПХ [59]. Прво, 200 µЛ Фолин-Циоцалтеу-овог фенолног реагенса (0,3М) је равномерно помешано кроз5-минутно мућкање са 200 µЛ раствора РПХ и овој смеши је додато 400 µЛ дејонизоване (ДИ) воде и 200 µЛ 10% (в/в) раствора натријум карбоната. Мешани раствор је подвргнут инкубацији од 60 минута у мраку на собној температури. Затим је центрифугиран 15 минута на 3000 о/мин. За мерење је коришћено 100 µЛ супернатанта. Да би се одредио ТПЦ (јединица: мг) еквивалента галне киселине (ГАЕ) по граму сувог РПХ узорка (јединица: мг ГАЕ/г РПХ), подаци оптичке апсорпције су унети у стандардну криву која представља галну киселину. Апсорбанца је добијена на 700 нм коришћењем ЕпоцхМицроплате спектрофотометра (БиоТек, ВТ, САД).

3.3.2. Укупан садржај флавоноида (ТФЦ)

ТФЦ је добијен према приступу Ватхони ет ал. уз мање измене [60]. Прво, помешано је 500 µЛ сваког узорка и 2 процента (в/в) раствора алуминијум хлорида. Реакциони раствор је темељно измешан и остављен 10 мин, па је процењена апсорпција на 415 нм. Резултат је приказан у микрограмима еквивалента кверцетина (КЕ) по граму сувог узорка РПХ (µг КЕ/г РПХ).

цистанцхе бодибуилдинг

3.3.3. ДППХ активност уклањања слободних радикала

Прво су помешани 198 µМ раствора ДППХ етанола (50 µЛ) и раствор РПХ или ДИ вода (0,5 µЛ; узорак и контрола, респективно), а затим остављени да одстоје 30 минута у мраку на собној температури. Након тога је добијена апсорбанца раствора на 517 нм. Релативна активност чишћења је израчуната одређивањем разлике у апсорпцији између узорка и контроле. Висока активност уклањања слободних радикала ДППХ одражава се ниском оптичком апсорбанцијом. У процени активности уклањања слободних радикала ДППХ раствора РПХ, коришћени стандард је био витамин Ц [61–63].

3.3.4. Активност чишћења слободних радикала АБТС

Приступ који су изнели Ву ет ал. је коришћен за процену антиоксидативне активности раствора РПХ [64]. Прво, 7 мМ АБТС основни раствор (250 µЛ) је реаговао са 2,45 мМ калијум персулфата (250 µЛ) да би се добио АБТС катјон слободних радикала (АБТС• плус), при чему је смеша задржана 16 х на 4 ◦Ц у мраку пре употребе. После еквилибрације у мраку на собној температури, 0.1 М физиолошки раствор пуферован са фосфатом (ПБС; пХ 7,4) је коришћен да се раствор разблажи до 0,70 ± 0,02 апсорбанције на 734 нм. Затим је у 180 µЛ разблаженог АБТС раствора додато 20 µЛ Тролок-а (позитивна контрола) или РПХ раствора (узорак). Смеша је затим подвргнута 10 мин инкубације на собној температури. Овом студијом је одређена оптичка апсорбанца на 734 нм; нижа апсорпција одговара вишој активности уклањања слободних радикала АБТС. Стандард коришћен за процену активности уклањања слободних радикала РПХсолутион-а АБТС био је антиоксидант Тролок.

3.3.5. Редуцтион Цапацити

Тест антиоксидативне снаге редукције гвожђа је коришћен да се одреди укупна антиоксидативна активност РПХ раствора. Како су известили Лин ет ал. [29], раствор РПХ (200 µЛ) је равномерно помешан са 1 процентом (в/в) К3Фе(ЦН)6 и 0,2 М ПБС пуфером (пХ 6,6; 100 µЛ сваки) Током 20 минута, коришћено је водено купатило од 50 ◦Ц за загревање смеше; након уклањања смеше из купатила, брзо је хлађена 3 мин. Након тога, извршено је додавање 10 процената (в/в) трихлоросирћетне киселине (100 µЛ) и 10-мин центрифугирање на 3000 рпм. Након тога је уследила екстракција супернатанта (400 µЛ) и његово равномерно мешање са О. 1 проценат (в/в) ФеЦл3 (100 µЛ) и ДИ вода (400 µЛ). Фе4[Фе(ЦН)6]3 је добијен10-мин реакцијом ове смеше у мраку. Након тога, већа оптичка апсорбанца (мерена на 700 нм) указује на већи капацитет редукције. Стандардни витамин Ц је коришћен за одређивање садржаја еквивалента витамина Ц (ВЦЕ) по граму РПХ.

3.3.6. Капацитет апсорпције радикала кисеоника (ОРАЦ)

Ова студија је добила ОРАЦ модификацијом претходно објављене методе [65]. Након растварања узорка РПХ у дестилованој води, раствор РПХ (50 µЛ) је помешан са флуоресцеином (10 µМ) у микротитарској плочи 96- бунара. Раствор је подвргнут 15-мин инкубацији на 37 ◦Ц након чега је додато 50 µЛ ААПХ (500 мМ). Сваких 5 минута и током укупно 120 мин, флуоресценција је забележена (λек и λем=485 и 528 нм, респективно). Антиоксидативни капацитет РПХ откривен је из кинетике распада флуоресценције израчунавањем површине испод криве (АУЦ ). У израчунавању РПХ ОРАЦ, стандард је био 15–250 µМ Тролок. ОРАЦ је приказан као микромол Тролок еквивалента (ТЕ) перграма сувог узорка РПХ (µмол ТЕ/г РПХ).

3.4. Инхибициона активност хијалуронидазе

Тест инхибиције хијалуронидазе је изведен коришћењем {{0}}микроплоче у бунар и претходно објављеном методом са малим модификацијама [40]. Н-ацетилглукозамин је ослобођен реакцијом хијалуронидазе са ХА супстратом. У присуству било ког инхибитора, ослобађање Н-ацетилглукозамина је смањено, при чему се ово ослобађање детектује добијањем 600-нм апсорбанције. ХА је преципитирана киселим раствором албумина који се састоји од 0.1 М ацетатног пуфера (пХ 3,9) и албумина говеђег серума (1 мг/мЛ). Раствор узорка и 5 мг/мЛ хијалуронидазе подвргнути су 20-мин инкубацији на 37 ◦Ц. У смешу за инкубацију, накнадно је додата ХА (1{{20}}0 µЛ; 5,0 мг/мЛ у 0,1 М ацетатном пуферу). Извршена је даља инкубација на 37 ◦Ц током 40 мин. Додато је 0,1 мЛ 0,4 М раствора алкалног бората да би се зауставила ензимска реакција.

3.5. Тирозиназа-инхибиторна активност

Ова студија је проценила активност антитирозиназе РПХ коришћењем претходно објављеног протокола са модификацијама [66]. Раствор ензима (135 У/мЛ) је припремљен растварањем тирозиназе у 20 мМ фосфатног пуфера (пХ 6,8). Додатно, ДИвода је коришћена за припрему раствора 1,25 мМ Л-ДОПА. Затим, 40 µЛ различитих концентрација раствора РПХ узорака је помешано са 40 µЛ раствора тирозиназе и 120 µЛ раствора Л-ДОПА. Током 30 минута, ова смеша је држана на 37 ◦Ц у тесту инхибиције РПХстирозиназеактивност. Спектрофотометар (ФЛУОстар Омега МицроплатеРеадер, БМГ Лабтецх ГмбХ, Немачка) је коришћен да би се добила 475-нм апсорбанца. Сва мерења су обављена три пута. Апсорбанција одговарајуће групе кадатирозиназеније било одузето. Стопа инхибиције ензима је одређена као

3.6. Карактеризација РПХ

3.6.1. Профили аминокиселина

Ова студија је открила састав аминокиселина РПХ. Прво, током 24 х и на 115 ◦Ц, коришћена је 4 М метансулфонска киселина за хидролизу узорака у евакуисаним затвореним цевима. Два система за испоруку растварача Ватерс 510 и анализатор аминокиселина (Л 8900; Хитацхи, Токио, Јапан) су коришћени за одвајање дериватизованих аминокиселина на колони аСпхерисорб ОДС2 дужине 25 м × 64,6 мм. Ова студија је користила следеће раствараче: (а) натријум ацетат (0,14 М) и триетиламин (850 µЛ/Л; пХ 5,6) и (б) 60 процената ацетонитрила, за који је градијент био 0 процената током 2 мин; 0–42 процента током 15,5 мин (конвексна крива); и 100 процената током 4 мин. Дупли узорци су узети за мерење профила аминокиселина на 254 нм [67,68].

3.6.2. Молекуларна тежина (МВ) протеина

У складу са Шегеровом методом [69] и под редукционим условима, у овој студији је добијена дистрибуција МВ путем трицин–натријум додецил сулфат (СДС)–полиакриламидегел електрофорезе (ПАГЕ) уз незнатне модификације. Пуфер за узорак (30 г/Л СДС, 0.375 МТрис-ХЦл, 0.125 г/Л Цоомассие Бриллиант Блуе Г-250 и 75 г/ Л глицерол; пХ 7) је коришћен за дисперговање лиофилизованог узорка, са центрифугирањем које је затим изведено пре пуњења. Укупно 20 µЛ 2-меркаптоетанола је додато у 1 мЛ трицин-СДС-ПАГЕ узорка. Узорак је загреван на 100 ◦Ц током 90 с. Узорак је напуњен сваким узорком и широким опсегом стандардног необајеног протеина (Био-Рад Лабораториес, Немачка) коришћењем микрошприца. Затим је изведена електрофореза - прво при константном напону од 30 мВ све док цео узорак није био садржан у гелу за слагање, а затим до завршетка при константним 100 мВ. Након тога, 0,02% Цоомассие Бриллиант Блуе Р{23}} раствор је примењен за бојење гела. Апсолутно позадинско бојење гелова је изведено мућкањем гелова у 10 процената сирћетне киселине преко ноћи. Коначно, слика гела је анализирана да би се идентификовале траке протеина у тракама; ова анализа је обављена у ИмагеЈ (УСНатионал Институтес оф Хеалтх, Бетхесда, МД, УСА). Стандардни маркери су коришћени за добијање калибрационе криве из које је процењена МВ. Укратко, први корак је био да се одреди дужина миграције сваке траке (Рф) са врха гела за раздвајање. Овај други корак је био прорачун калибрационе криве коришћењем Рф и лог (МВ) за стандардни маркер са датим МВ. Одређивање МВ је изведено коришћењем Рф протеинских трака у РПХ.

3.7. Цитотокицити Ассаи

Сирове ћелије од 264,7 су узгајане у Дулбеццо-овом модификованом медијуму орла (ДМЕМ) са високим садржајем глукозе који садржи 10 проценат феталног говеђег серума (ФБС), 4,5 г/Л глукозе, 1 проценат раствора антибиотика (100 јединица/ мЛ пеницилина и 100 µг/мЛ стрептомицина), 4 мМ Л-глутамина и 1,5 г/Л натријум бикарбоната на 37 ◦Ц и 5 процената ЦО2. Токсичност ћелија сирових 264,7 ћелија за РПХс мерена је методом теста пролиферације 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5 дифенил-тетразолијум бромида (МТТ) . Отприлике 1 × 104 ћелија по бунарчићу је постављено у 96- плоче са бунарима. После 24 х, различите концентрације РПХ (0-2000 µг/мЛ) су додане у ћелије. После 24 и 48 х инкубације, додато је 100 уЛ МТТ раствора (0,5 мг/мЛ). Плави кристали формазана су уочени када су прегледани под микроскопом. ДМЕМ је уклоњен и 100 уЛ диметил сулфоксида (ДМСО) је додато по бунарчићу. Апсорбанца је мерена читачем микротитарских плоча. Вијабилност ћелија ( проценат ) је затим израчуната као [А570 (третиране ћелије) − А570 (позадина)] / [А570 (нетретиране ћелије) − А570 (позадина)] × 100 процената [70].

3.8. Статистичка анализа

Извештај за сваки узорак хидролизата био је просечна вредност из три независна поновљена експеримента и одређивања. Резултати изражени као средња вредност ± стандардна девијација (СД) анализирани су једносмерном АНОВА-ом и Данкановим пост хоц тестом коришћењем СтатистицалАналисис Систем (верзија 20.0; СПСС, Армонк, Њујорк, САД). Вредности п < 0,05="" сматране="" су="" статистичком="">

4. Закључци

Ова студија је испитивала функције РПХ. Експериментални резултати су открили да РПХ садрже фенолна једињења и флавоноиде и да показују низ антиоксидативних активности, као што су активности чишћења ДППХ и АБТС, капацитет редукције и ОРАЦ. Поред тога, РПХ су ефективно инхибиранетирозиназеи активности хијалуронидазе. Протеаза је била критичан фактор који утиче на МВ обрасце РПХ. Анализа РПХ указује на њихов потенцијал за употребу као састојак у козметици.

цистанцхе бодибуилдинг

Референце

1. Ицхихасхи, М.; Андо, Х.; Иосхида, М.; Ники, И.; Матсуи, М. Фотостарење коже. Анти-Агинг Мед. 2009, 6, 46–59. [ЦроссРеф]

2. Ким, Ј.-С.; Ким, Д.; Ким, Х.-Ј.; Јанг, А. Заштитни ефекат хидролизата желатина из магареће коже на УВБ-индуковано фотостарење фибробласта људске коже. Процес. Биоцхем. 2018, 67, 118–126. [ЦроссРеф]

3. Цароцхо, М.; Ферреира, ИЦ Преглед антиоксиданата, прооксиданата и сродних контроверзи: Природна и синтетичка једињења, методологије скрининга и анализе и будуће перспективе. Фоод Цхем. Токицол. 2013, 51, 15–25. [ЦроссРеф]

4. Гуо, Кс.; Зханг, Ј.; Може.; Тиан, С. Оптимизација ограничене хидролизе протеина у остатку пиринча и карактеризација функционалних својстава производа. Ј. Фоод Проц. Пресерв. 2013, 37, 245–253. [ЦроссРеф]

5. Парк, Х.-И.; Лее, К.-В.; Цхои, Х.-Д. Састојци пиринчаних мекиња: Имуномодулаторне и терапеутске активности. Функција хране. 2017, 8,935–943. [ЦроссРеф] [ПубМед]

6. Зхоу, К.; Цаннинг, Ц.; Сун, С. Ефекти хидролизата пиринчаних протеина припремљених микробним протеазама и ултрафилтрацијом на слободне радикале и оксидацију липида меса. ЛВТ 2013, 50, 331–335. [ЦроссРеф]

7. Пиу', ЛД; Тассони, А.; Серразанети, ДИ; Ферри, М.; Бабини, Е.; Таглиазуццхи, Д.; Гианоти, А. Експлоатација течног нуспроизвода индустрије скроба за производњу биоактивних пептида из хидролизованих протеина пиринча. Фоод Цхем. 2014, 155, 199–206. [ЦроссРеф]

8. Ферри, М.; Граен-Хеедфелд, Ј.; Бретз, К.; Гуиллон, Ф.; Мицхелини, Е.; Цалабретта, ММ; Ламборгхини, М.; Груарин, Н.; Рода, А.; Крафт, А.; ет ал. Фракције пептида добијене из нуспроизвода пиринча путем еколошки прихватљивог процеса показују ин Витро биолошке активности повезане са здрављем. ПЛОС ОНЕ 2017, 12, е0170954. [ЦроссРеф]

9. Вен, Ц.; Зханг, Ј.; Зханг, Х.; Дуан, И.; Ма, Х. Антиоксидативни пептиди добијени из биљних протеина: изолација, идентификација, механизам деловања и примена у системима исхране: преглед. Трендс Фоод Сци. Тецхнол. 2020, 105, 308–322. [ЦроссРеф]

10. Пхелан, М.; Ахерне, А.; Фитзгералд, РЈ; О'Бриен, НМ Биоактивни пептиди изведени из казеина: биолошки ефекти, индустријска употреба, безбедносни аспекти и регулаторни статус. Инт. Даири Ј. 2009, 19, 643–654. [ЦроссРеф]

11. Уденигве, ЦЦ; Алуко, РЕ Биоактивни пептиди добијени од протеина из хране: производња, прерада и потенцијалне здравствене користи. Ј.Фоод Сци. 2012, 77, 11–24. [ЦроссРеф] [ПубМед]

12. Фардет, А.; Роцк, Е. Ин витро и ин виво антиоксидативни потенцијал млека, јогурта, ферментисаног млека и сирева: наративни преглед доказа. Нутр. Рес. Рев. 2018, 31, 52–70. [ЦроссРеф]

13. Леацх, ЈБ; Катхрин, АБ; Цхарлес, ВПЈ; Цхристине, ЕС Фотоукрштани хидрогелови хијалуронске киселине: природни, биоразградиви инжењерски скеле за ткиво. Биотецхнол. Биоенг. 2003, 82, 578–589. [ЦроссРеф]

14. Јегасотхи, СМ; Заболотниаиа, В.; Биелфелдт, С. Ефикасност нове топикалне нано-хијалуронске киселине код људи. Ј. Цлин. Аестхет.Дерматол. 2014, 7, 27–29.

15. Ндлову, Г.; Фоуцхе, Г.; Целаниане, М.; Цордиер, В.; Стеенкамп, В. Ин витро одређивање потенцијала против старења четирију јужноафричких лековитих биљака. БМЦ Цомплемент. Алтерн. Мед. 2013, 13, 304. [ЦроссРеф]

16. Јиратцхаиамаетхасакул, Ц.; Динг, И.; Хванг, О.; Им, С.-Т.; Јанг, И.; Миунг, С.-В.; Лее, ЈМ; Ким, Х.-С.; Ко, С.-Ц.; Лее, С.-Х. Ин витро скрининг инхибиторних и антиоксидативних активности еластазе, колагеназе, хијалуронидазе и тирозиназе 22 екстракта халофитних биљака за нове козмецеутике. Риба. Акуат. Сци. 2020, 23, 1–9. [ЦроссРеф]

17. Канг, М.; Парк, С.-Х.; Ох, СВ; Лее, СЕ; Иоо, ЈА; Нхо, ИХ; Лее, С.; Хан, БС; Цхо, ЈИ; Лее, Ј. Анти-меланогени ефекти ресорцинола су посредовани супресијом цАМП сигнализације и активацијом п38 МАПК сигнализације. Биосци. Биотецхнол. Биоцхем.2018, 82, 1188–1196. [ЦроссРеф]

18. Чататикун, М.; Иамауцхи, Т.; Иамасаки, К.; Аиба, С.; Цхиабцхалард, А. Антимеланогени ефекат листова Цротон рокбургхии и Цротонсублиратус у -МСХ стимулисаним Б16Ф10 ћелијама. Ј. Традит. Допуна. Мед. 2019, 9, 66–72. [ЦроссРеф] [ПубМед]

19. Ризело, ЦГ; Нионелли, Л.; Цода, Р.; Гоббетти, М. Синтхесис оф тхе Цанцер Превентиве Пептиде Лунасин би Лацтиц Ацид БацтериаДуринг Соурдоугх Ферментатион. Нутр. Рак 2012, 64, 111–120. [ЦроссРеф] [ПубМед]

20. Ризело, ЦГ; Таглиазуццхи, Д.; Бабини, Е.; Рутела, ГС; Саа, ДЛТ; Гианоти, А. Биоактивни пептиди из биљних прехрамбених матрица: Трендови истраживања и нове биотехнологије за синтезу и опоравак. Ј. Фунцт. Храна 2016, 27, 549–569. [ЦроссРеф]

21. Цосцуета, ЕР; Цампос, ДА; Осорио, Х.; Нерли, ББ; Пинтадо, М. Ензимска хидролиза сојиних протеина: алат за производњу биофункционалних састојака хране. Фоод Цхем. Кс 2019, 1, 100006. [ЦроссРеф]

22. Аидемир, ЛИ; Иеменициоглу, А. Да ли су фенолни антиоксиданси везани за протеине у махунаркама невидљиви део леденог брега? Ј. Плант. Биоцхем.Пхисиол. 2013, 1, 1–3. [ЦроссРеф]

23. Хуанг, СХ; Нг, ЛТ Квантификација садржаја полифенола и биоактивних састојака неких комерцијалних сорти пиринча на Тајвану. Ј. Фоод Цомпос. Анал. 2012, 26, 122–127. [ЦроссРеф]

24. Иосхитоми, К.; Танигуцхи, С.; Танака, К.; Уји, И.; Акимитсу, К.; Гоми, К. Терпен синтаза пиринча 24 (ОсТПС24) кодира монотерпен синтазу која реагује на јасмонат и која производи антибактеријски -терпинен против патогена пиринча. Ј. Плант. Пхисиол. 2016, 191,120–126. [ЦроссРеф]

25. Камолсукиеунионг, В.; Сукхакет, В.; Питија, К.; Тхорнгкхам, П.; Махатхееранонт, С.; Тоојинда, Т.; Ванавичит, А. Рајс Сесквитерпен игра важну улогу у антиксенози против смеђе биљчице у пиринчу. Биљке 2021, 10, 1049. [ЦроссРеф][ПубМед]

26. Лиу, И.; Ванг, З.; Ли, Х.; Лианг, М.; Ианг, Л. Ин витро антиоксидативна активност пиринчаног протеина под утицајем алкалног степена и дигестије гастроинтестиналне протеазе. Ј. Сци. Фоод Агриц. 2016, 96, 4940–4950. [ЦроссРеф] [ПубМед]

27. Пхонгтхаи, С.; Д'Амицо, С.; Сцхоенлецхнер, Р.; Хомтхаворнцхоо, В.; Равдкуен, С. Фракционисање и антиоксидативна својства хидролизата протеина пиринчаних мекиња стимулисаних ин витро гастроинтестиналном дигестијом. Фоод Цхем. 2018, 240, 156–164. [ЦроссРеф][ПубМед]

28. Хуанг, С.-Л.; Ванг, В.-Х.; Зхонг, Кс.-И.; Лин, Ц.-Т.; Лин, В.-С.; Цханг, М.-И.; Лин, И.-С. Антиоксидативна својства Јатропха цурцас Л. Екстракти љуске семена и језгра. Аппл. Сци. 2020, 10, 3279. [ЦроссРеф]

29. Лин, И.-С.; Лин, В.-С.; Тунг, Ј.-В.; Цхенг, И.-Ц.; Цханг, М.-И.; Цхен, Ц.-И.; Хуанг, С.-Л. Антиоксидативни капацитети семенки воћа жижуле и коре пулпе. Аппл. Сци. 2020, 10, 6007. [ЦроссРеф]

30. Схахи, З.; Саииед-Аланги, СЗ; Најафиан, Л. Ефекти типа ензима и времена процеса на степен хидролизе, траке електрофорезе и антиоксидативна својства хидролизованих протеина добијених из одмашћеног Буниум персицум Биосс. пресс цаке. Хелиион 2020, 6,е03365. [ЦроссРеф] [ПубМед]

31. Ксие, Х.; Хуанг, Ј.; Воо, МВ; Ху, Ј.; Ксионг, Х.; Зхао, К. Ефекат хладне и вруће деактивације ензима на структурна и функционална својства хидролизата протеина пиринчаног остатка. Фоод Цхем. 2021, 345, 128784. [ЦроссРеф]

32. Рани, С.; Пооја, К.; Пал, ГК Истраживање хидролизата и пептида пиринчаних протеина са посебним освртом на антиоксидативни потенцијал: Рачунски изведени приступи за одређивање биоактивности. Трендс Фоод Сци. Тецхнол. 2018, 80, 61–70. [ЦроссРеф]

33. Бисби, РХ; Брооке, Р.; Наваратнам, С. Ефекат антиоксидативног потенцијала оксидације у тесту капацитета апсорпције радикала кисеоника (ОРАЦ). Фоод Цхем. 2008, 108, 1002–1007. [ЦроссРеф]

34. Елиас, РЈ; Келлерби, СС; Децкер, Е. Антиокидант Ацтивити оф Протеинс анд Пептидес. Црит. Рев. Фоод Сци. Нутр. 2008, 48, 430–441.[ЦроссРеф] [ПубМед]

35. Мине, И.; Ли-Цхан, Е.; Јианг, Б. (Едс.) Биоактивни протеини и пептиди као функционална храна и нутриционисти; Вилеи-Блацквелл: Хобокен, Њ, САД, 2010; стр. 29–42.

36. Адебиии, АП; Адебиии, АО; Иамасхита, Ј.; Огава, Т.; Мурамото, К. Пречишћавање и карактеризација антиоксидативних пептида добијених из хидролизата протеина пиринчаних мекиња. ЕУР. Фоод Рес. Тецхнол. 2008, 228, 553–563. [ЦроссРеф]

37. Тхамнаратхип, П.; Јангцхуд, К.; Нитисинпрасерт, С.; Вардханабхути, Б. Идентификација молекулске тежине пептида из хидролизата протеина пиринчаних мекиња са високом антиоксидативном активношћу. Ј. Цереал Сци. 2016, 69, 329–335. [ЦроссРеф]

38. Тациас-Пасцацио, ВГ; Мореллон-Стерлинг, Р.; Сиар, Е.-Х.; Тавано, О.; Беренгуер-Мурциа, А.; Фернандез-Лафуенте, Р. Употреба алкалазеина у производњи биоактивних пептида: преглед. Инт. Ј. Биол. Мацромол. 2020, 165, 2143–2196. [ЦроссРеф] [ПубМед]

39. Саррингкарин, В.; Лаокулдилок, Т. Оптимизација услова производње глутинозног хидролизата протеина пиринчаних мекиња са антиоксидативним својствима. ЦМУ Ј. Нат. Сци. 2017, 16, 1–18. [ЦроссРеф]

40. Зханг, К.; Тонг, Кс.; Ки, Б.; Ванг, З.; Ли, И.; Суи, Кс.; Јианг, Л. Промене антиоксидативне активности алкалазе-хидролизованог сојиног хидролизата под симулираном гастроинтестиналном дигестијом и трансепителним транспортом. Ј. Фунцт. Храна 2018, 42, 298–305. [ЦроссРеф]

41. Ту, ПТБ; Тавата, С. Антиоксидативна, анти-агинг и анти-меланогена својства есенцијалних уља из две сорте алпиније зерумбет. Молекули 2015, 20, 16723–16740. [ЦроссРеф]

42. Нишида, И.; Сугахара, С.; Вада, К.; Тоиохиса, Д.; Танака, Т.; Оно, М.; Иасуда, С. Инхибицијски ефекти екстракта етил ацетата из луковица Сцилла сциллоидес на активности липоксигеназе и хијалуронидазе. Пхарм. Биол. 2014, 52, 1351–1357. [ЦроссРеф]

43. Цхен, Х.-Ј.; Даи, Ф.-Ј.; Фан, С.-Л.; Хуанг, И.-Ц.; Цхау, Ц.-Ф.; Лин, И.-С.; Цхен, Ц.-С. Кинетика инхибиције хијалуронидазе хидролизатом протеина пиринча (Ориза сатива Л.). Аппл. Сци. 2020, 10, 9087. [ЦроссРеф]

44. Гирисх, К.; Кемпарају, К. Магични лепак хијалуронан и његова гумица хијалуронидаза: биолошки преглед. Лифе Сци. 2007, 80, 1921–1943. [ЦроссРеф] [ПубМед]

45. Золгхадри, С.; Бахрами, А.; Кхан, МТХ; Муноз-Муноз, Ј.; Гарсија-Молина, Ф.; Гарсија-Кановас, Ф.; Сабоури, АА Свеобухватни преглед инхибитора тирозиназе. Ј. Ензим. Инхиб. Мед. Цхем. 2019, 34, 279–309. [ЦроссРеф] [ПубМед]

46. ​​Сео, ЕЈ; Хонг, ЕС; Цхои, МХ; Ким, КС; Лее, СЈ Антиоксидативни и избељивање коже екстракти Рхамнус иосхинои. КореанЈ. Фоод Сци. Тецхнол. 2010, 42, 750–754.

47. Оцхиаи, А.; Танака, С.; Танака, Т.; Танигуцхи, М. Протеин пиринчаних мекиња као моћан извор антимеланогених пептида са активношћу инхибиције тирозиназе. Ј. Нат. Прод. 2016, 79, 2545–2551. [ЦроссРеф] [ПубМед]

48. Кубгломсонг, С.; Тхееракулкаит, Ц.; Реед, РЛ; Ианг, Л.; Маиер, ЦС; Стевенс, ЈФ Изолација и идентификација инхибиције тирозиназе и пептида који хелирају бакар из хидролизованог албумина добијеног од пиринчаних мекиња. Ј. Агриц. Фоод Цхем. 2018, 66, 8346–8354.[ЦроссРеф]

49. Шуринк, М.; ван Беркел, ВЈ; Вицхерс, Х.; Боериу, ЦГ Нови пептиди са инхибиторном активношћу тирозиназе. Пептидес 2007, 28,485–495. [ЦроссРеф]

50. Исхикава, М.; Кавасе, И.; Исхии, Ф. Комбинација аминокиселина смањује пигментацију у ћелијама меланома Б16Ф0. Биол. Пхарм.Булл. 2007, 30, 677–681. [ЦроссРеф] [ПубМед]

51. Зханг, Р.; Веи, И.; Ли, М.; Цаи, М.; Гу, Р.; Може.; Цхен, Л.; Ванг, Ј. Ефекти меланогенезе хидролизата пиринчаног протеина и његових карактеристичних пептида Леу-Леу-Лис, Леу-Про-Лис и пироГлу-Лис на ћелије епидермалних меланоцита изазваних УВБ-ом. ФоодФунцт. 2020, 11, 8757–8767. [ЦроссРеф]

52. Ванг, И.; Цаи, Д.; Он, М.; Ванг, З.; Кин, П.; Тан, Т. Отворена ферментативна производња л-млечне киселине коришћењем белих пиринчаних мекиња истовременом сахарификацијом и ферментацијом. Биоресоур. Тецхнол. 2015, 198, 664–672. [ЦроссРеф] [ПубМед]

53. Пан, М.; Јианг, ТС; Пан, ЈЛ Антиоксидативна активност хидролизата протеина уљане репице. Биопроцес хране. Тецхнол. 2009, 4, 1144–1152.[ЦроссРеф]

54. Цхен, ХМ; Мурамото, К.; Иамауцхи, Ф.; Нокихара, К. Антиоксидативна активност дизајнираних пептида на бази антиоксидативног пептида изолованог из дигестата сојиног протеина. Ј. Агриц. Фоод Цхем. 1996, 44, 2619–2623. [ЦроссРеф]

55. Лиу, К.; Конг, Б.; Ксионг, ИЛ; Ксиа, Кс. Антиоксидативна активност и функционална својства хидролизата протеина свињске плазме под утицајем степена хидролизе. Фоод Цхем. 2010, 118, 403–410. [ЦроссРеф]

56. Лемес, А.; Сала, Л.; Орес, ЈДЦ; Брага, АРЦ; Егеа, МБ; Фернандес, КФ Преглед најновијих достигнућа у шифрованим биоактивним пептидима из отпада богатог протеинима. Инт. Ј. Мол. Сци. 2016, 17, 950. [ЦроссРеф] [ПубМед]

57. Ванг, Ј.-С.; Зхао, М.-М.; Зхао, К.-З.; Јианг, И.-М. Антиоксидативна својства папаин хидролизата пшеничног глутена у различитим оксидационим системима. Фоод Цхем. 2007, 101, 1658–1663. [ЦроссРеф]

58. Гао, М.-Т.; Канеко, М.; Хирата, М.; Тоорисака, Е.; Хано, Т. Употреба пиринчаних мекиња као извора хранљивих материја за ферментативну производњу млечне киселине. Биоресоур. Тецхнол. 2008, 99, 3659–3664. [ЦроссРеф] [ПубМед]

59. Хуанг, ВИ; Лин, ИР; Хо, РФ; Лиу, ХИ; Лин, ИС Ефекти водених раствора на екстракцију листова зеленог чаја. Сци. Ворлд Ј. 2013, 2013, 368350. [ЦроссРеф]

60. Ватхони, Н.; Схан, ЦИ; Схан, ВИ; Ростинавати, Т.; Индради, РБ; Пративи, Р.; Муцхтариди, М. Карактеризација и антиоксидативна активност пектина из коре индонежанског мангостина (Гарциниа мангостана Л.). Хелиион 2019, 5, е02299. [ЦроссРеф]

61. Тсаи, Ц.-Ц.; Цхан, Ц.-Ф.; Хуанг, В.-И.; Лин, Ј.-С.; Цхан, П.; Лиу, Х.-И.; Лин, И.-С. Примена Супернатанта СпентЦултуре Лацтобациллус рхамносус у козметичкој антиоксидацији, избељивању и задржавању влаге. Молецулес 2013, 18, 14161–14171.[ЦроссРеф]

62. Хуанг, В.-И.; Лее, П.-Ц.; Хсу, Ј.-Ц.; Лин, И.-Р.; Цхен, Х.-Ј.; Лин, И.-С. Ефекти квалитета воде на растварање праха екстракта Иерба Мате. Сци. Ворлд Ј. 2014, 2014, 1–6. [ЦроссРеф] [ПубМед]

63. Цхан, Ц.-Ф.; Ву, Ц.-Т.; Хуанг, В.-И.; Лин, В.-С.; Ву, Х.-В.; Хуанг, Т.-К.; Цханг, М.-И.; Лин, И.-С. Инхибиција антиоксидације и меланогенезе различитих Дендробиум тосаенсе екстраката. Молецулес 2018, 23, 1810. [ЦроссРеф] [ПубМед]64. Ву, Ц.-Т.; Агравал, ДЦ; Хуанг, В.-И.; Хсу, Х.-Ц.; Ианг, С.-Ј.; Хуанг, С.-Л.; Лин, И.-С. Анализа функционалности истрошених екстраката млевене кафе добијених хидротермалном методом. Ј. Цхем. 2019, 2019, 1–8. [ЦроссРеф]

65. Дорта, Е.; Родригез-Родригес, ЕМ; Јименез-Куезада, А.; Фуентес-Лемус, Е.; Спеиски, Х.; Лисси, Е.; Лопез-Аларцон, Ц. Употреба теста капацитета апсорпције радикала кисеоника (ОРАЦ) за предвиђање капацитета нуспроизвода манга (Мангифера индица Л.) да инхибирају оксидацију месних протеина. Фоод Анал. Методе 2016, 10, 330–338. [ЦроссРеф]

66. Лин, И.-С.; Цхен, Х.-Ј.; Хуанг, Ј.-П.; Лее, П.-Ц.; Тсаи, Ц.-Р.; Хсу, Т.-Ф.; Хуанг, В.-И. Кинетика инхибиторне активности тирозиназе коришћењем екстракта листова Витис винифера. БиоМед Рес. Инт. 2017, 2017, 5232680. [ЦроссРеф] [ПубМед]

67. Бидлингмеиер, БА; Цохен, СА; Тарвин, ТЛ Брза анализа амино киселина коришћењем дериватизације пре колоне. Ј. Цхроматогр. ББиомед. Сци. Аппл. 1984, 336, 93–104. [ЦроссРеф]

68. Асаи, ТТ; Оикава, Ф.; Иосхикава, К.; Иноуе, Н.; Сато, К. Колагенски пептиди добијени из хране, пролил-хидроксипролин (Про-Хип) и хидроксипролил-глицин (Хип-Гли) побољшавају раст примарно култивисаног фибробласта мишје коже користећи фетални говеђи серум без хидроксипролил пептида. Инт. Ј. Мол. Сци. 2019, 21, 229. [ЦроссРеф]

69. Сцхаггер, Х. Трицине–СДС–ПАГЕ. Нат. Протоц. 2006, 1, 16–22. [ЦроссРеф]

70. Диао, Ј.; Цхи, З.; Гуо, З.; Зханг, Л. Хидролизат протеина Мунг пасуља модулира имуни одговор путем НФ-кБ пута у макрофагама РАВ 264.7 стимулисаним липополисахаридом. Ј. Фоод Сци. 2019, 84, 2652–2657.[ЦроссРеф]