Људске амнионске мезенхималне матичне ћелије ублажавају АГВХД након Алло-ХСЦТ регулацијом интеракција између цревне микробиоте и цревног имунитета

Апстрактан

Акутна болест трансплантата против домаћина (аГВХД) након алогенске трансплантације хематопоетских матичних ћелија представља један од најзахтевнијих изазова. Дисбиоза цревне микробиоте може да се настави са аГВХД, а мезенхималне матичне ћелије (МСЦ) имају обећавајући терапеутски потенцијал за аГВХД. Међутим, остаје непознато да ли хАМСЦ утичу на микробиоту црева током ублажавања аГВХД-а. Сходно томе, настојали смо да дефинишемо ефекте и основне механизме МСЦ-а (хАМСЦ) добијених из људске амнионске мембране који регулишу микробиоту црева и цревни имунитет у аГВХД. Успостављањем хуманизованих модела мишева аГВХД и третмана хАМСЦс, открили смо да су хАМСЦ значајно побољшали симптоме аГВХД, преокренули имунолошку неравнотежу подгрупа Т ћелија и цитокина и обновили цревну баријеру. Штавише, разноврсност и састав микробиоте црева побољшани су након третмана са хАМСЦ. Спеарманова корелациона анализа је показала да постоји корелација између цревне микробиоте и протеина тесних спојева, имуних ћелија и цитокина. Наше истраживање је сугерисало да хАМСЦс ублажавају аГВХД промовишући нормализацију цревне микробиоте и регулишући интеракције између цревне микробиоте и цревне баријере, имунитета.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Кључне речи

Акутна болест трансплантата против домаћина · Амнионске мезенхималне матичне ћелије · Микробиота црева · Интестинална баријера · Интестинални имунитет

Увод

Примарна предност алогене трансплантације хематопоетских матичних ћелија (ало-ХСЦТ) је снажан антитуморски одговор због ефекта графт-версус-леукемиа (ГВЛ) који се покреће препознавањем пептида који произилазе из разлика у геномским полиморфизмима између пацијента и донатор. Међутим, акутна болест трансплантата против домаћина (аГВХД) се врти око развоја оштећења ткива примаоца услед напада ало-реактивних Т ћелија донора и представља велику компликацију опасну по живот у алоХСЦТ [1, 2]. Пријављено је да микробни поремећај црева изазива инфламаторне одговоре и корелира са болестима повезаним са инфламацијом [3, 4]. Бројне студије су показале да су поремећаји у микробиоти црева есенцијални фактор који покреће аГВХД након ало-ХСЦТ и да постају нова мета за лечење [5, 6]. Конкретно, дисбиозу цревне микробиоте код аГВХД обично карактерише губитак интестиналне бактеријске разноврсности и раст опортунистичких патогена [6]. Код гастроинтестиналног ГВХД-а, компромитована мукозна баријера иницира активацију ћелија које представљају антиген домаћина и Т ћелија донатора, што кулминира диференцијацијом Т-ћелија дуж парадигми патогеног типа-1 и типа-17 на рачун толерогених регулаторних Т-ћелија. обрасци ћелија [7]. Пре свега на основу 16С рибосомалне РНК (16С рРНА) секвенцирање је показало да је више врста цревне микробиоте повезано са ГВХД, а на пример, клостридије које производе бутират су повезане са одржавањем функције епителне баријере и слабљењем акутне ГВХД [8 ]. Мезенхималне матичне ћелије (МСЦ) су привукле велику пажњу у последњој деценији због својих потенцијала за самообнављање и вишелинијске диференцијације, као и имуномодулаторних својстава [9]. Сматра се да МСЦ омогућавају оштећена ткива из уравнотеженог инфламаторног и регенеративног микроокружења у присуству снажне инфламације и да се широко користе за лечење поремећаја заснованих на имунитету, у којима је најуспешнија клиничка примена укључена у лечење ГВХД [10]. Људске амнионске мезенхималне матичне ћелије (хАМЦ) су перинаталне матичне ћелије које поседују способност диференцијације налик на ембрионалне матичне ћелије и имуномодулаторна својства слична матичним ћелијама одраслих. Делећи фенотипове сличне типичним МСЦ-има, хАМСЦ су постали обећавајући извор матичних ћелија захваљујући лакоћи, неинвазивности и безбедности стицања ткива, обилном приносу ћелија и веома ниским етичким и моралним споровима у поређењу са матичним ћелијама из других извора. Хумани АМСЦ имају предности ниске имуногености и нема туморигености, што их чини идеалним извором ћелија за ћелијску терапију [11, 12]. Експерименти ин витро су потврдили да хАМСЦ показују већи пролиферативни капацитет и већу способност дугорочног раста од МСЦ-ова добијених из коштане сржи [13, 14]. Бројне студије су показале да хАМСЦ имају потенцијал да побољшају многе инфламаторне болести, укључујући инфламаторну болест црева, остеоартритис и аутоимуне болести [11]. Наша недавна студија је показала да су хАМСЦ побољшали аГВХД регулацијом равнотеже Т ефекторских и Трег ћелија [15]. Међутим, ефекат и механизам хАМСЦ-а на поремећај цревних микроба код ГВХД-а су непознати. Овде имамо за циљ да истражимо потенцијални утицај хАМСЦ-а на аГВХД, као и микроекосистем црева. То би била прва студија која би открила микробиоту црева и њену корелацију са имунитетом црева након хАМСЦ третмана аГВХД.

Материјали и методе

Изолација, култура и идентификација хАМСЦ

хАМСЦ су екстраховани као што је претходно описано [15]. Ћелије трећег пролаза (П3) су сакупљене од идентификације фенотипа кроз бојење антителима против ЦД34 (581, БД Пхарминген, САД), ЦД45 (ХИ30, БД Пхарминген, САД), ХЛА-ДР (Г46-6, БД Пхарминген) , САД), ЦД11б (ИЦРФ44, БД Пхарминген, САД), ЦД90 (5Е10, БД Пхарминген, САД), ЦД73 ​​(АД2, БД Пхарминген, САД) и ЦД105 (СН6, бионаука, САД), а затим анализирани проточним цитометром ( БД ФАЦС Цанто ИИ). Ћелије су проверене на њихову вишелинијску диференцијацију коришћењем специфичног индукционог медијума (БГсциенце, Кина) и обојене са Оил Ред-О и Ализарин Ред ради адипогенезе и остеогене диференцијације, респективно. За експерименте су коришћени хАМСЦ у пасусима 3 до 6.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

Збирка људских ПБМЦ

Узорци плазме су набављени од здравих добровољаца уз писмени информисани пристанак. Мононуклеарне ћелије људске периферне крви (ПБМЦ) су изоловане из периферне крви Фицолл-Хипакуе (Тиањин Хаоианг, Кина) центрифугирањем по густини, испране ПБС, суспендоване у пуферу за лизу црвене крви (Соларбио, Кина) на 4 степена током 15 минута. Поново опрати и затим суспендовати у ПБС-у за ињекцију у репну вену у НПГ мишеве.

Мишеви

8–10 недеља старости и 25–30 г мужјака и женки НПГ мишева купљени су од Беијинг Виталстар Биотецхнологи Цо., Лтд. и одгајани у условима СПФ у циклусу од 12 х светло-мрак са константном температуром и влажношћу. Све процедуре на животињама је одобрио Институционални комитет за негу и употребу животиња Јужног медицинског универзитета (бр. Л2019132) у складу са смерницама Националног савета за здравље и медицинска истраживања Кине о експериментисању на животињама.

Акутни ГВХД животињски модел и третман

Модел миша аГВХД је успостављен као што је претходно описано [15]. За лечење, 5 × 105 хАМСЦ по мишу (овде хАМСЦ група) и ПБС (овде аГВХД група) су убризгани преко репне вене у сваког миша трећег дана након трансплантације. У свим моделима мишева, мишеви су проверавани свака два дана на морбидитет и промене у тежини. Сваки миш је оцењен за патолошке карактеристике укључујући губитак тежине, погрбљено држање, наборано крзно, лезије на кожи, смањену покретљивост и дијареју, а затим је оцењен према аГВХД клиничком систему бодовања који је прилагођен оном који је првобитно описао Цооке [16]. У неким случајевима, мишеви у групи аГВХД патили су од тешког аГВХД-а, а мишеви у групи хАМСЦс трећег дана након третмана су жртвовани да би сакупили периферну крв и циљне органе укључујући јетру, слезину, плућа и црева. Измет ових мишева је сакупљен пре жртвовања.

ГФП-обележени хАМСЦ и ин виво праћење

ГФП-обележени хАМСЦ су успостављени и идентификовани као што је претходно описано [15]. Укратко, трансфектовали смо ген за зелени флуоресцентни протеин (ГФП) у хАМСЦ са лентивирусом као вектором. 5 × 105 ГФП-обележених хАМСЦ-ова суспендованих у 500 μЛ ПБС убризгане су у аГВХД мишеве преко репне вене. После 24 х и 72 х, мишеви су еутаназирани да би се сакупила црева, а затим су направљени замрзнути делови. ДАПИ супротно бојење је коришћено за разликовање ћелија примаоца.

Хистопатолошка евалуација

Циљни органи аГВХД-а су сакупљени у време некропсије, а затим обрађени у блокове уграђене у парафин да би се генерисали делови дебљине 5- μм за бојење хематоксилином и еозином (Х&Е). Хистолошки резултати су процењени на основу деструкције структуре ткива и инфилтрације лимфоцита [17]. За имунохистохемију, секције су депарафнизоване, рехидриране и третиране са 3% Х2О2 у метанолу током 20 минута да би се инактивирала активност ендогене пероксидазе. Затим су секције подвргнуте преузимању антигена и третиране серумским албумином током 1 х. Након тога, секције су инкубиране са зечјим анти-хуманим ЦД45 антителима (ЕП322И, Абцам, Енглеска) или ЗО{12}} антителима ((ЕПР19945-296, Абцам, Енглеска) 1 х на 37 степени. антитела су детектована са ХРП-коњугованим секундарним антителом (Генентецх, САД) и визуелизована помоћу ДАБ Позитивна област је анализирана помоћу Имаге Ј.

цистанцхе биљке које повећавају имуни систем

16С рРНА Секвенцирање фекалне микробиоте

Фекална геномска ДНК је екстрахована из 0.1 г смрзнутих фекалних узорака коришћењем ЕЗНА® ДНК комплета столице (Омега БиоТек, Норцросс, ГА, САД) у складу са протоколом произвођача. Користећи геномску ДНК као шаблон, специфични прајмери ​​(338Ф: 5′-АЦТЦЦТАЦГГГАГГЦАГЦА-3′, и 806Р: 5′-ГГАЦТАЦХВГГГТВТЦТААТ-3′) са бар кодовима и ПремикплТак (ТаКа) су коришћени за појачавање В3-В4 хиперваријабилни региони бактеријског 16С рРНА гена. После амплификације и пречишћавања, цео геном узорка је секвенциониран на Иллумина Хисек или Мисек платформи за секвенционирање високе пропусности од стране Магигене Тецхнологи Цо., Лтд. (Гуангџоу, Кина) да би се добили необрађени подаци у ФАСТК формату. Анализе података о секвенци су углавном вршене помоћу платформе Магицханд.

Проточна цитометријска анализа

Добијени су аГВХД циљни органи и периферна крв мишева и припремљени у једноћелијску суспензију. Ћелије су обојене моноклонским антителима против ЦД3 (УЦХТ1, Биолегенд, САД), ЦД4 (РПА-Т4, Инвитроген, САД), ЦД8 (РПА-Т8, Биолегенд, САД), ЦД25 (БЦ96, Биолегенд, САД) или усклађених изотипова контролисати ИгГ (еБиосциенце, САД) 30 мин на собној температури у мраку. Затим су ћелије обрађене пуфером за лизирање (БД Пхарм Лисе™) на 4 степена у мраку 15 минута. Интрацелуларно Фокп3 (236А/Е7, Инвитроген, САД) бојење је обављено према препорукама произвођача (Фикатион/Пермеабилизатион Солутион Кит; еБиосциенце). Затим су извршене полихроматске проточне цитометријске анализе на проточном цитометру.

Цитокинес Куантитатион

Нивои цитокина у серуму и супернатанту ткива мишева одређивани су коришћењем комплета цитокина Цитометриц Беад Арраи (ЦБА) Хуман Тх1/Тх2/Тх17 (БД Пхарминген, САД) према упутствима произвођача. Укратко, 50 μЛ сваког од узорака супернатанта је инкубирано са 50 μЛ мешаних перли за хватање Тх1/Тх2/Тх17 цитокина и 50 μЛ хуманог Тх1/Тх2/Тх17 ПЕ детекционог реагенса на собној температури у мраку, а затим суспендовано за анализу проточне цитометрије 3 х касније.

Укупна РНК је екстрахована из ткива дебелог црева миша након изолације коришћењем Тризол реагенса (ТаКаРа, Кина). Укупна РНК је коришћена као шаблон за реверзну транскрипцију цДНК. -актин је коришћен као интерна референца. Експресија мРНА је мерена кПЦР коришћењем следећих прајмера: ЗО-1-Ф, 5'-АЦЦАЦЦААЦЦЦГАГААГАЦ-3' и ЗО- 1-Р, 5'-ЦАГГАГТЦАТГГАЦГЦАЦА-3 '; Оццлудин-Ф, 5'-ТТГАААГТЦЦАЦЦТЦЦТТАЦАГА-3', и ОццлудинР, 5'-ЦЦГГАТАААААГАГТАЦГЦТГГ-3'; -ацтин-Ф, 5'-ГГЦТГТАТТЦЦЦЦТЦЦАТЦГ-3', и -ацтин-Р, 5'-ЦЦАГТТГГТААЦААТГЦЦАТГТ-3'. За мерење нивоа експресије РНК коришћена је 2-цт метода.

Ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА)

Нивои Д-ЛА и ДАО у плазми мерени су коришћењем ЕЛИСА комплета (Јингмеи, Кина) према упутствима произвођача. Укратко, сакупљени супернатанти плазме су стављени у 96-плоче обложене антителом, респективно. Апсорбанца је забележена на 450 нм коришћењем читача микроплоча (Мултискан МК3, Тхермо Фисхер Сциентифиц).

Статистичка анализа

Подаци су представљени као средња вредност ± СД. Т-тест независних узорака је изведен и визуелизован коришћењем ГрапхПад Присм8.0. Анализа података секвенцирања 16С рРНА је обављена коришћењем платформе Магицханд (хттп://цлоуд.магигенецом/). Анализа корелације између цревне микробиоте и имунитета спроведена је помоћу Р пакета (в3.6.3) да би се приказала матрица корелације. П вредности<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.

Резултати

Идентификација хАМСЦ

хАМСЦ су показали полигонску или фибробластну морфологију у култури (слика 1А) и били су снажно позитивни на површинску експресију МСЦ-специфичних маркера ЦД90, ЦД105 и ЦД73, али негативни на ЦД34, ЦД45, ХЛА-ДР и ЦД11б (Сл. 1Ц). Што се тиче вишелинијске диференцијације, наши резултати су показали да хАМСЦ показују адипоцитну и остеобластичну диференцијацију (слика 1Б).

хАМСЦ су значајно ублажили симптоме аГВХД код мишева

Прво смо проценили терапеутски ефекат хАМСЦ-а на аГВХД. У поређењу са групом аГВХД, хАМСЦс су значајно побољшале аГВХД, што је доказано значајно смањеним губитком тежине (слика 2Б) и смањеним клиничким резултатом аГВХД (слика 2Ц). Штавише, група хАМСЦс имала је значајно већу стопу преживљавања у поређењу са аГВХД мишевима (слика 2Д). Патолошка хистолошка анализа је показала да је аГВХД изазвао тешка оштећења ткива и инфилтрацију леукоцита. хАМСЦс, као што је показао Х&Е, ослабио је поремећај ткива и инфилтрацију егзогених Т ћелија у циљне органе аГВХД (слика 2Е). Доследно, резултати ИХЦ су такође потврдили да хАМСЦ побољшавају абнормалне патолошке манифестације (слика 2Ф). Ови резултати сугеришу да хАМСЦ имају потенцијал да побољшају симптоме аГВХД код аГВХД мишева.

хАМСЦ су утицали на имунитет домаћина код аГВХД мишева

Да бисмо разумели основне имуномодулаторне механизме помоћу којих хАМСЦ смањују аГВХД, измерили смо активацију и експанзију Т ћелија у периферној крви и циљним органима. Тест проточне цитометрије је открио да хАМСЦ значајно инхибирају број ЦД3+ЦД4+Т и ЦД3+ЦД8+Т ћелија у крви и циљним органима (слика 3А, Б). Штавише, удео ЦД4+ЦД25+Фокп3+Трегова у крви и циљним органима мишева у групи хАМСЦс био је значајно већи од оног у аГВХД групи (слика 3Ц) . Затим смо истражили ефекат хАМСЦ на профил цитокина (слика 4). администрација хАМСЦ-а је довела до очигледног смањења нивоа ИЛ-17А, ИФН-, ТНФ, ИЛ-6 и ИЛ-2 у циљним органима и крви у поређењу са нивоима аГВХД групе, осим нивоа ТНФ-а у слезини. У међувремену, поред нивоа ИЛ-10 у јетри, мишеви који су третирани хАМСЦс су показали значајно повећане нивое ИЛ-10 и ИЛ-4 у циљним органима и крви. Узети заједно, хАМСЦ су играли заштитну улогу у аГВХД тако што су преокренули имунолошку неравнотежу подскупова Т ћелија и цитокинске олује.

Предности цистанцхе тубулоса- ојачати имуни систем

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Енханце Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

хАМСЦ су побољшали оштећење цревне баријере код аГВХД мишева

Да бисмо истражили да ли хАМСЦ могу да поправе цревну баријеру код аГВХД, прво смо приметили да ли хАМСЦ могу да мигрирају у црева. Као што је приказано на слици 5А, хАМСЦ обележени ГФП су откривени у цревима након ињекције у хАМСЦ и могли су да се усаде и инфилтрирају у цревима. Затим смо дизајнирали хистопатолошки преглед ткива танког црева. У групи аГВХД, црево је еродирано и некротизирано, цревне ресице су очигледно уништене, ресице су сломљене и масивни леукоцити су инфилтрирали цревну слузокожу, субмукозу и ламина проприа. Интестиналне ресице су редовно распоређене и није дошло до лома цревних ресица или одвајања вилозног епитела након третмана хАМСЦ (слика 5Б). Инфилтрација хуманих лимфоцита је такође примећена имунохистохемијом у цревима у групи аГВХД, док је третман хАМСЦс могао да смањи њихову инфилтрацију (слика 5Ц). Да бисмо проценили заштитни ефекат хАМСЦ на интегритет цревне слузокоже, урадили смо имунохистохемију да бисмо открили ефекат на ЗО-1. У групи која је третирала хАМСЦс, ниво експресије протеина чврстог споја ЗО-1 је значајно повећан у поређењу са групом аГВХД (слика 5Д). Такође смо испитали нивое експресије мРНА интестиналних протеина чврстог споја (ТЈс) и нивое Д-млечне киселине (Д-ЛА) и диамин оксидазе (ДАО) у плазми да бисмо одредили функцију цревне баријере и цревну пермеабилност. Када се дају интравенозно, хМАСЦ би могли значајно да повећају нивое експресије мРНА ЗО-1 и Оццлудина, кључних протеина ТЈ (Слика 5Е, Ф), док смањују нивое Д-ЛА и ДАО (Слика 5Г, Х). Дакле, када се појавио аГВХД, цревна баријера је оштећена смањењем цревних протеина тесног споја и повећањем цревне пермеабилности. У међувремену, хАМЦС би могли значајно да преокрену поремећај цревне баријере.

Слика 1 Фенотипска и функционална карактеризација хАМСЦ. (А) Репрезентативне микрографије хАМСЦ-а од пасуса 0 до 3 (без бојења, 100×). (Б) Способност вишелинијске диференцијације хАМ СЦ-а. Адипогена диференцијација хАМСЦ-а (лево) обојена је Оил Ред-О, а остеобластична диференцијација хАМСЦ-а (десно) обојена је Ализарин Ред (бојењем, 100 ×). (Ц) Проточна цитометријска анализа која показује да су хАМСЦ позитивни на ЦД90, ЦД105 и ЦД73 ​​док су негативни на ЦД34, ЦД45, ЦД11б и ХЛА-ДР

Слика 2 хАМСЦ су ублажили аГВХД код НПГ мишева. (А) Шематски дијаграм који илуструје распоред администрације хАМСЦ у аГВХД моделима миша. (Б) Промене телесне тежине у различитим групама (н=10). (Ц) аГВХД клинички скор (засновано на губитку тежине, погрбљеном држању, нарушеном крзну, лезијама коже, смањеној покретљивости и дијареји) у различитим групама (н=10). (Д) Опстанак међу различитим групама (н=10). (Е) Репрезентативне микроскопске слике Х&Е бојења (400×) и хистолошке оцене (засноване на деструкцији структуре ткива и инфлтрацији лимфоцита) (н=4). (Ф) Репрезентативне микроскопске слике имунохистохемије (400×) и пропорција ЦД45 позитивне области (н=4). Вредности су представљене као средња вредност±СД

Слика 3 хАМСЦс су инхибирали експанзију Т ћелија донора док су побољшали стварање или експанзију Трегс ин виво. (А) Анализа проточне цитометрије ЦД3+ЦД4+Т ћелија(н=6), (Б) Анализа проточне цитометрије ЦД3+ЦД8+ Т ћелије (н=6), (Ц) Анализа проточне цитометрије ЦД4+ЦД25+Фокп3+Трегова (н=6). Вредности су представљене као средња вредност±СД

Слика 4 хАМСЦ-и су смањили регулацију проинфламаторних цитокина ИЛ-17А, ИФН-, ТНФ, ИЛ-6, ИЛ-2 и појачано регулисане антиинфламаторне цитокине ИЛ-10 и ИЛ -4 ин виво (н=5). Вредности су представљене као средња вредност±СД

Алтернације цревне микробиоте након третмана хАМСЦ код аГВХД мишева

Секвенцирање 16С рРНА је изведено у ДНК фекалних бактерија изолованих из различитих група мишева. Индекси -диверзитета, укључујући индексе ОУТ, Цхао1 и Сханнон, испољили су сличне тенденције, а мишеви који су третирани хАМСЦс су имали микробиоту са значајно већом -диверзитетом у односу на групу аГВХД (слика 6А). Анализа главних координата (ПЦоА) заснована на Ун веигхтед-унифрац дистанце, Менхаттан дистанце и Браи-Цуртис метричке удаљености, дала је дисперзоване тачке података на дијаграмима две групе, упркос томе што разлика није била значајна (слика 6Б). Након тога, проценили смо пејзаж микробиоте црева да бисмо даље истражили потенцијалну разлику у саставу између две групе. Израчунато је укупно 773 ОТУ, а група хАМСЦс имала је веће ОТУ у поређењу са групом аГВХД (слика 6Ц). У погледу бактеријског састава на нивоу филума, Фирмицутес и Бацтероидетес су били два најпревладавајућа типа (слика 6Д). Такође смо организовали упоредну топлотну мапу за анализу микробиоте црева између две групе (слика 6Е). Род Одорибацтер и Руминоцоццус_1 показао је релативно високу заступљеност у групи хАМСЦ, који су важни микроби за одржавање цревне хомеостазе (Слика 6Ф, Г). Да бисмо потврдили која је бактерија измењена третманом хАМСЦ-а и заузврат утицала на прогресију болести против аГВХД, извршили смо поређења класа високих димензија користећи линеарну дискриминантну анализу (ЛДА) величине ефекта (ЛЕфСе) која је открила значајне разлике у превласти бактеријских заједница између две групе. Као што је приказано на (Слика 6Х, И), Стрептоцоццацеае (породица и род Стрептоцоццус), Палудибацтерацеае, Ф0058 и Делфтиа су биле кључне врсте бактерија које доприносе дисбиози цревне микробиоте у групи аГВХД. Ипак, корисне бактерије Лацхноспирацеае, Росебуриа, Руминоцоццацеае, Руминицлостридиум, Осциллибацтер и Цлостридиа (класа и ред Цлостридиалес) показале су релативно обогаћивање у групи хАМСЦ, што би могло бити повезано са ублажавањем аГВХД-а посредованим хАМСЦ. Заједно, разноврсност и састав цревне микробиоте побољшани су након примене хАМСЦ-а и кретали се у општем тренду који је био користан за тело.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

хАМСЦ су регулисали интеракције између цревне микробиоте и цревног имунитета

Да би се разумео потенцијални однос између микробиоте црева и баријере цревне слузокоже, корелације између ТЈ и цревне микробиоте на нивоу рода анализиране су Спеармановом корелационом анализом. Као што је приказано на слици 7, постојала је позитивна веза између ЗО-1 и корисних бактерија, Руминоцоццацеае_УЦГ.014, Мурибацулум, Руминоцоццус_1 и Руминицлостридиум_9. Релативна бројност корисних бактерија, Росебуриа, Одорибацтер, Руминоцоццус_1, и Руминоцоццацеае_УЦГ.014, показала је драматичну позитивну корелацију са Оццлудин. Затим смо спровели анализу корелације између микробиоте црева и цревне имунолошке баријере помоћу Спеарманове методе корелације ранга (слика 7). Приметили смо да је повећање Росебурије, Мурибацулума и Руминокока _1 негативно повезано са процентом ЦД3 +ЦД4+Т ћелија. Поред тога, повећање корисних бактерија, Руминоцоццус_1 и Руминицлостридиум _9, било је у позитивној корелацији са процентом Трег-ова, док је у негативној корелацији са ИЛ-17. Бројност Лацтобациллуса и Цандидатус_Артхромитуса била је у негативној корелацији са ИФН-. Постојала је негативна корелација између обиља Мурибацулума и ИЛ-2. Повећање бројности Цандидатус_Саццхаримонас и смањење Есцхерицхиа. Бројност шигела је била у позитивној корелацији са нивоом ИЛ-10 (слика 7). Резултати корелационе анализе су показали да су хАМСЦ побољшали инфламаторно окружење домаћина и регулисали цревну хомеостазу која може бити повезана са модулацијом цревне микробиоте, и последично спречити аГВХД.

Слика 5 хАМСЦс је побољшао дисфункцију цревне баријере код аГВХД мишева. (А) ГФП-обележени хАМСЦ инфилтрирани у црева. (Б) Репрезентативне микроскопске слике Х&Е бојења црева (400×) и хистолошки резултат (засновано на деструкцији структуре ткива и инфилтрацији лимфоцита) (н=4). (Ц) Репрезентативне микроскопске слике имунохистохемије (400×) црева и пропорција ЦД45 позитивне површине (н=4). (Д) Репрезентативне микроскопске слике имунохистохемије (400×) црева и пропорције ЗО-1 позитивне области (н=4). (Е) нивои експресије мРНА ЗО-1 и оклудина (н=3). (Ф) Нивои Д-ЛА и ДАО у плазми (н=4).Вредности су представљене као средња вредност±СД

Дискусија

Напредна микробна анализа пружила је нове увиде у сложене интеракције између микробиоте домаћина и црева [18]. Микробиота црева могла би да се промени након ало-ХСЦТ и уско је повезана са аГВХД, што сугерише да микробиота црева може бити нова мета за лечење аГВХД [5]. Бројне студије, укључујући нашу недавну студију, истражиле су и потврдиле терапеутски ефекат МСЦ на аГВХД [15, 19, 20]. Међутим, ефекат на микробиоту црева током овог периода остаје нејасан. У овој студији смо истражили утицај хАМСЦ-а на аГВХД и потенцијалне механизме у њему ин виво. У складу са претходним студијама [15, 21–23], наши резултати су показали да хАМСЦ имају повољан заштитни ефекат на аГВХД код мишева, о чему сведоче ослабљени симптоми аГВХД и продужено преживљавање. Такође смо показали да хАМСЦ показују имуносупресивни ефекат кроз смањење експанзије Т ћелија донора, док истовремено повећавају генерисање Трегс у аГВХД. У међувремену, хАМСЦ би могли смањити проинфламаторне цитокине и појачати антиинфламаторне цитокине ин виво, тако да инхибирају инфламаторне одговоре. Интестинална баријера, густа структура састављена од монослоја цревних епителних ћелија, одржава свој интегритет и спречава транслокацију луминалне микробиоте у здраво стање [24]. Током ало-ХСЦТ, режими кондиционирања оштећују цревну баријеру, што је почетни корак у развоју аГВХД, јер дозвољава транслокацију бактерија преко баријере и доводи до нарушавања цревне имунолошке хомеостазе [24, 25]. Акумулирани докази показују да МСЦ поседују способност поправке ткива, за коју је доказано да поправља интегритет цревне баријере код мишева са колитисом [26]. Протеини тесног споја, укључујући ЗО-1 и Оццлудин, имају суштинску улогу у функцији цревне баријере и транслокација цревне микробиоте преко оштећене цревне баријере изазива упалу [27]. Д-ЛА се добија из цревних бактерија, а ДАО се углавном концентрише у цревној слузокожи. Дакле, високе концентрације Д-ЛА и ДАО у плазми могу делимично да одражавају промене у цревној пермеабилности и функцији цревне баријере [28]. Тренутно смо открили да су нивои експресије ТЈ-а драматично порасли након примене хАМСЦ-а, док су се нивои Д-ЛА и ДАО у плазми значајно смањили, што указује да би хАМСЦ-и могли побољшати дисфункцију цревне баријере и опоравити цревну пермеабилност. Црева су један од органа који су најтеже погођени аГВХД и истраживања су истакла да бактерија, посебно цревна микробиота, игра централну улогу у патогенези и развоју аГВХД [5, 6]. Као што је објављено у претходним студијама, губитак бактеријске разноликости пацијената са ало ХСЦТ био је повезан са повећаном смртношћу од аГВХД [29, 30]. Фекална доминација опортунистичких патогена Ентероцоццус и Протеобацтериа такође је повезана са повећаном ГВХД [6, 31]. Последњих деценија повећана пажња је посвећена корелацији између цревне микробиоте и третмана МСЦ код инфламаторних болести. Доказано је да МСЦ побољшавају дисбиозу цревне микробиоте код реуматоидног артритиса, сепсе и инфламаторне болести црева [32–34]. Да бисмо даље истражили механизам којим хАМСЦ побољшавају аГВХД, истражили смо утицај хАМСЦ-а на микробиоту црева. У тренутној студији, примена хАМСЦ-а показала је значајан ефекат на -разноврсност микробних заједница у поређењу са без трансплантације, што указује да би се обиље цревне микробиоте могло променити након третмана хАМСЦ-има. Међутим, није било значајне разлике у мерењима диверзитета, вероватно због мале величине узорка обе групе или недовољног циклуса лечења хАМСЦ. Анализа која је користила упоредну топлотну мапу у нивоима рода показала је да је примена хАМСЦ повећала обиље корисних бактерија, Одорибацтер и Руминоцоццус_1 у цревној флори, који су произвођачи кратколанчаних масних киселина (СЦФА) са антиинфламаторним својствима [35 , 36]. Да би се идентификовале основне доминантне бактерије посредоване трансплантацијом хАМСЦ, ЛЕфСе анализа је спроведена између две групе. У поређењу са аГВХД групом, третман хАМСЦс значајно је повећао обиље неких корисних микроба који се односе на антиинфламаторне ефекте, као што су Лацхноспирацеае, Росебуриа, Руминококацеае, Руминицлостридиум, Осциллибацтер, Цлостридиа, за које је све описано да су корисни за производњу СЦ-ФА [метаболита]. 37–42]. Дакле, наша запажања су показала да је након примене хАМСЦ-а дошло до побољшања дисбиозе цревне микробиоте, што се манифестује побољшаном разноврсношћу и повећаним релативним обиљем корисних бактерија.

Слика 6 Алтернације цревне микробиоте код аГВХД мишева. (А) поређење -диверзитета. (Б) поређење -диверзитета. (Ц) Венов дијаграм ОТУ-а. (Д) Релативна бројност бактерија на нивоу типа. (Е) Топлотна карта обиља врста на нивоу рода. (Ф) Релативна заступљеност Одорибацтера на нивоу рода. (Г) Релативна бројност Руминокока_1 на нивоу рода. (Х) Кладограм заснован на ЛЕфСе анализи. (И) ЛДА резултат израчунат на основу карактеристика различито заступљених између аГВХД и хАМСЦ група. (АИ) н=3 мишева по групи. Вредности су представљене као средња вредност±СД

аГВХД је компликован инфламаторни процес који је покренут уништавањем интегритета цревне баријере праћено транслокацијом цревне микробиоте и њених компоненти. Препознавање молекуларних образаца повезаних са оштећењем и молекуларних образаца повезаних са патогеном од стране ћелија које представљају антиген индукује проинфламаторни одговор укључујући активацију Т ћелија и цитокинску олују да погорша оштећење цревне баријере и промовише развој аГВХД [24, 43]. С друге стране, микробиота црева и метаболити добијени из микробиоте, као што су СЦФА, играју важну улогу у одржавању интегритета цревне баријере и цревне хомеостазе, као и у обликовању имуног система слузокоже и балансирању одбране домаћина са микробним компонентама и метаболитима [24, 44] . Интеркомуникација између домаћина и цревне микробиоте на цревној баријери регулише мукозне и системске имуне одговоре и, у патолошким стањима, може резултирати ГВХД [6, 45, 46]. Сугерише да је микробиота црева уско повезана са експресијом протеина тесних спојева [47]. Ова студија је показала да је експресија мРНА ТЈс ЗО-1 и Оццлудина била у негативној корелацији са релативном количином штетних бактерија, док је имала позитивну корелацију са корисним бактеријама, што указује да је микробиота црева важна за одржавање интегритета цревна баријера. Поред тога, микробиота црева је такође веома важна у одржавању цревне имунолошке баријере [47]. Приметили смо да су неке од корисних бактерија биле у негативној корелацији са процентом ЦД3+ЦД4+Т ћелија, али у позитивној корелацији са процентом Трег-ова. Овде смо открили да су корисне бактерије, углавном произвођачи СЦФА, биле у негативној корелацији са проинфламаторним цитокинима, али у позитивној корелацији са антиинфламаторним цитокинима, док су штетне бактерије у обрнутој корелацији. Укратко, значајна разлика у микробиоти црева између третмана сугерише пуну слику интеракција између цревне микробиоте и цревне баријере, имунитета. Још увек је било неколико ограничења о којима вреди разговарати у нашим експериментима. Прво, иако је наша студија истраживала ефекте хАМСЦ-а на имунитет, цревну баријеру и цревну микробиоту у аГВХД, основни механизам још увек треба да буде верификован у даљем истраживању. Друго, исцрпљивање микробиоте црева и трансплантација фекалне микробиоте су потребни да би се решиле узрочне корелације између цревне микробиоте, цревне баријере и имунитета. Треће, даља истраживања која истражују утицај хАМСЦ-а на СЦФА-е изведене из микробиоте и друге метаболите су оправдана. У закључку, наше истраживање је сугерисало да хАМСЦ ублажавају аГВХД промовишући нормализацију цревне микробиоте и регулишући интеракције између цревне микробиоте и цревне баријере, имунитета. Наша студија је прва која систематски дефинише ефекте и основне механизме хАМСЦ-а који регулишу микробиоту црева и цревни имунитет у аГВХД.

Слика 7 Анализа корелације између цревне микробиоте и цревног имунитета. Спеарманова корелациона анализа је спроведена између релативне количине 15 различитих цревних микробиота (на нивоу рода) и нивоа експресије мРНК ТЈс, процента имуних ћелија као и концентрације цитокина у цревима међу две групе. Спеарман р вредности се крећу од -0.5 (плава) до 0.5 (црвена)

Референце

1. Сцхмид, Ц. (2021). Корак ближе ГВЛ-у без ГВХД-а. Крв, 137(19), 2565–2566. хттпс://дои.орг/10.1182/блоод.2020010132

2. Цханг, И., Зхао, Кс., & Хуанг, Кс. (2018). Стратегије за побољшање и очување ефеката против леукемије без погоршања болести трансплантата против домаћина. Фронтиерс ин Иммунологи, 9, 3041. хттпс://дои.орг/10.3389/фмму.2018.03041

3. Зху, В., Винтер, МГ, Биндлосс, МКС, Спига, Л., Дуеркоп, БА, Хугхес, ЕР, Буттнер, Л., де Лима Ромао, Е., Бехрендт, ЦЛ, Лопез, ЦА, Сифуентес- Домингуез, Л., Хуф-Харди, К., Вилсон, РП, Гиллис, ЦЦ, Тукел, Ц., Кох, АИ, Бурстеин, Е., Хоопер, ЛВ, Баумлер, АЈ, & Винтер, СЕ (2018). Прецизно уређивање микробиоте црева побољшава колитис. Природа, 553(7687), 208–211. хттпс://дои.орг/10.1038/натуре25172

4. Зхао, Л., Зханг, Ф., Динг, Кс., Ву, Г., Лам, ИИ, Ванг, Кс., Фу, Х., Ксуе, Кс., Лу, Ц., Ма, Ј. , Иу, Л., Ксу, Ц., Рен, З., Ксу, И., Ксу, С., Схен, Х., Зху, Кс., Схи, И., Схен, К., … Зханг, Ц (2018). Бактерије црева које се селективно промовишу дијеталним влакнима ублажавају дијабетес типа 2. Сциенце (Њујорк, Њујорк), 359 (6380), 1151–1156. хттпс:// дои.орг/10.1126/сциенце.аао5774

5. Шоно, И., и ван ден Бринк, МРМ (2018). Повреда цревне микробиоте у алогеној трансплантацији хематопоетских матичних ћелија. Рецензије о природи. Рак, 18(5), 283–295. хттпс://дои.орг/10.1038/ нрц.2018.10

6. Стафас, А., Бургос да Силва, М., и ван ден Бринк, МРМ (2017). Интестинална микробиота у алогеној трансплантацији хематопоетских ћелија и болести трансплантата против домаћина. Крв, 129(8), 927–933. хттпс://дои.орг/10.1182/блоод-2016-09-691394

7. Ву, К., Иуан, И., Иу, Х., Даи, Кс., Ванг, С., Сун, З., Ванг, Ф., Феи, Х., Лин, К., Јианг, Х. ., & Цхен, Т. (2020). Метаболит цревних микроба триметиламин Н-оксид погоршава ГВХД индукујући поларизацију М1 макрофага код мишева. Крв, 136(4), 501–515. хттпс://дои.орг/10.1182/блоод.2019003990

8. Матхевсон, НД, Јенк, Р., Матхев, АВ, Коенигскнецхт, М., Ханасх, А., Тоубаи, Т., Оравецз-Вилсон, К., Ву, С., Сун, И., Росси, Ц ., Фујивара, Х., Биун, Ј., Схоно, И., Линдеманс, Ц., Цалафоре, М., Сцхмидт, ТМ, Хонда, К., Иоунг, ВБ, Пеннатхур, С., … Редди, П. (2016). Метаболити добијени из цревног микробиома модулирају оштећење епителних ћелија црева и ублажавају болест трансплантата против домаћина. Натуре Иммунологи, 17(5), 505–513. хттпс://дои.орг/10.1038/ни.3400

9. Даве, ЈР, Цхандекар, СС, Бехера, С., Десаи, КУ, Салве, ПМ, Сапкал, НБ, Мхаске, СТ, Девле, АМ, Покаре, ПС, Паге, М., Јог, А., Цхивте , ПА, Сривастава, РК, & Томар, ГБ (2022). Људске мезенхималне матичне ћелије гингиве задржавају свој раст и имуномодулаторне карактеристике независно од старости донора. Сциенце Адванцес, 8(25), м6504. хттпс://дои.орг/10. 1126/сциадв.абм6504

10. Зхао, К., & Лиу, К. (2016). Клиничка примена мезенхималних стромалних ћелија у трансплантацији хематопоетских матичних ћелија. Јоурнал оф Хематологи & Онцологи, 9(1), 46. хттпс://дои.орг/ 10.1186/с13045-016-0276-з

11. Лиу, К., Хуанг, К., Ву, Х., Зуо, Г., Гу, Х., Денг, К., & Ксин, Х. (2021). Карактеристике и терапеутски потенцијал матичних ћелија људских амниона. Међународни часопис за молекуларне науке, 22(2), 970. хттпс://дои.орг/10.3390/ијмс22020970

12. Ли, Ј., Зхоу, З., Вен, Ј., Јианг, Ф., & Ксиа, И. (2020). Људске амнионске мезенхималне матичне ћелије промовишу ендогену регенерацију костију. Фронтиерс ин Ендоцринологи, 11, 543623. хттпс://дои.орг/10.3389/фендо.2020.543623

13. Диаз-Прадо, С., Муинос-Лопез, Е., Хермида-Гомез, Т., Циционе, Ц., Рендал-Вазкуез, МЕ, Фуентес-Бокуете, И., де Торо, ФЈ, Бланцо, ФЈ ( 2011). Људска амнионска мембрана као алтернативни извор матичних ћелија за регенеративну медицину. Диференцијација; Истраживање биолошке разноврсности, 81(3), 162–171. хттпс:// дои.орг/10.1016/ј.диф.2011.01.005

14. Хонг, Ј., Гао, И., Сонг, Ј., Зхуо, В., Сун, Х., & Пинг, Б. (2016). Поређење биолошких карактеристика и имуносупресивне активности између хуманих амнионских мезенхималних матичних ћелија и мезенхималних матичних ћелија људске коштане сржи. Зхонггуо Схи Иан Ксуе Ие Ксуе За Зхи, 24(3), 858–864. хттпс:// дои.орг/10.7534/ј.иссн.1009-2137.2016.03.041

15. Гао, И., Ли, В., Бу, Кс., Ксу, И., Цаи, С., Зхонг, Ј., Ду, М., Сун, Х., Хуанг, Л., Хе, И ., Ху, Кс., Лиу, К., Јин, Х., Ванг, К., & Пинг, Б. (2021). Људске амнионске мезенхималне матичне ћелије инхибирају аГВХД регулацијом равнотеже Трег и Т ефецтор ћелија. Јоурнал оф Инфламматион Ресеарцх, 14, 3985–3999. хттпс://дои.орг/10.2147/ ЈИР.С323054

16. Цооке, КР, Кобзик, Л., Мартин, ТР, Бревер, Ј., Делмонте, ЈЈ, Цравфорд, ЈМ, & Феррара, ЈЛ (1996). Експериментални модел синдрома идиопатске пнеумоније након трансплантације коштане сржи: И. Улоге минорних Х антигена и ендотоксина. Блоод, 88(8), 3230–3239.

17. Ианез, Р., Ламана, МЛ, Гарциа-Цастро, Ј., Цолменеро, И., Рамирез, М., & Буерен, ЈА (2006). Мезенхимске матичне ћелије добијене из масног ткива имају ин виво имуносупресивна својства применљива за контролу болести трансплантата против домаћина. Матичне ћелије (Дејтон, Охајо), 24(11), 2582–2591.

18 Хоопер, ЛВ, Литтман, ДР, и Мацпхерсон, АЈ (2012). Интеракције између микробиоте и имуног система. Сциенце (Њујорк, Њујорк), 336 (6086), 1268–1273. хттпс://дои.орг/10.1126/ сциенце.1223490

19. Келли, К., & Рашко, ЈЕЈ (2021). Мезенхималне стромалне ћелије за лечење болести трансплантата против домаћина. Фронтиерс ин Иммунологи, 12, 761616. хттпс://дои.орг/10.3389/фмму.2021.761616

20. Мациас-Санцхез, МДМ, Мората-Тарифа, Ц., Цуенде, Н., Цардеса-Гил, А., Цуеста-Цасас, М. А., Пасцуал-Цасцон, МЈ, Пасцуал, А., Мартин-Цалво , Ц., Јурадо, М., Перез-Симон, ЈА, Еспигадо, И., Гарзон Лопез, С., Цармона Санцхез, Г., Мата-Алцазар-Цабаллеро, Р., & Санцхез-Пернауте, Р. (2022. ). Мезенхималне стромалне ћелије за лечење акутне и хроничне болести трансплантата против домаћина отпорне на стероиде: искуство вишецентричне саосећајне употребе. Транслациона медицина матичних ћелија, 11(4), 343–355. хттпс://дои.орг/10.1093/стцлтм/сзац003

21. Таго, И., Кобаиасхи, Ц., Огура, М., Вада, Ј., Иамагуцхи, С., Иамагуцхи, Т., Хаиасхи, М., Накаисхи, Т., Кубо, Х., & Уеда, И. (2021). Мезенхимске матичне ћелије добијене из људског амниона ублажавају ксеногену болест трансплантата против домаћина спречавањем активације и пролиферације Т ћелија. Сциентифц Репортс, 11(1), 2406. хттпс://дои. орг/10.1038/с41598-021-81916-и

22. Иамахара, К., Харада, К., Охсхима, М., Исхикане, С., Охнисхи, С., Тсуда, Х., Отани, К., Тагуцхи, А., Сома, Т., Огава, Х. ., Катсураги, С., Иосхиматсу, Ј., Харада-Схиба, М., Кангава, К., & Икеда, Т. (2014). Поређење ангиогених, цитопротективних и имуносупресивних својстава мезенхимских матичних ћелија људских амниона и хориона. ПЛоС Оне, 9(2), е88319. хттпс:// дои.орг/10.1371/јоурнал.поне.0088319

23. Јамахара, К., Хамада, А., Сома, Т., Окамото, Р., Окада, М., Јошихара, С., Јошихара, К., Икегаме, К., Тамаки, Х., Каида, К. ., Иноуе, Т., Охсуги, И., Нисхикава, Х., Хаиасхи, Х., Ито, ИМ, Иијима, Х., Охнисхи, С., Хасхимото, Д., Исое, Т., … Фујимори, И (2019). Безбедност и ефикасност мезенхималних матичних ћелија добијених из амниона (АМ01) код пацијената са акутном болешћу графт-версус-хост-а отпорном на стероиде након алогене трансплантације хематопоетских матичних ћелија: протокол студије за јапанско испитивање фазе И/ИИ. БМЈ Опен, 9(7), е26403. хттпс://дои.орг/10.1136/бмјоп ен-2018-026403

24. Лин, Д., Ху, Б., Ли, П., Зхао, И., Ксу, И., & Ву, Д. (2021). Улоге цревне микробиоте и микробних метаболита у акутној ГВХД. Експериментална хематологија и онкологија, 10(1), 49. хттпс:// дои.орг/10.1186/с40164-021-00240-3

25. Гхимире, С., Вебер, Д., Мавин, Е., Ванг, КСН, Дицкинсон, АМ, & Холлер, Е. (2017). Патофизиологија ГвХД и других великих компликација повезаних са ХСЦТ. Фронтиерс ин Иммунологи, 8, 79. хттпс://дои.орг/10.3389/фмму.2017.00079

26. Ксу, Ј., Ванг, Кс., Цхен, Ј., Цхен, С., Ли, З., Лиу, Х., Баи, И., & Зхи, Ф. (2020). Мезенхимске матичне ћелије изведене из ембрионалних матичних ћелија промовишу интегритет епитела дебелог црева и регенерацију тако што подижу циркулишући ИГФ-1 код мишева са колитисом. Тхераностицс, 10(26), 12204–12222. хттпс://дои.орг/10.7150/тхно.47683

27. Зхао, И., Хуанг, Ј., Ли, Т., Зханг, С., Вен, Ц., & Ванг, Л. (2022). Берберин побољшава аГВХД ремоделирањем микробиоте црева, потискивањем сигнала ТЛР4 и поправком баријере дебелог црева за инхибицију инфламасома НЛРП3. Јоурнал оф Целлулар анд Молецулар Медицине, 26(4), 1060–1070. хттпс://дои.орг/10. 1111/јцмм.17158

28. Иуан, М., Лин, Л., Цао, Х., Зхенг, В., Ву, Л., Зуо, Х., Тиан, Кс., & Сонг, Х. (2022). Интестинална микробиота учествује у заштитном дејству ХО-1/БММСЦ на трансплантацију јетре са стеатотичним трансплантацијама јетре код пацова. Фронтиерс ин Мицробиологи, 13, 905567. хттпс://дои.орг/10.3389/фмицб.2022.905567

29. Таур, И., Јенк, РР, Пералес, М., Литтманн, ЕР, Морјариа, С., Линг, Л., Но, Д., Гобоурне, А., Виале, А., Дахи, ПБ, Понце , ДМ, Баркер, ЈН, Гиралт, С., ван ден Бринк, М., & Памер, ЕГ (2014). Ефекти бактеријске разноликости цревног тракта на морталитет након алогенске трансплантације хематопоетских матичних ћелија. Крв, 124(7), 1174–1182. хттпс://дои.орг/10.1182/ крв-2014-02-554725

30. Јенк, РР, Таур, И., Девлин, СМ, Понце, ДМ, Голдберг, ЈД, Ахр, КФ, Литтманн, ЕР, Линг, Л., Гобоурне, АЦ, Миллер, ЛЦ, Докампо, МД, Пелед, ЈУ, Арпаиа, Н., Цросс, ЈР, Пеетс, ТК, Лумисх, МА, Схоно, И., Дудаков, ЈА, Поецк, Х., … ван ден Бринк, МРМ (2015). Интестинална Блаутиа је повезана са смањеном смртношћу од болести трансплантата против домаћина. Биологија трансплантације крви и сржи: часопис Америчког друштва за трансплантацију крви и сржи, 21(8), 1373–1383. хттпс://дои.орг/10.1016/ј.ббмт.2015.04.016

31. Ле Бастард, К., Цхеваллиер, П., & Монтассиер, Е. (2021). Микробиом црева у алогенској трансплантацији хематопоетских матичних ћелија и специфичне промене повезане са акутном болешћу трансплантата против домаћина. Ворлд Јоурнал оф Гастроентерологи, 27(45), 7792–7800. хттпс:// дои.орг/10.3748/вјг.в27.и45.7792

32. Ли, Кс., Лу, Ц., Фан, Д., Лу, Кс., Ксиа, И., Зхао, Х., Ксу, Х., Зху, И., Ли, Ј., Лиу, Х. ., & Ксиао, Ц. (2020). Људске пупчане мезенхималне матичне ћелије показују терапеутски потенцијал код реуматоидног артритиса регулацијом интеракције између имунитета и цревне микробиоте преко арил угљоводоничних рецептора. Границе у ћелијској и развојној биологији, 8, 131. хттпс://дои.орг/10.3389/фцелл.2020.00131

33. Сун, Ј., Динг, Кс., Лиу, С., Дуан, Кс., Лианг, Х., & Сун, Т. (2020). Мезенхимске матичне ћелије добијене од масноће ублажавају акутну повреду плућа и побољшавају микробиоту црева код септичких пацова. Истраживање и терапија матичних ћелија, 11(1), 384. хттпс://дои.орг/10.1186/ с13287-020-01902-5

34. Соонтарарак, С., Цхов, Л., Јохнсон, В., Цои, Ј., Вхеат, В., Реган, Д., & Дов, С. (2018). Мезенхималне матичне ћелије (МСЦ) изведене из индукованих плурипотентних матичних ћелија (иПСЦ) еквивалентних МСЦ добијеним од масноће у промовисању зарастања црева и нормализације микробиома у моделу инфламаторне болести црева код миша. Транслациона медицина матичних ћелија, 7(6), 456–467. хттпс://дои.орг/ 10.1002/сцтм.17-0305

35. Ли, Ј., Зоу, Ц., & Лиу, И. (2022). Ублажавање алергије на храну изазвану овалбумином код мишева циљаним ректалним и колоничним давањем цијанидин-3-О-глукозида. Фоодс (Басел, Свитзерланд), 11(11), 1542. хттпс://дои.орг/10.3390/фоодс11111542

36. Маруиама, С., Мацуока, Т., Хосоми, К., Парк, Ј., Нисхимура, М., Мураками, Х., Конисхи, К., Мииацхи, М., Кавасхима, Х., Мизугуцхи, К. ., Кобаиасхи, Т., Оока, Т., Иамагата, З., & Кунисава, Ј. (2022). Класификација појаве дислипидемије на основу цревних бактерија повезаних са уносом јечма. Фронтиерс ин Нутритион, 9, 812469. хттпс://дои.орг/10.3389/фнут.2022.812469

37. Лее, СХ, Парк, Х., Канг, ЦД, Цхои, ДХ, Парк, СЦ, Парк, ЈМ, Нам, С., Цхае, ГБ, Лее, КИ, Цхо, Х., & Лее, СЈ ( 2022). Интрамускуларни додатак витамина Д3 у високим дозама утиче на микробиоту црева пацијената са инфекцијом клостридиоидес дифциле. Фронтиерс ин Целлулар анд Инфецтион Мицробиологи, 12, 904987. хттпс://дои.орг/10.3389/фцимб.2022.904987

38. Меиер, РК, Лане, АИ, Венингер, СН, Мартинез, ТМ, Кангатх, А., Лаубитз, Д., & Дуца, ФА (2022). Олигофруктоза обнавља постпрандијални ниво кратколанчаних масних киселина током храњења са високим садржајем масти. Гојазност (Силвер Спринг, Мд.), 30(7), 1442–1452. хттпс://дои.орг/ 10.1002/оби.23456

39. Санг, Ј, Зхуанг, Д, Зханг, Т, Ву, К, Иу, Ј, Зханг, З (2022) Конвергентни и дивергентни узорци старости диверзитета микробиоте црева код људи и нељудских примата. М-Системс: е151221. хттпс:// дои.орг/10.1128/мсистемс.01512-21

40. Ге, Кс., Хе, Кс., Лиу, Ј., Зенг, Ф., Цхен, Л., Ксу, В., Схао, Р., Хуанг, И., Фараг, МА, Цапаноглу, Е. , Ел-Сееди, ХР, Зхао, Ц., & Лиу, Б. (2022). Побољшање дијабетеса типа 2 захваљујући новој координацији 6, 8-гванидил лутеолин кинон-хром преко биохемијских механизама и интеракције цревне микробиоте. Часопис за напредна истраживања, С2090–1232(22), 121–129. хттпс://дои.орг/ 10.1016/ј.јаре.2022.06.003

41. Динг, К., Цао, Ф., Лаи, С., Зхуге, Х., Цханг, К., Валенчак, ТГ, Лиу, Ј., Ли, С., & Рен, Д. (2022). Лацтобациллус плантарум ЗИ08 ублажава хроничну стеатозу јетре изазвану алкохолом и повреду јетре код мишева обнављањем хомеостазе цревних фора. Фоод Ресеарцх Интернатионал (Отава, Онт.), 157, 111259. хттпс://дои.орг/10. 1016/ј.фоодрес.2022.111259

42. Реес, НП, Схахеен, В., Куинце, Ц., Тселепис, Ц., Хорниблов, РД, Схарма, Н., Беггс, АД, Икбал, ТХ, & Кураисхи, МН (2022). Систематски преглед предиктивних биомаркера донатора и примаоца одговора на трансплантацију фекалне микробиоте код пацијената са улцерозним колитисом. ЕБиоМедицине, 81, 104088. хттпс://дои.орг/10.1016/ј.ебиом.2022.104088

43. Ли, А., Абрахам, Ц., Ванг, И., & Зханг, И. (2020). Нови увиди у основну биологију акутне болести трансплантата против домаћина. Хаематологица, 105(11), 2540–2549. хттпс://дои.орг/10.3324/хаематол. 2019.{12}}. Каиама, Х., Окумура, Р., & Такеда, К. (2020). Интеракција између микробиоте, епитела и имуних ћелија у цревима. Годишњи преглед имунологије, 38, 23–48. хттпс://дои.орг/ 10.1146/Анну рев-иммунол-070119-115104

45. Сцхлутер, Ј., Пелед, ЈУ, Таилор, БП, Маркеи, КА, Смитх, М., Таур, И., Ниехус, Р., Стафас, А., Даи, А., Фонтана, Е., Аморетти , ЛА, Вригхт, РЈ, Морјариа, С., Фенелус, М., Пессин, МС, Цхао, Њ, Лев, М., Боханнон, Л., Бусх, А., … Ксавиер, ЈБ (2020). Микробиота црева је повезана са динамиком имуних ћелија код људи. Натуре, 588(7837), 303–307. хттпс://дои.орг/10.1038/ с41586-020-2971-8

46. ​​Ианг, Ј, Ианг, Х, Ли, И (2022) Троструке интеракције између цревне микробиоте, микобиоте и имунитета домаћина. Критички осврти у науци о храни и исхрани: 1–21. хттпс://дои.орг/10.1080/10408 398.2022.2094888

47. Ан, Ј., Лиу, И., Ванг, И., Фан, Р., Ху, Кс., Зханг, Ф., Ианг, Ј., & Цхен, Ј. (2022). Улога мукозне баријере црева у аутоимуним болестима: потенцијална мета. Фронтиерс ин Иммунологи, 13, 871713. хттпс://дои.орг/10.3389/фмму.2022.871713