Маханимбине је побољшао дефицит памћења у вези са старењем код мишева кроз побољшану холинергичку трансмисију и потиснути оксидативни стрес, нивое амилоида и неуроинфламацију, 2. део

2.6. Процена нивоа малондиалдехида (МДА) и глутатиона (ГСХ).

Користећи комерцијално доступне комплете, нивои МДА и ГСХ су анализирани у узорцима мозга (Цаиман Цхемицал Цомпани, Анн Арбор, МИ, САД).

Како наука и технологија настављају да напредују, научници покушавају да открију мистерије мистериозних и важних људских психолошких активности као што су памћење, размишљање и свест. Међу њима, проучавање узорака мозга сматра се пољем велике забринутости јер нам може помоћи да дубље разумемо однос између памћења и мозга.

Кликните на суплементе да бисте побољшали памћење

Пре свега, шта је узорак мозга? Једноставно речено, односи се на методу хватања, очувања и анализе неурона (можданих ћелија) и њихових веза у мозгу. Лаички речено, то је као мапа мозга која може показати везе и функције између различитих области.

Затим, хајде да причамо о односу између узорака мозга и меморије. Научна истраживања су показала да је наше памћење уско повезано са структуром мозга. Када научимо нова знања, у мозгу се формирају нове неуронске везе, које временом постају све јаче. Кроз проучавање узорака мозга, научници напорно раде на проучавању ових можданих веза и покушавају да схвате како да побољшају учење и памћење кроз њих.

Осим тога, кроз анализу узорака мозга, научници могу пронаћи и неке занимљиве ствари. На пример, открили су да је хипокампус у људском мозгу област блиско повезана са памћењем. То је зато што хипокампус има важну функцију у људском мозгу да претвара информације из краткорочне меморије у дугорочну меморију.

Стога, вредност истраживања узорака мозга није само да нам помогне да боље разумемо однос између мозга и памћења, већ и да нам помогне да откријемо основне узроке поремећаја памћења или когнитивних болести, чиме се промовише лечење и превенција сродних болести.

Коначно, требало би да позитивно гледамо на помоћ истраживања памћења узорака мозга. Иако има још много научних проблема које треба решити, уз континуирано унапређење науке и технологије, верујемо да ће у будућности бити још помака. Радујмо се будућности заједно и радујемо се што ћемо наш мозак учинити паметнијим кроз научна истраживања! Види се да треба побољшати памћење. Цистанцхе може значајно побољшати памћење јер Цистанцхе има антиоксидативне, антиинфламаторне и анти-аге ефекте, што може помоћи у смањењу оксидативних и инфламаторних реакција у мозгу, чиме се штити здравље нервног система. Поред тога, Цистанцхе такође може да подстакне раст и поправку нервних ћелија, чиме се побољшава повезаност и функција неуронских мрежа. Ови ефекти могу помоћи у побољшању памћења, способности учења и брзине размишљања, а такође могу спречити појаву когнитивне дисфункције и неуродегенеративних болести.

Нивои МДА и ГСХ мерени су у наномолима/милиграмима протеина и микромолима/милиграмима протеина, респективно. Праћена је Брадфордова техника да би се проценио садржај протеина у ткивима мозга.

2.7. Процена активности ацетилхолина (АЦх) и ацетилхолинестеразе (АЦхЕ)

Нивои АЦх и АЦхЕ у хомогенату мозга анализирани су коришћењем комерцијализованих комплета (БиоАссаи Систем, Хаивард, Калифорнија, САД), који су били ЕнзиЦхромТМ АцетилцхолинеАссаи кит и КуантиЦхромТМ комплет за анализу ацетилхолинестеразе, респективно.

Интензитет формирања боје је детектован у читачу микроплоча на 570 и 412 нм, респективно. Добијени ниво АЦх је изражен као µМ, док је активност АЦхЕ изражена као У/Л.

2.8. Мерење нивоа -амилоида

ЕЛИСА комплети компаније Цлоуд Цлоне Цорп (Кати, ТКС, САД) су коришћени за процену нивоа А 1-40 и А 1-42 у хомогенатима мозга. За мерење формирања боје коришћен је читач микроплоче подешен на 450 нм.

Концентрација А 1-40 и А 1-42 у узорку била је обрнуто повезана са интензитетом боје. Резултати су представљени у смислу пг/мЛ укупног протеина.

2.9. Процена активности -секретазе (БАЦЕ-1) у мозгу миша

Активност БАЦЕ-1 у хомогенату је квантификована коришћењем комерцијализованог комплета (СенсоЛите® -Сецретасе Ассаи Кит из АнаСпец, Фремонт, Калифорнија, САД). Детекција комплета се заснива на пептиду који се цепа БАЦЕ-1, а сигнал се детектује коришћењем спектрофотометра са ексцитацијом/емисијом на 490/520 нм.

2.10. Мерење активности укупне циклооксигеназе (ЦОКС).

Активност укупног ЦОКС у хомогенату мозга је процењена коришћењем ЕЛИСА комплета (Цаиман Цхемицал Цомпани, Анн Арбор, МИ, УСА). Формирање боје је директно пропорционално укупној активности ЦОКС. Читач микроплоче је коришћен за очитавање апсорбанције на 590 нм.

2.11. Експресија гена БАЦЕ-1 и ЦОКС-2

Експресија БАЦЕ-1 и ЦОКС-2 у изолованој РНК мозга је анализирана коришћењем РТ-ПЦР. Три главна укључена корака су: екстракција РНК, конверзија РНК тоцДНК и ланчана реакција полимеразе у реалном времену (РТ-ПЦР).

Сви кораци су укључивали комплете које обезбеђује Киаген Валенциа, Калифорнија, САД. Прво, РНК је екстрахована из узорка мозга који је сачуван у РНК. У овом кораку, приближно 100 мг узорка можданог ткива је испрано помоћу ТиссуеРуптор у 1 мЛ КИАзол реагенса за лизу и инкубирано 5 минута на собној температури.

Смеши лизата мозга и реагенса за лизу КИАзол је додат хлороформ и снажно мућкан током 15 с, након чега је уследила инкубација на собној температури 2-3 мин.

Смеша је центрифугирана на 12,000×г 15 минута на 4 ◦Ц, а три фазе су формирале безбојну фазу (горњу фазу), која се састојала од РНК и сакупљена је са 1 запремином 70% етанола који је додат у то.

Затим, 700 µЛ узорка је пребачено у центрифугирану колону и центрифугирано на собној температури на 8000 × г током 15 с; проток је одбачен. Након додавања 700 µЛ пуфера РВ1 (достављеног у комплету) и центрифугирања 15 с на 8000 × г, проток је одбачен. Корак је настављен додатком 500 µЛ пуфера РПЕ (достављен у комплету) и центрифугирање 15 с на 8000 × г.

Овај корак је поновљен два пута да би се испрала било каква органска контаминација у РНК. На крају, РНК је елуирана додавањем 50 µЛ воде без РНК-азе и центрифугирана 1 мин на 8000 × г.

Концентрација РНК је мерена коришћењем ананодропа (нанодроп 2000ц, Тхермофисхер Сциентифиц, Валтхам, МА, УСА). Екстрахована РНК је затим претворена у цДНК, која је коришћена за извођење РТ-ПЦР.

Прво, 14 µЛоф шаблонске РНК је додато са 6 µЛ мастер мешавине реверзне транскрипције (1 µЛ Куантисцрипт реверзне транскриптазе, 4 µЛ Куантисцрипт РТ пуфера, 1 µЛ мешавине РТ прајмера). Након мешања, инкубирана је 15 минута на 42 ◦Ц, а затим је уследила инкубација на 95 ◦Ц током 3 мин да би се инактивирала Куантисцрипт реверзна транскриптаза.

Формирани производ је цДНК, и на крају је спроведен РТ-ПЦР. Услови РТ-ПЦР су фиксирани на 95 ◦Ц током 5 минута, након чега је уследило 40 циклуса на 95 ◦Ц током 10 минута и 60 ◦Ц током 30 минута.

Експресија БАЦЕ-1 и ЦОКС-2 гена је квантификована и нормализована у односу на два гена за одржавање домаћинства (-ацтин и ГАПДХ). Прајмери ​​нуклеотидних секвенци су засновани на мишјем БАЦЕ-1 (предњи50-ГЦАТГАТЦАТТГГТГГТАТЦ-30: обрнуто 50-ЦЦАТЦТТГАГАТЦТТГАЦ-ЦА-30) ​​и ЦОКС-2 (напред 50-ГТГТГЦГАЦАТАЦТЦААГЦАГГА) секвенце цДНК. -30: обрнуто 50-ТГААГТГГТААЦЦГЦТЦАГГТГ-30), ГАПДХ (напред 50-ТГАЦАГГАТГЦАГААГГАГА-30: обрнуто 50-ГЦТГГААГГТГГАЦАГТГАГ-30), -актин (напред 50-ТГАЦАГГАТГЦАГААГГАГА-30: обрнуто 50-ГЦТГГААГГТГГАЦАГТГАГ-30).

Добијена су флуоресцентна мерења, а за њихову евалуацију коришћен је софтвер Ротор-Гене 6000 (Киаген, Хилден, Немачка).

Резултати су представљени као нивои експресије након нормализације на ген за одржавање, а то су били Б-актин и ГАПДХ коришћењем компаративног ЦТ приступа (праговни циклус). Једначина (1) је коришћена за израчунавање генске експресије узорка.

ЦТ вредност сваког узорка добијена је на основу стандардне криве која је генерисана за сваки ген (циљни ген и референтни ген).

∆∆ЦТ=∆ЦТ узорак − ∆ЦТ контрола (1)

где

∆ЦТ узорак: ЦТ вредност циљног гена − ЦТ вредност референтног гена

∆ЦТ контрола: ЦТ вредност циљног гена − ЦТ вредност референтног гена

2.12. Статистичка анализа

Експериментални подаци су представљени као средња вредност ± СЕМ. Једносмерна АНОВА процедура (Грапх Пад верзија 9, ГрапхПад Софтваре Инц., Ла Јолла, Калифорнија, САД) и Тукеи–Крамерпост хоц тест су коришћени за категоризацију статистичких варијација. Значајно је дефинисано као вредност вероватноће 0.05.

3. Резултати

3.1. Маханимбине-појачано памћење код остарелих мишева

Просторно учење и способност памћења маханимбине у моделу миша испитани су помоћу МВМ теста. Измерени су латенција бекства (ЕЛ), удаљеност бекства (ЕД) и време проведено у циљном квадранту.

Штавише, локомоторна активност је такође узета у обзир на основу просечне брзине пливања мишева. Слика 2А показује да је старија контролна група имала значајно дужи ЕЛ од дана 1 данас 3 (22.05 ± 1,70 с, 21,35 ± 1,85 с, 19,96 ± 2,34 с; п < 0,001) у поређењу са младом контролом (12,75 ± 1,30, 10,12 ± 0,98; 7,60 ± 1,31;

Открило је да су старији мишеви успоставили значајан дефицит у учењу и функцији памћења у МВМ тесту. Међутим, орални третман са различитим дозама (1 и 2 мг/кг) маханимбина показао је преокрет горе поменутих промена у ЕЛ код остарелих мишева.

Вредности ЕЛ за групу маханимбина од 1 мг/кг биле су 22.01 ± 1,60 с, 15,88 ± 1,54 с (п < 0.01) и8 .26 ± 0.93 с (п < 0.001) за 1., 2. и 3. дан, у поређењу са контролом старости, док је ЕЛ вредности за групу маханимбина од 2 мг/кг биле су 16.09 ± 0,33 с (п < 0,05), 17,14 ± 0,57 с (п < 0,05), 10,57 ± 0.86 с (п < 0,05) 0,01), респективно, када је паралелно са старијом контролом. Трећег дана, ЕЛ обе групе (1 и 2 мг/кг) маханимбина није се значајно разликовао од младе контроле.

Слика 2. Утицај маханимбине на (А) кашњење у бекству, време потребно за проналажење скривене платформе. (Б) Раздаљина бекства, пређена удаљеност од почетне тачке до проналажења скривене платформе; (Ц) просечна брзина, брзина пливања животиње да би се пронашла скривена платформа; (Д) тест сондом, процентуално време остарелих мишева проведених у циљном квадранту коришћењем Морисовог теста воденог лавиринта. Дошло је до значајних побољшања у латенцији бекства и удаљености бекства са маханимбином код старијих мишева.

Поред тога, третман је повећао време проведено у циљном квадранту остарелих мишева. Сви подаци су изражени као средња вредност ± СЕМ (н {{0}}). Једносмерна АНОВА (1. дан: Ф(3,20)=11.74, п < 0.001, дан 2: Ф(3,20)=17.38,п < 0.001 и дан 3: Ф(3,2{{69 }})=14.88, п < 0.001 за излазни дан 1: Ф(3,20) {{; 26}}.22, п < 0.001, дан 2: Ф(3,20)=28.62, п < 0,001 и дан 3: Ф(3,20) {{40 }}.15, п < 0,001 за дан 1:Ф(3,20)=1.939, п > 0,05, дан 2: Ф(3,20)=3.467,; п > 0,05, и дан 3: Ф(3,20)=2.497, п > 0,05 за просечну брзину Ф(3,20)=7.185, п < 0,01 за тест сондом; Тукеи–Крамеров тест вишеструког поређења.** п < 0,01 и *** п < 0,001 у поређењу са младом контролном, # п < 0,05, ## п < 0,01 и ### п < 0,001 у поређењу са контролном старијом.

Слика 2Б представља ефекат маханимбина на пређену удаљеност од почетне тачке до проналажења скривене платформе. Старија контролна група прешла је најдужу раздаљину пре него што је пронашла скривену платформу 1, 2 и 3 дана (4,79 ± 0.73 м, 4,34 ± {{10}}, 11 м и 4,38 ± 0.59 м; п < {{2{24}}}.001; 0,24 м, односно 0,78 ± 0,14 м);

Остарели мишеви који су храњени 1 мг/кг маханимбина значајно су смањили ЕД (2,17 ± 0.11 м (п < 0.01), 2,10 ± { {13}}.24 м (п < 0.{17}}01), 0,89 ± 0,18 (п < 0,001) за дан 1 до 3 у складу са старијом контролом.

Значајан паралелни пад ЕД примећен је код мишева којима је давана 2 мг/кг маханимбина током 1, 2 и 3 дана (2,43 ± 0.28 (п < 0.01) , 2,78 ± 0, 32 (п < 0.0 01), 1,47 ± 0,30 (п < 0,001);

Што се тиче просечних брзина пливања током задатка, нису уочене разлике међу групама (слика 2Ц). Ово указује да маханимбине није променио никакву локомоторну активност у вези са моторичком функцијом код старијих мишева.

Након 24 сата од стварног задатка, спроведена је тестна сесија (дан 30) да би се проценило задржавање памћења животиња. Старија контролна група (слика 2Д) провела је мање времена у циљном квадранту (10.10 ± 1,14% (п < 0,001)) и показала је значајно смањено време проведено у циљаном квадранту у поређењу са млада контрола (19,53 ± 2,56%), док су старији мишеви третирани са 1 мг/кг (20,27 ± 4,84%, п < 0,01) и 2 мг/кг (17,85 ± 1,56%, п < 0,05) маханимбина показали значајно повећање оралне сонде. дуже време проведено у циљаном квадранту у поређењу са старијом контролом.

3.2. Ефекат Маханимбине на нивое МДА и ГСХ у мозгу старијих мишева

Нивои МДА у старој контроли (Слика 3А) били су знатно виши (11,54 ± 0.88 µМ; п < 0.001) у односу на младу контролну групу (4,37 ± 0,09 µМ). Повећање нивоа МДА у хомогенату мозга старијих мишева одражава већу активност ЛПО, што указује на повећање оксидативног стреса у можданом ткиву.

Супротно томе, примена маханимбина (1 мг/кг, по) значајно је смањила нивое МДА у мозгу код старијих мишева (7,56 ± 0.35 µМ; п < 0.001) у поређењу остарелој контроли. Нису забележене значајне промене са 2 мг/кг маханимбина (9,65 ± 0,51 µМ).

Количина глутатиона (ГСХ) у хомогенату мозга указује на антиоксидативни потенцијал маханимбина. Статистичка анализа ГСХ (Слика 3Б) показала је значајно слабљење између старије контролне групе (0.0028 ± 0.0004 µмола/ мг; п < 0,001) када је повезан са младом контролом (0,0447 ± 0,0029 µмола/мг).

Ова студија је такође открила да је третман са маханимбином (1 и 2 мг/кг, по) преокренуо ниво ГСХ, који је био значајно виши (0.0372 ± 0.{{8} }{{10}}38 µмола/мг, п < 0,001 и 0,0282 ± 0,0041 µмола/мг, п < 0,001) у складу са старом контролом;

3.3. Маханимбине је побољшао холинергичку активност у мозгу старијих мишева

Слика 4А приказује нивое АЦх у мозгу миша. АЦх је упоредиво смањен (п < 0.001) у старој контроли (17,79 ± 1,54 µМ) у поређењу са младом контролном (34,82 ± 0). 31 µМ). Примена маханимбина (1 и 2 мг/кг), међутим, значајно се повећала (35,61 ± 0.85 µМ, (п < 0.001); 39,42 ± 0,88 µМ (п < 0,001); односно) ниво АЦх у мозгу повезан са контролом старости.

Слика 4Б представља ефекат маханимбина на активност АЦХЕ у мозгу. Активност АЦхЕ у старој контролној групи (204,80 ±1,55 У/Л) била је значајно повишена (п < 0,001) упоредо са младом контролном (51,06 ± 1,36 У/Л).

Без обзира на то, ниво АЦхЕлевел је сугестивно инхибиран третманом од 1 мг/кг (62.03 ± 4,64 У/Л; п < 0.001) и 2 мг/кг (43,73 ± 4,76 У /Л; п < 0,001) маханибин када је повезан са контролом старења. Све у свему, примена високе дозе маханимбина (2 мг/кг, по) је дала боље резултате за холинергичку активност пошто је повећала ниво АЦх и потиснула активност АЦхЕ.

For more information:1950477648nn@gmail.com