Студија о микробним ензимима произведеним током комбиноване бактеријске ферментације и њихових биолошких активности ⅲ

Поглавље 3 Студија о антиоксиданци активности ензима

 

Доказано је да многе људске болести се односе на тоАктивно кисеоник и слободни радикали, као што јеупала, артериосклероза,старење, дијабетес, рак, итд.Прекомерни бесплатни радикалиУ телу може изазвати денатурацију протеина, оштећења ћелије и смрти, па чак и патолошке промене у телу. Стога многи студији у земљи и иностранству траже храну богату природним антиоксидативним састојцима како би се спречило и регулисало болести изазване слободним радикалима исхраном. Данас, уз све већи животни стандард, људи постепено пребацују усредсређеност на своја тела, па се више и више здравствених производа појављују у бескрајном току. Међутим, није лако бити заиста корисно. Ензими су врста хране коју можете сами да направите у животу људи. Трошкови нису баш високи и има много користи.
Микробне ензими имају различите здравствене функције као што су антибактеријска и противупална, промовисање метаболизма, побољшање имунитета, избељивања и анти-старења, детоксикације и анти-рака. Тренутно постоје релативно мало студија о антиоксидансним својствима микробних ензима у земљи и иностранству, па планирамо да спроведемо дубинско истраживање о њима. Овај рад узима Аппле ензим као истраживачки објект и користи укупни садржај фенола, смањење снаге, ДППХ · Слободно радикално, супероксидно слободно радикално и ослобађајући слободну радикалну особу за уклањање радикала за утврђивање индекса да би се утврдила свеобухватна и систематска истрага Аппле-ове ензим од ферментације 3 месеца. Студирани су састав и садржај антиоксидативних активних састојака, а његова антиоксидативна активност је разумена.

Нова биљка цистанце са много више анти-оксидационе моћи од бактерије Ферментација

Подршка служба Вецистанца - највећи извозник цистанса у Кини:
Е-пошта: wallence.suen@wecistanche.com
Вхатсапп / Тел: +86 15292862950

 

 

 

 

3.1 Материјали и методе

3.1.1 Материјали

(1) експериментални материјали
Оперите свеже јабуке са стерилном водом под стерилним условима, наравно, осушите их у стерилни оперативни сто, огулите их и нарежите их за каснију употребу. Додајте бели шећер и јабуке у стерилизованој стакленој тегли у масовном односу од 1: 1. Активирајте бактерије потребне за експерименте и инокулирати их у ензими у складу са оптималном схемом (овај корак рада је изостављен у контролној групи), запечатите га и поставите на хладно и суво место. После 3 месеца ферментације собне температуре, узмите узорак да бисте добили целу течност ензима која садржи целулозу и филтрирајте је. Узмите супернатант као експериментални узорак и центрифугирајте узорак на 10000РПМ током 15 минута у центрифугу велике брзине пре одређивања релевантних података. Вриједно је напоменути да у процесу прављења ензима, како би се избегло непотребна контаминација, све наше операције се изводе под стерилним условима.

(2) Главни инструменти
Спектрофотометар: В -1100, Схангхаи Артинг фабрика научних инструмената;
Стална температура за температуру купка: ХХ -2, Вухан Литиан Тецхнологи Инструмент Цо, Лтд. Остали инструменти су исти као 2.1.3.

3.1.2 Методе

(1) Одређивање укупног садржаја фенола [53]
① Припрема стандардне криве:
Тачно вагати {0}}. 123 г галлне киселине, растопи га у малој количини дестиловане воде и пренијети га на 5,3}} мл волуметријску тиквицу да би се створило запремину. Узмите 8 чистих 1 {{1 {12}}}} МЛ Волуметријске тиквице, додајте 0, 0,8, 0,4, 1,2, 0,8, 1,0, 1,2, и 1,4 мл Галличне киселине стандардно растворе, додајте 1 мл фолинског реагенса, додајте 1 мл фолинских реагенса и 2 мл од 5% наЦо3 на сваку, топлоту у кујну купаоницу на собној температури 30 мин. Користите спектрофотометар за мерење апсорбанције А на таласној дужини од 650 НМ и нацртајте стандардну криву са апсорбанцијом А као хоризонталне оси и концентрацију узорка као вертикална осовина. ② откривање
Додајте дестиловану воду на 100 уЛ, 200 μл, 300 ул, 400 ул и 500 ул узорака у 46 мл, а затим додајте 1МЛ реагенс фол-фенола, помешајте се у 3МЛ-у, реагујте у константну температуру на 25 степени, користите сталну водену купатилу од 25 степени, користите дестиловану воду као празну контролу на таласној дужини од 760НМ. Спектрофотометар. Укупни садржај фенола изражено је као еквивалента Галлинске киселине, а укупни фенол садржај израчунава се према стандардној једначини кривуље.

(2) Анализа редукције [54]
Додајте 1 0 0 μЛ, 2 0 0 ул, 300 ул, 400 ул и 500 ул узорак на 2,5 мл фосфатног пуфера са концентрацијом од 0,2мл / Л и пХ вредности од 6,6, а затим додајте 2,5 мл калијум ферикланид (В / В) масовно концентрацијом од 1% и реагује на 50 степени током 30 минута. Затим додајте 2,5 мл трихлороцетичке киселине (в / в) масовну концентрацију од 10%, и центрифуге на 3000РПМ током 10 минута у центрифугима велике брзине. Одмах након изласка, узмите 2,5 мл супернатант у волуметријску тиквицу, додајте 2,5 мл дестиловане воде и 0,5 мл ферричног хлорида (В / В) са масовном концентрацијом од 0,1%. Користите дестиловану воду као празну контролу и мерите апсорбанцију А на таласној дужини од 700нм помоћу спектрофотометра. Снага смањења власти може се проценити у вредности апсорбанције. Што је већа вредност апсорбанције, јачи смањујући снагу.

 

(3) Одређивање ефекта окидања без супероксида Анион [55]

Узми 4,5 мл 0. 0 5 мол / л пХ 8,2 Трис-ХЦл пуфер и загреје га у воденој купељи од 25 степени за 2 0 Мин. Додајте 1 мл ензимског раствора са узорком са концентрацијама од 10%, 20%, 30%, 40%, а 50% и 0,4 мл раствора пирогалола од 25 ммол / Л. Добро измешајте и реагујте у воденој купељи од 25 степени 5 минута. Додајте 1,0 мл 8 мол / Л ХЦл да бисте прекинули реакцију. Користите Трис-ХЦл пуфер као референцу и користите спектрофотометар за мерење апсорбанције а на таласној дужини од 299 НМ за израчунавање брзине прочишћавања. За празну контролну групу коришћена је 1 мл растварача уместо умјера. О 2- стопа окидања израчуната је према Формули 3.1: О 2- стопа окидања (%)=(А1 × 100 (3.1) где: А1 је апсорбанција празне цеви; А2 је апсорбанција узорка.

(4) Одређивање ефекта чишћења на хидроксилне радикале [56]

1 0 0 ул, 200 л, 300 μл, 400 ул, 500 ул узорах раствора је додат са водом до 2мл, а затим је додат на 1,4 мл водоник пероксида са моларном масом концентрацијом од 6 ммл натријума салицилата са моларном масеном сулфатом од моларне масе. 1,5 ммол / л и загрејано у константној водостајној купељи на 37 степени за 1Х. Подесите на нулу са дестилованом водом и мерите апсорбанцију а на таласној дужини од 562НМ помоћу спектрофотометра. Извршите 3 репликате за сваки третман. Израчунајте хидроксилну радикалну брзину окидања према формули 3.2: хидроксилна радикална брзина прочишћења (%)=[(А {{22} А2) / А1] × 100 (3.2) где: А1 је просечна апсорбанција празног; А2 је просечна апсорбанција решења узорка. (5) Одређивање ДППХ-а без радикалног чишћења у ДПП-у [57]

Нова биљка цистанце са много више анти-оксидационе моћи од бактерије Ферментација

 

Прецизно пипета 2 мл ензимског узорка раствора са концентрацијама 1 0%, 20%, 30%, 40%, а 50% у 10 мл волуметријска тиквица, а затим додајте 2 мл 80% ДППХ етанол воденог раствора на волуметријску тиквицу. Концентрација моларне масе је 2 × 10-4 мол / л. Након мешања, оставите да стоји на собној температури током 30 мин. Користећи 80% етанол раствора као референца, мерите апсорбанцију узорка на таласној дужини од 517 НМ, што је забележено као А1. Помијешајте 2 мл ДППХ раствора и 2 мл етанолног раствора масе концентрације од 80% и мери њихову апсорбанцију на истој таласној дужини, која је снимљена као А0. Помијешајте 2 мл ензимског раствора и 2 мл етанолног раствора масе концентрације од 80% и мери њихову апсорбанцију на истој таласној дужини, која је забележена као А2. Израчунајте ДППХ без радикалне брзине прочитања према Формули 3.3:
ДППХ Слободна радикална брзина прочишћења (%) {{0}}} [1-}} / а 0] × 100 (3.3) где: А1 је 2 мл ДППХ 80% етанол воденог раствора и 2 мл ензимског раствора ензима; А2 је апсорбанција мешовитих раствора раствора од 2 мл ензима и 2 мл 80% етанола масовним концентрацијама; А0 је апсорбанција мешовитих раствора од 2 мл ДППХ раствора и 2 мл 80% етанола по масовној концентрацији.

(6) АБТС Слободна радикална способност окидања [58]
Додајте одређену количину калијум сулфата на 7 ммол / л АБТС решење све док коначна концентрација мешовитих раствора није 2,45 ммол / л. Поставите мешовити раствор на хладно и суво место на собној температури током 12 до 16 сати. 1 уЛ, 3 μл, 5 μл, 7 ул и 9 ул раствора узорка допуњен је на 10 уЛ са 5ММОЛ / Л ПХ7.4 фосфатним пуфером, а затим је помешано равномерно са 10 мл горњег калијум сулфата и абтед мешовитог решења и дозвољено је да реагује на реакциону температуру од 30 степени од 30 степени од 30 степени од 30 степени од 30 степени од 30 степени. Нула са дестилованом водом и мери апсорбанцију а на таласној дужини од 734НМ користећи спектрофотометар. Израчунајте АБТС бесплатну брзину прочишћења у Формули 3.4:
АБТС слободна радикална брзина прочишћења (%)=[(А 1- А2) / А1] × 100 (3.4) где: А1 је апсорбанција празне контролне групе; А2 је апсорбанција експерименталне групе

 

3.2 Резултати и анализе

3.2.1 Укупно садржаја фенола

(1) Стандардна крива
Стандардна крива укупног садржаја фенола привучена је концентрацијом галинске киселине као хоризонтална осе и вредност апсорбанције А као вертикална осовина, као што је приказано на слици 3.1.

 

Сл.3.1 Стандардна крива укупног садржаја фенола

Са Сл.3.1, можемо видети да је стандардна једначина кривуље И =11. 375к +0. 2593 (Кс је концентрација узорка, и је апсорбанција), р 2=0. 9981.

(2) Одређивање узорака

Резултати укупне фенол садржаја за одређивање ензима Аппле-а у контролној групи и експерименталне групе у различитим концентрацијама приказани су на Сл.3.2.

 

 

 

Сл.3.2 Кривуља укупног фенолног садржаја

Као што је приказано на Сл .3.2, јабучни ензими и у контролној групи и експерименталној групи имају висок укупни фенолни садржај, а обоје се повећавају повећањем количине узорка узорака додан додатог решења за узорке. У истом градијенту концентрације, укупни фенолни садржај јабучног ензима у контролној групи порастао је са 0. 673мг до 2,8 {0 7 мг, а укупни фенолни садржај експерименталне групе повећан је са 0,961мг до 4.185 мг. Укупни фенолни садржај експерименталне групе је много већи од контролне групе, а тренд пораста је очигледнији. Према укупном фенолном садржају, укупна антиоксидативна активност експерименталне групе је већа од оне контролне групе.

 

3.2.2 Смањење снаге

Резултати смањења јабучних утврђивања јабука у контролној групи и експерименталне групе у различитим концентрацијама приказани су на слици 3.3.

 

Као што је приказано на слици 3.3, променљиви тренд смањења снаге јабучних ензима је сличан тренду променљивости укупног садржаја фенола. Смањена снага експерименталне групе је већа од оне контролне групе и да ли је то експериментална група или контролна група, у опсегу концентрације представљеног у експерименту, смањење снаге приказује све већи тренд са повећањем количине узореног решења. Експериментални подаци су такође потврдили да је у погледу смањења власти, антиоксидативна активност експерименталне групе већа од оне Цонтрол Гроуп.

 

 

3.2.3 Супероксидна анионска способност слободног радикала

Резултати супероксида анионске слободне радикалне способности ензима јабуке у контролној групи и експерименталне групе у различитим концентрацијама приказани су на слици 3.4.

Као што је приказано на слици 3.4, постоји велика разлика у супероксидном анионском радикалној способностима ослобођења експерименталне групе и контролне групе. У опсегу концентрације представљеног у експерименту, супероксидни анионски радицалска способност експерименталне групе најпознатије се када концентрација узорка буде 10% до 20%, а промена није очигледна након што је концентрација већа од 20%; Када је концентрација 50%, супероксидна анионска способност без осилене способности слободне је чак 85,4%. Слободна способност крњења без супероксида која показује контролну групу могу се јасно видети са графикона тренда. Како се концентрација ензима повећава, ова слободна радикална способност се повећава такође се повећава, полако се мења и постепено тежи стабилној држави. Способност омаловажавања достиже највише 42,6%. Експериментална група је готово двоструко више од контролне групе.

 

 

3.2.4 Хидроксилска способност слободног радикала

Промјене у хидроксилној радикалној способности окидања јабуке у контролној групи и експерименталне групе у различитим концентрацијама приказане су на Сл. 3.5.

 

 

Сл.3.5 Кривуља задирке хидроксилне слободне радикале

 

Може се видети са Сл. 3.5 да је у опсегу концентрације представљен у експерименту, хидроксилска радикална способност бедксила у експерименталној групи и контролна група и контролна група се повећала са повећањем додате количине. Хидроксилна радикална способност безначајне способности експерименталне групе била је нижа од оне контролне групе и то је веома слабо извршила у ниским концентрацијама. У високим концентрацијама, хидроксилска способност слободне лозе се значајно повећала. Разлог може бити да су током процеса ферментације, врсте и садржаји микроорганизама у ензимима Аппле-а у експерименталној групи и контролној групи, а садржај секундарних метаболита и компонената сваког производа произведен од стране ферментације, тако да је приказан антиоксидантни капацитет.

 

3.2.5 ДППХ · Слободна способност радикалне окидања

У поређењу са другим методама откривања, ДППХ · Слободна радикална способност окидања се широко користи за процену антиоксидансних активности у кратком временском периоду [59]. ДППХ · слободна радикална способност омаловажавања у различитим концентрацијама је приказана у складу са резултатима контролне групе и експерименталних групних јабучних ензима, као што је приказано на слици 3.6.

Као што је приказано на слици 3.6, када је концентрација контролне групе Аппле ензим мањи од 30%, а ДППХ · СПОСОБНОСТ РАДИЧНОГ СПОСОБНОСТИ ЈЕ МНОГО ОД 50%, али експериментална група Аппле Ензим је такође показала виши ДППХ · слободну радикалну способност крњења у ниским концентрацијама. Експериментални резултати показују да је додавање Аспергиллус оризае, квасац, термофилни стрептокок и бугарски лактобацилко користан за ДППХ · слободну радикалну особу за уклањање ензима. Када је концентрација ензима 50%, ова способност је чак 91,4%, што је много веће од 69,8% контролне групе у истој концентрацији.

 

3.2.6 АБТС радикални капацитет окидања

Резултати АБТС радикалног крчећег капацитета јабучних ензима у контролној групи и експерименталне групе у различитим концентрацијама приказани су на Сл. 3.7.

Сл.3.7 Кривуља са циљем радикалног чишћења
Може се видети са Сл. 3.7 да је стопа окидања јабучних ензима у експерименталној групи већа када је додатак ензима већи од 5 уЛ. Студија Ерел ет ал. показало да капацитет окидања абта радикала у великој мери зависи од веће концентрације фенолних супстанци [60]. Резултати укупне одлучности садржаја фенола показали су да је укупни садржај фенола експерименталне групе веће од оне контролне групе. Експериментални резултати на Сл. 3.7 Управо је проверен да је капацитет окидања надахних радикала већа од оне контролне групе.

 

3.3 Резиме овог поглавља

This chapter studies the relationship between the antioxidant activity of apple enzymes produced by fermentation with four selected strains of apples, the concentration of enzyme samples, and the comparison of antioxidant active components and free radical scavenging ability between the experimental group and the control group. Експериментални резултати показују да је укупни садржај фенола Аппле ензима у контролној групи нижи од оне у експерименталној групи, а његова редукциона моћ, супероксидни анионски радикал, ДППХ слободну радикалну способност слободних радикала и абс је боља од оних у контролној групи; Ензим у контролној групи има посебно добру особу за уклањање хидроксилних слободних радикала.
Генерално, експериментална група је показала већу антиоксидативну активност, која је додатно потврдила изводљивост вештачки додавања сојева за прављење микробичних ензима. На овај начин, микробна храна за ензим има више супстанци корисно за здравље људи на основу првобитне природне ферментације и може се боље развити у правцу који очекују људи.