Монотерпенски састојци из Цистанцхе Тубулоса—хемијске структуре канканозида А—Е и канканола—

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Хаихуи КСИЕ, Тосхио МОРИКАВА, Хисасхи МАТСУДА, Сеикоу НАКАМУРА, Осаму МУРАОКА и Масаиуки ЈОСХИКАВА

Апстрактан

Изолована су четири нова иридоидна гликозида, канканозиди А (1), Б (2), Ц (3) и Д (4), хлоровани иридоид, канканол (5) и ациклични монотерпенски гликозид, канканозид Е (6). из метанолног екстракта осушених стабљика Цистанцхе тубулоса (СЦХРЕНК) Р. ВИГХТ (Оробанцхацеае) заједно са 16 познатих једињења. Структуре ових нових једињења (1—6) су одређене на основу хемијских и физичко-хемијских доказа.

Кључне речи:Цистанцхе тубулоса; канканосиде; канканол; иридоид; монотерпен; Оробанцхацеае

Цистанцхе тубулоса(СЦХРЕНК) Р. ВИГХТ (Оробанцхацеае)је вишегодишња паразитска биљка која расте на коренима врсте Салвадора или Цалотропис, а распрострањена је у Северној Африци, Арабији и азијским земљама.1) Стабљике ове биљке (Канка-никујују на јапанском) традиционално се користе за лечење импотенције, стерилитета. , лумбаго и телесна слабост.2) Раније је из кинеске и пакистанске Ц. тубулоса изоловано неколико иридоида, монотерпеноида, фенилетаноида и лигнана. 1,3–7) У току наших серијских студија о биоактивним састојцима кинеских природних лекова,8–18) четири нова иридоидна гликозида, канканозиди А (1), Б (2), Ц (3) и Д (4 ), хлоровани иридоид, канканол (5) и ациклични монотерпенски гликозид, канканозид Е (6), изоловани су из метанолног екстракта овог биљног лека заједно са 16 познатих једињења укључујући 12 монотерпена (7—18). Овај рад се бави изолацијом и разјашњавањем структуре нових монотерпенских конституената (1—6).

Цистанцхе тубулоса

Метанолни екстракт из осушених стабљикаЦистанцхе тубулоса(26,8 процената од овог биљног лека) је подвргнут хроматографији на колони са силика гелом у нормалној фази и реверзној фази и поновљеној ХПЛЦ да би се добили канканозиди А (1, 0.0{{10 }}54 процента ), Б(2, 0.030 процента ), Ц (3, 0.00 27 процената ), и Д (4, {{40}.{{48}015 процената), канканол (5, 0.0{ {66}}34 процента) и канканозид Е (6, 0.027 процената) заједно са мусаенозидном киселином19) (7, 0.020 процената) , генипозидна киселина19) (8, 0,030 процената), 8-епилоганска киселина7) (9, 0,033 процената), глурозид19) (10, 0,14 процената), антирид20) (11, 0,0079 процената), ајугол10. (01) проценат ), барциозид19) (13, 0,21 проценат ), 6-деоксикаталпол19) (14, 0,11 процената ), аргиол21) (15, 0,0030 процената ), цистанин22,23) (16, 0,0040 процената ), цис тахлор 17, 0,0035 процената), (2Е,6З)-8-бД-глукопираносилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенска киселина24) (18, 0,0028 процената ), Д манитол25) (4,19 стр ерцент ), уридин25) (0,0069 процената), (3Р)-3-хидрокси-2- пиролидинон26,27) (0,0020 процената) и (3Р)-3-хидрокси-1-метил{ {97}}пиролидинон27) (0,0059 процената).

Структура канканозида А (1) Канканозид А (1) је добијен као аморфни прах и показао је негативну оптичку ротацију ([а]Д 25 107,4 степена у МеОХ). ИР спектар 1 показао је апсорпциону траку на 1647 цм 1 која се може приписати олефинској функцији поред јаких апсорпционих трака на 3410 и 1076 цм1 што указује на гликозидни део. У бомбардовању позитивним и негативним јонима брзим атомом (ФАБ)-МС од 1, квазимолекуларни пикови јона су примећени при м/з 369 (М На) и 345 (МХ), а ФАБ-МС анализа високе резолуције открила је молекуларни формула 1 да буде Ц16Х26О8. Кисела хидролиза 1 са 1,0 М хлороводоничном киселином (ХЦл) ослобађа Д-глукозу, која је идентификована ХПЛЦ анализом коришћењем оптичког детектора ротације.8,10—12,15—18) 1 Х- (ЦД3ОД, табела 1) и 13Ц-НМР (Табела 2) спектри 1, који су додељени различитим НМР експериментима,28) показују сигнале који се могу приписати два метила [д 1,31 (с, 10-Х3), 1,51 (бр с, {{47} }Х3)], два метилена [д 1,49, 2,02 (оба м, 6а- и 6б-Х), 1,64, 1,67 (оба м, 7б- и 7а-Х)], два метина [д 2,21 (дд, Ј 2,7 , 9,5 Хз, 9-Х), 2,71 (м, 5-Х)] и а,б-незасићена ацетал група [д 5,33 (д, Ј 2,7 Хз, 1-Х ), 5,95 (бр с, 3-Х)] заједно са б-глукопиранозилном остатком [д 4,62 (д, Ј 7,9 Хз, 1 -Х)]. Као што је приказано на слици 1, експеримент корелационе спектроскопије 1 Х–1Х (1 Х–1 Х ЦОСИ) на 1 је показао присуство парцијалних структура написаних подебљаним линијама. У експерименту хетеронуклеарних корелација вишеструких веза (ХМБЦ) на 1, уочене су корелације дугог домета између следећих протона и угљеника (3-Х, 1 -Х и 1-Ц; 11- Х3 и 3-Ц; 3-Х, 5-Х, 6-Х2, 9-Х, 11-Х3 и 4- Ц ; 11-Х3 и 5-Ц; 10-Х3 и 7-Ц; 1-Х, 7-Х2, 9-Х, 10-Х3 и 8-Ц; 10-Х3 и 9-Ц; 7-Х2 и 10-Ц) као што је приказано на слици 1. Ензимска хидролиза 1 са б-глукозидазом дала је агликон, канкагенин а (1а) као што је приказано на слици 3. Поређење 13Ц НМР спектра за 1 са онима за 1а открило је померање гликозилације око 1- положаја у 1 [1: дЦ 94,1 (1-Ц), 134,6 (3-Ц), 53,3 (9-Ц); 1а: дЦ 92,9 (1-Ц), 135,3 (3-Ц), 54,7 (9-Ц)]. Дакле, повезаност бД-глукопиранозилног дела у 1 је такође разјашњена да се налази на 1- позицији 1а. Затим, релативна стереоструктура 1 је окарактерисана експериментом нуклеарне Оверхаусерове спектроскопије побољшања (НОЕСИ), који је показао НОЕ корелације између следећих протонских парова (1-Х и 10-Х3; 3-Х и 11-Х3; 5-Х и 6б-Х, 9-Х; 6б-Х и 7б-Х; 7а-Х и 10-Х3; 7б-Х и {{ 190}}Х) као што је приказано на слици 2. Коначно, апсолутна конфигурација 1- положаја у 1 одређена је применом 13Ц НМР правила померања гликозилације 1,1-дисахарида,29) које је пронађено да се примени на хемиацетална једињења.30,31) Потврђено је да се стереоструктура 1-положаја у 1 одржава у 1а поређењем 1Х-НМР анализе укључујући НОЕСИ експеримент. Утврђено је да су вредности померања гликозилације [Дд 1,2 ппм (1 -Ц) и 0,9 ппм (1- Ц), у пиридину-д5] карактеристичне за комбинацију Р, ремиацетал, што је одговарало апсолутној стереоструктури од 1 као што је приказано на слици 3. Према томе, апсолутна конфигурација на {{217}позицији 1 је одређена као С конфигурација, а апсолутна стереоструктура 1 је разјашњена као што је приказано.

Структуре канканозида Б (2) и Ц (3) Канканозида Б (2) су такође изоловане као аморфни прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 26 118,7 степени у МеОХ). ИР спектар од 2 је показао апсорпционе траке на 3410, 1647 и 1{{5{{80}}}}85 цм 1 које се могу приписати хидроксилној, олефинској и етарској функцији. Молекуларна формула Ц15Х24О10 од 2 одређена је пиковима квазимолекуларних јона у ФАБ-МС са позитивним јонима и ФАБ-МС високе резолуције. Кисела хидролиза 2 са 1,0 М ХЦл ослободила је Д-глукозу, која је идентификована ХПЛЦ анализом коришћењем оптичког детектора ротације.8,10—12,15—18) 1Х- (ЦД3ОД, табела 1) и 13Ц-НМР ( Табела 2) спектри 28) од 2 показују сигнале који се могу приписати два метилена [д 1,40 (ДДД, Ј 5,2, 7,3, 13,5 Хз, 6а-Х), 2,52 (ДДД, Ј 7,0, 9,2, 13,5 Хз, 6б-5), , 3,99 (оба д, Ј 11,9 Хз, 10-Х2)], четири метина [д 2,21 (дд, Ј 6,4, 8,6 Хз, 9-Х), 2,83 (м, 5- Х), 4,02 (дд, Ј 5,2, 7,0 Хз, 7-Х), 5,49 (д, Ј 6,4 Хз, 1-Х)], и пар цисолефифина [д 4,95 (дд, Ј 4,0 , 6,1 Хз, 4-Х), 6,22 (дд, Ј 1,8, 6,1 Хз, 3-Х)], заједно са б-глукопиранозилном остатком [д 4,72 (д, Ј 7,9 Хз, 1 - Х)]. Сигнали протона и угљеника у 1Х- и 13Ц-НМР подацима 2 били су слични онима за 6-деоксикаталпол (14), осим сигнала услед 7- и 8- позиције. Као што је приказано на слици 1, експеримент 1 Х–1 Х ЦОЗИ на 2 је показао присуство делимичних структура написаних подебљаним линијама и, у ХМБЦ експерименту, уочене су корелације дугог домета између следећих протонских и угљеничних парова ({{ 122}}Х, 1-Х и 1-Ц; 1-Х и 3-Ц; 10-Х2 и 7- Ц; 1-Х , 7-Х, 9-Х, 10-Х2 и 8-Ц; 7-Х, 10-Х2 и 9-Ц ; 7-Х и 10-Ц). Релативну стереоструктуру 2 карактерише НОЕСИ експеримент, који је показао НОЕ корелације између следећих протонских парова (1-Х и 10-Х2; 3- Х и 4-Х; 5-Х и 6б-Х, 9-Х; 6б-Х и 7-Х; 7-Х и 9-Х) као што је приказано на слици 2. Коначно, алкални третман 14 са 5 процената воденог раствора калијум хидроксида (КОХ) дао је 2 и 19, 32) тако да је стереоструктура 2 разјашњена.

Канканозид Ц (3) је изолован као аморфни прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 26 34.0 степен у МеОХ). У ФАБ-МС са негативним јонима од 3, уочен је пар пикова изотопа квазимолекуларних јона на м/з 399 и 401 (МХ). ФАБ-МС мерењем високе резолуције утврђено је да је молекулска формула 3 Ц15Х25ЦлО10. Кисела хидролиза 3 са 1,0 М ХЦл ослободила је Д-глукозу, која је идентификована ХПЛЦ анализом коришћењем оптичког детектора ротације.8,10—12,15—18) 1Х- (ЦД3ОД, табела 1) и 13Ц-НМР ( Табела 2) спектри 28) од 3 показују сигнале који се могу приписати три метилена [д 1,70 (бр дд, Ј око 3, 13 Хз, 4а-Х), 2,70 (бр дд, Ј око 6, 13 Хз, 4б-Х) , 1,68 (бр д, Ј око 13 Хз, 6а Х), 2,44 (м, 6б-Х), 4,01, 4,04 (оба д, Ј 11,3 Хз, 10-Х2)], пет метина [д 2,47 (дд, Ј 2,5, 7,9 Хз, 9-Х), 2,61 (м, 5- Х), 3,94 (бр с, 7-Х), 5,10 (бр д, Ј ца. 3 Хз, 3-Х), 5,48 (д, Ј 2,5 Хз, 1-Х)], и б-глукопиранозил део [д 4,60 (д, Ј 8,0 Хз, 1 -Х)]. Сигнали протона и угљеника у 1Х- и 13Ц-НМР спектрима 3 су се могли преклапати са сигналима 2, осим за сигнале због 3- и 4- положаја. Положаји бД-глукопиранозила и функције хлора у 3 су разјашњени из Х–Х ЦОЗИ и ХМБЦ експеримената као што је приказано на Слици 1. Сходно томе, планарна структура 3 је конструисана као што је приказано. Релативна стереоструктура 3 је одређена експериментом НОЕСИ, у којем су уочене НОЕ корелације између следећих протонских парова (1-Х и 3-Х, 10-Х2; 3- Х и 4а-Х; 4б-Х и 5- Х; 5-Х и 6б-Х, 9-Х; 6б-Х и 7-Х; {{121} }Х и 9-Х) као што је приказано на слици 2.

Структуре канканозида Д (4) и канканола (5) Канканозид Д (4) је изолован као аморфни прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 25 30.6 степени у МеОХ). ИР спектар 4 је показао апсорпциону траку на 1655 цм 1 која се може приписати олефинској функцији и јаке апсорпционе траке на 341 0 и 1078 цм 1 што указује на његову гликозидну структуру. У ФАБ-МС са позитивним јонима од 4, примећен је пик квазимолекуларних јона на м/з 341 (М На). Молекуларна формула Ц15Х26О7 од 4 одређена је ФАБ-МС мерењем високе резолуције. Кисела хидролиза 4 са 1,0 М ХЦл ослободила је Д-глукозу,8,10—12,15—18), док је (Р)-ротундност (4а) 33,34) добијена ензимском хидролизом 4 са б-глукозидазом. 1Х-НМР (табела 3, ЦД3ОД) и 13Ц-НМР (табела 4) спектри28) од 4 су показали сигнале који се могу приписати метилу [д 1,69 (с, 10-Х3)], три метилена [д 1,41, 2,06 (оба м, 4-Х2), 1,51, 2,01 (оба м, 6а- и 6б-Х), 2,23 (бр дд, Ј око 8, 15 Хз, 7а-Х), 2,37 (бр дд , Ј око 8, 15 Хз, 7б-Х)], метин [д 2,90 (м, 5- Х)] и два метилена која имају функцију кисеоника {д [3,56 (ДДД, Ј 2,8, 7,4 , 13,2 Хз), 3,97 (ДДД, Ј 4,9, 8,0, 13,2 Хз), 3-Х2], 4,04, 4,18 (оба д, Ј 12,2 Хз, 1-Х2)} заједно са б- глукопиранозил део [д 4,25 (д, Ј 7,7 Хз, 1 -Х)]. Положај бД-глукопиранозилног дела у 4 је разјашњен у ХМБЦ експерименту као 3-положај (слика 1). На основу овог доказа, утврђено је да је апсолутна стереоструктура 4 као што је приказано.

Канканол (5) је добијен као аморфни прах са позитивном оптичком ротацијом ([а]Д 25 11,1 степен). Хемијска јонизација (ЦИ)-МС од 5 показала је пар пикова јона изотопа на м/з 221 и 223 због квазимолекуларног јона (МХ). ЦИ-МС мерење високе резолуције од 5 открило је да је молекулска формула Ц9Х13ЦлО4. 1 Х-НМР (Табела 1, ЦД3ОД) и 13Ц-НМР (Табела 2) спектри28) од 5 су показали присуство следећих функција: три метилена [д 1.60 (ДДД, Ј 2.5, 5.5, 13.1 Хз, 4а-Х), 1,80 (бр дд, Ј око 3, 13 Хз, 4б Х), 1,83 (бр д, Ј око 12 Хз, 6а-Х), 2,57 (м, 6б-Х), 3,75 , 3,88 (оба д, Ј 9,2 Хз, 10-Х2)], пет метина [д 2,76 (дд, Ј 4,3, 8,0 Хз, 9-Х), 2,50 (м, 5- Х), 3,80 (бр с, 7-Х), 5,17 (бр д, Ј око 3 Хз, 3-Х), 5,26 (д, Ј 4,3 Хз, 1-Х) ]. Планарна структура 5 је потврђена експериментима 1 Х–1 Х ЦОЗИ и ХМБЦ. То јест, експеримент 1 Х–1 Х ЦОЗИ на 5 је указао на присуство парцијалних структура написаних подебљаним линијама, ау ХМБЦ експерименту су уочене корелације дугог домета као што је приказано на слици 1. Релативна стереоструктура 5 је била утврђено експериментом НОЕСИ, у коме су уочене НОЕ корелације између следећих протонских парова (1-Х и 9-Х; 3-Х и 4а-Х; 4б-Х и {{ 93}} Х; 5-Х и 6б-Х, 9-Х; 6б-Х и 7-Х; 7-Х и 9-Х) као што је приказано на слици 2. Поређењем 1Х- и 13Ц-НМР података за 5 са ​​онима за 14а, који су добијени третманом 14 са 5 процената водене ХЦл као што је приказано на графикону 1,35) положај хлора група у 5 је подржана да буде 3-позиција. Штавише, ацетилација 5 са ​​анхидридом сирћетне киселине (Ац2О) и пиридином дала је 3,7-оксид (5а), док је 14а дао диацетат (14б) под истим условима ацетилације. Овај доказ нас је такође навео да потврдимо да је позиција функције хлора 3б-позиција (Графикон 3). Сходно томе, утврђено је да је стереоструктура 5 као што је приказано.

Структура канканозида Е (6) Канканозид Е (6) је изолован као аморфни прах са негативном оптичком ротацијом ([а]Д 25 20.0 степен у МеОХ). ИР спектар 6 је показао апсорпционе траке на 3410, 1647, 1085 цм 1 које се могу приписати гликозидним и карбонилним функцијама, док је његов УВ спектар показао апсорпциони максимум на 211 нм (лог е 4,63), што указује на присуство б-незасићене карбоксилне киселине. Молекуларну формулу Ц16Х28О8 од 6 карактерише ФАБ-МС позитивних и негативних јона и МС мерење високе резолуције. Кисела хидролиза 6 ослобођене Д-глукозе,8,10—12,15—18) док (2Е,6Р)-8-хидрокси-2,6-диметил- 2-октанска киселина (6а) 36) добијен је ензимском хидролизом 6 са б-глукозидазом. 1Х-НМР (табела 3, ЦД3ОД) и 13Ц-НМР (табела 4) спектри28) од 6 указују на присуство (2Е,6Р)-8-хидрокси-2,6- дио диметил-2-октанске киселине [д 0,95 (д, Ј 6,4 Хз, 10-Х3), 1,30, 1,48 (оба м, 5-Х2), 1,45, 1,70 (оба м, { {70}}Х2), 1,65 (м, 6-Х), 1,81 (с, 9-Х3), 2,22 (2Х, м, 4-Х2), 3,61, 3,94 (оба м, 8-Х2), 6.78 (дд, Ј 1.2, 7.3 Хз, 3-Х)] заједно са бД-глукопиранозил делом [д 4.26 (д, Ј 7.6 Хз, 1-Х)] . Поређењем сигнала угљеника у 13Ц-НМР спектру од 6 са онима од 6а, примећен је помак гликозилације око 8-положаја 6. Положај глукозидне везе је такође потврђен ХМБЦ експериментима као што је приказано у Слика 1. Према томе, апсолутна стереоструктура 6 је разјашњена као (2Е,6Р)-8-б-Д-глукопираносилокси-2,6-диметил-2-октанска киселина.

корист екстракта цистанцхе

Експериментално

За добијање физичких података коришћени су следећи инструменти: специфичне ротације, Хориба СЕПА{0}} дигитални полариметар (л 5 цм); УВ спектри, Схимадзу УВ-1600 спектрометар; ИР спектри, Схимадзу ФТИР-8100 спектрометар; ЕИ-МС, ЦИ-МС и ЦИ-МС, ЈЕОЛ ЈМС-ГЦМАТЕ масени спектрометар високе резолуције; ФАБ-МС и МС високе резолуције, ЈЕОЛ ЈМС-СКС 102А масени спектрометар; 1 Х-НМР спектар, ЈЕОЛ ЕКС-270 (270 МХз) и ЈНМ-ЛА500 (500 МХз) спектрометри; 13Ц-НМР спектри, ЈЕОЛ ЕКС-270 (68 МХз) и ЈНМ-ЛА500 (125 МХз) спектрометри са тетраметилсиланом као интерним стандардом; и ХПЛЦ детектор, Схимадзу РИД-6А индекс преламања и СПД- 10Авп УВ-ВИС детектори. ХПЛЦ колоне, ИМЦ-Пацк ОДС-А (250 4,6 мм ид) и (250 20 мм ид) колоне су коришћене у аналитичке и препаративне сврхе, респективно.

За хроматографију су коришћени следећи експериментални услови: хроматографија на колони силика гела обичне фазе, силика гел БВ-200 (Фуји Силисиа Цхемицал, Лтд., Аицхи, Јапан, 15{{10}}—35 0 мрежа); хроматографија на колони силика гела реверзне фазе, Цхроматорек ОДС ДМ1020Т (Фуји Силисиа Цхемицал, Лтд., Аицхи, Јапан, 100—200 месх); ТЛЦ, претходно обложене ТЛЦ плоче са силика гелом 60Ф254 (Мерцк, 0,25 мм) (обична фаза) и силика гелом РП- 18 Ф254С (Мерцк, 0,25 мм) (реверзна фаза); ХПТЛЦ реверзне фазе, претходно обложене ТЛЦ плоче са силика гелом РП-18 ВФ254С (Мерцк, 0,25 мм); а детекција је постигнута прскањем са 1% Це(СО4)2–10% воденог Х2СО4 након чега је уследило загревање.

Садни материјал

Осушене стабљике Цистанцхе тубулоса (СЦХРЕНК) Р. ВИГХТ купљене су у Урумкију, провинција Ксињианг, Кина у јануару 2005. преко Еисхин Традинг Цо., Лтд. Осака, Јапан, а ботаничку идентификацију је извршио професор Јиа Ксиаогуанг у Синђанг институту за традиционални кинески и Етнолошки лекови. Узорак ваучера (2005.01. Ксињианг-01) ове биљке налази се у нашој лабораторији.

Екстракција и изолација

Осушене стабљике Ц. тубулоса (5.0 кг) су у праху и екстраховане три пута метанолом под рефлуксом 3 х. Испаравањем растварача под сниженим притиском добија се метанолни екстракт (1340 г, 26,8 процената овог биљног лека). Метанолни екстракт (160 г) је подвргнут хроматографији на колони са силика гелом нормалне фазе [3,2 кг, ЦХЦл3–МеОХ–Х2О (10 : 3 : 1→7 : 3 : 1, ниже слој→6 : 4 : 1)МеОХ] да би се добило шест фракција [Фр. 1 (5.04 г), о. 2 (9,84 г), Фр. 3 (7,80 г), Фр. 4 (13,28 г), Фр. 5 (113,6{{104}} г), и о. 6 (7,61 г)]. Фракција 1 (5.00 г) је одвојена хроматографијом на колони са силика гелом реверзне фазе [150 г, МеОХ–Х2О (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, в/в)→МеОХ] да би се добило пет фракција [Фр. {{50}} (83{{201}} мг), о. 1-2 (590 мг), о. 1-3 (180 мг), о. 1-4 (124 мг), и Фр. 1-5 (3200 мг)]. о. {{60}} (830 мг) је даље одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (10 : 90, в/в)] да би се добио канканол (5, 20 мг, 0,0034 процената), аргиол (15, 18 мг, 0,0030 процената), цистанин (16, 24 мг, 0,0040 процената) и Фр. 1-1-2 (62 мг), који је даље одвојен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (2 : 98, в/в)] да би се добио (3Р)-3-хидрокси-2-пиролидинон (0,0020 процената ) и (3Р)-3-хидрокси-1-метил-2-пиролидинон (0,0059 процената). о. 1-2 (590 мг) је пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (35 : 65, в/в) и ЦХ3ЦН– Х2О (20 : 80, в/в)] да би се добио цистанхлорин (17, 21 мг, 0,0035 проценат ). Фракција 2 (9,72 г) је подвргнута хроматографији на колони силика гела реверзне фазе [290 г, МеОХ–Х2О (20 : 80→30 : 70→40 : 60→60 : 40, в/в)→МеОХ] да би се омогућило седам разломака [Фр. 2-1 (1986 мг), Фр. 2-2 (1563 мг), Фр. 2-3 (3931 мг), Фр. 2-4 (375 мг), Фр. 2-5 (486 мг), Фр. 2-6 (460 мг), и Фр. 2-7 (336 мг)]. о. 2-1 (466 мг) је одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (5 : 95, в/в)] да би се добио уридин (0,0069 процената). о. 2-2 (535 мг) је одвојен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (10 : 90, в/в)] да би се добио антирид (11, 15 мг, 0,0079 процената) и 6-деоксикаталпол (14, 214 мг, 0,11 процената). о. 2-3 (535 мг) је одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (20 : 80, в/в)] да би се добио глурозид (10, 110 мг, 0,14 процената) и барциозид (13, 164 мг, 0,21 проценат) . о. 2-4 (375 мг) је одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (30 : 70, в/в)] да би се добили канканозиди А (1, 32 мг, 0,0054 процента) и Д (4, 9 мг, 0,0015 процената ). о. 2-6 (460 мг) је даље одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (45 : 55, в/в)] да би се добио канканозид Е (6, 161 мг, 0,027 процената) и (2Е,6З){{192 }}бД-глукопираносилокси-2,6-диметил-2,6-октадиенска киселина (18, 17 мг, 0,0028 процената). Фракција 3 (7,60 г) је подвргнута колонској хроматографији на силика гелу реверзне фазе [230 г, МеОХ–Х2О (20 : 80→40 : 60→50 : 50→ 60 : 40, в/в)→МеОХ] да би се добило пет фракција [Фр. 3-1 (2652 мг), Фр. 3-2 (593 мг), Фр. 3-3 (3610 мг), Фр. 3-4 (190 мг), и Фр. 3-5 (336 мг)]. о. 3-1 (480 мг) је пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (10 : 90, в/в)] да би се добио канканозид Б (2, 19 мг, 0,018 процената), генипосидна киселина (8, 32 мг, 0,030). проценат), и ајугол (12, 12 мг, 0,011 процената). Фракција 4 (13,10 г) је подвргнута хроматографији на колони са силика гелом реверзне фазе [390 г, МеОХ–Х2О (10 : 90→20 : 80→30 : 70→40 : 60→50 : 50, в/в)→ МеОХ] да би се добило седам фракција [Фр. 4-1 (6114 мг), Фр. 4-2 (430 мг), Фр. 4-3 (1058 мг), Фр. 4-4 (170 мг), Фр. 4-5 (2595 мг), Фр. 4-6 (1635 мг), и о. 4-7 (1064 мг)]. о. 4-2 (430 мг) је даље одвојено помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (5 : 95, в/в)] да би се добило 2 (70 мг, 0,012 процената) и канканозид Ц (3, 16 мг, 0,0027 процената) . о. 4-6 (1058 мг) је такође раздвојен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (15 : 85, в/в)] да се добије мусаенозидна киселина (7, 116 мг, 0,020 процената) и 8-епилоганска киселина (9, 193 мг, 0,033 процента). Фракција 5 (15,15 г) је подвргнута хроматографији на колони са силика гелом реверзне фазе [455 г, МеОХ–Х2О (0 : 100→10 : 90→ 20 : 80→40 : 60→50 : 50, в/в)→МеОХ ] дати седам разломака [Фр. 5-1 (9311 мг), Фр. 5-2 (1114 мг), Фр. 5-3 (306 мг), Фр. 5-4 (347 мг), Фр. 5-5 (1620 мг), Фр. 5-6 (1453 мг), и о. 5-7 (1106 мг)]. о. 5-1 (9311 мг) је кристализован из МеОХ да би се добио Д-манитол (3337 мг, 4,19 процената).

Позната једињења (7—18) су идентификована поређењем њихових физичких података ([а]Д, ИР, 1Х-НМР, 13Ц-НМР, МС) са пријављеним вредностима1,7,19—24,26,27) или оне комерцијалних узорака.25) Канканозид А (1): аморфни прах, [а]Д 25 107,4 степена (ц 1,50, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц16Х26О8На (М На) 369,1525; Пронађено 369.1522. ИР (КБр): 3410, 2940, 1647, 1076 цм1. 1 Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД и пиридин-д5) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД и пиридин-д5) д Ц: дат у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона: м /з 369 (М На). ФАБ-МС негативних јона: м/з 345 (МХ).

Канканозид Б (2): Аморфни прах, [а]Д 26 118,7 степени (ц 0.10, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц15Х24О10На (М На) 387,1267; Пронађено 387.1261. ИР (КБр): 3410, 2940, 1647, 1085 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ФАБ-МС позитивних јона: м/з 387 (М На). ФАБ-МС негативних јона: м/з 363 (МХ).

Канканозид Ц (3): аморфни прах, [а]Д 26 34.0 степен (ц 1.00, МеОХ). ФАБ-МС негативних јона високе резолуције: Израчунато за Ц15Х24ЦлО10 (МХ) 399,1058; Пронађено 399.1077. ИР (КБр): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ФАБ-МС негативних јона: м/з 399, 401 (МХ).

Канканозид Д (4): аморфни прах, [а]Д 25 30.6 степени (ц 0,50, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц15Х26О7На (М На) 341,1204; Пронађено 341.1210. ИР (КБр): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 3. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 4. ФАБ-МС позитивних јона: м/з 341 (М На). ФАБ-МС негативних јона: м/з 317 (МХ).

Канканол (5): Аморфни прах, [а]Д 25 11,1 степен (ц 1,40, МеОХ). ЦИ-МС високе резолуције: Израчунато за Ц9Х14ЦлО4 (МХ) 221,0580; Пронађено 221.0582. ИР (КБр): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ЦИ-МС м/з (проценти): 221 (МХ) (5 ), 223 (МХ) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) и 57 (49).

Канканозид Е (6): аморфни прах, [а]Д 25 20.0 степена (ц 2.00, МеОХ). ФАБ-МС са позитивним јонима високе резолуције: Израчунато за Ц16Х28О8На (М На) 371,1682; Пронађено 371.1690. УВ [МеОХ, нм (лог е)]: 215 (4.16). ИР (КБр): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 3. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 4. ФАБ-МС позитивних јона: м/з 371 (М На). ФАБ-МС негативних јона: м/з 347 (МХ).

корист екстракта цистанцхе

Кисела хидролиза 1—4 и 6 са 1 М ХЦл

Раствор 1-4 или 6 (сваки 1,5 мг) у 1 М ХЦл (0.5 мл) је загреван под рефлуксом 3 х. После хлађења, реакциона смеша је сипана у ледену воду и неутрализована са Амберлите ИРА-400 (ОХ облик), а смола је уклоњена филтрацијом. Затим је филтрат екстрахован са ЕтОАц. Водени слој је подвргнут ХПЛЦ анализи под следећим условима: ХПЛЦ колона, Ка сензор ЛЦ НХ{{10}}, 4,6 мм ид 250 мм (Токио Касеи Цо., Лтд., Токио, Јапан); детекција, оптичка ротација [Сходек ОР-2 (Схова Денко Цо., Лтд., Токио, Јапан)]; мобилна фаза, ЦХ3ЦН–Х2О (75:25, в/в); споредна брзина 0,8 мл/мин; температура колоне, собна температура. Идентификација Д-глукозе присутне у воденом слоју извршена је поређењем њеног времена задржавања и оптичке ротације са онима аутентичног узорка: тР 12,3 мин (позитивна оптичка ротација)

Ензимска хидролиза 1, 4 и 6 са б-глукозидазом

Раствор 1 (7,7 мг) у Х2О (1,5 мл) третиран је са б-глукозидазом (5.0 мг, од бадема, Ориентал Иеаст Цо., Токио, Јапан) и раствор је мешан на 37 степени. за 3 д. Након што је у реакциону смешу додат ЕтОХ, растварач је уклоњен под сниженим притиском, а остатак је пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (55:45, в/в)] да би се добио канкагенин а (1а, 2,3 мг, 56 процената) . Сличном процедуром, (Р)-ротундиол33,34) (4а, 1,2 мг, 69 процената) и (2Е,6Р)-8-хидрокси-2,6-диметил{{30} }октанска киселина36) (6а, 6,8 мг, 62 процента) добијени су од 4 (3,5 мг) и 6 (20,4 мг), респективно.

Канкагенин а (1а): Бели прах, [а]Д 25 18,4 степена (ц 0.20, МеОХ). ЕИ-МС високе резолуције: Израчунато за Ц10Х16О3 (М) 184,1099; Пронађено 184.1106. ИР (КБр): 3410, 2940, 1684 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ЕИ МС: м/з (проценти): 184 (М, 37) , 95 (100).

Алкални третман 14 са 5 процената воденог КОХ

Раствор од 14 (23.0 мг) у 5% воденом раствору КОХ (1.0 мл) је мешан на 80 степени током 2 х. Реакциона смеша је неутрализована са Амберлите ХЦР-В2 (Х облик). Уклањање растварача из филтрата под сниженим притиском дало је остатак, који је пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (5:95, в/в)] да би се добило 2 (4,0 мг, 16 процената) и 1932) (10,5 мг). , 43 одсто).

Третман киселином 14 са 5% воденог раствора ХЦл

Раствор од 14 (250 мг) у 5% воденом раствору ХЦл (20 мл) је мешан на собној температури 3 х. Реакциона смеша је сипана у ледену воду и цела реакциона смеша је екстрахована са ЕтОАц. Екстракт ЕтОАц је сукцесивно испран засићеним воденим НаХЦ03 и сланим раствором, затим осушен преко анхидрованог МгС04 праха и филтриран. Уклањање растварача из филтрата под сниженим притиском дало је остатак, који је одвојен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (20: 80, в/в)] да се добије 14а (4,0 мг, 25 процената).

14a

Бели прах, [а]Д 20 21,5 степени (ц 0,30, МеОХ). ЦИ-МС високе резолуције: Израчунато за Ц9Х14ЦлО4 (МХ) 221,0580; Пронађено 221.0587. ИР (КБр): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ЦИ-МС: м/з (проценти): 221 (МХ) ( 7), 223 (МХ) (3), 203 (М Х2О) (97), 205 (М Х2О) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) и 57 (65).

Ацетилација 5 и 14а

Раствор 5 (2,5 мг) у пиридину (0,5 мл) третиран је анхидридом сирћетне киселине (Ац2О, 0,4 мл) и смеша је мешана на собној температури 12 х. Реакциона смеша је сипана у ледену воду и цела реакциона смеша је екстрахована са ЕтОАц. Екстракт ЕтОАц је сукцесивно испран са 5% воденог раствора ХЦл, засићеним воденим раствором НаХЦ03 и сланим раствором, затим осушен преко анхидрованог праха МгС04 и филтриран. Уклањање растварача из филтрата под сниженим притиском дало је остатак, који је пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (35:65, в/в)] да би се добило 5а (2,3 мг, 77 процената). Сличном процедуром, 14б (2,7 мг, 87 процената) је такође припремљен и пречишћен помоћу ХПЛЦ [МеОХ–Х2О (55: 45, в/в)] из 14а (2,1 мг).

5a

Бели прах, [а]Д 20 1,8 степени (ц 0,18, МеОХ). ЦИ МС високе резолуције: Израчунато за Ц11Х15О5 (МХ) 227,0919; Пронађено 227.0925. ИР (КБр): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ЦИ-МС м/з (проценти): 227 (МХ) (28 ), 209 (М Х2О) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) и 57 (34 ).

14b

Бели прах, [а]Д 20 23,7 степени (ц 0,06, МеОХ). ЦИ-МС високе резолуције: Израчунато за Ц13Х18ЦлО6 (МХ) 305,0792; Пронађено 305.0790. ИР (КБр): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 цм1. 1Х-НМР (500 МХз, ЦД3ОД) д: дат у табели 1. 13Ц-НМР (125 МХз, ЦД3ОД) д Ц: дат у табели 2. ЦИ-МС: м/з (проценти): 305 (МХ) ( 2), 307 (МХ) (1), 263 (МХ Ц2Х3О) (6), 265 (МХ Ц2Х3О) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) и 57 (93).

Признања

Ово истраживање је подржано од стране 21. програма ЦОЕ, пројекта Ацадемиц Фронтиер и Грант-ин-Аид за научна истраживања Министарства образовања, културе, спорта, науке и технологије Јапана. Аутори захваљују професору Ксиаогуанг Јиа-у на Институту за традиционалну кинеску и етнолошку медицину Ксињианг у Урумчију, Кина, за идентификацију биљног материјала.

цистанцхе бенефит

Референце и белешке

1) Кобаиасхи Х., Огуцхи Х., Такизава Н., Мииасе Т., Уено А., Усмангхани К., Ахмад М., Цхем. Пхарм. Бул., 35, 3309—3314 (1987).

2) Ксињианг Сциенце анд Тецхнологи Пресс, "Цултуре Тецхникуес оф Ксињианг Стапле Медицал Плантс", Синђанг Институт за традиционалну кинеску и етнолошку медицину Ед., 2004, стр. 84—88.

3) Ду Н., Зхоу П., Ванг Ј., Лиу Ц., Ли В., Зхонггуо Иаоке Дакуе Ксуе бао, 24, 46—48 (1993).

4) Ксуе Д., Зхонггуо Зхонгиао Зазхи, 22, 170—171 (1997).

5) Сонг З., Мо С., Цхен И., Ту П., Ли В., Зхао И., Зхенг Ј., Зхонггуо Зхонгиао Зазхи, 25, 728—730 (2000).

6) Сонг З., Ту П., Зхао И., Зхенг Ј., Зхонгцаоиао, 31, 808—810 (2000).

7) Иосхизава Ф., Деиама Т., Такизава Н., Усмангхани К., Ахмад М., Цхем. Пхарм. Бул., 38, 1927—1930 (1990).

8) Матсуда Х., Морикава Т., Тао Ј., Уеда К., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 50, 208—215 (2002).

9) Морикава Т., Мацуда Х., Тогуцхида И., Уеда К., Иосхикава М., Ј. Нат. Продукт, 65, 1468—1474 (2002).

10) Тао Ј., Морикава Т., Тогуцхида И., Андо С., Матсуда Х., Иосхикава М., Биоорг. Мед. Цхем., 10, 4005—4012 (2002).

11) Морикава Т., Тао Ј., Андо С., Мацуда Х., Иосхикава М., Ј. Нат. Продукт, 66, 638—645 (2003).

12) Тао Ј., Морикава Т., Андо С., Матсуда Х., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 51, 654—662 (2003).

13) Матсуда Х., Морикава Т., Ксие Х., Иосхикава М., Планта Мед., 70, 847—855 (2004).

14) Сун Б., Морикава Т., Матсуда Х., Тевтракул С., Харима С., Иосхикава М., Ј. Нат. Продукт, 67, 1464—1469 (2004).

15) Морикава Т., Сун Б., Матсуда Х., Ву Љ, Харима С., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 52, 1194—1199 (2004).

16) Ксие Х., Ванг Т., Матсуда Х., Морикава Т., Иосхикава М., Тани Т., Цхем. Пхарм. Бул., 53, 1416—1422 (2005).

17) Морикава Т., Ксие Х., Матсуда Х., Иосхикава М., Ј. Нат. Прод., 69 (2006) у штампи.

18) Морикава Т., Ксие Х., Матсуда Х., Ванг Т., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 54, 506—513 (2006).

19) Кобаиасхи Х., Карасава Х., Мииасе Т., Фукусхима С., Цхем. Пхарм. Бул., 33, 3645—3650 (1985).

20) Отсука Х., Пхитоцхемистри, 33, 617—622 (1993).

21) Зхао В., Ианг Г., Ксу Р., Кин Г., Пхитоцхемистри, 41, 1553—1555 (1996).

22) Кобаиасхи Х., Карасава Х., Мииасе Т., Фукусхима С., Цхем. Пхарм. Бул., 32, 1729—1734 (1984).

23) Ксу З., Ианг С., Ианг Ј., Лу Р., Зхонгцаоиао, 30, 244—246 (1999).

24) Ванг СЈ, Пеи ИХ, Хуа ХМ, Цхин. Цхем. Летт., 12, 343—344 (2001).

25) Та позната једињења су идентификована поређењем њихових физичких података са комерцијално добијеним узорцима.

26) Пирес Р., Бургер К., Тетрахедрон, 53, 9213—9218 (1997).

27) Камал А., Рамана КВ, Рамана АВ, Бабу АХ, Тетрахедрон: Асимметри, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1 Х- и 13Ц-НМР спектри 1-6 и сродних једињења (19, 1а, 5а, 14а, 14б) су додељени уз помоћ побољшања без изобличења помоћу поларизационог трансфера (ДЕПТ), корелационе спектроскопије двоструког квантног филтера ( ДКФ ЦОСИ), експерименти хетеронуклеарне вишеструке квантне кохеренције (ХМКЦ) и хетеронуклеарне вишеструке везе (ХМБЦ).

29) Нишизава М., Кодама С., Иамасе И., Каиано К., Хатакеиама С., Иа мада Х., Цхем. Пхарм. Бул., 42, 982—984 (1994).

30) Иосхикава М., Уеда Т., Матсуда Х., Иамахара Ј., Мураками Н., Цхем. Пхарм. Бул., 42, 1691—1693 (1994).

31) Матсуда Х., Схимода Х., Уемура Т., Уеда Т., Иамахара Ј., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 47, 1753—1758 (1999).

32) Дамтофт С., Јенсен СР, Ниелсен БЈ, Пхитоцхемистри, 24, 2281—2283 (1985).

33) Ватанабе К., Такада И., Матсуо Н., Нисхимура Х., Биосци. Биотецх. Биоцхем., 59, 1979—1980 (1995).

34) Такикава Х., Иамазаки И., Мори К., Еур. Ј. Орг. Цхем., 229—232 (1998).

35) Китагава И., Фукуда И., Танииама Т., Иосхикава М., Цхем. Пхарм. Бул., 39, 1171—1176 (1991).

36) Иамагуцхи К., Схинохара Ц., Којима С., Содеока М., Тсуји Т., Биосци. Биотецх. Биоцхем., 63, 731—735 (1999).