Део 2: Хомоаргинин побољшава дијабетичку нефропатију независну од синтазе азот-оксида-3

За више информација. контактtina.xiang@wecistanche.com

3. РЕЗУЛТАТИ

3.1 Карактеристике миша

Дијабетични мишеви дивљег типа и НОС3- имали су значајно мању телесну тежину у поређењу са недијабетичним мишевима након 24 недеље, што је значајно повећано хомоаргинином код дијабетичких НОС3-7 мишева. Глукоза у крви била је виша код свих дијабетичких дивљих типова и НОС3-7 мишева. Однос бубрег/телесна тежина био је значајно већи код дијабетичких НОС3-7 мишева, док је третман хомоаргинином значајно смањио однос срчане и телесне тежине код дијабетичких НОС3- мишева. Систолни крвни притисак је значајно повећан код НОС3-7 мишева у поређењу са дивљим типом и показао је тренд смањења; иако није значајан третманом хомоаргинином код дијабетичких НОС3-/ мишева. (Табела 1).

3.2 Хомоаргинин смањује албуминурију код дијабетичких НОС3-/- мишева

Дијабетес је значајно повећао албуминурију и код дивљег типа и код НОС3-/ мишева у поређењу са нормалним, што је ефекат значајно смањен третманом хомоаргинином (Слика 1). Пошто су резултати примећени код мишева дивљег типа били у складу са нашом претходном студијом (Ветзел ет ал., 2019) о заштитном ефекту хомоаргинина у ДН, анализирали смо само НОС3-/ мишеве за остатак ове студије.

3.3 Хомоаргинин смањује нивое БУН у плазми код дијабетичких НОС3-7- мишева

Затим смо проценили ефекте примене хомоаргинина на нивое БУН у плазми код НОС3- мишева. Нивои БУН у плазми су повећани код дијабетичких мишева и смањени третманом хомоаргинином (Слика 2).

Кликните да бисте сазнали више о органској цистанцхе и употреби цистанцхе

3.4 Изрази НОС1 и НОС2 нису промењени код дијабетичких НОС3- мишева

Затим смо утврдили да ли дијабетес и/или хомоаргинин мењају експресију других изоформа НОС у бубрезима код НОС3 - мишева. Наши резултати показују да ни дијабетес ни хомоаргинин нису утицали на експресију гена НОС1 или НОС2 код НОС3-7 мишева (Слика 3).

3.5 Хомоаргинин смањује гломеруларну патологију и фиброзу код дијабетичких НОС3- мишева

Анализа гломеруларних пресека обојених ПАС-ом показала је да су дијабетички НОС3-- мишеви повезани са повећаним волуменом гломерула, целуларношћу гломерула, дебљином базалне мембране гломерула (ГБМ) и индексом гломеруларне повреде у поређењу са недијабетичним НОС3一 мишевима; ефекат значајно смањен коришћењем третмана хомоаргинином (Табела 2 и Слика 4а). Штавише, дијабетички НОС3 мишеви су показали повећан проценат фиброзе (користећи ИмагеЈ) у Массоновим трихром (Слика 4б,ц) обојеним пресецима 24 недеље након дијабетеса, који је смањен третманом хомоаргинином.

3.6 Хомоаргинин смањује фибротичне маркере бубрега код дијабетичких НОС3-/- мишева

ПЦР анализа у реалном времену показује значајно повећање фибронектина бубрега (Слика 5а), ТГФ (Слика 5б), актина глатких мишића (Слика 5ц) и Е-кадхерина (Слика 5д) након дијабетеса код НОС3-/мишева. Додатак хомоаргинина значајно је смањио повећање ових маркера фиброзе.

3.7 Хомоаргинин смањује инфилтрацију гломеруларних макрофага код дијабетичких НОС3-/мишева

Дијабетички НОС3-/мишеви су показали значајно повећање инфилтрираних бубрежних макрофага након дијабетеса (Слика 6) у поређењу са мишевима без дијабетеса. Лечење хомоаргинином значајно је смањило инфилтрацију макрофага 24 недеље након дијабетеса.

3.8 Хомоаргинин смањује срчану фиброзу и побољшава срчану функцију код мишева са дијабетесом НОС3-7-р

Дијабетички НОС3-/ мишеви су показали повећан проценат фиброзе (користећи ИмагеЈ) у Массоновим трихромом (Слика 7а,б) обојеним пресецима 24 недеље након дијабетеса, који је смањен третманом хомоаргинином. Штавише, дијабетички НОС3-7 мишеви су имали значајно смањење фракције избацивања (ЕФ) и фракционог смањења (ФС) (Слика 7ц-е) у поређењу са контролама без дијабетеса у 22 недеље дијабетеса, што је ефекат значајно обновљен коришћењем хомоаргинина третман.

3.9 Хомоаргинин обнавља МЦУ комплекс и његове регулаторе код дијабетичких Инс2Акита мишева

Узорци бубрега добијени из наше претходне публикације (Ветзел ет ал., 2019) анализирани су на МЦУ комплекс и његове регулаторе. Мишеви са дијабетесом имали су значајно повећање МЦУ бубрега и његовог позитивног регулатора, експресије МЦУР1, заједно са смањењем негативног регулатора МЦУ бубрега, експресије МИЦУ1 (Слика 8), у поређењу са недијабетичарским контролама у доби од 18 недеља код Инс2Ак мишева, док дијабетички мишеви третирани додатком хомоаргинина вратили су МЦУ комплекс и његове регулаторе на нормалне нивое.

3.10 Хомоаргинин обнавља МЦУ комплекс мишева и његове регулаторе код дијабетичких НОС3-7-

Дијабетички НОС3-/мишеви су имали значајно повећање МЦУ бубрега (Слика 9а) заједно са значајним смањењем његовог негативног регулатора, експресије МИЦУл (Слика 9б,ц), у поређењу са контролама без дијабетеса након 24 недеље дијабетеса , док су дијабетички НОС3-мишеви третирани додатком хомоаргинина вратили МЦУ комплекс и његов негативни регулатор на нормалне нивое.

4. ДИСКУСИЈА

Дијабетичка нефропатија остаје важна и нерешена компликација дијабетеса. Наша претходна публикација је показала да суплементација хомоаргинином даје предностбубрегазаштита код дијабетичких модела мишева (Ветзел ет ал., 2019). Међутим, тачан механизам којим хомоаргинин посредује ове ефекте није био јасан. Садашња студија показује да суплементација хомоаргинином посредујебубрежнизаштита ткива у ДН независно од НОС3, што ће на крају променити наше разумевање механизма(а) помоћу којих хомоаргинин индукује бубрежну и срчану заштиту у ДН. Заштитни ефекат хомоаргинина у ДН може бити посредован побољшањем митохондријалне функције.

Ендотелна дисфункција, коју карактерише смањена биорасположивост НО, и повећан оксидативни стрес, карактеристика је дијабетеса (Цреагер ет ал., 2003) и ДН (Голигорски ет ал., 2001). Улога експресије и деловања НОС3 у ДН је контроверзна; стога, иако се показало да низак или недостатак НОС3 погоршава ДН (Ванг ет ал, 2011; Зхао ет ал., 2006), недавна публикација (Натарајан ет ал., 2019) је показала да прекомерна експресија НОС3 код Инс2Аки мишева вероватно погоршава ДН преко повећаног одвајања НОС3 и оксидативног стреса пре него повећањем бубрежне производње/дејства НО. Пошто хомоаргинин може бити супстрат за НОС повећањем Л-аргинина (Хецкер ет ал., 1991; Моали ет ал., 1998), он такође може посредовати у свом ефекту преко деловања/производње НО. Међутим, наша претходна публикација је показала да орална суплементација аргинином изненађујуће није спречила или смањила маркере оштећења бубрега код дијабетичких мишјих модела, упркос успешном повећању нивоа аргинина у плазми и бубрезима (Иоу ет ал., 2014). Директна интеракција између нивоа хомоаргинина и производње НО је контроверзна. Хомоаргинин би могао да смањи синтезу НО из аргинина (а) надметањем аргинина и хомоаргинина за ћелијско преузимање од стране транспортера катјонских амино киселина (ЦАТ) (Цхафаи ет ал, 2017; Хагос ет ал., 2006); (б) транс-стимулацијом ЦАТ, што би заузврат могло повећати ћелијски ефлукс аргинина; и (ц) конкуренцијом хомоаргинина и аргинина за НОС (Пилз ет ал., 2015), иако је хомоаргинин мање ефикасан супстрат за овај ензим (Моали ет ал.,1998; Зван ет ал,2013). Иако хомоаргинин може повећати доступност аргинина, а тиме и синтезу НО инхибицијом аргиназе, то је мало вероватно због слабог афинитета хомоаргинина за аргиназу (Марз ет ал, 2010). Без обзира на то, хомоаргинин може допринети синтези НО служећи као супстрат за НОС, јер хомоаргинин, чак и са слабијим афинитетом према НОС у поређењу са аргинином, може да се метаболише у НО и хомоцитрулин (Дрецхслер ет ал., 2011).

Да бисмо испитали механизам заштитног ефекта хомоаргинина у ДН, истражили смо ефекте суплементације хомоаргинином на дисфункцију бубрега, гломеруларне хистопатолошке промене и регрутовање макрофага у НОС3-/-и њихов модел мишева са дијабетесом дивљег типа легла. Додатак хомоаргинина значајно је побољшао дијабетичку албуминурију код дијабетичара дивљег типа и НОС3-7 мишева, потврђујући наше претходно откриће (Ветзел ет ал, 2019), и био је повезан са смањеном гломеруларном патологијом и експресијом фиброзних маркера бубрега код дијабетичких НОС{{ 5}}мишеви.

Узети заједно, наши резултати указују на директну улогу заштитног ефекта хомоаргинина у ДН и подржавају концепт да хомоаргинин посредује у заштити бубрежног ткива независно од НОС3. И кардиоваскуларни морбидитет и морталитет су повећани код пацијената са ДН. У срцу, нижи нивои хомоаргинина су повезани са повећаним задебљањем леве коморе, нижим ЕФ и вишим НТпроБНП (Бахлс ет ал., 2018). Обрнуто, суплементација хомоаргинином чува срчану функцију у мишјем моделу срчане инсуфицијенције након инфаркта миокарда (Атзлер ет ал., 2017). У тренутној студији, такође смо показали да је заштитни ефекат хомоаргинина за побољшање срчане функције и смањење срчане фиброзе независан од експресије НОС3 на сличан начин као и његов ефекат на бубреге. Међутим, не можемо искључити хемодинамски ефекат хомоаргинина у ДН с обзиром на његов тренд смањења крвног притиска; иако није значајно.

Чини се да је механизам заштитног ефекта хомоаргинина повезан са модулацијом митохондријалне функције коју регулише МЦУ комплекс и његови регулатори. Митохондријална дисфункција игра кључну улогу у оштећењу бубрега (Броокс ет ал., 2009; Цоугхлан & Схарма, 2016; Халлан & Схарма, 2016; Лонг ет ал.. 2016; Схарма, 2015; Сун ет ал. 2008; Ванг ет ал. .,2012;Иоу ет ал.,2016;Иу ет ал., 2006; Зхан ет ал.,2013).У бубрезима, ендотелне ћелије су посебно осетљиве на митохондријалну дисфункцију (Хонг ет ал.,2012) и доприносе оксидативном стресу, упорно исцрпљивање енергије, оштећење енергетски зависних механизама поправке и ћелијска смрт у повреди бубрега (Функ ет ал., 2010; Функ & Сцхнеллманн, 2012). МЦУ је мултимерни комплекс укључен у брзо усвајање Ца' у митохондријама и показало се да буду дисрегулисани у срчаној патологији (Лиао ет ал., 2015; Луонго ет ал., 2015; Неманиет ал, 2018; Томар ет ал, 2019; Воодс ет ал, 2019). Митохондријски унос Ца2 плус посредован МЦУ комплексом игра кључну улогу у трансдукцији сигнала, биоенергетици и смрти ћелија, а његова дисрегулација је повезана са неколико људских болести. Иако је апоптоза подоцита повезана са дисрегулацијом МЦУ (Ксу ет ал., 2018; Иуан ет ал., 2017), улога комплекса МЦУ и његова интеракција са додатком хомоаргинина у ДН нису познати. Наши тренутни подаци код дијабетичких мишева показали су да примена хомоаргинина значајно смањује експресију МЦУ, повећава МЦУ-негативни регулатор (МИЦУ1) и смањује МЦУ-позитивни регулатор (МЦУР1) у ДН, а овај ефекат је независан од експресије НОС3. Стога спекулишемо да постоји веза између митохондријске Ца' сигнализације и нежељених клиничких исхода у ДН. Нормализација митохондријалне функције је неопходна за обнављање оксидативног метаболизма током ДН. Потребне су додатне студије да би се потврдио директан ефекат хомоаргинина на функцију митохондрија.

У закључку, наша студија по први пут показује да је механизам заштите бубрежног и срчаног ткива коришћењем суплементације хомоаргинином у ДН независан од НОС3, и вероватно је посредован побољшањем митохондријалне дисфункције. Резултати наше студије могу на крају довести до нових терапијских интервенција дизајнираних да повећају хомоаргинин у лечењу ДН.

Користи одЦистанцхе

1. Цистанцхе је веома добар традиционални кинески лек за тонирање бубрега. Не само да може тонизирати јин бубрега, већ и тонизирати јанг бубрега, а његов фармаколошки ефекат је релативно благ. Онда је то добра вест за мушкарце.

2. Цистанцхе је богат алкалоидима,ехинакозид, и кристално неутралне супстанце, као и неке елементе у траговима и витамине, који могу ефикасно да ојачају бубреге, јанг и крв. Добро утиче на симптоме недостатка јанга, а може ефикасно да спречи појаву губитка тежине.

3. Цистанцхе не може лечити само мушкарцеимпотенција, ноћне емисије и преурањене ејакулације, такође може да лечи нередовне менструације код жена, аменореју и друге гинеколошке болести.

Ко још не може да једе цистанче

1. Они са недостатком јин бубрега. Због ефекта Цистанцхеа на загревање и исхрану бубрега-јанга, људи са недостатком јин бубрега ће погоршати симптоме недостатка јин-а, као што су пет узнемирених врућина, немиран сан и лежање, више снова, црвени језик и мање облоге, тако да људи са недостатком јин бубрега не треба јести цистанцхе.

2. Људи са дијарејом због недостатка слезине. Цистанцхе има ефекат влажења сувоће и заглађивања црева. Људи са недостатком слезине и дијарејом могу погоршати симптоме дијареје и лабаве столице. Због тога, људи са недостатком слезине и дијарејом не би требало да једу цистанцхе.

3. Малолетници. Цистанцхе је моћан тоник. Малолетници су још у фази физичког и психичког развоја. Једење цистанцхе не доприноси њиховом сопственом расту и развоју. Стога, ако није неопходно, препоручује се да малолетници не једу цистанче.

Стога, ако треба да окрепите своје бубреге, Цистанцхе је добар додатак, а ако имате других стања, користите га уз савет лекара.