Прелиминарна студија о узорцима тестенине окарактерисаним антиоксидативним једињењима и њиховој биолошкој активности на ћелије бубрега

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Федерико Ди Марко и др

Апстрактан:Тестенина је једна од основних намирницамедитеранскидијета и из тог разлога је изабрано за ову студију да процени њена антиоксидативна својства. Одабране су три врсте тестенина: тестенина од хељде, ражи и тестенина од јаја. Квалитативно-квантитативну анализу карактеризације извршили суХПЛЦ-ДАДда идентификује антиоксидативна једињења. Подаци су показали присуство каротеноида као што је лутеин и полифенола као што је индолсирћетна киселина, (каротеноиди од {{0}}.08 до 0,16 мг/100 г,полифенолаод 3,7 до 7,4 мг/100 г). Да би се проценио ефекат откривених метаболита, спроведено је експериментисање ин витро набубрегамодели ћелија: ХЕК-293 и МДЦК. Стандарди -каротена, индолесирћетне киселине, кафеинске киселине, хидроалкохолних и каротеноидних екстраката из узорака тестенина тестирани су у присуству антиоксидативног агенса да би се утврдиле варијације одрживости. -стандарди каротена и индолесирћетне киселине су испољили заштитни ефекат на ћелије ХЕК-293, док на МДЦК није откривен никакав ефекат. Испитане концентрације су вероватно у опсегу оних које се достижу у телу након конзумирања стандардних оброка од тестенине. Екстракти обогаћени каротеноидима и хидроалкохолни екстракти показали су различите ефекте, посматрајући спасавање хидроалкохолног екстракта тестенине ражи и екстракта тестенине од хељде обогаћеног каротеноидима, док је тестенина од јаја показала блаже ефекте у зависности од дозе претпостављајући прооксидативно понашање при високим концентрацијама. Прелиминарни резултати сугеришу да се понашања могу пратити до читавих фитокомплекса у односу на појединачне молекуле и да су потребна даља истраживања.

Кључне речи:тестенина;медитеранскидијета; полифеноли; каротеноиди; антиоксидативна једињења;бубрегаздравље;ХПЛЦ/ДАДанализе

Цистанцхе тубулоса спречава болест бубрега, кликните овде да бисте добили узорак

1. Представљање

Упркос томе, не постоји јединствена дефиницијамедитеранскидијета—због варијација и прилагођавања у кулинарској традицији не само широм Медитерана већ и широм света [1]—може се сматрати да медитеранска исхрана има неколико компоненти које испуњавају важне критеријуме за здраву исхрану: низак садржај засићених масних киселина, високог садржаја композитних угљених хидрата, дијететских влакана и молекула антиоксиданса и обиља у поврћу.

Тешко је утврдити која храна или активни састојци се у њој налаземедитеранскиисхрана је најодговорнија за здравствене бенефиције; Подаци који се акумулирају сугеришу да његове главне предности леже у комбинацији комплекса и широког спектра различитих хранљивих материја које синергијски и адитивно делују [2].

Последњих година, све већа литература (опсервационе студије и рандомизована контролна испитивања) је показала здравствене користи повезане са медитеранском исхраном, смањујући ризик од развоја више хроничних болести као што су кардиоваскуларне болести [3–5], дијабетес [6–10], рак [11,12], гојазност [13–15] или когнитивно здравље [16–19] и повећање очекиваног животног века [20].

Чини се да су побољшања крвног притиска [21], липидног профила [22,23], инсулинске резистенције [24] и заштите од оксидативног стреса, упале, агрегације тромбоцита и ендотелне дисфункције [25–28] механизми деловања одговорни за благотворно дејство на опште здравље. Сви ови биолошки ефекти изазвани придржавањем медитеранског начина живота могли би бити релевантни не само за горе наведене хроничне болести, већ и за превенцију бубрежног пропадања у општој популацији. Хронична болест бубрега (ХББ) представља глобални јавноздравствени проблем, који погађа преко 750 милиона људи широм света и делује често тихо и неометано захваљујући својој асимптоматској клиничкој презентацији. Различити докази су подвукли јаку везу између медитеранске исхране и очувања бубрега [29].

Узимајући у обзир све горе наведене ефекте као факторе ризика за опадање бубрежне функције, бубрег се може сматрати једним од примарних мета. Недавна мета-анализа кохортних студија показала је да су исхрана заснована на биљци, као што је медитеранска дијета или дијететски приступ за заустављање хипертензије (ДАСХ) дијета, повезана са мањим ризиком од инцидената.ЦКДи албуминурија у општој популацији [30]. Једно од објашњења би могло бити да воће и поврће садрже биоактивна једињења која штите од упале и ендотелне дисфункције која промовишу динамичке промене фракције филтрације, што доводи до прогресивног смањења брзине гломеруларне филтрације, експанзије запремине екстрацелуларне течности, абнормалног баланса јона и хипоксије бубрега, на крају. што доводи до губитка функције бубрега [31–33]. Штавише, повећање потрошње поврћа, воћа, житарица и махунарки могло је довести до смањења потрошње животињских протеина што је позитивно утицало на ацидо-базну равнотежу и гломеруларну хемодинамикубубрега, штитећи га од гломеруларне склерозе и губитка функције [34–37].

Упркос томе, постоји неколико студија са супротним подацима о утицају исхране са високим садржајем протеина на смањење бубрежне функције у општој популацији [38–41], све већи докази сугеришу да извор протеина игра важну улогу у очувању функције бубрега и да прелазак са животињског на биљни извор протеина може бити од користи [42,43].

Тестенина је једна од намирница које се највише конзумирају на свету и једна је од основних намирница у медитеранској исхрани. Традиционално, Италија је главни произвођач и лидер у потрошњи тестенина, чак и ако се тестенина конзумира широм света због ниске цене, укуса и дужег рока трајања од осталих пекарских производа [44]. Тестенина је добар извор угљених хидрата и енергије (100 г куване тестенине садржи око 31 г угљених хидрата и око 158 кцал), али обично има мало липида, протеина, фосфора и калијума који су хранљиве компоненте ограничене у већини реналних дијета за болест бубрега (доступно на мрежи на хттпс://фдц.нал.усда.гов, приступљено 1. децембра 2020.). Природно обогаћена пшенична тестенина, која представља већину комерцијално доступних тестенина, такође нуди добре нивое тиамина, рибофлавина, ниацина, фолата, гвожђа и селена, као и полифенола. Штавише, тестенина се увек конзумира у комбинацији са другим намирницама које се могу сматрати јачим извором полифенола, као што су маслиново уље и поврће. Тестенина се најчешће производи са гризом од дурум пшенице, због својих одличних реолошких својстава, врхунске боје тестенине, квалитета кувања и прихватљивости код потрошача, али у последње време тестенина се може производити и од других житарица као што су пиринач, хељда, раж, спелта.

Последњих година потрошачи су постали свеснији да уравнотежена исхрана, као што је медитеранска, може позитивно утицати на здравље, због чега прехрамбена индустрија настоји да одговори овим захтевима производњом квалитетних и функционалних намирница и прехрамбених састојака.

Упркос томе што је обогаћена храна произведена у здраве сврхе, људи би се могли навести да је преузму уместо уравнотежене исхране. Ово је толико важна тема да подстакне ФДА да објави ад хоц документ под насловом „Политика фортификације ФДА“ како би с једне стране дао одговор прехрамбеној индустрији, а са друге академском свету [44].

Уравнотежена, адекватна и разноврсна исхрана је важан корак ка срећном и здравом начину живота без ризика од преоптерећења неким додатним компонентама садржаним у обогаћеној храни. Управо из тог разлога поново су откривене нетрадиционалне житарице и псеудожитарице које су отвориле пут њиховој употреби као функционалним састојцима хране јер поседују неке нутритивне и функционалне квалитете којих нема или недостају традиционалним житарицама. Хељда и раж су богати извори фитокемикалија као што су полифеноли, једињења која су у снажној корелацији са антиоксидативним активностима [45,46].

Покренут у марту 2005. године, пројекат МОЛИ-САНИ укључио је око 25,000 грађана који живе у Молизеу (Италија), да би проценили еколошке и генетске факторе који леже у основи кардиоваскуларних болести, тумора и неуродегенеративних болести. Према студији пројекта МОЛИ-САНИ, унос тестенина је повезан са нижим БМИ и нижим нивоом централне гојазности. Многе студије су потврдиле да висококалоричне дијете доводе до повећања телесне тежине, а не дијета која укључује угљене хидрате. У ствари, ако је део тестенине исправан и сос није превише калоричан, тањир тестенине може имати калоријски садржај који поштује дневне енергетске потребе [47]. Тестенина се веома цени јер су њене карактеристике повезане не само са контролом телесне тежине, већ и са неколико позитивних здравствених својстава [48]. Насумична, контролисана студија спроведена на здравим субјектима показала је да производи на бази ражи побољшавају регулацију гликемије, повећавају цревне хормоне укључене у регулацију апетита и метаболизма. Раж смањује нивое апетита након оброка тако што смањује жељу за јелом у наредним оброцима, повећава осећај ситости и смањује глад повећањем хормона ситости ГЛП-1 (пептид сличан глукагону-1) и пептида ИИ (ПИИ). Нижи постпрандијални одговор глукозе примећен је код групе људи који су конзумирали храну на бази ражи у поређењу са групом испитаника који су конзумирали рафинисану пшеницу. Ово се дешава зато што је раж житарица са ниским гликемијским индексом која се такође може користити код пацијената са дијабетесом [49]. Раж може побољшати липидни профил у плазми, у ствари, унос целе ражи је обрнуто повезан са концентрацијом ЛДЛ холестерола, односом ЛДЛ/ХДЛ и концентрацијом триглицерида. Овај ефекат је последица присуства влакана и -глукана [50].

Тестенина је добро позната као извор угљених хидрата, али може да садржи и мања једињења, као што су каротеноиди [51], посебно лутеин, и друге врсте антиоксиданса као што су полифеноли. Ови биоактивни молекули могу бити обогаћени различитим врстама тестенина, у зависности од сировина. На пример, садржај каротеноида у дурум пшеници је већи него у хлебној пшеници [52], а ниво антиоксиданата се може повећати уградњом фракције мекиња и целог зрна дурум пшенице у производе од тестенине [53]. Хељда је значајан извор фенолних једињења, витамина и есенцијалних аминокиселина [54], док додавање јаја у припрему тестенине преноси каротеноиде и лутеин. Каротеноиди учествују у превентивном деловању, посебно код синдрома инфламације и њихова улога је због њихових антиоксидативних својстава [55] против слободних радикала и синглетног кисеоника [56]. Тестенина садржи различите врсте молекула антиоксиданса и за честе потрошаче велика потрошња се може сматрати важним извором таквих здравих једињења.

Овде показујемо да различите врсте тестенина, односно тестенине од хељде, ражи и јаја, садрже различите количине антиоксидативних једињења, која имају улогу да побољшају виталност бубрежних ћелија у стабилном стању или након индукције оксидативног стреса.

2. Материјал и методе

2.1. Узорци

Анализирана су и испитана три узорка куване тестенине: један узорак тестенине од хељде од интегралног брашна (1), један узорак тестенине од интегралног брашна од ражи (2) и један узорак тестенине од јаја од дл брашна од дурум пшенице (3).

2.2. Припрема узорака тестенина

Укупно 50 г тестенине од хељде или интегралне ражене тестенине кувано је у 500 мЛ воде 7 минута; 50 г тестенине од јаја од брашна од дурум пшенице кувано је у 500 мЛ воде 1 мин, према наводима произвођача.

Да би се добили екстракти обогаћени каротеноидима, 10 г куване тестенине растворено је у 100 мЛ ацетона, хладно соникирано 30 мин. Узорак је центрифугиран 5 мин на 5000 рпм, супернатант је суво упарен на ротационом испаривачу, а остатак је растворен у ацетону или ДМСО у зависности од низводне анализе. Да би се добили екстракти обогаћени полифенолима, 10 г сваког узорка куване тестенине растворено је у 50 мЛ 70:30 ЕтОХ/Х2О на пХ 3,2. Узорци су мућкани 24 х, центрифугирани 5 мин на 1400 рпм. Узорак је центрифугиран 5 минута на 5000 рпм и супернатант је сакупљен и анализиран у ХПЛЦ-ДАД, док је аликвот испарен на суво, а остатак растворен у ДМСО за третман ћелија.

2.3. ХПЛЦ-ДА-МС анализа

Квалитативне квантитативне анализе каротеноида и полифенола су спроведене коришћењем течне хроматографије ХП 1100 опремљене ДАД детектором и којом управља ХП 9000 радна станица (Агилент Тецхнологиес, ​​Пало Алто, Калифорнија, САД) и повезана са спектрометром за нагомилавање са АПИ/електроспреј интерфејсом (Агилент Тецхнологиес). Услови рада масеног спектрометра били су следећи: температура гаса, 350 ◦Ц; проток азота, 11,0 Л/мин; притисак небулизатора, 40 пси; квадруполна температура, 100 ◦Ц; и капиларни напон 4000 В. Масени спектрометар је радио у позитивном и негативном режиму на 80–180 еВ.

Једињења су раздвојена помоћу 250 × 4,6 мм ид, 5 µм ЛУНА Ц18 колоне (Пхеноменек, Торранце, Калифорнија, САД). УВ/Вис спектри су снимљени у опсегу 190–600 нм, а хроматограми су добијени на 250, 280, 330, 350 и 450 нм. Узорци су анализирани градијентним елуирањем при брзини од 0,8 мЛ/мин. Мобилна фаза за каротеноиде је био вишестепени систем линеарног градијента растварача (растварач А: ацетон, растварач Б: Х2О, пХ 3,2 мрављом киселином), почевши од 80 процената ацетона до 100 процената за 30 мин. полифеноли су елуирани коришћењем следећег градијента: од 90 процената Х2О (подешен на пХ 3,2 помоћу мравље киселине) до 100 процената ЦХ3ЦН за 40 мин. Сви коришћени растварачи били су чистоће ХПЛЦ (БДХЛаборатори Супплиес, Пооле, УК).

2.4. Квантитативна анализа

Квантификацију појединачних полифенолних једињења директно је извршио ХПЛЦ-ДАД користећи регресиону криву у пет тачака (Р2 већи од или једнак 0.998) у опсегу 0–30 µг на основу аутентични стандарди. Конкретно, флавоноли су одређени на 350 забавног кверцетин 3-О-глукозида као референтног једињења, док су деривати кафеинске киселине одређени на 330 нм коришћењем хлорогенске киселине као референтног једињења и деривата индола сирћетне киселине на 280 нм коришћењем 3 индолсирћетне киселине (Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД). Каротеноиди су одређени на 450 нм коришћењем бета-каротена као референтног једињења (Ектрасинтхесе, Лионе, Франциа). У свим случајевима, стварне концентрације деривата су израчунате након примене корекција за разлике у молекуларној тежини.

2.5. Укупан садржај фенола

Укупни садржај фенола је одређен методом Фолин–Циоцалтеу, коју су описали Синглетон ет ал. [57] и мало модификовано према Деванто ет ал. [58]. У 125 µЛ одговарајуће разблаженог екстракта узорка додато је 0.5 мЛ дејонизоване воде и 125 µЛ Фолин–Циоцалтеу реагенса. Смеша је држана 6 мин, а затим је додато 1,25 мЛ 7% воденог раствора На2Ц03. Коначна запремина је подешена на 3 мл са водом. После 90 минута, мерена је апсорпција на 760 нм у односу на воду као бланко. Количина укупних фенола је изражена као еквиваленти галне киселине (ГАЕ, мг галне киселине/100 г узорка) кроз калибрациону криву галне киселине. Калибрациона крива се кретала од 20 до 500 µг/мЛ (Р2=0.9969) [57,58].

2.6. Ћелијска култура

Ћелије хуманог ембрионалног бубрега 293 (ХЕК-293) и ћелије Мадин-Дарби псећег бубрега (МДЦК) узгајане су у ДМЕМ са додатком ГлутаМАКС-а, 10 процената (в/в), феталног говеђег серума, 100 У/мЛ пеницилина и 100 µг /мЛ стрептомицина на 37 ◦Ц са 5 процената ЦО2.

2.7. МТТ Ассаи

5{{10}}00 ћелија/бунарић МДЦК и ХЕК-293 ћелија је засејано у плоче са 96 бунарчића и остављено да се причврсти 24 х. За студије одрживости, ћелије су инкубиране 24 х до 72 х са бета каротеном, индол-3-сирћетном киселином, кафеинском киселином (у ДМСО) и екстрактима тестенине сами или у присуству магнезијум моноперокси фталата (ММПП, Сигма-Алдрицх , Сент Луис, МО, САД). За необрађене узорке коришћен је ДМСО у медијуму у концентрацијама једнаким онима које су коришћене за тестирана једињења. Испитане концентрације за стандарде биле су у распону од 2 пМ до 10 µМ, док су за ММПП од 0,001 до 0,05 мг/мЛ. Измерена је виталност ћелије 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолијум бромид (МТТ, Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО, САД). Плоче су инкубиране на 37 ◦Ц током 1 х, а затим је Формазан произведен редукцијом МТТ растворен у ДМСО. Апсорбанца је одређена на читачу микроплоча (Митхрас ЛБ 940-Бертхолд) на 570 нм. Проценат виталности ћелија је израчунат коришћењем односа АбсТЕСТ/АбсЦТРЛ.

2.8. Статистичка анализа

Сваки експеримент је изведен у четири примерка и поновљен најмање три пута. Разлике у процентима одрживости су процењене коришћењем упареног Студентовог т-теста и двосмерне АНОВА праћене постхоц тестом са Холмовом корекцијом за вишеструка поређења концентрација метаболита (п < 0.05).="" резултати="" су="" изражени="" као="" средња="" вредност="" ±="" стандардна="" грешка,="" а="" анализа="" је="" извршена="" у="" окружењу="" р-студио="" [59]="" за="" р="" верзију="" 3.6.3="" [60]="" коришћењем="" пакета="" „тидиверсе“="">

3. Резултати и дискусија

3.1. Одређивање хемијског квалитета узорака тестенине

Информације о нутритивним вредностима хране омогућавају информисање избора хране и исхране. Тестенина се традиционално припрема од гриза, али чак и са другим житарицама, све садрже скроб као главни састојак, затим протеине, масти, витамине, минерале и биоактивна једињења [62]. У табели С1 су наведени подаци о исхрани.

Да бисмо упоредили нутритивне вредности неколико врста тестенина обогаћених биоактивним једињењима због различитих извора житарица или суплементације специфичних састојака, анализирали смо тестенину од хељде, тестенине од ражи и тестенине од јаја. Да би се добили екстракти обогаћени различитим подкласама једињења присутних у узорцима тестенине, спроведене су и анализиране и хидроалкохолне и ацетонске екстракције. Појединачни полифеноли су условно идентификовани коришћењем података из ХПЛЦ-ДАД-МС анализе поређењем и комбинацијом њихових времена задржавања и масене спектрометрије и УВ спектра (видети слике С1–С5 за исти пример МС спектра) и поређењем резултата са стандардима (каемпферол, кверцетин, рутин и ферулинска киселина) и претходни библиографски радови. Конкретно, у хидроалкохолним екстрактима идентификовани су флавоноиди, деривати кафе и индолсирћетне киселине (Табела 1): дериват индолсирћетне киселине је главно једињење као што је раније описано чак и за гриз. [63]. Узимајући у обзир релативне саставе, тестенина од хељде је показала више нивое флавоноида, посебно деривати кверцетина су главни флавоноли као што је раније објављено у хељди [64,65], и занемарљиво присуство деривата кафеинске киселине; ражена тестенина је показала већи ниво деривата кофеинске киселине, посебно ферулинске киселине [66] и низак садржај флавоноида; Тестенина од јаја је имала само ниску концентрацију флавоноида (дериват апигенина [67]) и без присуства деривата кофеинске киселине.

Као пример, хроматографски профили узорака куване тестенине, снимљени на 350 нм, приказани су на слици 1. Слика открива квалитативни састав анализираних узорака.

Лутеин је био главни каротеноид идентификован у екстрактима ацетона, са сличним релативним садржајем у односу на укупне врсте каротеноида, као што је приказано у табели 2, у складу са претходним студијама [68]. Каротеноиди нису откривени у тестенини од ражи.

Присуство антиоксидативних секундарних метаболита је такође процењено у узорцима тестенине (Табела 3). Процењен је укупан антиоксидативни капацитет биокомпоненти, вероватно због активности фенола/полифенола и изведен је закључак о броју таквих молекула.

3.2. Ефекат индол-3-сирћетне киселине,8- Каротен и кафеинска киселина на виталност ћелија

Медитеранска исхрана је препозната као извор антиоксидативних молекула, који штите организам од оксидативног стреса и подржавају здрав статус [2]. Стога смо се питали да ли биомолекули откривени у нашим узорцима тестенине могу утицати на одрживост ћелија и у којој мери. Користили смо ХЕК-293 и МДЦК здраве ћелије бубрега да одредимо активност стандардних једињења индолсирћетне киселине, -каротена и кофеинске киселине. Бубрези су посебно подложни оксидативном стресу и акумулација слободних радикала доводи до оштећења функције бубрега [69]. Ћелије су инкубиране са скаларном концентрацијом стандардних једињења, а виталност ћелије је мерена у различитим временским тачкама (Слика 3 и Слика С6).

Утврђено је да не испољавају никакав токсични ефекат на ХЕК{{0}} ћелије за све тестиране концентрације у време инкубације. Само -каротен је смањио виталност ћелија на начин у облику слова У на ХЕК-293 ћелијама и на дозно-зависан начин у МДЦК ћелијама (Слика 3). Занимљиво је да су концентрације које се вероватно достигну у телу након конзумирања стандардног оброка од тестенина (обично 80 гр) у опсегу најнижих тестираних (2 × 10_5 –2 × 10_4 уМ, [70 ,71]), што је обезбедило слабо побољшање виталности обе ћелијске линије. С друге стране, при вишим концентрацијама изнад 0,2 уМ, које се могу добити само фармаколошки, кафеинска киселина је показала значајно побољшање виталности ћелије, док су индолсирћетна киселина и -каротен показали упоредиве ефекте уз повећање концентрације (2–20 уМ ) у ХЕК-293 ћелијама током времена.

3.3. Ефекат индол-3-сирћетне киселине, каротена и кафеинске киселине на ћелије третиране ММПП

Затим смо се запитали да ли индолосирћетна киселина, -каротен и кафеинска киселина могу да се супротставе стресу изазваном оксидационим агенсом ММПП. Прво смо тестирали ефекат ММПП тако што смо ХЕК-293 и МДЦК ћелије изложили серијским разблажењима (0.005–0,05 мг/мЛ) лека и одређена је виталност ћелија. Примећено је смањење зависно од дозе након третмана ММПП и ИЦ50 је био упоредив у две тестиране ћелијске линије. Након инкубације са 20–25 µг/мЛ ММПП, виталност ћелија је значајно смањена на око 50–60 процената (Слика 4), а полумаксимална инхибиторна концентрација (ИЦ50) је израчуната на 26 µг/мЛ за ХЕК{{16} } и 22 µг/мЛ за МДЦК.

Затим смо тестирали заштитну активност наших антиоксидативних молекула на ћелијама третираним ММПП, тако што смо допунили ћелијски медијум са 2 × 10_5 нМ индолосирћетном, -каротеном или кафеинском киселином. Благо позитиван ефекат на виталност ћелија и ХЕК-293 и МДЦК је потврђен применом стандарда као таквих у дози која је вероватно добијена из дела тестенине (Слика 5).

Као што се очекивало, ММПП је смањио виталност ћелије на 60–65 процената; третман са индолесирћетном киселином или каротеном супротставља ефекат ММПП и спашава виталност ћелије за 30 процента (п < 0,001)="" и="" 27="" процената="" (п=""> 0,01) на ХЕК-293 ћелијама, док кафеинска киселина није имала никакав значајан ефекат. У присуству оксидативног агенса, бета-каротен и индолсирћетна киселина су показали заштитни ефекат на ћелије у ниској концентрацији, док кофеинска киселина није супротставила оксидативни стрес у концентрацији која је потребна за побољшање виталности ћелије. Ови позитивни ефекти су вероватно последица антиоксидативних својстава индолсирћетне киселине и каротеноида који могу значајно да уравнотеже цитотоксичност посредовану ММПП у дози коришћеној у овом експерименталном стању. Без обзира на то, није примећено значајно спасавање на МДЦК ћелијама третираним ММПП, што сугерише да, чак и ако стандарди сами по себи показују значајно позитиван ефекат на виталност ћелија, они нису довољни да се изборе са ММПП изазваним оксидативним стресом. Чини се да ембрионалне ХЕК 293 ћелије брже организују одбрамбену линију од стреса него одрасли МДЦК, вероватно због додатних ћелијских редокс хомеостазних система.

3.4. Утицај фракције обогаћене каротеноидима из тестенине на цитотоксичност изазвану ММПП

Да би се проценили ефекти фракција обогаћених каротеноидима добијених екстракцијом ацетоном тестенине од хељде и тестенине од јаја на ћелије бубрега у присуству оксидативног стреса, ХЕК-293 ћелије су инкубиране са различитим концентрацијама екстраката рангираних од 2 × { {3}} уМ до 2 × 10_3 уМ у присуству ММПП током 72 х (слика 6 и табела С2). Коришћена концентрација се односи на концентрацију -каротена откривену у екстракту (табела2). Садржај лутеина се кретао од 1,5 × 10_6 уМ до 1,5 × 10_3 уМ у тестенини од хељде и од 1,34 × 10_6 уМ до 1,34 × 10_3 уМ у тестенини са јајима.

У оба екстракта ацетона, присуство природних фитокомплекса, показало је различите ефекте у односу на појединачни стандард, што је резултирало већом активношћу при нижим концентрацијама. Како се концентрација екстраката из тестенине јаја повећава, примећено је смањење виталности ћелија. Најнижа концентрација каротеноидних екстраката (2 × 10-6 µМ) изазвала је скроман позитиван ефекат сам или у присуству ММПП на ХЕК-293 ћелије. Екстракт тестенине од хељде је створио побољшање виталности ћелија као екстракт сам, али и у присуству МПП у распону од 32 ± 5 процената при најнижој концентрацији до 21 ± 9 процената за 2 × 10-4 µМ.

Активност ацетонских екстраката је такође процењена на МДЦК ћелијама у присуству или одсуству ММПП и упоређена са оном добијеном у ХЕК-293 ћелијама (Слика 7 и Табела С2).

Екстракти обогаћени каротеноидима дали су укупан ефекат про-вијабилности при свим испитиваним концентрацијама за обе врсте тестенина. Што се тиче ХЕК-293 хељде, екстракт тестенине је дао бољи спас након третмана ММПП за све дозе у распону од 50 ± 7 процената до 82 ± 5 процената у поређењу са ХЕК-239 ћелијама; екстракти из тестенине од јаја су имали малу помоћ само при најнижој концентрацији каротеноида 2 × 10_6 уМ у присуству ММПП, што сугерише да специфична композиција екстраката игра кључну улогу у одговору. Дакле, тестенина од хељде показала је већи капацитет спасавања на виталност ћелија у односу на тестенину од јаја, а пошто су експерименти изведени коришћењем исте количине -каротена, разлика би могла бити последица присуства мањих једињења, као што су једињења флавоноида, већа. у првој.

Врсте каротеноида су укључене у различите хемијске реакције које имају двоструку природу оксиданса и антиоксиданса у зависности од биолошког контекста и њихових концентрација: ова висока реактивност је последица присуства коњугованих двоструких веза [72]. Њихова антиоксидативна улога била је повезана са способношћу делокализације електрона које дају оксидативне врсте и радикали [73,74]. У присуству високих оксидативних услова, њихова активност се може претворити у прооксидант [75]. У нашим случајевима, овај налаз је примећен у тестенини од јаја за ХЕК-293 (и сам и у присуству ММПП) и МДЦК ћелијама у присуству ММПП, где су различите дозе екстракта ацетона произвеле супротне ефекте.

3.5. Ефекат хидроалкохолног екстракта на цитотоксичност изазвану ММПП

Након тога, проценили смо ефекте хидроалкохолних екстраката из тестенине од хељде, тестенине од ражи и тестенине од јаја на бубрежне ћелије тестирањем различитих концентрација у распону од 5 × 10_5 уМ до 5 × 10_1 уМ са или без ММПП (Слика 8 и Табела С3). Коришћена концентрација се односи на концентрацију укупног садржаја фенола откривену у екстракту (Табела 3). Према садржају узорака тестенине наведених у табели 1, за тестенину од хељде концентрација индолсирћетне киселине је рангирана од 1,85 × 10_5 уМ до 1,85 × 10_1 уМ, за деривате кафеинске киселине је рангирана од 3,5 × 10_6 уМ до 3,5 × 10_2 уМ и за садржај флавоноида био је рангиран од 2,8 × 10_5 уМ до 2,8 × 10_1 уМ; за тестенину од ражи, концентрација индолсирћетне киселине је била од 2,2 × 10_5 уМ до 2,2 × 10_1 уМ, за деривате кафеинске киселине од 1,95 × 10_5 уМ до 1,95 × {{37} } уМ и за врсте флавоноида од 8,5 × 10_6 уМ до 8,5 × 10_2 уМ; за тестенину од јаја, концентрација индолсирћетне киселине је била од 4,25 × 10_5 уМ до 4,25 × 10_1 уМ, за врсте флавоноида од 7,5 × 10_6 уМ до 1,85 × 10_2 уМ док нису били присутни деривати кафеинске киселине.

Хидроалкохолни екстракт из тестенине од јаја није имао никакав значајан утицај на виталност ХЕК- 293 независно од присуства оксидативног стреса. Екстракт тестенине од хељде показао је побољшање виталности ћелија након третмана ММПП само у највишој концентрацији (28 ± 6 процената). Сам екстракт ражене тестенине показао је опште побољшање виталности ћелија за све дозе у распону од 14 ± 7 процената до 18 ± 1 процената, као иу присуству ММПП од 27 ± 3 процента до 13 ± 3 процента. Пхито комплекс представљен у екстрактима показао је да је био активнији од појединачних стандарда, утичући на виталност ћелија при нижим концентрацијама у поређењу са последњим. Ови резултати сугеришу да се у хидроалкохолним екстрактима главна улога у спасавању може приписати присуству деривата кафеинске киселине, примећујући већи спас за ражену тестенину и мањи/занемарљив ефекат за прошлост јаја, у којој се они не могу детектовати.

Хидроалкохолни екстракт је затим тестиран на МДЦК ћелијама у истим условима као и раније и процењена је виталност ћелије (Слика 9 и Табела С4).

Хидроалкохолни екстракт из тестенине од хељде и јаја показао је контрастне ефекте на виталност ћелија: први је повећава, док је други смањује; за оба није откривен никакав ефекат на третман ММПП. Екстракт из тестенине од ражи није показао никакав значајан ефекат на виталност ћелија, али открива снажан заштитни ефекат против оксидативног стреса посредованог ММПП у свим концентрацијама у распону од 50 ± 7 процената до 61 ± 21 процената. У стандардним условима.

У одсуству ММПП, чини се да висок садржај индолсирћетне киселине у екстракту тестенине од јаја има токсични ефекат на виталност ћелија. Упоређујући два модела ћелија, приметили смо различита понашања у односу на тестенину од хељде и ражи у одсуству ММПП. Конкретно, ХЕК-293 је показао повећање одрживости код овог другог, док је МДЦК код првог. Разлике се односе на деловање фото комплекса који се одликују већим садржајем флавоноида за тестенину од хељде. Спашавање виталности ћелија међу узорцима, уочено за обе ћелијске линије, одговара повећаном садржају деривата кафеинске киселине у тестенини од ражи.

Проучавање интеракције између полифенола који садрже фитокомплексе и бубрежних ћелија могло би да помогне у истраживању познатих важних ефеката на физиологију бубрега које та једињења врше [76], фокусирајући се на један од могућих носача, тестенину, која се обично повезује са здравом исхраном за бубреге. Као опште правило, метаболити полифенола имају полувреме елиминације у плазми од неколико сати и брзо се елиминишу преко бубрега и јетре: уринарним и жучним путем. Укупна количина метаболита полифенола излучених у урину је у корелацији не само са њиховом максималном концентрацијом у плазми, већ и са њиховом способношћу да се излуче путем жучи, а не уринарног тракта. На пример, излучивање кверцетина и његових гликозида урином чини 0.3–1,4 процената унесене дозе [77]; кофеинска киселина и ферулна киселина чине 5,9 одсто, односно 27 одсто. Стога, полифеноли добијени од тестенина могу имати позитиван утицај на бубрежне ћелије у зависности од тога

количина и метаболизам. Потребне су даље студије да би се боље дефинисао њихов допринос здрављу бубрега.

Додатни материјали:Следеће је доступно на мрежи на хттпс://ввв.мдпи.цом/артицле/ 10.3390/ну13041131/с1, Табела С1: Табела исхране. Табела С2—Детекција варијације виталности ћелија ХЕК-293 и МДЦК инкубираних са све већом количином фракције обогаћене каротеноидима из тестенине од хељде и тестенине од јаја на медијуму и ММПП за 72 (ХЕК-293) и 24 ( МДЦК) сати. * п < {{20}}.5,="" **="" п="">< 0.01,="" ***="" п="">< {{30}}.001="" .="" табела="" с3—детекција="" варијације="" вијабилитета="" ћелија="" хек-293="" инкубиране="" са="" повећаном="" количином="" хидроалкохолног="" екстракта="" из="" тестенине="" од="" хељде,="" тестенине="" од="" ражи="" и="" тестенине="" од="" јаја="" на="" медијуму="" и="" ммпп="" током="" 72="" х.="" *="" п="">< 0,5,="" **="" п="">< 0,01,="" ***="" п="">< 0,001.="" табела="" с4—детекција="" варијације="" вијабилитета="" ћелија="" мдцк="" инкубираних="" са="" све="" већом="" количином="" хидроалкохолног="" екстракта="" из="" тестенине="" од="" хељде,="" тестенине="" од="" ражи="" и="" тестенине="" од="" јаја="" на="" медијуму="" и="" ммпп="" током="" 24="" х.="" *="" п="">< 0,5,="" **="" п="">< 0,01,="" ***="" п="">< 0,001.="" слика="" с1:="" мс="" спектри="" кемпферола="" у="" хидроалкохолном="" екстракту="" тестенине="" куване="" хељде.="" слика="" с2:="" мс="" спектри="" кверцетина="" у="" хидроалкохолном="" екстракту="" тестенине="" куване="" хељде.="" слика="" с3:="" мс="" спектри="" рутина="" у="" хидроалкохолном="" екстракту="" куване="" тестенине.="" слика="" с4:="" мс="" спектри="" ферулне="" киселине="" један="" у="" хидроалкохолном="" екстракту="" тестенине="" куване="" ражи.="" слика="" с5:="" мс="" спектри="" апигенин="" гликозида="" у="" хидроалкохолном="" екстракту="" тестенине="" куване="" у="" јајима.="" слика="" с6:="" вијабилност="" ћелије="" за="" детекцију="" хек-293="" инкубиране="" са="" све="" већом="" количином="" индолсирћетне="" киселине,="" -каротена="" и="" кафеинске="" киселине="" током="" 24="" (а)="" и="" 48="" (б)="" сати="" пријављене="" вредности="" одговарају="" средњој="" вредности="" виталности="" ћелије="" са="" стандардном="" грешком="" преко="" три="" биолошке="" реплике.="" проценат="" виталности="" ћелија="" је="" израчунат="" коришћењем="" односа="">

Referенцес

1. Лацатус,у, ЦМ; Григореску, ЕД; Флориа, М.; Онофриеску, А.; Михаи, БМ Медитеранска дијета: Од културе исхране вођене околином до медицинског рецепта у настајању. Инт. Ј. Енвирон. Рес. Јавно здравље 2019, 16, 942.

2. Јацобс, ДР; Гросс, МД; Тапселл, ЛЦ Синергија хране: Оперативни концепт за разумевање исхране. Сам. Ј. Цлин. Нутр.2009, 89, 1543S.

3. Де Лоргерил, М.; Сален, П.; Мартин, Ј.-Л.; Моњауд, И.; Делаие, Ј.; Мамелле, Н. Медитеранска дијета, традиционални фактори ризика и стопа кардиоваскуларних компликација након инфаркта миокарда. Тираж 1999, 99, 779–785.

4. Псалтопоулоу, Т.; Наска, А.; Орфанос, П.; Трицхопоулос, Д.; Моунтокалакис, Т.; Трицхопоулоу, А. Маслиново уље, медитеранска дијета и артеријски крвни притисак: студија грчког европског проспективног истраживања рака и исхране (ЕПИЦ). Сам. Ј. Цлин. Нутр. 2004, 80, 1012–1018.

5. Еструх, Р.; Рос, Е.; Салас-Салвад6, Ј.; Цовас, М.-И.; Цорелла, Д.; Ар6с, Ф.; Г6мез-Грација, Е.; Руиз-Гутијерез, В.; Фиол, М.; Лапетра, Ј.; ет ал. Примарна превенција кардиоваскуларних болести медитеранском исхраном. З. Гефасседизин 2013, 10, 28.

6. Ууситупа, М.; Кхан, ТА; Вигуилиоук, Е.; Кахлеова, Х.; Ривеллесе, АА; Хермансен, К.; Пфеиффер, А.; Тханопоулоу, А.; Салас- Салвад6, Ј.; Сцхваб, У.; ет ал. Превенција дијабетеса типа 2 променама начина живота: систематски преглед и мета-анализа. Нутриентс 2019, 11, 2611.

7. Јаннасцх, Ф.; Крогер, Ј.; Сцхулзе, МБ Обрасци исхране и дијабетес типа 2: систематски преглед литературе и мета-анализа проспективних студија. Ј. Нутр. 2017, 147, 1174–1182.

8. Еспозито, К.; Цхиодини, П.; Маиорино, МИ; Белластелла, Г.; Панагиотакос, Д.; Гиуглиано, Д. Која дијета за превенцију дијабетеса типа 2? Мета-анализа проспективних студија. Ендокрина 2014, 47, 107–116.

9. Хуо, Р.; Ду, Т.; Ксу, И.; Ксу, В.; Цхен, Кс.; Сун, К.; Иу, Кс. Ефекти дијете у медитеранском стилу на контролу гликемије, губитак тежине и кардиоваскуларне факторе ризика код особа са дијабетесом типа 2: мета-анализа. ЕУР. Ј. Цлин. Нутр. 2015, 69, 1200–1208.

10. Мартин-Пелдез, С.; Фито, М.; Цастанер, О. Медитеранска дијета ефекти на превенцију дијабетеса типа 2, прогресију болести и повезане механизме. Преглед. Нутриентс 2020, 12, 2236.

11. Милајерди, А.; Намази, Н.; Ларијани, Б.; Азадбакхт, Л. Удружење индекса квалитета исхране и морталитета од рака: систематски преглед и мета-анализа кохортних студија. Нутр. Рак 2018, 70, 1091–1105.

12. Сцхвингсхацкл, Л.; Сцхведхелм, Ц.; Гилберт, Ц.; Хоффманн, Г. Приврженост медитеранској исхрани и ризик од рака: ажурирани систематски преглед и мета-анализа. Нутриентс 2017, 9, 1063.

13. Саи6н-Ореа, Ц.; Разкуин, Ц.; Булл6, М.; Цорелла, Д.; Фит6, М.; Ромагуера, Д.; Виокуе, Ј.; Алонсо-Г6мез, АМ; Варнберг, Ј.; Мартинез, ЈА; ет ал. Ефекат нутритивне и бихејвиоралне интервенције на придржавање медитеранске дијете са смањеном енергијом међу пацијентима са метаболичким синдромом: привремена анализа ПРЕДИМЕД-Плус рандомизованог клиничког испитивања. ЈАМА Ј. Ам. Мед. доц. 2019, 322, 1486–1499.

14. Бајерска, Ј.; Цхмурзинска, А.; Музсик, А.; Крзиз˙ ановска, П.; Ма˛дри, Е.; Малиновска, АМ; Валковиак, Ј. Губитак тежине и метаболички ефекти на здравље од медитеранске и централноевропске дијете са ограниченом енергијом код жена у постменопаузи: рандомизовано контролисано испитивање. Сци. Реп. 2018, 8, 11170.

15. Еструх, Р.; Мартинез-Гонзалес, МА; Цорелла, Д.; Салас-Салвад6, Ј.; Фит6, М.; Цхива-Бланцх, Г.; Фиол, М.; Г6мез-Грација, Е.; Ар6с, Ф.; Лапетра, Ј.; ет ал. Утицај медитеранске исхране са високим садржајем масти на телесну тежину и обим струка: Анализа унапред одређених секундарних исхода ПРЕДИМЕД рандомизоване контролисане студије. Ланцет Диабетес Ендоцринол. 2019, 7, е6–е17.

16. Молендијк, М.; Молеро, П.; Ортуно Сднцхез-Педрено, Ф.; Ван дер Доес, В.; Ангел Мартинез-Гонзалез, М. Квалитет исхране и ризик од депресије: систематски преглед и мета-анализа проспективних студија о дози и одговору. Ј. Аффецт. Дисорд. 2018, 226, 346–354.

17. Ву, Л.; Сун, Д. Придржавање медитеранске дијете и ризик од развоја когнитивних поремећаја: ажуриран систематски преглед и мета-анализа проспективних кохортних студија. Сци. Реп. 2017, 7, 1–9.

18. Лоугхреи, ДГ; Лавеццхиа, С.; Бреннан, С.; Лавлор, БА; Келли, МЕ Утицај медитеранске дијете на когнитивно функционисање здравих старијих одраслих: систематски преглед и мета-анализа. Адв. Нутр. 2017, 8, 571–586.

19. Арнолд, СЕ; Арванитакис, З.; Мацаулеи-Рамбацх, СЛ; Коениг, АМ; Ванг, ХИ; Ахима, РС; Црафт, С.; Ганди, С.; Буеттнер, Ц.; Стоецкел, ЛЕ; ет а Инзулинска резистенција мозга код дијабетеса типа 2 и Алцхајмерове болести: концепти и загонетке. Нат. Рев. Неурол. 2018, 14, 168–181.

20. Трицхопоулоу, А.; Василопоулоу, Е. Медитеранска дијета и дуговечност. Бр. Ј. Нутр. 2020, 84, С205–С209.