Урођени имунитет и старење код дуговечних слатководних корњача (Киностернон Фавесценс: Киностернидае)

Апстрактан

Позадина

Прогресивна дерегулација имуног система са годинама, названа имуносенесценција, добро је проучавана у системима сисара, али су студије о имунолошкој функцији дуговечних, дивљих популација несисара ретке. У овој студији користимо 38-годишњу студију о поновном хватању ознака да квантификујемо односе између старости, пола, преживљавања, репродуктивног учинка и урођеног имунолошког система код дуговечног рептила, корњача жутог блата (Киностернон фавесценс;Тестудинес; Киностернидае).

бенефиције додатка цистанцхе-повећавају имунитет

Методе

Проценили смо стопе преживљавања и морталитета специфичне за узраст према полу на основу података о поновном хватању за 1530 одраслих жена и 860 одраслих мушкараца преко 38 година хватања. Анализирали смо бактерицидну способност (БЦ) и два имунска одговора на страна црвена крвна зрнца – хемаглутинацију посредовану природним антителима (НАбс) и способност хемолизе посредоване комплементом (Лис) – код 200 одраслих особа (102 жене; 98 мушкараца) у распону од старости од 7 до 58 година ухваћени у мају 2018. током њиховог изласка из брумације, и за које су били доступни подаци о репродукцији и дугорочним подацима о поновном улову.

Резултати

Открили смо да су жене мање и да живе дуже од мушкараца у овој популацији, али је стопа убрзања смртности у одраслом добу иста за оба пола. Насупрот томе, мушкарци су показали већи урођени имунитет од жена за све три имунолошке варијабле које смо мерили. Сви имуни одговори су такође варирали обрнуто са годинама, што указује на имуносенсценцију. За женке које су се размножавале у претходној репродуктивној сезони, маса јајета (а самим тим и укупна маса квачила) се повећавала са годинама. Поред имуносенесценције бактерицидне способности, женке које су произвеле мања квачила су такође имале нижу бактерицидну способност.

Закључци

За разлику од општег обрасца кичмењака са нижим имунолошким одговором код мушкараца него код жена (вероватно одражавајући супресивне ефекте андрогена), пронашли смо више нивое све три имунолошке варијабле код мушкараца. Поред тога, супротно претходним радовима који нису пронашли доказе о имуносенсценцији код обојених корњача или црвеноухих корњача, открили смо смањење бактерицидне способности, способности лизе и природних антитела са годинама код корњача жутог блата.

Кључне речи

Урођена имунолошка функција, гмизавци, старење, полно специфично, старење

бенефиције додатка цистанцхе-повећавају имунитет

Позадина

Старење у многим системима кичмењака карактерише старење организма – опадање ефикасности и перформанси физиолошких и ћелијских процеса [1] што доводи до пада преживљавања и плодности специфичног за узраст са старењем [2]. Студије старења у дивљим популацијама кичмењака често су се фокусирале на квантификацију промена плодности и морталитета у вези са узрастом [3], али ређе на физиолошке механизме који могу допринети таквом демографском старењу (нпр. [4–6]). Један такав физиолошки механизам кандидата је имунолошка функција, која игра кључну улогу у преживљавању. Показало се да смањена имунолошка функција негативно утиче на преживљавање и репродукцију [6–8]. Прогресивна дерегулација имуног система са годинама, названа имуносенесценција, добро је проучавана код људи како за урођени имунитет (чија дисрегулација са годинама може довести до хроничне упале [9]), и за стечени имунитет, где су најбоље проучене промене. повећање меморије Т ћелија и смањење наивних Т ћелија са старењем (али и овде, имуносенесценција остаје загонетна [10]). Међутим, старосне промене у имунолошком систему дуговечних, дивљих популација несисара нису добро описане у литератури, а студије које се фокусирају на имуносенесценцију рептила су чак ретке (прегледано у [8]). Старење организма, које доводи до демографског старења у популацијама, еволуирало је у дивљини. Стога су студије о природним популацијама добро позициониране да открију еволутивно очуване процесе старења који су могућа ограничења за то како се старење дешава. Истовремено, проучавање органског и демографског старења у дивљини пружа реалистичне еколошке контексте и открива до које мере су механизми старења флексибилни. Конкретно, гмизавци имају многе карактеристике које их препоручују за проучавање механизама старења, укључујући имуносенесценцију. Прво, они су сестринска клада сисара, који заједно чине монофилетску кладу амниота; имунолошка функција и ћелијски сигнални путеви су високо очувани у амниотима (прегледано у [11]). Друго, гмизавци показују неколико фенотипова који омогућавају проучавање старења у низу физиолошких и морфолошких контекста, што није могуће код већине врста сисара (нпр. отпорност на хипоксију, отпорност на смрзавање, отров, оклоп, толеранција на топлоту, прегледано у [8 ]). Осим птица, гмизавци су поикилотермни, и многи настављају да расту као одрасли (нпр. [12] али видети [13]) и повећавају своју плодност са старењем ([14–17], прегледано у [8]). Штавише, многе лозе рептила имају јединствене морфолошке карактеристике. Примери последњег укључују заштитне фенотипове - као што су спољашњи ребри код корњача и отров код неких змија. Недавне филогенетичке анализе стопе морталитета старења показале су снажну подршку хипотези да лозе рептила са заштитним фенотиповима имају дужи живот и спорије старење од сисара сличне величине, посебно код корњача [18], (видети такође [19, 20]). Заиста, преко 300 врста тетрапода са дивљим узорцима [18], корњаче су биле јединствене по томе што су читаву лозу карактерисале врсте са скоро занемарљивим морталитетом старења и дугим животним веком – осећај који се огледа у заточеништву [21]. С обзиром на то да се раст (а самим тим и плодност) може наставити током животног века одрасле особе, селекција против штетних мутација са фенотиповима касног доба може бити јача у старијим годинама код корњача и других гмизаваца са овим карактеристикама у односу на сисаре (као у [22]). Ове особине сугеришу да се имуносенсценција можда не манифестује на исти начин код гмизаваца у поређењу са другим кичмењацима амниота, као што су сисари или птице, и да чак може да изостане због селективних притисака на одржавање имунолошке функције са повећаном репродукцијом (нпр. [5]) . Овде се фокусирамо на проширење компаративног пејзажа студија старења код корњача како бисмо промовисали њихову употребу као модела спорог старења. Имуни систем корњача, као и других амниота, укључује урођене и стечене компоненте (прегледано у [23]), али недавне анализе сугеришу да се гмизавци могу више ослањати на урођену одбрану у односу на сисаре и птице [24]. Конкретно, иако гмизавци имају Б и Т ћелије повезане са адаптивним имунитетом, традиционални адаптивни брзи одговор на секундарно излагање патогенима може се више ослањати на урођени имунитет [24]. Постоји све већа литература о обрасцима урођеног имунитета код ектотермних гмизаваца који су повезани са узрастом [4, 25–27], што пружа прву линију одбране од страних патогена. У исто време, проучавање полних разлика у старању организма и демографском старењу проширило се на бољу филогенетску покривеност, укључујући гмизавце [28]. Важно је да су ове студије могуће у дивљим популацијама само са могућношћу прецизног старења јединки, што захтева дуготрајно проучавање дуговечних врста ([29, 30], прегледано у [31]). Ту литературу додајемо истражујући аспекте полне и старосне специфичности урођеног имунитета, преживљавања, репродукције жена и односа међу њима код дуговечног рептила. Користимо 38-годишњу студију повратног хватања жутих муљних корњача познатог узраста (Киностернон фавесценс) да квантификују односе између старости, пола, преживљавања и репродуктивног учинка на урођени имуни систем као интегративни приступ разумевању имуносенсценције. Као и друге корњаче, утврђено је да ова врста споро стари када се полови посматрају заједно [18]. Конкретно, проценили смо три мере урођеног имунитета – циркулишућа природна антитела, способност лизе посредоване комплементом и бактерицидну способност плазме – у нашој популацији дуготрајне студије у Небраски (САД). Постојећом парадигмом урођене имуносенесценције, предвидели смо да ће мере урођеног имунитета опадати са старењем, упркос неким доказима који говоре супротно [5, 32].

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

Резултати

Две стотине животиња је узорковано 2018. за имунолошке варијабле (Н=98 мужјака, Н=102 женки) и ова запажања обухватају наше имунолошке податке. Од ових 102 женке, 85 се репродуковало 2017. године и оне обухватају наше репродуктивне податке о женама. Коначно, за анализу старења морталитета у популацији у целини, користили смо нашу дугорочну базу података о Н=2380 јединствених појединаца познате старости (Н=860 мушкараца, Н=1530 жена ). У нашем узорку особа са имунолошким подацима (200 одраслих), старост је била у великој корелацији са величином тела; старије животиње су биле веће и по маси и по дужини (нпр. маса тела, р=0.58, Пр.<0.0001; plastron length, r=0.60, Pr. <0.0001). Therefore body size was not included in models where age was an explanatory factor. In the immune data individuals, adult females were smaller than males and tended to be older (Table 1, Fig. S2), a result that is mirrored in the population as a whole (see Fig. 5 in [33]). Because adult females in our immune sample were significantly older than males, we z-transformed age for all analyses of innate immune function to dissociate the confound of age and sex. This allowed for a comparison of relatively old and young adult males and females.

Табела 1. Величина, старост и морталитет Старење у жутим блатним корњачама

У популацији у целини, жене су имале дужи средњи и максимални животни век одраслих (старости у којима је умрло 50 и 95% одраслих). И одрасли мужјаци и женке корњаче су показале пораст морала у вези са годинама, што указује на старење. Почетна стопа морталитета одраслих била је виша код мушкараца него код жена, али су стопе убрзања морталитета биле еквивалентне (Табела 1, Сл. 1). У нашем имунолошком подузорку појединаца, три мере урођене имунолошке функције биле су у значајној (позитивној) корелацији једна са другом (хемаглутинација посредована природним антителима, хемолиза посредована комплементом и бактерицидна способност, табела С1). Али пошто су корелације биле слабе (све |р|< 0.28), we analyzed each variable separately. For all three variables, batch represents the reagents used. For bactericidal competence, five individual lyophilized pellets of Escherichia coli were used to generate control plates across the experiment; as control plates decreased in their colony count, a fresh control solution was made. For natural antibodies and cell lysis capability, two separate bottles of rabbit red blood cells were used sequentially. Significant variation among E. coli pellets and individual rabbits (that generate the red blood cells) is expected, and we controlled for it here as a batch effect in our models. All three immune variables declined with advancing age (BC and Lysis, Pr< 0.05; Nabs, Pr=0.08, Table 2, Fig. 2) and were higher in males than females (Table 2, Fig. 3). For the 85 females in our data for which we had both most-recent reproductive output and immune measures, clutch size did not change with age, whereas egg mass increased with age (Tables 3, S2, Fig. 4). Because clutch size did not change with age, a third measure of reproductive effort, total clutch mass followed the identical trend as egg mass and was not considered further. Interestingly, the three females greater than 50 years old had lower age-corrected egg mass (age>50 година) од жена у следећем најнижем старосном интервалу (Н=13 старости 40–50 година (т=2.45, Пр.=0.014)) што указује на могућност старења у репродуктивном резултату код веома старих женки (видети слику 4). За ових 85 репродуктивних жена, старије жене су пратиле исти тренд који је примећен код свих одраслих: смањена бактерицидна способност и хемолиза посредована комплементом са годинама (Табела 3, видети Слику 1). Поред тога, женке са већим канџама - без обзира на старост - имале су већу бактерицидну способност од оних са мањим канџама (слика С1). За разлику од величине квачила, нисмо нашли никакве ефекте масе јаја на имунолошку функцију (подаци нису приказани).

Дискусија

Предности додатка цистанцхе-како ојачати имуни систем

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Енханце Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

Морталитет и репродуктивно старење

Женке жуте муљне корњаче живе дуже од мужјака у овој популацији; међутим, они старе сличном стопом (слика 1), а морталитет специфичан за узраст расте са годинама код оба пола (слика 1), иако споро. Ови подаци показују споро старење морталитета код ове врсте, али нисмо пронашли доказе о репродуктивном старењу у нашим узорцима женки. Мало убрзање морталитета код одраслих корњача је пријављено у великој филогенетској студији тетрапода [18], као иу појединачним дугорочним студијама за џиновске корњаче [34] и насликане корњаче ([35, 36] али види [ 37, 38] и врсте корњача са шаркама [39]); међутим, код других врста корњача, смртност често остаје константна са одрастањем одраслих [40], или се смањује са годинама [3, 15, 41]. У популацијама корњача у заточеништву (нпр. записи у зоолошком врту) да Силва ет ал. [21] су открили да већина врста корњача показује спор или занемарљив пад морталитета са годинама. Репродуктивно старење женки (тј. опадање репродуктивног учинка специфичног за узраст) до сада није примећено код врста корњача (осликане корњаче [30], Бландингове корњаче [15, 41], пустињске корњаче [3] и боксове корњаче [42]) . Ворнер и колеге [30] су приметили смањење преживљавања излегања обојених корњача од најстаријих женки осликаних корњача, упркос томе што није дошло до смањења репродуктивног учинка. Поред тога, многе репродуктивне студије корњача су показале позитивне корелације између величине квачила, величине јајета и/или масе квачила са величином тела корњача ([43]; рецензирано [44]), где је величина тела често позитивно повезана са старошћу у корњаче (нпр. ова студија, [17, 32], али видети [41]). Ови подаци сугеришу да се репродуктивно старење ретко јавља код корњача, ако се уопште и дешава.

Слика 1 Преживљавање и старосно специфичан морталитет код одраслих мушкараца и жена К. фавесценс. Медијан (50% живих) и максимални (5% живи) животни век је дужи код одраслих женки (црне испрекидане линије) жутих блатних корњача него код одраслих мужјака (сиве пуне линије). И-оса је Лк преживљавања за одрасле, почевши од 11. године. Линије које падају на к-осу показују средњи и максимални животни век специфичан за пол у хронолошком узрасту. Уметак приказује Гомпертзове моделе убрзавања морталитета током одраслог доба; почетни морталитет одраслих за мушкарце је значајно већи него за женке (висина линија), са еквивалентним порастом (нагиби линија) (Табела 1). И-оса је природни логаритам морталитета специфичне за узраст из уграђеног Гомпертзовог модела убрзања

Дуговечност и старење специфична за пол

Студије полних разлика у организму и демографском старењу остају ретке код врста које нису сисари. Вероватно постоје два разлога за ово: почетни извештаји о демографији о дивљим популацијама често обједињују податке за довољну моћ за процену убрзања смртности; а код многих врста пол младих је непознат због недостатка спољашњих гениталија и мора се ослањати на развој секундарних полних фенотипова да би се одредио пол код новозрелих животиња. У прегледу података о дуговечности у заточеништву, да Силва и његове колеге [21] су известили да је просечан очекивани животни век одраслих мушкараца премашио животни век женки за око 20%, супротно нашим резултатима за корњаче од жутог блата. Међутим, чини се да је већа дуговечност женки у дивљим популацијама корњача (осликане корњаче [28, 45]), пегаве корњаче [46, 47], дрвене корњаче [48], корњаче на карти [49] лиске [50], кутијасте корњаче [51], и црвеноухи клизачи [52]). Насупрот томе, свесни смо само две студије које су известиле да мужјаци корњача наџиве женке у дивљини (гопхер корњаче [53] али види [54], и популација осликаних корњача [36]. Потребни су додатни подаци, али ови теренски подаци су у супротности са записима који су сумирани у [21], и сугеришу могућу интеракцију између пола и окружења која се односи на дуговечност и старење.

Табела 2 Анализа варијансе за имунолошке варијабле за одрасле мужјаке и женке жутог блата корњача

Функција имунитета специфична за пол

Открили смо виши ниво имунолошке функције код мушкараца него код женки, што је супротно од општег обрасца код кичмењака [55, 56], и претпоставља се да је барем делимично повезано са супресијом имуног система андрогенима [57, 58]. Многе врсте корњача су одговарајући модели за ово питање јер им недостају полни хромозоми, па стога полови имају идентичну архитектуру генома при зачећу. Они уместо тога имају одређивање пола зависно од температуре (ТСД) при чему је пол одређен топлотним окружењем које се доживљава током критичног периода ембрионалног развоја, уклањајући сваку збрку између генома специфичних за пол и сексуалног развоја специфичног за пол [59]. Лопез-Перез и колеге [60] нису пронашли никакву разлику у бактерицидној способности између мужјака и женки код врсте мошусне корњаче (још једна киностернидна корњача са ТСД). Исто тако, Зиммерман и колеге [32, 61, 62] нису пронашли никакву полну разлику у мерама урођеног имунитета код црвеноухих корњача (такође са ТСД). Насупрот томе, код осликаних корњача [5] – још једна врста са ТСД –, већа способност хемолизе посредована комплементом је пријављена код мужјака, а већи титар природних антитела код женки, без сексуалних ефеката на бактерицидну способност. Поред тога, Фреедберг и колеге [63] су открили да хладне температуре инкубације које производе мужјаци код друге ТСД корњаче повећавају имунокомпетентност код мужјака више него код женки, али нису нашли такве ефекте у блиско сродном конгенеру. Иако се чини да ови прелиминарни подаци сугеришу да корњаче можда не прате општи образац кичмењака нижег имунолошког одговора код мужјака, јасно је да је потребно даље истраживање. Пратећи теорију еко имунологије која поставља везе између имунолошке одбране и стратегија животне историје [64, 65], очекивали бисмо да дуговечни пол више улаже у стечени у односу на урођени имунитет [66]; ограничени подаци о дуговечности специфичним за пол искључују свеобухватан тест међу врстама.

цистанцхе биљке које повећавају имуни систем

Разлике у понашању и обрасци активности могу изложити женке жутих муљних корњача већим притисцима инфекције него мужјаци, што може потиснути имунолошку функцију женки [55, 56]. Наша проучавана врста има необичан годишњи циклус активности (погледајте Методе). На нашем месту истраживања одрасли мужјаци излазе из брумације у просеку 5 дана пре него што женке у пролеће [Ајверсон и Грин, необјављени подаци], остану активни у води у јуну током продужених напада женки на гнежђење, и у просеку прелазе на летњу еститивацију. касније од женки [67]. Дакле, годишњи период активности ове врсте је необично кратак, при чему је типичан мужјак активан у води можда 25% дуже од типичне женке. Међутим, није јасно зашто би их краћа сезона активности жена изложила већим притисцима имунолошког система. Такође, репродуктивна активност се разликује између мужјака и женки, при чему се парење и оплодња дешавају у воденом стубу, након чега женке морају изаћи из воде на копно да би одложиле своја јаја (док мужјаци немају такав обавезан напад на копно) [67]. сезонски (нпр. [Концентрације стероида у циркулацији рептила су високе 68, 69]), и стога се образац који смо приметили веће имунолошке функције код мужјака може приписати узорковању само током пролећног ницања – тј. веома рано у сезони. Сезонске варијације у андрогенима корњача су прилично добро проучене, а нивои тестостерона у циркулацији за мужјаке корњача су генерално веома ниски у рано пролеће (преглед у [69]), док је врхунац у пролеће за женке док се припремају за овулацију [69– 74]. Познато је да тестостерон потискује имунолошку функцију ([57], али види [58]) и то би могло објаснити нижи имуни одговор код жена у поређењу са мушкарцима. Међутим, познато је да естрадиол побољшава имунолошку функцију [23] и генерално је повишен код женки у рано пролеће, након чега следи врхунац убрзо након тога у вези са овулацијом и овипозицијом ([75], прегледано у [69]). Дакле, на основу нашег раног пролећног узорковања, обрасци естрадиола и тестостерона су мало вероватна објашњења нижих имунолошких одговора уочених код наших женки. Нажалост, недостају нам подаци за нивое хормона у циркулацији у нашој испитиваној врсти, али с обзиром на управо описане опште обрасце, утицај циркулишућих стероида на имунолошку функцију још увек није јасан.

Слика 2 Урођени имунитет опада са годинама код одраслих К. фавесценс. А Бактерицидна компетенција и Б комплементом посредована лиза су се смањивале са годинама на сличан начин за одрасле мужјаке и женке жутог блата корњача (погледајте табелу 2 за статистичке резултате). Ц Природна антитела (НАбс) показала су исти тренд. На свим панелима, И-оса представља остатке из линеарних модела са старошћу уклоњеном из модела (Табела 2). Кс-оса је з-трансформисано доба са уметнутим линијама које означавају старост у годинама за мушке и женске одрасле корњаче. Регресије: БЦ остаци=−{{10}}.138(зАге), Р2=0.06; Остаци лизе=−0.01(зАге), Р2=0.02; НАбс остаци=−0.01(зАге), Р2=0.01

Женска репродукција и имунолошка функција

Нисмо пронашли доказе о имуним трошковима за женску репродукцију. Ни величина квачила (Табела 3) ни маса јаја (подаци нису приказани) нису негативно утицали на било коју имунолошку варијаблу. Заиста, женке које су полагале веће канте јаја имале су већу бактерицидну способност (слика С1). Теорија животне историје предвиђа да појединци морају алоцирати ресурсе особинама попут оних које подржавају самоодржавање и репродукцију како би максимизирали кондицију [76]. Међутим, репродукција представља значајан енергетски трошак за женке, па стога ресурси који се издвајају за репродукцију могу доћи на рачун других особина [77]. Стога се може очекивати да ће жене које много улажу у текућу репродукцију искусити компромис са тренутном имунолошком ефикасношћу [78]. Овај компромис између репродукције и имунолошке функције испитан је код других гмизаваца са мешовитим резултатима. Гравидне западне копнене подвезице (Тамнопхис елеганс) показале су нижу пролиферативну способност Т-лимфоцита као одговор на митоген у односу на негравидне конспецифике, али нису показале разлику у БЦ између репродуктивних стања [27]. Насупрот томе, гравидне мале звечарке (Систрурус милариус) показале су смањену способност БЦ у односу на негравидне змије [79]. Мере урођеног имунитета између репродуктивних стања код сликаних корњача (Цхрисемис пицта) биле су зависне од старости [5]. Конкретно, млађе женке које су имале велика квачила показале су већу способност лизе од старијих женки са слично великим величинама квачила. Међутим, иста студија је открила повећану БЦ код старијих жена, што је у супротности са налазима ове студије о смањењу имунолошке функције са старењем. Поред тога, без обзира на године, открили смо да су веће величине квачила у корелацији са већим БЦ и да није било ефекта репродукције на природну производњу антитела или способност лизе. Ови резултати сугеришу да су компромиси између имунолошке функције и репродукције вероватно специфични за имунолошку компоненту.

Слика 3 Урођени имунитет је значајно већи код одраслих К. фавесценс него код женке. Повратно трансформисани најмањи квадрат значи ±1 СЕ за А) бактерицидну способност (и-оса је пропорција убијених колонија Е. цоли) и Б) природна антитела (и-оса је титар максималног разблажења при којем долази до хемаглутинације црвених крвних зрнаца зеца ) и комплементом посредована лиза (максимални титар разблажења при којем долази до лизе црвених крвних зрнаца кунића). Звездице представљају значајну полну разлику за дату имунолошку меру. (Погледајте табелу 2 за статистичке резултате). ЛС значи: БЦ=0.37, 0.62; НАбс=4.0, 4.6; Лис=8.2, 9.{18}}

Табела 3 Анализа имунолошких варијабли и репродуктивног напора за репродуктивне женке жутог блата корњача

Слика 4. Маса јајета, а не величина квачила, расте са годинама код репродукције женки К. фавесценс. И-оса представља остатке из линеарног модела у табели 3 са старошћу уклоњеном из модела. Остаци масе јаја=0.025 (старост) – 0,73, Р2=0,40

Имуносенесценција

Од варијабли урођеног имунитета које смо испитали код жутих муљних корњача, пронашли смо доказе имуносенесценције код све три (Слика 2; Табела 2). Резултати других студија су различити. На пример, већи (вероватно старији) црвеноухи клизачи нису показали никакву промену у БЦ у поређењу са мањим јединкама [32, 61], слично налазима о бактерицидној способности код обојених корњача где је старост била позната [5]. Ова последња студија је такође пријавила повећање хемаглутинације код старијих животиња. Очигледно, још увек није евидентан образац промена везаних за узраст у урођеном имунолошком систему корњача. Међу осталим гмизавцима који нису птичи, резултати су такође прилично варијабилни (прегледано у [8, 26]). На пример, у популацијама змија подвезица, и способност хемаглутинације и хемолизе се смањује код старијих змија [27, 80], као и имуни одговор на митоген фитохемаглутинин код Дикерсонових огрличастих гуштера [81]. Док се код водених питона хемаглутинација повећава са годинама [82]. Даља истраживања ће бити неопходна да би се разумела ова варијација у правцу промена урођеног имунитета урођеног имунитета код гмизаваца уопште, а посебно код корњача. Насупрот томе, подаци о сисарима и птицама углавном показују опадање имунолошке функције са годинама. Штавише, у овим таксонима, већина уочених имуносенсценција се десила у адаптивном имунолошком систему [83–85] са мање израженим променама пронађеним у урођеном имунитету (прегледано у [6]), иако ни овде обрасци нису нужно конзистентни у свим мерама урођеног имунитета [ 86]. Међутим, код гмизаваца, адаптивни имуни систем реагује спорије на изазове и не показује робусне одговоре током поновљене изложености патогену (прегледано у [24, 87]). Дакле, урођена имунолошка функција и промене у таквој функцији повезане са узрастом могу бити критичне за целокупно имунолошко здравље гмизаваца.

Закључци

Овде смо покушали да проширимо упоредна разматрања урођене имуносенсценције и њене интеракције са смртношћу и репродуктивним старењем. Одабрали смо дуго проучавану дивљу популацију корњача (жутог блата) да тестирамо повезаност између ових мера старења јер су недавне опсежне упоредне студије идентификовале да корњача има изузетно споро старење и дуг животни век. Без обзира на то, мере механизама старења захтевају познату старост, што је могуће постићи само кроз дуготрајно проучавање дивљих, дуговечних врста. Открили смо да морталитет и имунитет имају полно специфичне карактеристике; жене су живеле дуже и имале нижу урођену имунолошку функцију од мушкараца. Овај резултат је упечатљив на основу температурне зависности одређивања пола, чиме се искључује допринос полних хромозома старењу специфичном за пол. Све три мере урођеног имунитета су опадале са старењем. Код женки, маса квачила се повећавала са старењем код женки, а репродуктивни учинак није предвидео урођену имунолошку функцију осим да су женке са већим квачилима имале већу бактерицидну способност, што указује на очигледну цену репродуктивног напора за урођени имунитет код женки. Ово је прва студија која испитује три осе старења код корњача, групе коју карактерише споро до занемарљиво старење. Ови налази о имуносенесценцији, морталитету и репродукцији сугеришу корњаче као нови модел за разумевање механизама спорог старења, или, тачније, проучавање универзалних механизама старења (као што је имуносенесценција) у монофилетској групи коју карактерише споро убрзање морталитета одраслих и занемарљиво репродуктивно старење.

Методе

Узорковање на терену

Узимање узорака ткива за корњаче од жутог муља (ИМТ) за ову студију обављено је 2018. маја на језеру Гимлет на нашем дуготрајном истраживачком месту у Националном резервату за дивље животиње Цресцент Лаке (ЦЛНВР), у округу Гарден, Небраска , САД (41 степен 45,24′Н, 102 степен 26,12′В). Мочварни комплекс језера Гимлет је плитко (просечне дубине 0,8м), пешчано језеро са мочварним стаништем [88]. ИМТс показују температурно зависно одређивање пола (ТСД) са женкама произведеним у топлим условима инкубације и и мужјацима и женкама произведеним у хладнијим условима [59]. Од 1981. до 2018. овде су се одвијале студије екологије поновног хватања и гнежђења. На овом месту, ИМТ обично зимују на копну закопани у планинским пешчаним брежуљцима поред мочвара, појављују се у априлу и мају и мигрирају у воду, а затим се већина женки враћа у исте пешчаре које се гнезде у јуну, иако се неке не размножавају сваке године [67, 87]. До јула све корњаче почињу да напуштају мочваре да би се задржале у пешчаним брдима до краја лета (видети такође [89]). Током пољских сезона, постављене су ограде за наношење паралелно са обалом између три зимовалишта и језера и праћене континуирано сваког дана. Током година (укључујући 2017.) када су ограде биле постављене током сезоне гнежђења, свака ухваћена женка је рендгенски снимана да би се одредила величина квачила, а мерена је ширина сваког јајета на сваком рендгенском снимку. Једначина регресије која повезује средњу рендгенску ширину квачила са стварном средњом масом јаја из подскупа гнезда која су накнадно ископана омогућила нам је да проценимо масу јаја и масу квачила (обоје у г) за сваку трудну женку у 2017. (н{{24} }). Једначине за ове односе и фт су следеће: стварна ширина јаја=0.98(процењена ширина јаја)+1.52, Р2=0.89; Стварна маса јаја=0.64 (Процењена маса јаја) – 6.07, Р2=0.85; а у узорку од Н=1795 ИМТ јаја сакупљених током неколико година ширина јаја се може поуздано користити за процену масе јаја (а самим тим и укупне масе квачила) Маса јаја=0.68 (Ширина јаја) – 6,77, Р2=0.85 (Иверсон, необјављени подаци). Ово нам је омогућило да испитамо ефекте тих мера репродуктивног учинка на имунитет у пролеће 2018. када је ових 85 женки корњача изашло из брумације. Једном ухваћене, корњаче су транспортоване назад у теренску лабораторију где су забележени морфометријски подаци, укључујући максималну дужину карапакса (ЦЛ у мм), максималну дужину пластрона (ПЛ у мм) и телесну масу (БМ у г). До 0,5 мл пуне крви је сакупљено из цервикалног синуса помоћу хепаринизованог шприца од 26 калибра и центрифугирано (7000 рпм) у криоепрувети током 5 минута да би се одвојиле компоненте крви. Крвна плазма је пипетирана у посебну криоепрувету. И плазма и упакована црвена крвна зрнца су одмах замрзнута у течном азоту док нису транспортована на Државни универзитет Ајове за складиштење на -80 степени. Узорковане корњаче (98 мужјака и 102 женке) превезене су назад на своју почетну локацију хватања и пуштене на супротну страну ограде да би наставиле до језера.

Одређивање старости

Пошто је ова студија почела 1981. године, старост у годинама након почетног хватања сваке корњаче процењена је као број зима након излегања. Процена старости је иста сваке године и стога се наше методе за одређивање старости примењују на све податке који се овде разматрају (популација и имуни подузорак). Пошто се сваке године у овој популацији производи само један прстенасти прстен, старост незрелих корњача обично је једнака укупном броју присутних прстенова. Међутим, током изузетно оштрих година, можда неће бити никаквог раста, а два прстена се могу појавити као један. Дакле, број прстенова је минимална старост и може бити потцењен ако се прстенови не преброје и не процене у контексту општих образаца раста љуске у целој популацији. Упоређивањем обрасца прираста у расту неостареле јувенилне корњаче са општим обрасцем раста у популацији, старост при првом хватању могла би се поуздано утврдити до најмање 12 година. Избројали смо минимални број прстенова на одраслим корњачама ухваћеним у раним годинама студије, а старост је процењена за све те корњаче ако је број прстенова био мањи од 20. Међутим, већина корњача је првобитно обележена појединачно и остарела пре своје шесте зиме, а касније је старила на основу стварног интервала поновног хватања. Одрасле женке су биле значајно старије (и мање) од мужјака у нашим узорцима (табела С3; неупарени т-тест, П=0.0003, видети слику С2 и слику 5 у [33]). Стога је старост з-трансформисана унутар сваког пола на средњу вредност од 0 са јединичном варијансом. Ова варијабла „старост” је коришћена у свим статистичким анализама. Искључили смо податке за 26 малолетника без спола.

Репродуктивна анализа

Репродуктивни учинак – величина квачила, укупна маса квачила – повећава се са повећањем величине и старости. Стога, за анализе које су укључивале женски репродуктивни учинак заједно са годинама у моделу, користили смо сирове вредности репродуктивног учинка без корекције за величину тела. Сви линеарни модели су изведени у САС в. 9.4 (САС Институте, Цари, НЦ, УСА).

Анализа преживљавања

Стопе преживљавања и старосне стопе морталитета одраслих Киностернон фавесценс из западне Небраске процењене су на основу Гомперцовог модела (Табела 1) [18, 90, 91] који процењује почетну вероватноћу смртности у почетној доби и стопу убрзања морталитета у целом животни век. Компликованији модели (нпр. укључујући константни Макехамов термин за смртност независну од старости, укључујући параметар успоравања) нису подржани овим подацима на основу промене АИЦ-а (израчунате у пакету БаСТА Р [90]). Гомпертз моделирање је примењено на наш дугорочни скуп података о поновном хватању обележја са језера Гимлет, укључујући податке од 1530 појединачних женки и 860 појединачних мушкараца. Старост у зрелости је у просеку износила 11 година за оба пола, што је познато из дугогодишњег праћења старости и репродукције у овој популацији [88, 92, 93]. Пошто сазревање зависи од величине, ове процене старости сазревања (тј. 11 година) су максималне процене (на пример, повремени мужјак корњаче се може идентификовати у млађим годинама). Тестирали смо осетљивост коришћења просечне старости сазревања од 10 година без значајног утицаја на процене животног века и морталитета старења (подаци нису приказани). Максимални и средњи животни век одрасле особе израчунати су као број година након старости прве репродукције док се процењује да је 95 и 50% одраслих у синтетичкој кохорти умрло. Скупови података су анализирани коришћењем 'баста' функције из БаСТА пакета за Р [90].

Имунолошке мере

Хемаглутинација посредована природним антителима и способност хемолизе посредоване комплементом (НАбс, Лисис) су наводно прва линија одбране од патогена код кичмењака (прегледано у [94]), а ове мере урођене имунолошке функције су проучаване код многих рептила. врсте (нпр. [4, 5, 32, 80, 82, 95]). Завршили смо тестове за НАбс и способност лизе према тесту хемолиза-хемаглутинација прилагођеном из [96] за употребу код фарбаних корњача [5, 97]) коришћењем црвених крвних зрнаца зеца. Користили смо две боце црвених крвних зрнаца зеца (ХемоСтат ХемоСтат Лабораториес, Диксон, Калифорнија, САД) да завршимо све тестове. Испитали смо све плоче са позитивним и негативним контролама и узорцима у дупликату. Виши титри за хемаглутинацију указују на већу количину природних антитела у узорку плазме, пошто су високи титри индикација да су природна антитела у високим концентрацијама чак и у све разблаженој плазми [96]. Слично, виши титри за хемолизу указују на то да је плазма способна да лизира еритроците чак и при разблаженијим концентрацијама [96]. Дакле, повећани нивои природних антитела и способност лизе повезани су са повећаном функцијом имунитета. Процењивали смо бактерицидну способност (БЦ) плазме квантификовањем њене способности да инхибира раст Есцхерицхиа цоли користећи наш објављени протокол за обојене корњаче [5, 97], прилагођен из [98]. Пет лиофилизованих пелета Е. цоли (Мицробиологицс, АТЦЦ#8739) је коришћено у овом експерименту, при чему је свака нова пелета коришћена за генерисање новог контролног раствора док смо напредовали кроз узорке. Повећана бактерицидна способност одговара повећању имунолошке функције. Сви имунолошки тестови су обављени у пролеће 2019. на узорцима прикупљеним у пролеће 2018. године.

Имунолошка мера: статистичке анализе

Зависне варијабле су анализиране коришћењем општих линеарних модела са експланаторним варијаблама зАге (стандардизована старост унутар сваког пола); Пол (одрасли мушкарци и одрасле жене); двосмерна интеракција између зАге и Сека; и серија за променљиве сметње (БЦ: Н=4; НАбс и лиза: Н=2) да би се урачунале контролне пелете (БЦ) или боца црвених крвних зрнаца зеца (НАбс и Лисис). Бактерицидна компетенција је Арцсине трансформисана да би се узела у обзир пропорционални подаци и да би се испунили услови нормалности. НАбс и Лисис су лог-10 трансформисани да би испунили услове нормалности. Сви линеарни модели су изведени у САС в. 9.4 (САС Институте, Цари, НЦ, УСА). Графикони су направљени у ггплот2 [99].

Референце

1. Харман Д. Старење: преглед. Анн НИ Ацад Сци. 2001;928:1–21.

2. Риклефс РЕ. Еволуција старења из упоредне перспективе. Фунцт Ецол. 2008;22:379–92.

3. Јонес ОР, Сцхеуерлеин А, Салгуеро-Гомез Р, Цамарда ЦГ, Сцхаибле Р, Цаспер ББ, ет ал. Разноликост старења преко Дрвета живота. Природа. 2014;505(7482):169–73.

4. Сцхванз Л, Варнер ДА, МцГаугх С, Ди Терлиззи Р, Брониковски АМ. Физиолошко одржавање у зависности од стања у дуговечном ектотерму, насликаној корњачи (Цхрисемис пицта). Ј Екп Биол. 2011;214:88–97.

5. Јудсон ЈМ, Рединг ДМ, Брониковски АМ. Имуносенесценција и њен утицај на репродукцију код дуговечног кичмењака. Ј Екп Биол. 2020;223:јеб223057.

6. Петерс А, Делхеи К, Накагава С, Аулсеброок А, Верхулст С. Иммуносенесценце ин вилд анималс: мета-аналисис анд оутлоок. Ецол Летт. 2019;22:1709–22.

7. Сцхмид-Хемпел П. Варијације у имунолошкој одбрани као питање еволуционе екологије. Проц Р Соц Б. 2003;270(1513):357–66.

8. Хоекстра ЛА, Сцхвартз ТС, Спаркман АМ, Миллер ДА, Брониковски АМ. Неискоришћени потенцијал биодиверзитета рептила за разумевање како и зашто животиње старе. Фунцт Ецол. 2020;34:38–54.

9. Францесцхи Ц, Цапри М, Монти Д, Гиунта С, Оливиери Ф, Севини Ф, ет ал. Омаловажавање и спречавање погрде: системска перспектива старења и дуговечности произашла је из студија на људима. Мецх Аге Девелоп. 2007;128:92–105.

10. Павелец Г, Брониковски АМ, Цуннане СЦ, Ферруцци Л, Францесцхи Ц, Фулоп Т, Гаудреау П, Гладисхев ВН, Гонос ЕС, Горбунова В, Кеннеди БК, Ларби А, Лемаитре ЈФ, Лиу ГХ, Маиер АБ, Мораис ЈА, Нобрега ОТ, Москалев А, Риккерт МО, Селуанов А, Сениор АМ, Украинтсева С, Ванхаелен К, Витковски Ј, Цохен АА. Загонетка људског имуног система је „старење“. Мецх Аге Девелоп. 2020;192.

11. Сцхвартз ТС, Брониковски АМ. Путеви молекуларног стреса и еволуција репродукције и старења код гмизаваца. У (Т. Флатт & А. Хеиланд, ур.) Молекуларни механизми еволуције животне историје. Оксфорд: Окфорд Унив Пресс; 2011. Стр. 193–209

12. Армстронг ДП, Кеевил МГ, Роллинсон Њ, Броокс РЈ. Суптилне индивидуалне варијације у неодређеном расту доводе до великих варијација у преживљавању и доживотном репродуктивном резултату код дуговечног рептила. Фунцт Ецол. 2007;32:752–61.

13. Омеиер ЛЦМ, Фуллер ВЈ, Годлеи БЈ, Снапе РТЕ, Бродерицк АЦ. Одлучан или неодређен раст? Поновно разматрање стратегије раста морских корњача. Мар Ецол Прог Сер. 2018;596:199–211.

14. Брониковски АМ, Арнолд СЈ. Еволуциона екологија варијације историје живота код змије подвезице Тхамнопхис елеганс. Екологија. 1999;80:2314–25.

15. Цонгдон ЈД, Нагле РД, Киннеи ОМ, ван Лобен Селс РЦ. Хипотезе старења код дуговечног кичмењака, Бландингова корњача (Емидоидеа бландингии). Екп Геронтол. 2001;36:813–27.

16. Вилкинсон ПМ, Раинватер ТР, Воодвард АР, Леоне ЕХ, Цартер Ц. Одредите раст и репродуктивни животни век америчког алигатора (Аллигатор миссиссиппиенсис): докази из дуготрајних поновних хватања. Цопеиа. 2016;104:843–52.

17. Хоекстра ЛА, Вебер РЦ, Брониковски АМ, Јанзен ФЈ. Раст, облик и њихов утицај на животну историју дуговечног кичмењака. Евол Ецол Рес. 2018;19(6):639–57.

18. Реинке БА, Цаиуела Х, Јанзен ФЈ, Лемаитре ЈФ. Гаиллард ЈМ, плус 110 других. Различите стопе старења код ектотермних тетрапода пружају увид у еволуцију старења и дуговечност. Наука. 2022;376:1459–66.

19. Беркел Ц, Цацан Е. Анализа дуговечности код Цхордата идентификује врсте са изузетном дуговјечношћу међу таксонима и указује на еволуцију дужих животних векова. Биогеронтол. 2021;22:329–43.

20. Старк Г, Тамар К, Итесцу И, Фелдман А, Меири С. Хладне и изоловане ектотерме: покретачи дуговечности рептила. Биол Ј Линн Соц. 2018;125:730–40.

21. да Силва Р, Цонде ДА, Баудисцх А, Цолцхеро Ф. Споро и занемарљиво старење међу Тестудинима доводи у питање еволуционе теорије старења. Наука. 2022;376:1466–70.

22. Цхарлесвортх Б. Фисхер, Медавар, Хамилтон и еволуција старења. Генетика. 2000;156:927–31.

23. Зиммерман ЛМ, Вогел ЛА, Бовден РМ. Разумевање имуног система кичмењака: увиди из рептилске перспективе. Ј Екп Биол. 2010;213:661–71.

24. Зиммерман ЛМ. Гмазовска перспектива имунитета кичмењака: 10 година напретка. Ј Екп Биол. 2020;223(Пт 21):јеб214171.

25. Палациос МГ, Ганглоф ЕЈ, Рединг ДМ, Брониковски АМ. Генетска позадина и термално окружење различито утичу на онтогенезу имуних компоненти током раног живота ектотермног кичмењака. Ј Аним Ецол. 2020;89:1883–94.

26. Фиелд ЕК, Хартзхеим А, Терри Ј, Давсон Г, Хаидт Н, Неуман-Лее ЛА. Рептилска урођена имунологија и екоимунологија: шта знамо и куда идемо? Интегра Цомп Биол. 2022;62:1557–71.

27. Палациос МГ, Брониковски АМ. Варијације имунитета током трудноће сугеришу трошкове репродукције специфичне за имунолошку компоненту код живородне змије са различитим стратегијама животне историје. Ј Екп Зоол Део А. 2017;327:513–22.

28. Брониковски АМ, Меисел РП, Бига ПР, Валтерс ЈР, Манк ЈЕ, Ларсцхан Е, ет ал. Старење специфично за пол код животиња: перспектива и будући правци. Агинг Целл. 2022;21:е13542.

29. Реед ТЕ, Круук ЛЕ, Ванлесс С, Фредериксен М, Цуннингхам ЕЈ, Харрис МП. Репродуктивно старење код дуговечне морске птице: стопе опадања перформанси у касном животу повезане су са различитим трошковима ране репродукције. Ам Нат. 2008;171:Е89–Е101.

30. Варнер ДА, Миллер ДА, Брониковски АМ, Јанзен ФЈ. Вишедеценијски теренски подаци откривају да корњаче преживљавају у дивљини. Проц Натл Ацад Сци УС А. 2016;113(23):6502–7.

31. Реинке БА, Миллер ДАВ, Јанзен ФЈ. Шта су нас дугорочне теренске студије научиле о динамици становништва? Анн Рев Ецол Евол Сис. 2019;50(1):261–78.

32. Зиммерман ЛМ, Бовден РМ, Вогел ЛА. Црвеноухе корњаче не реагују на имунизацију хемоцијанином из кључаонице, али имају висок ниво природних антитела. ИСРН Зоол. 2013а;2013:1–7.

33. Иверсон ЈБ. Неуспех регрутовања посредством климе у популацији корњача и његов утицај на северне границе дистрибуције. Цхелониан Цонс Биол. 2022;21(2):181–6.

34. Гибсон ЦВД, Хамилтон Ј. Популациони процеси у великом биљоједном рептилу: Џиновска корњача атола Алдабра. Оецологиа. 1984;61:230–40.

35. Миллер ДАВ, Јанзен ФЈ, Феллерс ГМ, Клееман ПМ, Брониковски АМ. Биодемографија ектотермних тетрапода пружа увид у еволуцију и пластичност образаца морталитета. У: Веинстеин М, Лане МА, уредници. Социјалност, хијерархија, здравље: компаративна биодемографија. Васхингтон ДЦ: Натионал Ацадемиц Пресс; 2014. стр. 295–313.

36. Реинке БА, Хоекстра Л, Брониковски АМ, Јанзен ФЈ, Миллер ДАВ. Заједничка процена раста и преживљавања на основу података о обележавању и поновном хватању ради побољшања процена старења у дивљим популацијама. Екологија. 2020;101(1):е02877. хттпс://дои.орг/10.1002/еци.2877.

37. Кеевил, МГ 2020. Заједничка процена раста и преживљавања на основу података марк–поновног хватања ради побољшања процена старења у дивљим популацијама: коментар. Екологија е03232. хттпс://дои.орг/10.1002/еци.3232.

38. Брониковски АМ, Реинке БА, Хоекстра Л, Јанзен ФЈ, Миллер ДАВ. Заједничка процена раста и преживљавања на основу података марк-поновног хватања ради побољшања процене старења у дивљим популацијама: одговор. Екологија. 2022:103:е03571. хттпс://дои.орг/10.1002/еци.3571.

39. Цаиуела Х, Акани ГЦ, Хема ЕМ, Енианг ЕЕ, Амади Н, Ајонг СН, ет ал. Животна историја и процеси морталитета зависни од старости код тропских гмизаваца. Биол Ј Линн Соц. 2019;128:251–62. 40. Гибонс ЈВ. Зашто корњаче живе тако дуго? Биосциенце. 1987;37:262–9.

41. Цонгдон ЈД, ван Лобен Селс РЦ. Односи репродуктивних особина и величине тела са постизањем полне зрелости и старости код Бландингових корњача (Емидоидеа бландингии). Ј Евол Биол. 1993;6:547–57.

42. Миллер ЈК. Бежање од старења: демографски подаци тропрсте корњаче (Террапене Царолина Триунгуис). Екп Геронтол. 2001;36(4–6):829–32.

43. Молл ЕО. Репродуктивни циклуси и адаптације. У: Харлесс М, Морлоцк Х, уредници. Корњаче: перспективе и истраживања. Малабар, Флорида: Џон Вајли и синови; 1979. п. 305–20.

44. Иверсон ЈБ, Линдеман ПВ, Ловицх Ј. Разумевање репродуктивне алометрије у корњачама: клизав нагиб. Ецол Евол. 2019;9:11891–903.

45. Иверсон ЈБ. Цхрисемис пицта беллии (западна сликана корњача). Дуговечност. Херпетол Рев. 2022;53:484.

46. ​​Литзгус ЈД. Полне разлике у дуговечности пегаве корњаче (Цлеммис гуттата). Цопеиа. 2006;2006:281–8.

47. Ернст ЦХ. Раст пегаве корњаче (Цлеммис гуттата). Ј Херп. 1975;9:313–8.

48. Бровн ДЈ, Сцхраге М, Риан Д, Моен РА, Нелсон МД, Буецх РР. Глиптемис инсцулпта (дрвена корњача) дуговечност у дивљини. Херпетол Рев. 2015;46:243–4.

49. Иверсон ЈБ, Смитх ГР, Реттиг ЈЕ. Величина тела, раст и дуговечност корњаче са северне карте (Граптемис геограпхицал) у Индијани. Ј Херп. 2019;53:297–301.

50. Мунсцхер Е, Цампбелл К, Хауге ЈБ, Хоотман Т, Осборне В, Буттерфелд БП, ет ал. Псеудемис форидана пенинсуларис (полуострвни Цоотер) и Псеудемис нелсони (Флорида црвено-трбушасти Цоотер). Дуговечност. Херпетол Рев. 2020; 51:111–3.

51. Левис ЕЛ, Иверсон ЈБ. Террапене орната (китњаста корњача). Дуговечност. Херпетол Рев. 2018; 49:530.

52. Левис ЕЛ, Иверсон ЈБ, Смитх ГР, Реттиг ЈЕ. Величина тела и раст клизача са црвеним ушима (Трацхемис сцрипта) на северној ивици његовог опсега: да ли важи Бергманово правило? Херп Цонсерв Биол. 2018;13:700–10.

53. Цуртин АЈ, Зуг ГР, Спотила ЈР. Дуговечност и стратегије раста пустињске корњаче (Гопхерус агассизии) у две америчке пустиње. Ј Арид Енвирон. 2009;73:463–71.

54. Медица ПА, Нуссеар КЕ, Ескуе ТЦ, Саетхре МБ. Дугорочни раст пустињских корњача (Гопхерус агассизии) у популацији јужне Неваде. Ј Херпетол. 2012;46:213–20.

55. Клеин СЛ. Хормони и системи парења утичу на полне и врсте разлике у имунолошкој функцији међу кичмењацима. Бехав Проц. 2000;51:149–66.

56. Клеин СЛ. Хормонски и имунолошки механизми који посредују у полним разликама у инфекцији паразитима. Парасите Иммунол. 2004;26:247–64.

57. Фоо ИЗ, Накагава С, Рходес Г, Симмонс ЛВ. Ефекти полних хормона на имунолошку функцију: мета-анализа. Биол Рев. 2007;92:551–71.

58. Келли ЦД, Стоехр АМ, Нунн Ц, Смитх КН, Прокоп ЗМ. Сексуални диморфизам у имунитету код животиња: мета-анализа. Ецол Летт. 2018;21:1885–94.

59. Јанзен ФЈ, Паукстис ГЛ. Одређивање пола у животној средини код рептила: екологија, еволуција и експериментални дизајн. К Рев Биол. 1991;66(2):149–79.

60. Лопез-Перез ЈЕ, Меилан ПА, Гоесслинг ЈМ. Сексуална трговина урођеним и стеченим имуним системима Стернотхерус минор. Ј Екп Зоол. 2021;333:820–8.

61. Зиммерман ЛМ, Паитз РТ, Вогел ЛА, Бовден РМ. Варијације у сезонским обрасцима урођеног и адаптивног имунитета код клизача са црвеним ушима (Трацхемис сцрипта). Ј Екп Биол. 2010;213:1477–148358.

62. Зиммерман ЛМ, Цлаирардин СГ, Паитз РТ, Хицке ЈВ, ЛаМагделеине КА, Вогел ЛА, ет ал. Хуморални имуни одговори одржавају се са годинама код дуговечне ектотерме, црвеноухе клизне корњаче. Ј Екп Биол. 2013б;216:633–40.

63. Фреедберг С, Греивес ТЈ, Еверт МА, Демас ГЕ, Беецхер Н, Нелсон ЦЕ. Окружење инкубације утиче на развој имуног система код корњаче са одређивањем пола из околине. Ј Херпетол. 2008;2008(42):536–41.

64. Лее КА. Повезивање имунолошке одбране и животне историје на нивоу појединца и врсте. Интегр Цомп Биол. 2006;46:1000–15.

65. Схелдон БЦ, Верхулст С. Еколошка имунологија: скупа одбрана од паразита и трговина у еволуционој екологији. Трендови Ецол Евол. 1996;11:317–21.

66. Палациос МГ, Цунницк ЈЕ, Брониковски АМ. Сложена интеракција стања, животне историје и преовлађујућег окружења обликује имунолошку одбрану змија у дивљини. Пхисиол Биоцхем Зоол. 2013;86:547–58.

67. Иверсон ЈБ. Гнежђење и родитељска брига у корњачи, Киностернон фавесценс. Цан Ј Зоол. 1990;68:230–233.

68. Лицхт П. Ендокрини обрасци у репродуктивном циклусу корњача. Херпетологица. 1982;38:51–61.

69. Грахам СП, Вард ЦК, Валкер ЈС, Стерретт С, Мендонца МТ. Сексуални диморфизам и сексуалне варијације репродуктивних хормона у Пасцагоула Мап Туртле, Граптемис гиббонс. Цопеиа. 2015;103:42–50.

70. Схелби ЈА, Мендонца МТ, Хорне БД, Сеигел РА. Сезонске варијације у репродуктивним стероидима мужјака и женки корњача са жутим мрљама, Граптемис фавимацулата. Ген Цомп Ендоцринол. 2000;119:43–51.