Симултано ХПЛЦ одређивање хидрофилних средстава за избељивање у козметичким производима

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791

Миав-Линг Цханг а, Цхур-Мин Цханг б,*

Апстрактан

Метода течне хроматографије високих перформанси за квантификацију четири најчешће коришћена хидрофилнаизбељивањеагенс*/гликолна киселина (ГА), аскорбинска киселина (АА),арбутин(АРТ) и Мг аскорбил фосфат (МАП) је развијен. Изократско одвајање је изведено коришћењем Ц18 колоне са агенсом јонски пар као мобилном фазом. Аналити су детектовани апсорпцијом ултраљубичастог светла на таласној дужини од 220 и 240 нм, респективно. Утврђено је да су калибрационе криве линеарне у 8.0-36 мг/мл (ГА), 10.0-300 мг/мл (АА и АРТ) и 5.6-451 мг/мл ( МАПА). Коефицијент корелације анализе линеарне регресије био је са опсегом 0.9974-0.9997. Добијаци четири аналита били су између 94,8 и 100,1 процената, а прецизност ове методе била је боља од 6,9 процената релативне стандардне девијације (РСД) (н=3). Утврђено је да се АА разграђује у воденом раствору. Да би били сигурни да је АА стабилан током ХПЛЦ анализе, сви аналити су растворени у дестилованој води и ови раствори су прочишћени гасом азота да би се уклонио кисеоник и чувани на 25 8Ц. Резултати тестирања показују да је процедура брза, једноставна, селективна метода и да је погодна за рутинску анализу комерцијалнихкозметика.# 2003 Елсевиер БВ Сва права задржана.

Кључне речи: козметички производ; Хидрофилно средство за избељивање; Гликолна киселина; Аскорбинска киселина; Арбутин; Мг аскорбил фосфат; ХПЛЦ

Цистанцхе хербаје природно средство за избељивање.

1. Представљање

Западњаци сматрају препланулу кожу здравом и лепом. Напротив, светла кожа се у оријенталним земљама сматра лепом. Због тога су лосиони за избељивање веома популарни у оријенталу. Примењују се за избељивање коже. Хемијски пилинг се обично користи у клиничком лечењу оштећене коже лица која настаје услед акни, мелазме, обичних брадавица и сл. У овој техници,козметичкипроизводи који садрже хемотерапеутско средство наносе се на кожу ради стимулисања обнављања ћелија коже. Боја коже постаје светлија. Стога се ово хемотерапеутско средство назива и аизбељивањеагент [1-6]. Пријављено је да средство за избељивање као што је гликолна киселина (ГА), једна од хидрокси киселина, повећава хидратацију коже и стога даје глаткији изглед, што резултира мање линија лица и бора [7,8]. Постоје две врсте средстава за избељивање: липофилна средства за избељивање и хидрофилна средства. Примери липофилних средстава за избељивање су којична киселина, салицилна киселина, аскорбилпалмитат, азелаична киселина и адапален. Примери хидрофилних средстава за избељивање су гликолна киселина (ГА), аскорбинска киселина (АА),арбутин(АРТ), и магнезијум аскорбил фосфат (МАП). Хидрофилна средства за избељивање се овде проучавају јер њихове поларне групе имају слаб афинитет према Ц18 колони која се користи у ХПЛЦ и тешко их је раздвојити у ХПЛЦ. Користили смо метод јонског пара да решимо овај проблем.

Хемијске структуре и максималне концентрације ових хидрофилнихизбељивањеагенси су дати у табели 1. На Тајвану не постоји ограничење за концентрацију ГА и АА који се користе у козметичким производима. АРТ се, међутим, може користити до 7 теж. процента и МАП до 3 теж. проценат .Иако не постоји ограничење за концентрацију ГА који се користи у козметичким производима, америчка администрација за храну и лекове је известила да ово средство за избељивање може изазвати тешке опекотине или отицање коже [9]. Уопштено, око 30-40 теж. проценат ГА се користи укозметиказа употребу у козметичким салонима и вишој концентрацији, 50-70теж. процената, користи се у козметичким производима које користе лекари [10].

Сврха ове студије је развој методе квантитативне анализе за прецизно мерење нивоа избељивача у козметичким производима. Овај посао је од великог значаја за јавну безбедност. Иако постоји много публикација које описују процену избељивача у козметичким формулацијама [11-16], методе симултане квантитативне анализе још увек нису објављене у литератури. Ова студија се односи на аналитичку методу, која може детектовати и истовремено квантификовати хидрофилнеизбељивањеагенти.

Хидрофилниизбељивањеагенси нису увек стабилни у воденом раствору. Они су подвргнути оксидацији. Иако је објављено неколико студија о стабилности АА [17-19], окружење АА у овим извештајима није погодно за ХПЛЦ за истовремено одређивање хидрофилних избељивача. Важно је осигурати да су хидрофилни агенси за избељивање стабилни током анализе ради тачности резултата.

2. Експериментални

2.1. Реагенси и стандарди

ГА, АА, АРТ и МАП и реклама су купљени од Алфа Цо. (Америцан), АлфаЦо. (Американац), Вако (Јапанац) и Липо. Цо. (амерички), респективно. Метилпарабен и У-13 се добијају од Индуцхема. Цо. (Швајцарска). Лимунска киселина, тетрабутиламонијум хидроксид (ТБАХ), сорбитол, фосфорна киселина и калијумдихирофосфат су купљени од АлдрицхЦо. (Американац). Све хемикалије су биле аналитичке класе реагенса. Комерцијалникозметичкипроизводи, од различитих произвођача, купљени су у малопродајним објектима иу локалној апотеци. Растварачи и вода су филтрирани кроз мембрану 0.45 мм и дегазирани.

2.2. Инструментација

ХПЛЦ апарат (Хитацхи Цо., Јапан) се састојао од модуларног хроматографског система. На који је уграђена пумпа (модел И-7100), УВ детектор (модел И-7420; променљива таласна дужина) и вентил за убризгавање са петљом за узорке од 25 мл (Модел7725, Рхеодине, Цотати, УС). Прикупљање и обрада података обављени су помоћу персоналног рачунара коришћењем СИСЦ софтвера (Тајван). Ињекције узорка вршене су шприцем од 25 мл (Хамилтон, Швајцарска). Коришћена је 5 мм, 250 мм /4,60 мм ИД А Мигхтисил РП-18ГП колона од нерђајућег челика.

2.3. Хроматографски услови

Хроматографска анализа је спроведена методом изократске реверзне фазе са једном колоном. У методи јонског упаривања, мобилна фаза је била 0.{{10}}05 М раствор пуфера калијум дихидро фосфата укључујући три хемикалије: ТБАХ, метанол и фосфорну киселину. Количина ове три хемикалије има велики утицај на раздвајање и резолуцију спектра ХПЛЦ. Концентрација ТБАХ је варирала од 1 до 10 мМ; метанола од 1 до 10 вол. проценат . Различита количина фосфорне киселине је додата у пуферски раствор да би се подесиле пХ вредности од 2,5 до 5,0. Резултати тестирања ће омогућити да се одабере одговарајућа мобилна фаза за добру резолуцију. Све покретне фазе су филтриране кроз Миллипоре филтер, величине пора 0,45 мм, и дегазиране соникацијом пре употребе. Коришћена је брзина протока од 1,1 мл/мин. Аналити су детектовани УВ апсорпцијом на 220 или 240 нм. Идентитет четири састојка је додељен хроматографијом са аутентичним стандардима. Квантификација је извршена интеграцијом пика применом методе екстерне стандардизације.

цистанцхе бенефитсофефикасно избељивање коже

2.4. Калибрациона крива

Основни раствори су припремљени тачним одмеравањем агенаса и затим њиховим растварањем у води. Пет радних раствора од четири аналита је свеже припремљено од њихових основних раствора у односу {{0}} са дестилованом водом. Одговарајуће разблаживање ових радних раствора дало је концентрације од 10/300 мг/мл, осим за ГА и МАП, где су концентрације биле 8.0-36.0 мг/мл и 5,6/451 мг/мл, респективно. Калибрационе криве су конструисане цртањем вршних површина сваке компоненте у односу на концентрацију и дате вредности нагиба, заједно са коефицијентом пресјека и корелације за сваку калибрациону криву. Калибрационе криве су биле за квантификацију четириизбељивањеагенти у четири узорка комерцијалнихкозметика.

2.5. Студија опоравка

Узорак креме који садржи бризбељивањеагенси су коришћени као контрола у студији опоравка. Различита количина четири хидрофилна средства за избељивање, ГА, АА, АРТ и МАП, додата је овој контролној креми. Концентрација је дата у табели 4. Око 1 г сваког припремљеног узорка креме је извагано у стаклену боцу и додато је 30 мл дестиловане воде, а затим је боца потопљена у ултразвучно купатило 15 минута, термостатирано на 25 8Ц. Добијени раствор је допуњен до запремине од 100 мл са дестилованом водом, а затим је филтриран и деоксигенисан са Н2 око 3 мин, а затим запечаћен Бакелит капом и силиконским прстеном.

3. Резултати и дискусија

3.1. Хроматографија и резолуција

Структура четириизбељивањеагенси, ГА, АА, АРТ и МАП, приказани су у табели 1. Сви су веома поларни молекули. За поларне аналите, метанол или ацетонитрил се обично користи као компонента мобилне фазе у Ц18 колони или цијано-пропил колони ХПЛЦ. Међутим, ко-елуирање ових поларних аналита је нађено када су коришћени метанол или ацетонитрил. Стога је немогуће раздвојити ове аналите. Да би се решио овај проблем ко-елуције, коришћен је метод јонског упаривања за смањење њиховог поларног карактера да би се добило прихваћено време задржавања. Поред тога, важно је пронаћи одговарајући услов раздвајања за истовремену анализу четири аналита укозметичкипроизводи. Да би се добило оптимално-маничко стање, овде се разматра утицај мобилне фазе и њене пХ вредности. Добијени резултати су илустровани на слици 1. Концентрација ТБАХ у мобилној фази варирала је од 1 до 10 мМ. Израчунати фактор капацитета опада како концентрација ТБАХ расте (видети слику 1(а)). Овај пад вредности фактора капацитета је оштар за МАП, али веома благ за ГА, АРТ и АА. Значајна разлика у фактору капацитета између МАП-а и осталих може бити због јаког јонског карактера МАП-а. Мања разлика у фактору капацитета даје разумно време задржавања у ХПЛЦ-у. Због тога је концентрација ТБАХ изабрана да буде 10 мМ за мобилну фазу. Утицај количине метанола на фактор капацитета приказан је на слици 1(б). Слични резултати су пронађени онима за ТБАХ. Већа концентрација метанола, мања разлика у фактору капацитета и краће време задржавања у ХПЛЦ. У овом случају је изабрано десет одсто запреминског метанола.

Различита количина фосфорне киселине је додата горе поменутом пуферском раствору за промену пХ вредности од 2,5 до 5.0. При пХ вредности од 5.0, у резултатима хроматографа примећени су широки и вишеструки пикови. Врхови хроматографа за ГА, АА и АРТ се преклапају један са другим. За разлику од претходних резултата, фактор капацитета расте са повећањем пХ вредности за МАП (видети слику 1(ц)). Промена фактора капацитета због пХ вредности је веома мала за ГА, АА и АРТ. Неопходно је одабрати пХ вредност која даје довољно разлика у вредностима фактора капацитета за добру резолуцију у ХПЛЦ. Из ових разлога је изабрана пХ вредност једнака 2,5. Као резултат, погодна мобилна фаза за ХПЛЦ анализу је 0.005 М раствор пуфера калијум-дихидрофосфата који садржи 10 мМ ТБАХ, 10 вол. проценат метанола и фосфорне киселине. Фосфорна киселина је коришћена за подешавање пХ вредности пуферског раствора на 2,5.

3.2. Одређивање таласне дужине за УВ детектор

УВ спектар овихизбељивањеагенси растворени у мобилној фази добија се коришћењем УВ спектрофотометра. Максимални пик апсорпције је на 220 нм за ГА, на 243 нм за АА, на 227 нм за АРТ и на 238 нм за МАП. На 240 нм, УВ детектор има високу осетљивост у детекцији АА и МАП, али веома ниску осетљивост за ГА и АРТ (видети слику 2(б)). Док су на 220 нм, јасни пикови на ХПЛЦхроматографу су приказани за сва четири средства за избељивање (видети слику 2(а)). Да би се добила боља осетљивост за све аналите, таласна дужина детектора је подешена на 220 нм за детекцију и квантификацију четири аналита. Процедура је релативно брза са аналитичким временом рада од 12,1 мин на собној температури (око 26 8Ц).

3.3. Студија стабилности средстава за избељивање

АА се разлаже до дехидроаскорбинске киселине (ДХА) када се раствори у воденом раствору. Због тога је важно одржавати аскобинску киселину стабилном током анализе ради тачности резултата. Фернандес ет ал. известили су да су главни фактори који утичу на разградњу кисеоник и температура [19]. У њиховој студији, деградација је била значајна за 1 х, а утицај пХ вредности раствора на разградњу помињан је само при пХ 5.0 и 5.6. У нашој студији, стабилност АА је процењена коришћењем промене концентрације АА у различитим условима животне средине као што су третирани или необрађени раствори са Н2, пХ вредност и температура. Што је дуже време за значајну промену, то је аскорбинска киселина стабилнија.

Резултати, сумирани у табели 3, показују снажну корелацију између стабилности и третираног или нетретираног раствора са Н2. Губитак нетретираног раствора АА је бржи од третираног раствора. Као што је приказано у табели 3, при 10 8Ц и пХ2, време потребно за 10 процентну деградацију АА је било око 10 х без третмана и око 48 х за третирани раствор. Ово може бити због фактора да је за оксидацију доступно много мање кисеоника. Примећено је да је, у присуству кисеоника и на 25 8Ц, ниво АА од 8,7 и 71,2 процената после 10 х примећен за пХ 6,9 и 2,0. Овај резултат се може објаснити већом количином дисоцираног АА на пХ 6,9 и овај облик би требало да буде мање стабилан од недисоцираног облика [19]. Напротив, у одсуству кисеоника и на 25 или10 8Ц, водени раствор АА је много стабилнији при пХ 6,9. Разлог да АА буде стабилнији још није даље истражен. У односу на температуру раствора, у нетретираним растворима, АА је мање стабилан на вишој температури (25 8Ц) него на нижој температури (10 8}Ц). Међутим, за третиране растворе, водени раствор АА је стабилан и није под утицајем температуре.

3.4. Валидација за линеарност и тест за прецизност

Користећи описане хроматографске услове, постигнута је разумна резолуција између ових аналита и осталих једињења укозметичкипроизвод. Метода је валидирана за линеарност и прецизност. За израчунавање калибрационих кривих за сваку је примењено подешавање линеарне кривеизбељивањеагент. Резултати су дати у табели 4. Одлична линеарност је добијена у распону од 5,6 до 451 мг/мл за све стандарде осим за ГА за који је опсег био од 8 до 36 мг/мл. Коефицијент корелације је у распону од 0 .9974 до 0.9997. Прецизност методе је израчуната као релативна стандардна девијација (РСД, н{{10}}) тестова који садрже четири хидрофилна избељивача у истом опсегу концентрација. Утврђено је да се динарски распон креће од 0,3 до 6,43 одсто.

3.5. Опоравак

Крема која садржи бризбељивањеагенси су коришћени као контрола у студији опоравка. Мале количине четири агенса за избељивање додате су овој контролној креми. ХПЛЦ хроматографија показује да нема детектованог УВ апсорпционог врха за контролну крему (видети Слику 3(а)) и четири пика апсорпције су пронађена за крему за узорке која садржи ова четири средства за избељивање. На сл. 3(б), пик 1 је максимум УВ апсорпције за ГА; пик 2 за АА; врх 3 за АРТ; врх 4 форМАП. Свако средство за избељивање има своје време задржавања. Овај знак ће се касније користити за идентификацију ових агенаса за избељивање. Резултати су сумирани у табели 2. Опсег од 94-100 процената опоравка за четири агенса је добијен и при ниским и високим концентрацијама. Коефицијенти варијансе израчунати из три понављања били су мањи од 6,9 процената. ХПЛЦ хроматограми четири аналита екстрахована из експерименталне формулације су приказани на слици 3 и није примећена никаква интерференција.

цистанцхе плантимапротив старења, антиоксиданс, иефекти неге коже

3.6. Апликација

Четири комерцијално доступнакозметичкипроизводи су анализирани. Суизбељивањекрема (козметички број 1), гел за избељивање Ц20 (козметички број 2), есенцијални лосион (козметички број 3) и лосион за пилинг (козметички број 4). Ова козметика је испитана поступком описаном у овој студији. Хроматографи за ова четири козметичка средства су дати на слици 4(а/д). Хроматограф 4 (а) даје мали апсорпциони врх пика 4, односно козметички број 1 садржи МАП. Хроматограф 4 (б) показује врх пика 2, што је индикација да козметички број 2 садржи АА. Са хроматографа 4 (ц) и (д), АРТ је идентификован у козметичком броју 3, а и ГА и АА су идентификовани у козметичком броју 4. Постоји неозначени вршни хроматограф 4 (д). Овај максимум УВ апсорпције има време задржавања дуже него за пик 3, али много краће него за пик 4. Јасно је да овај необележени максимум апсорпције није због агенаса за избељивање већ због других састојака инкозметичког броја 4. Квантификацију ових агенаса за избељивање је извршио интеграција пикова у хроматографији применом методе екстерне стандардизације. Ниво средстава за избељивање у ова четирикозметикадат је у табели 5. Напомиње се да добијени резултати потврђују тачност и показују усклађеност са означеном тврдњом.

4. Закључак

Развијени ХПЛЦ тест је једноставан и брз за истовремену анализу хидрофилнихизбељивањеагенти. Фактор капацитета је коришћен да се изабере одговарајућа мобилна фаза за ХПЛЦ. Требало је да изаберемо услов који даје мању разлику у фактору капацитета за разумно време задржавања. Битно је да изабрани услов даје довољно разлика у вредностима фактора капацитета за добру резолуцију у хроматографу ХПЛЦ. Као резултат, погодна мобилна фаза за ХПЛЦ анализу је 0.005 М калијум дихидрофосфатни пуферски раствор који садржи 10 мМ ТБАХ, 10 вол. проценат метанола и фосфорне киселине. Фосфорна киселина је коришћена за подешавање пХ вредности пуферског раствора на 2,5. Боља таласна дужина детекције заизбељивањеагенса је на 220 нм за ХПЛЦ. Поред тога, добијен је погодан метод за стабилизацију АА у аналитичком поступку. Што је важно за тачност резултата.

цистанцхе тубулосакришке

Кликните на слику и добијте више информација