Студија о ефекту Ацтеосиде (активни састојак на ЦИСТАНЦХЕ ДЕСТЕРИЦОЛА) на НАФЛД-у индуковање аутофагије

2 резултата

2.1 Поређење ЛЦ 3- ⅱ нивоа експресије протеина у ћелијама хепг2 третира сеАЦТ и ЕЦХ релативни израз ЛЦ 3- ⅱ протеинаУ ћелијама Хепг2 третиране бафа1 (0. 67 ± 0. 0 4) је било знатно веће од тога у празној контролној групи (0. 41 ± 0 2). Релативни израз ЛЦ {{1 {{2 {28}}}}}} ⅱ протеина у ћелијама Хепг2 у групи Рапамицин + Бафа1 (1,24 ± {{3 {34}}}. {{36} 6) је било веће од тога у рапамицинској групи (0. 28 ± {{4 {42}}}}. 02). Израз ЛЦ 3- ⅱ протеина у ћелијама Хепг2 у групи ЕЦХ + БАФА1 и АЦТ + БАФА1 Група [0.43 ± 0,02 и 1,36 ± 0,11, респективно] били су значајно виши од оних у АЦХ Групи и АЦТ Гроуп [(0,18 ± 0,01 и 0,28 ± 0,02, респективно) и разлике су биле статистички значајне (П<0.05).

ТЦМ Херцегови цистанце за заштиту јетре

2.2 Поређење ЛЦ 3- ⅱ нивоа експресије протеина у ћелијама хепг2 третира се различитим концентрацијама акта

The LC3-Ⅱ protein expression levels of HepG2 cells in the CON group (0.79±0.07) were compared with those in the STA group (0.50±0.04), with no significant difference (P>{{{{1 {14}}}}}}}}. 0 5); ЛЦ 3- ⅱ нивоа експресије протеина хепг2 ћелија у бафа1 у комбинацији са 25, 5 0 и 1 0 Групима уМОЛ / Л (1,17 ± {33}. 97 ± 0,25, респективно је било знатно веће од оних у 25, 50 и 100 ммол / Л Ацт групе (0,38 ± 0,09, 0,35 ± 0,18 и 0,30 ± 0,15, односно), са значајним разликама (стр<0.05). The LC3-Ⅱ protein expression level of HepG2 cells in the 50 μmol/L ACT group was the highest. See Figure 1.

Напомена: А. Имуноблоттирање протеина; Б. Резултати полу-квантитативног анализе; у поређењу са групом акта без бафа1, АП<0.05.
Слика 1 Поређење ЛЦ 3- ⅱ нивоа експресије протеина у ћелијама хепг2 третира се различитим концентрацијама акта

2.3 Поређење одрживости хепг2 ћелија третираних различитим концентрацијама акта за 24 и 48 х

Вриједности ГЕПГ2 ћелија након интервенције са 0, 2 {{1}, 4 0 и 1 0. {24}. 0. 99 ± 0. 0. 99 ± {43}}. 19, 1. 0 ± 0. 12, 0. 94 ± {61}}. 94 ± 0. 20, респективно; и вредности ћелија хепг2 након интервенције током 48 х су 3,06 ± 0,27, .96 ± 0,27, 2,88 ± 0,27, 3,01 ± 0,15 и .09 ± 0,22, односно. Није било значајне разлике у вредностима хепг2 ћелија након 24 и 48 х интервенције са различитим концентрацијама акта (ф =0. 213, 0,213, п =0. 96, 0,36). Погледајте слику 2.

Напомена: А. Хепг2 ћелије су третиране различитим концентрацијама акта за 24 х; Б. Хепг2 ћелије су третиране различитим концентрацијама акта 48 х.

Слика 2 од вредности на 570 нМ након 24 и 48 х третмана са различитим концентрацијама акта

2.4 Поређење нивоа ТГ-а и уљане црвене боје у ин витро ћелијском моделу Нафлд-а након интервенције акта

ТГ ниво хепг2 ћелија у групи модела (34,15 ± 1,90) био је значајно већи од оне у празној контролној групи (14.17 ± 2,74) и групи за интервенцију акта (19.11 ± 1,68), а разлике су биле статистички значајне (стр<0.05). The number of stained lipid droplets in HepG2 cells in the ACT intervention group was significantly reduced (see Figure 3).

Напомена: А. ТГ ниво; Б. Уље црвено О мрље (20 ×); у поређењу са групом модела, АП<0.05.
Слика 3 Поређење нивоа ТГ-а и уља црвеног боје у Нафлд ин витро модел ћелије након поступања са актом

2.5 Поређење аутофагозома и липидних капљица Након третмана акта у поређењу са празном контролном групом, липидне капљице хепг2 ћелија у групи рапамицин у групи за интервенцију у рапамицини су значајно повећани, а ЛЦ3 Аутофагозоми хепг2 ћелија у групи за интервенцију чине се значајно и ко-локализовали се значајно и ко-локализовали се значајно и ко-локализоване липидне групе у простору. Погледајте слику 4.

3 дискусија

НАФЛД је најчешћа хронична болест јетре на свету, која чини око 1/4 укупне популације на свету и постала је глобални проблем јавног здравља. Прехрани је главни фактор који вози нафлд. Прекомеран унос хранљивих састојака по ћелијама јетре изазива прекомјерно депоновање масти у ћелијама, што доводи до липотоксичних реакција, као што су ћелијски стрес (оксидативни стрес и ендоплазматски мрежни стрес), упала активирања и ћелијским апоптозом и накнадно изазивају низ промена у фенотиповима јетре, као што су инфламаторне стимулације и фиброза [{2}}] и фиброза [{2}}. Последњих година студије су показале да аутофагија игра важну улогу у спречавању развоја хуманог НАФЛД-а. Резултати детекције индекса повезаних са аутофагијом у језгри пацијената са НАФЛД и безалкохолним масним болестима јетре и јетрени прехрани и дијета са високим и дијетом високог масти, а да је аутофагијски процес блокиран, који је довео до масовног накупљања унутарћелијског накупљања унутарњака интрацелуларних капљицама са липидима [16]. Остале студије су показале да је након кључног гена 7 аутофагије хепатоцита посебно покуцало у мишевима хранило дијету са високом масноћом, ниво ТГ-а у мишу хепатоцити значајно је порастао [17]. Међутим, након прекомерне експресије АТГ7 гена или интервенције са индукторима аутофагије као што су рапамицин и карбамазепин, масна дегенерација у јетри миша значајно је смањена [{11}}].
Ово сугерише да се дегенерација масне јетре може значајно смањити побољшањем активности аутофагије јетре, пружајући ефикасну стратегију за лечење НАФЛД-а. Природни производи, као главни извор нове развоја лекова, широко се користе у превенцији и лечењу различитих болести јетре. As an excellent product commonly used in traditional Chinese medicine, Cistanche deserticola has attracted widespread attention for its pharmacological effects such as neuroprotection, immunomodulation, antioxidant, anticancer, and liver protection. До сада је више од 120 једињења изоловано са Цистанцхе Десертицола, укључујући фенилетаноидне гликозиде, терпеноиде и њихове гликозиде, лигнане и њихове гликозиде, олигосахариде, полиола и полисахарида [21]. Међу њима су фенилетаноидни гликозиди најпопуларнија класа једињења у активним састојцима Цистанце Десертицола. ЕЦХ и АЦТ су репрезентативна једињења Цистанцхе Десертицола фенилетаноидне гликозида, која имају позитивне ефекте у антиоксидантима, штитећи јетру, миокардни, нервне ћелије и побољшања меморије [22-23]. Међутим, не постоји релевантни извештај о литератури о томе да ли су ЦИСТАНЦХЕ ДЕСЕРТИЦОЛА фенилетаноидни гликозиди укључени у процес аутофагије у заштити јетре.

Аутофагија је процес само-деградације који је свеприсутан у телу. То је катаболички процес у којем аутофагосоми деградирају мобилни метаболички отпад. Процес аутофагија углавном укључује три процесе: аутофагија иницијација, аутофагична продужења и аутофагичка формација лизоса, које су углавном регулисане рапамицин циљним протеином и фосфатидилинозитолом -3 киназом сигнализирајућим путевима. Аутофагосоми су маркери ћелијске аутофагије. У процесу формирања аутофагосома, низ протеина повезаних са аутофагијом, укључујући АТГ5 ~ 12 и ЛЦ3 играју важну улогу. Стога је ова студија изградила систем за аутофагију, открио је ниво експресије протеина ЛЦ3 на молекуларном нивоу и проценио индукцијску способност аутофагије два фенилетаноидног гликозида ЦИСТАНСХЕ ДЕСТИЦООЛА. Резултати су показали да се након додавања баФа1 третмана на основу интервенције индуктора аутофагије рапамицин, интрацелуларни ЛЦ 3- ⅱ од хепг2 ћелија значајно повећано, што указује да систем за процену аутофагије може тачно проценити активност ликовца; Након што су исказни и акт третирани са Бафа1, израз ЛЦ 3- ⅱ протеина у Групима ЕЦХ2 у групи ЕЦХ + БАФА1 и АЦТ + БАФА1 Гроуп је био значајно већи од оних у АЕЦХ Групи и АЦТ Гроуп, и разлике биле су статистички значајне (П<0.05). However, since the autophagy process is very complex, it is easily changed by external environmental stimuli. Therefore, this study used BafA1 to block the autophagic flow, thereby more accurately evaluating the autophagy inducing ability of ECH and ACT. The results showed that after using BafA1 to block the autophagic flow, the intracellular autophagosomes could not be degraded in the autophagolysosomes, resulting in a significant increase in the overall autophagy level of the cells. After the intervention of rapamycin, Ech, and ACT in HepG2 cells, the LC3-Ⅱ protein expression levels of HepG2 cells in the rapamycin+BafA1 group and the ACT+BafA1 group were higher than those in the BafA1 group alone. Although the expression levels of HepG2 cells in the ECH+BafA1 group were significantly higher than those in the ECH group alone, the differences were statistically significant (P<0.05), the expression levels of LC3-Ⅱ protein in HepG2 cells were lower than those in the BafA1 group alone, indicating that ACT has a significant ability to induce autophagy in HepG2 cells. Therefore, this study took ACT as the research object and further studied its pharmacological activity in inducing autophagy and вршење заштите јетреи друге биолошке функције. Друго, сигурност је основно разматрање у развоју лекова. Да би се проценила сигурност акта, ова студија је даље тестирала ефекат акта о одрживости хепг2 ћелија. The results showed that the viability of HepG2 cells was almost unaffected by intervention with different concentrations of ACT, indicating that ACT can be used as a candidate drug to further study its pharmacological effects and molecular mechanisms.

Аутофаги је високо очувани биолошки процес у ћелијама, а незнатне промене у концентрацијама лекова ће утицати на ниво целуларних аутофагосома. Да би се додатно одредио оптимална концентрација АЦТ-а да би се добила формирање аутофагосома у ћелијама Хепг2, ова студија је користила различите концентрације акта у комбинацији са Бафа1 да би се третирале хепг2 ћелије и откривени ниво експресије ЛЦ 3- ⅱ протеина у ћелијама. Резултати су показали да је 50 μмол / л акта могло значајно повећати ниво аутофагосома у ћелијама хепг2. Стога је ова студија користила 50 ммол / л Ацт да интервенише у моделу Нафлд ћелије изграђеног ин витро и прелиминарно истражује однос између њеногзаштита јетрефункција и аутофагија.
Сродне студије на моделима ћелија Нафлд показала су да је након ин витро интервенције са слободним масним киселинама, ТГ нивоа хепг2 ћелија значајно се повећала, а у ћелијама се може јасно приметити агрегација масних капљичких капљица у ћелијама [{1}}]. У овој студији, 100 ммол / Л па је коришћен за интервенисање у ћелијама хепг2 ин витро 24 х. ТГ ниво хепг2 ћелија у моделу групе био је значајно већи од тога у празној контролној групи. Истовремено, агрегација капљица липида могла би се јасно посматрати у ћелијама, што указује да је модел НАФЛД ћелије успешно изграђен. Да би додатно посматрали ефекат акта на Нафлд Целл Модел, АЦТ-а 50 мМол / Л користи се за интервенирање модела НАФЛД ин витро, а ефекат акта о Нафлд-у је оцењен са детекцијом на нивоу ТГ-а и уљаним бојама. Резултати су показали да су након интервенције акта, ниво ТГ и број масних липида у ћелијама у хепг2 знатно нижи од оних у групи модела, што указује да активност смањује ТГ у моделу нафлд-а изазване на АЦТ-у. Да би додатно проучио однос између активности липида и ћелијске аутофагије чина, ова студија је користила ЛЦ 3- ⅱ специфична протеинска антитела и телесне флуоресцентне сонде за ко-матични аутофагози и липидне капљице. Примећено је да је број аутофагосома у ћелијама на хепг2 након интервенције акција значајно повећан у поређењу са контролном групом, која је била у складу са резултатима протеинских имуноблота у овој студији, даљње потврђивање да је активност која је индукује аутофагију у ћелијама за аутофагију у хепг2. Поред тога, након интервенције дроге, интрацелуларни аутофагози и липидни капљици су ко-локализовани, указујући на то да је ефекат чињења на побољшање ПА-индуковане Нафлд масне дегенерације може укључивати укључивање ћелијске аутофагије. Међутим, у моделу Нафлд ћелије, било да је дело да се акт врши њену фармаколошку активност смањења интрацелуларних нивоа ТГ-а кроз липофагијски пут, још увек треба да се додатно објашњава блокирањем интрацелуларног процеса аутофагије.
Укратко, међу два једињења фенилетанол гликозида Цистанце Десертицола, АЦТ има значајну способност индукције аутофагије у ћелијама Хепг2. У исто време, у ћелијском моделу је ћелије изазване патери изазване, ЦТ је значајно смањио ниво ТГ у ћелијама ХЕПГ2. Након акције интервенције, аутофагози и липидни капљице у ћелијама Хепг2 имали су одређени однос са ко-локализацијом, што указује да аутофагија може бити нови пут који је укључен у фармаколошки процес акта у погледу заштите јетре. Погледајте Слику 5. У наредним истраживањима, механизам деловања акције у спуштању липида ће се даље проучавати детаљима помоћу аутофагијских блокатора да поставе Фондација за будући нови развој лекова.