Потенцијал вакцина заснованих на дендритским ћелијама за модулацију популација урођених лимфоидних ћелија типа 3

Апстрактан:

Вакцине дендритичних ћелија (ДЦ) су врста имунотерапије која се ослања на комуникацију ДЦ са другим аспектима имуног система. ДЦ су моћне ћелије које представљају антиген укључене у активацију урођених имуних одговора и образовање адаптивног имунитета, што их чини идеалним метама за имунотерапије. Урођене лимфоидне ћелије (ИЛЦ) су релативно ново идентификоване у области имунологије и имају важну улогу у здрављу и болестима. Овде описане студије истраживале су комуникацију између ИЛЦ типа 3 (ИЛЦ3) и ДЦ користећи мишји модел вакцинације засноване на ДЦ. Уочене су локалне и системске промене у популацији ИЛЦ3 након примене ДЦ вакцине, а након изазивања ћелија меланома Б16Ф10, уочене су промене у популацији ИЛЦ3 у плућима. Интеракције између ДЦ и ИЛЦ3 треба даље истражити како би се утврдио потенцијал који би њихова комуникација могла имати у здрављу, болести и развоју имунотерапије.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

Кључне речи:

дендритске ћелије (ДЦ); урођена лимфоидна ћелија типа 3 (ИЛЦ3); урођена; комуникација

1. Представљање

Урођене лимфоидне ћелије (ИЛЦ) су хетерогена група леукоцита добијених из уобичајених лимфоидних прогениторних ћелија које имају кључне функције у развоју ткива, поправци и хомеостази. ИЛЦ су повезане са различитим инфламаторним болестима укључујући инфламаторну болест црева, псоријазу, астму и разне аутоимуне болести [1]. Обично се деле у три главне групе, тип 1 (ИЛЦ1), тип 2 (ИЛЦ2) и тип 3 (ИЛЦ3), на основу експресије фактора транскрипције, профила цитокина и специфичних фенотипских маркера [2]. Природне ћелије убице (НК) се понекад групишу као подскуп ИЛЦ1 због њихових сличности; међутим, показало се да НК ћелије имају различите карактеристике од ИЛЦ1 као што су експресије фактора транскрипције и цитолитичка активност које су их разликовале као сопствени подтип ИЛЦ [3]. Међутим, многи и даље сматрају НК ћелије подгрупом ИЛЦ1 [4]. Због сличних профила цитокина, фактора транскрипције и имунолошких функција, ИЛЦ (НК ћелије, ИЛЦ1, ИЛЦ2 и ИЛЦ3) се сматрају урођеним панданима компоненти адаптивног имуног система који одражавају цитотоксичне Т лимфоците, Тх1, Тх2 и Тх17 одговоре, респективно [4]. Међутим, за разлику од Т ћелија, њима недостају рецептори специфични за антиген [5].

ДЦ су урођени леукоцити који су критични у индукцији имунолошких одговора и толеранције. Имају рецепторе за препознавање образаца који препознају молекуларне обрасце повезане са патогеном и/или оштећењем и најефикасније су ћелије које представљају антиген [6]. Кроз презентацију антигена и секрецију цитокина, ДЦ могу диктирати судбину наивних Т ћелија и индуковати проинфламаторне одговоре или имуносупресију. Т ћелије се могу образовати да препознају антиген као опасан и нападну га или као неопасан и поприме толерогени фенотип [6]. ДЦ су такође укључени у активирање урођеног имунитета као и образовање адаптивног имунитета. Директним контактом или производњом различитих цитокина и растворљивих фактора, ДЦ могу активирати друге урођене леукоците и промовисати урођене имуне одговоре [7].

Моћ ДЦ-а је коришћена у имунотерапији као што су ДЦ вакцине. ДЦ вакцине се припремају изоловањем ДЦ од пацијента или изоловањем ДЦ прекурсора и добијањем ДЦ. Овим ДЦ-овима се манипулише ек виво, што укључује сазревање ДЦ-а на имуногени начин. ДЦ су такође оптерећени специфичним антигенима, на које ће вакцина имати за циљ да развије имуногене одговоре усмерене на [8]. ДЦ вакцине су имунотерапеутска платформа која користи предност способности ДЦ-а да образује адаптивни имуни систем да изазове антиген-специфичне одговоре, посебно антиген-специфичне цитотоксичне Т ћелије. Стога се већина истраживања вакцине ДЦ фокусирала на капацитет ДЦ да образују адаптивни имуни систем. Међутим, последњих година показало се да однос између ДЦ и НК ћелија има снажан утицај на антитуморски имунитет што је кључно за ефикасност ДЦ вакцинације [9–11]. Ово показује важну потребу да се истраже други односи између ДЦ и различитих урођених леукоцита и утицај који ове комуникације могу имати на ефикасност ДЦ вакцина. Пошто су НК ћелије део породице ИЛЦ и због блиске сличности ИЛЦ са Т ћелијама [5], циљ овде представљених студија био је да се испита потенцијални однос између ДЦ и другог члана породице ИЛЦ, ИЛЦ3. Користили смо платформу за ДЦ (моДЦ) вакцину изведену из моноцита где су ДЦ генерисани ек виво из ћелија прекурсора мишје коштане сржи. МоДЦ вакцине су најчешћи облик ДЦ вакцина јер их је, историјски гледано, било најлакше произвести [12].

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Кликните овде да видите производе Цистанцхе Енханце Иммунити

【Затражите више】 Е-пошта:cindy.xue@wecistanche.com / Вхатс Апп: 0086 18599088692 / Вецхат: 18599088692

ИЛЦ3 имају важне функције у цревној хомеостази, имунитету против екстрацелуларних бактерија и развоју лимфоидног ткива [5]. ИЛЦ3 се могу поделити у групе које се разликују по експресији површинских маркера и производње цитокина. Међутим, сви ИЛЦ3 изражавају РОР т [13]. Једна подгрупа ИЛЦ3 су ћелије индуктора лимфоидног ткива ИЛЦ3-које су важне у органогенези [14]. ИЛЦ3 се такође могу поделити на основу експресије природног рецептора цитотоксичности (НЦР), што је код мишева експресија НКп46 [15,16], а код људи, то је НКп44 [17,18]. Дакле, постоје НЦР+ и НЦР-ИЛЦ3 који имају разлике у својим функционалним капацитетима и фенотипским карактеристикама. На пример, сугерисано је да НЦР+ ИЛЦ3 производе ИЛ-22, али не и ИЛ-17, док НЦР− ИЛЦ3 могу да производе оба цитокина [19]. Међутим, у недавној студији Фианцетте ет ал., показало се да НЦР+ ИЛЦ3 могу да произведу ниску количину ИЛ-17 [20]. Ранкин и др. показао код мишева да НЦР+ ИЛЦ3 захтевају фактор транскрипције Т-бет. Према томе, НЦР+/− ИЛЦ3 се могу разликовати на основу НКп46 и Т-бет експресије. У студијама описаним овде, мишји ИЛЦ3 су дефинисани линијом-ЦД45+ДКС5-РОР т+, при чему су НЦР+ ИЛЦ3 такође били Т-бет+НКп46+ и НЦР-ИЛЦ3 су Т-бет-НКп46 − (Табела 1 и Додатак А, слике А1–А3).

Табела 1. ИЛЦ3 подскупови дефинисани анализом проточне цитометрије.

Циљ овог истраживања био је да помогне да се разјасни да ли постоји комуникација између ДЦ вакцина и ИЛЦ3 и потенцијала које би њихове интеракције могле имати у ДЦ имунотерапији. Показало се да ИЛЦ3 имају улогу у различитим болестима и канцерима и стога имају потенцијал у различитим контекстима имунотерапије. ИЛЦ3 су релативно нови на сцени имунологије и као резултат тога, њихов утицај на болести и третмане је ограничено истражен. ИЛЦ3 реагују на спољашње стимулусе, који ће диктирати њихове активности и да ли промовишу прогресију или супресију тумора [21,22]. Слично Тх17 ћелијама, ИЛЦ3 имају фактор транскрипције РОР т и производе Тх17 одговор цитокине као што су ИЛ-17 и ИЛ-22. ИЛ-22 је важан за контролу бактеријских инфекција у цревима [16]. Међутим, у моделу рака дебелог црева изазваног бактеријама, показано је да ИЛ-17 и ИЛ-22 из ИЛЦ у дебелом цреву доприносе развоју рака дебелог црева [23]. Штавише, ИЛЦ3 су у корелацији са негативним исходима код карцинома дојке [24]. Супротно томе, примећена је повезаност између НЦР+ ИЛЦ3 и терцијарних лимфоидних структура (ТЛС) и бољи клинички исходи код карцинома плућа не-малих ћелија [18]. Поред тога, недавна студија је истраживала ИЛЦ3 код колоректалног карцинома. Студија је приметила повећање ИЛЦ1 и смањење ИЛЦ3 у узорцима пацијената са ресецираним колоректалним туморима у поређењу са одговарајућим немалигним суседним ткивима. Секвенцирање РНК и транскрипционо профилисање открили су да ИЛЦ3 имају повећану пластичност и различите функционалне капацитете унутар колоректалних тумора у поређењу са немалигним ткивима. Занимљиво је да је секвенцирање РНК такође сугерисало да су ИЛЦ3 који инфилтрирају тумор имали повећану пластичност да би прешли на ИЛЦ1 фенотип. Студија је приметила да интеракције ИЛЦ3 са Т ћелијама подржавају имунитет типа И, а код колоректалног карцинома, ове интеракције су ограничене, што омета антитуморске одговоре. Ово подржава важну функцију за ИЛЦ3 у антитуморском имунитету. Све у свему, рад је показао значајну улогу коју ИЛЦ3 имају у регулацији имунолошке хомеостазе и колоректалног карцинома [25]. Стога се сматра да ИЛЦ3 имају двоструку улогу у здрављу и болести. Они могу да промовишу прогресију рака [23,24,26], али такође могу допринети антитуморским одговорима [18,25,27,28]. Чини се да су њихов фенотип и допринос раку контекстуални, што указује на потенцијал да се манипулише ИЛЦ3 путем имунотерапије како би се добио фенотип који помаже у одговорима против рака, а не подржава прогресију тумора. Дакле, вакцине засноване на ДЦ представљају могући метод утицаја на микроокружење тумора кроз манипулацију фенотиповима ИЛЦ и њиховом производњом цитокина, што би омогућило прилагођавање имуног одговора у зависности од околности и могло би бити корисно у истраживању рака.

Пошто је било ограничено истраживање комуникације између ДЦ и ИЛЦ3, посебно у контексту ДЦ вакцинације, студије описане овде су истраживале промене у популацији ИЛЦ3 након примене вакцине засноване на ДЦ мишевима. У овом раду примећена је комуникација између вакцине засноване на ДЦ и ИЛЦ3, што се показало кроз трајни утицај вакцине на ИЛЦ3 одговоре током најмање 10 дана након имунизације.

цистанцхе тубулоса-побољшава имуни систем

2. Резултати

2.1. Број и НЦР+ и НЦР− ИЛЦ3 се повећао у локалном дренирајућем лимфном чвору након примене ДЦ вакцина 

ДЦ вакцина је припремљена диференцијацијом ДЦ од ћелија добијених из мишје коштане сржи ек виво. Ови ДЦ су стимулисани да промовишу њихово сазревање како би стекли имуногени фенотип. ДЦ-ови су затим напуњени пептидом. Пошто се ова студија фокусира на природу комуникације између два урођена леукоцита, ДЦ и ИЛЦ3, пептид одабран за производњу вакцине био је намерно ирелевантан за наш биолошки модел како би се избегло да Т ћелије специфичне за антиген постану збуњујућа варијабла. Према томе, ДЦ вакцина је била напуњена пептидом добијеним из пилећег овалбумина.

Да бисмо почели да истражујемо да ли ДЦ вакцинација утиче на ИЛЦ3 популацију, прво смо проценили да ли постоје разлике у целуларности проксимално од места вакцинације. Дошло је до промена у локалном дренирајућем лимфном чвору након ДЦ вакцинације, што је укључивало повећање броја ИЛЦ3 (Слика 1). Кинетика повећања ИЛЦ3с је показала да се ИЛЦ3с постепено повећавао након ДЦ вакцинације (Слика 1б,ц). Процењен је број НЦР+ и НЦР− ИЛЦ3 у локалном дренирајућем лимфном чвору и обе субпопулације су се повећале након примене ДЦ вакцине. Иако су и НЦР+ и НЦР- ИЛЦ3 популације достигле врхунац три дана након ДЦ вакцинације, НЦР- ИЛЦ3 су се вратиле на хомеостатске бројеве седам дана након имунизације, док је број НЦР+ ИЛЦ3 остао значајно већи у поређењу са лажно третираним контролним мишевима.

Слика 1. Број природних рецептора цитотоксичности (НЦР)+ и НЦР− тип 3 урођених лимфоидних ћелија (ИЛЦ3с) порастао је у локалном дренирајућем лимфном чвору након ДЦ имунизације. Женке Ц57БЛ/6 мишева су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекција задњег стопала. Поплитеални лимфни чворови су испитани за ИЛЦ3 популације. (а) Одређен је укупан број ћелија у лимфном чвору. Акумулација (б) НЦР− ИЛЦ3 и (ц) НЦР+ ИЛЦ3 у лимфном чвору и проценат ЦД{{10}} ћелија у лимфном чвору које су биле (д) НЦР− ИЛЦ3 и (е) НЦР+ ИЛЦ3с. Свака трака представља податке из четири поплитеална лимфна чвора. Студентов т-тест је коришћен у свакој временској тачки да би се утврдиле значајне разлике између контролних мишева инокулисаних физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) и мишева инокулисаних ДЦ вакцином (п-вредности * < 0.{{ 21}}5, ** < 0.005, *** < 0,0005 и **** < 0,0001). Репрезентативни тачкасти графикони који показују просечан број (ф) НЦР- ИЛЦ3 и (г) НЦР+ ИЛЦ3 у дренирајућем поплитеалном лимфном чвору. Графикони приказују средњу вредност са стандардном девијацијом.

2.2. ДЦ вакцине су повећале производњу ИЛЦ3 цитокина у слезини без промене укупног броја ИЛЦ3 слезене

Затим, системске промене у популацији ИЛЦ3 су испитане проценом слезине, која је највећи секундарни лимфоидни орган [29], недељу дана након вакцинације ДЦ, што је стандардна временска тачка наше лабораторије за системску процену промена у леукоцитима. Није уочена значајна разлика у укупном броју НЦР+ или НЦР− ИЛЦ3 у слезини (Слика 2).

Слика 2. Није било промена у броју ИЛЦ3 слезине након ДЦ имунизације. Женке Ц57БЛ/6 мишева (н=8 [ПБС] или 10 [ДЦ]) су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекција задњег стопала. Слезине су сакупљене недељу дана након инокулације и испитане на ИЛЦ3 популације. Укупан број слезене (а) НЦР− ИЛЦ3 и (б) НЦР+ ИЛЦ3 (и средњи геометријски флуоресцентни интензитет Т-бет за НЦР+ ИЛЦ3) и проценат ЦД45+ ћелија слезине које су биле (ц) НЦР− ИЛЦ3 и (д) НЦР+ ИЛЦ3 су праћени и квантификовани анализом проточне цитометрије. Студентов т-тест је коришћен за одређивање значаја између популација контролних мишева инокулисаних физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) и мишева инокулисаних са ДЦ. Средства се нису битно разликовала. Репрезентативни тачкице које приказују просечан број слезене (е) НЦР− ИЛЦ3 и НЦР+ ИЛЦ3. Стандардна девијација и средња вредност су представљени тракама графикона и тракама грешака.

Пошто на профиле цитокина ИЛЦ3 могу утицати фактори средине, ИЛЦ3 производња ИЛ-22 и ИЛ-17 у слезини је мерена недељу дана након вакцинације ДЦ. Дошло је до повећања ИЛЦ3 који производе ИЛ-17 или ИЛ-22 или оба цитокина код мишева третираних ДЦ вакцинама у поређењу са контролним мишевима (Слика 3).

Слика 3. Дошло је до повећања ИЛЦ3 слезине који производе ИЛ-17 и ИЛ-22 након ДЦ имунизације. Женке Ц57БЛ/6 мишева (н=12-18) су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекције задњег стопала. Контролни мишеви су третирани физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС). Недељу дана након имунизације, слезине су сакупљене и прегледане на ИЛ-17- и ИЛ{{10}}производне ИЛЦ. Број ћелија-ЦД127+ДКС5− ћелија које производе (а) ИЛ-17, (б) ИЛ-22 и (ц) и ИЛ-17 и ИЛ{{ 16}} и њихови одговарајући геометријски средњи флуоресцентни интензитети су одређени коришћењем интрацелуларног бојења цитокина и проточне цитометрије. Подаци су анализирани коришћењем двосмерног АНОВА теста (п-вредности * < 0.05, ** < 0.005). (д) Репрезентативни графикони тачака показују просечан број ЦД45+ лозе-ЦД127+ДКС5− ћелија слезине које производе ИЛ-17 и/или ИЛ-22. Графикони приказују средњу вредност са стандардном девијацијом.

2.3. ИЛЦ3 субпопулације након ДЦ имунизације и изазова са Б16Ф10 ћелијама меланома

ИЛЦ3 могу играти двоструку улогу у прогресији рака доприносећи и про- и антитумогеним одговорима [22]. Стога је истражен утицај ДЦ вакцинације на ИЛЦ3 одговоре у контексту рака. Мишеви су третирани ДЦ вакцинама и недељу дана касније, они су интравенозно изазвани ћелијама меланома Б16Ф10, што је резултирало засејавањем плућа. Као што је поменуто, пошто су се процењивале само компоненте урођеног имунитета, у нашим експериментима није требало процењивати образовање специфичног за антиген вакцином и стога коришћени модел меланома није експримирао овалбумин, што је чинило пептидом напуњеним на ДЦ. небитно. Кинетички експеримент (слика 1) показао је да се локални одговори ИЛЦ3 могу посматрати у року од три дана. Дакле, три дана након изазивања, број ИЛЦ3 субпопулација и њихова способност да производе цитокине испитани су у слезини и плућима. Слично ономе што је уочено у слезини мишева који нису били наивни, није било значајне разлике у укупном броју НЦР+ и НЦР- ИЛЦ3 слезине између контролне групе и групе имунизоване ДЦ (Слика 4). Међутим, за разлику од наивног модела, у слезини више није било промена у производњи ИЛ-17 и/или ИЛ-22 (Слика 5).

Слика 4. Није било промене у укупном броју ИЛЦ3 слезине после ДЦ вакцинације и изазивања Б16Ф10 ћелија меланома. Женке Ц57БЛ/6 мишева (н=10) су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекције задњег стопала, а недељу дана касније, мишевима је дато 3 × 105 Б16Ф10 ћелија путем ињекције у вену репа. Слезине су сакупљене и испитане на акумулацију ИЛЦ3 популација три дана након примене Б16Ф10. Број (а) НЦР− ИЛЦ3 слезене и (б) НЦР+ ИЛЦ3 (и средњи геометријски интензитет флуоресцентног Т-бет за НЦР+ ИЛЦ3) и проценат ЦД45+ ћелија слезине које су биле (ц) НЦР− ИЛЦ3 и (д) НЦР+ ИЛЦ3 су праћени и квантификовани проточном цитометријом. Студентов т-тест је коришћен за одређивање значаја између популација контролних мишева третираних физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) и мишева инокулисаних са ДЦ. Средства се нису битно разликовала. Репрезентативни тачкасти графикони показују просечан број слезене (е) НЦР− ИЛЦ3 и НЦР+ ИЛЦ3. Средња вредност и стандардна девијација су представљени тракастим графиконима и тракама грешке.

Слика 5. Није било промене у броју ИЛЦ слезине-17 и/или ИЛ-22-који производе ИЛЦ након ДЦ вакцинације и изазивања ћелија меланома Б16Ф10. Женке мишева Ц57БЛ/6 (н=10) су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекције задње јастучиће и недељу дана касније, 3 × 105 Б16Ф10 ћелија су дате интравенозно. Три дана касније, слезине су сакупљене и испитане на производњу ИЛЦ3 цитокина. Број ЦД127+ДКС5- ћелија које производе (а) ИЛ-17, (б) ИЛ-22 и (ц) и ИЛ-17 и ИЛ-22 и њихови одговарајући геометријски средњи флуоресцентни интензитети су одређени коришћењем интрацелуларног бојења цитокина и проточне цитометрије. Подаци су анализирани коришћењем двосмерног АНОВА теста и није откривена значајна разлика између ДЦ вакцинисаних мишева и контрола третираних физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС). (д) Репрезентативни графикони тачака показују просечан број ЦД45+лозе ЦД127+ДКС5- ћелија слезине које производе ИЛ-17 и/или ИЛ-22.

Интравенска ињекција ћелија Б16Ф10 преко репне вене је уобичајен мишји модел метастаза синтетичког меланома у плућима [30]. Због тога су плућа такође испитана да би се одредио број ИЛЦ3 субпопулација и проценила њихова производња цитокина.

Дошло је до смањења броја НЦР- ИЛЦ3 са истовременим повећањем броја НЦР+ ИЛЦ3 (Слика 6). Међутим, није примећен ефекат ДЦ вакцинације на ИЛЦ3-посредовану производњу цитокина у плућима (Слика 7).

Слика 6. Након ДЦ имунизације и изазова са Б16Ф10 ћелијама, дошло је до нумеричких промена у ИЛЦ3 субпопулацијама у плућима. Женке Ц57БЛ/6 мишева (н=10) примиле су ДЦ вакцине путем ињекције задњег јастучића, а недељу дана касније, 3 × 105 Б16Ф10 ћелија је дато интравенозно. Три дана након изазивања, плућа су испитана коришћењем проточне цитометрије на број (а) НЦР− ИЛЦ3 и (б) НЦР+ ИЛЦ3 (и средњи геометријски интензитет флуоресцентне вредности Т-бет за НЦР+ ИЛЦ3) и проценат ЦД{ {18}} ћелије које су биле (ц) НЦР- ИЛЦ3 и (д) НЦР+ ИЛЦ3. Студентов т-тест је коришћен за одређивање значаја између субпопулација контролних мишева третираних физиолошким раствором пуферованим фосфатом (ПБС) и мишева инокулисаних ДЦ (п-вредности *<0.05, *** <0.0005, and **** < 0.0001). Representative dot plots showing the average number of pulmonary (e) NCR− ILC3s and NCR+ ILC3s. The graphs display the mean with the standard deviation.

Слика 7.Није било промене у броју ИЛЦ3 који производе ИЛ-17 и/или ИЛ-22 у плућима након ДЦ вакцинације и изазивања ћелија меланома Б16Ф10. Женке мишева Ц57БЛ/6 (н=10) су инокулисане ДЦ вакцинама путем ињекције задње јастучиће стопала и недељу дана касније, интравенозно им је примењено 3 × 105 Б16Ф10 ћелија. Три дана касније, плућа су сакупљена и испитана на ИЛЦ{12}посредовану производњу цитокина. Број ћелија-ЦД127+ДКС5− ћелија које производе (a) ИЛ-17, (b) ИЛ-22 и (c) и ИЛ{{0}} и ИЛ-22 и њихови одговарајући геометријски средњи флуоресцентни интензитети су одређени коришћењем интрацелуларног бојења цитокина и проточне цитометрије. Подаци су анализирани коришћењем двосмерног АНОВА теста (п-вредности *** < 0,0005). Није било значајне разлике у укупном броју ИЛ-22-производње, ИЛ-17-производње и ИЛ-22 и ИЛ-17 лозе која производи мулти-цитокине-ЦД{{ 12}}ДКС5− ћелије. (d) Репрезентативне тачкице које приказују просечан број плућних ЦД45+ линија-ЦД127+ДКС5− ћелија које производе ИЛ-17 и/или ИЛ-22. Стандардна девијација и средња вредност су представљени тракама графикона и тракама грешака.

3. Дискусија

Овде описане студије настојале су да истраже потенцијалну комуникацију између ИЛЦ3 и ДЦ у контексту ДЦ вакцине. Дошло је до повећања броја и НЦР+ и НЦР- ИЛЦ3 субпопулација у дренирајућим лимфним чворовима (Слика 1) након вакцинације ДЦ, што је сугерисало да је дошло до локалне комуникације између ДЦ вакцине и ИЛЦ3 субпопулација. Међутим, комуникација између ДЦ-а и НЦР+ ИЛЦ3 имала је дуготрајнији утицај на укупан број НЦР+ ИЛЦ3 од оне која је примећена између ДЦ и НЦР- ИЛЦ3. Ово је показало да ДЦ-ови могу имати јединствене интеракције са ИЛЦ3 у зависности од њихове експресије НЦР-а. Није примећена промена у броју ИЛЦ3 субпопулација у слезинама седам дана након ДЦ вакцинације (Слика 2) или десет дана након ДЦ вакцинације и три дана након изазивања ћелија меланома Б16Ф10 (Слика 4). Наше методе за испитивање ИЛЦ3 за њихову производњу ИЛ-17 и ИЛ-22 имају ограничење јер показују и транслациони и транскрипциони одговор услед ин витро рестимулације ћелија. Међутим, додали смо експерименталну контролу у све експерименте, што би био третман без стимулације ин витро да би се открило шта ИЛЦ3 производе као одговор на сигнал примљен ин виво. Као што је илустровано на сликама 3д, 5д и 7д, ћелије које нису примиле ин витро стимулацију произвеле су ИЛ-17 и ИЛ-22. Поред тога, иако се број ИЛЦ3 ћелија слезине није променио (Слика 2), производња цитокина од стране ИЛЦ3 субпопулација била је различита седам дана након ДЦ вакцинације (Слика 3). Ово сугерише да би вакцинација ДЦ могла утицати на функционалност ИЛЦ3 одговора без утицаја на њих бројчано. Будући да су компоненте урођеног имуног система, трговина ИЛЦ3 у и ван ткива могла се десити у распону од неколико дана, чиме се спречава откривање бројчаних разлика модулираних третманом седам до десет дана након вакцинације ДЦ. Докази за ово су примећени у лимфном чвору који дренира ДЦ вакцину где се број ИЛЦ3 повећао током три дана, а затим почео да се смањује (Слика 1). Дакле, можда је дошло до нумеричких промена у ИЛЦ3 субпопулацијама у слезини које су пропуштене јер су се вратиле на хомеостатске бројеве до седмог дана након ДЦ имунизације. Ипак, студије су биле фокусиране на дуготрајније одговоре за разлику од краткорочних пролазних одговора и стога нису даље истраживале овај пут. Занимљиво, иако се број субпопулација ИЛЦ3 слезине није разликовао од контролних група, њихови профили цитокина су измењени (Слика 3). Производња ИЛ-22 и ИЛ-17 је повећана у ИЛЦ3 слезине, што је показало да вакцинација ДЦ има системски ефекат на ИЛЦ3. Укратко, ДЦ вакцинација није утицала на количину ИЛЦ3 слезине, али је утицала на њихову функционалност.

Иако је постојао трајни ефекат на производњу цитокина изведених из ИЛЦ3- седам дана након ДЦ имунизације у слезини мишева без тумора, овај утицај на ИЛЦ3с у слезини није био детектован три дана након интравенске инфекције са Б16Ф10 ћелијама меланома ( Слика 5). Чинило се да ДЦ вакцина прима ИЛЦ3 популације у моделу без тумора који је потиснут након изазивања тумора. Пошто су ИЛЦ под великим утицајем њиховог окружења, то би могло сугерисати да је комуникација између ДЦ у вакцини и ИЛЦ3 ограничена на модел без тумора. Насупрот томе, ово би такође могло бити последица мобилизације припремљених ИЛЦ3 на друге локације у телу где су се Б16Ф10 можда скупиле и успоставиле микроокружење које је изазвало регрутацију леукоцита.

Уочен је помак у ИЛЦ3 субпопулацијама у плућима десет дана након вакцинације са ДЦ и три дана након ћелијске инфекције Б16Ф10 у поређењу са контролним мишевима који нису вакцинисани ДЦ који су примили само Б16Ф10 ћелије. Конкретно, дошло је до повећања броја НЦР+ ИЛЦ3 и смањења НЦР- ИЛЦ3 у плућима (Слика 6). Т-бет је фактор транскрипције који је повезан са Тх1 одговорима [31]. Према томе, повећање НЦР+ ИЛЦ3, који изражавају Т-бет, указује на потенцијалну промоцију имунитета типа 1. Ово би могао бити користан ИЛЦ3 одговор у контексту рака где су обично пожељни имуни одговори типа 1.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Показало се да НЦР+ ИЛЦ3 могу произаћи из подскупа НЦР− ИЛЦ3 [16]. Стога се повећање НЦР+ ИЛЦ3 и смањење НЦР- ИЛЦ3 може приписати стимулацији која је изазвала прелазак у НЦР- ИЛЦ3 да постану НЦР+ ИЛЦ3. Ако су ИЛЦ3 били подвргнути пребацивању фенотипа са НЦР- на НЦР+, можда нису могли да производе цитокине током или убрзо након пребацивања и док су се прилагођавали окружењу и свом новом фенотипу. Стога је њихова производња цитокина можда заустављена или одложена док се дешавала промена фенотипа, што би могло да објасни зашто није било промена у ИЛЦ3-посредованој производњи ИЛ-17 и/или ИЛ-22 у плућа (слика 7). Међутим, такође је могуће да ДЦ вакцинација једноставно није утицала на производњу цитокина од стране ИЛЦ3 у плућима у овом тренутку.

4. Материјали и методе

Етичко одобрење

Све студије на мишевима изведене су према протоколу за коришћење животиња #3807 под надзором особља за бригу о животињама на Универзитету Гуелпх.

Мишеви

Женке Ц57БЛ6 мишева су примљене из Цхарлес Ривер Лабораториес старости од пет до осам недеља. Мишеви су смештени у контролисаном окружењу у јединици за изолацију животиња Универзитета Гуелпх и дали су им недељу дана да се аклиматизирају пре почетка експеримената. Мишеви су храњени и давана им је вода ад либитум.

Културе дендритичких ћелија

Сакупљени су бутне кости и тибије женки мишева Ц57БЛ6, а крајеви костију одсечени. Користећи шприц, коштана срж тибије и фемура је испрана ПБС-ом у Петријеву посуду. Коштана срж је ресуспендована у једноћелијску суспензију и избројана је помоћу хемоцитометра. Ћелије су затим ресуспендоване у медијуму (РПМИ [ХиЦлоне Цат# СХ30027.01] са 2-меркаптоетанолом [Гибцо Реф# 21985-023], 1% пеницилина/стрептомицина [ХиЦлоне Цат# СВ30010] и 10% фетални говеђи серум [ВВР Цат#97068-085]) до концентрације од 1,25 × 106 ћелија по мЛ, допуњен са 20 нг/мЛ фактор стимулације колоније гранулоцита-макрофага (ГМ-ЦСФ) (Биолегенд Цат#576308) и аликвоти у боце културе од 25 цм2, 5 мЛ по боци. Културе су стављене у влажне инкубаторе на 37 ◦Ц са 5% ЦО2 и остављене да расту 7 дана. Другог дана културе, додато је 5 мЛ свежег медијума са 20 нг/мЛ ГМ-ЦСФ. Петог дана, 5 мЛ сваке културе је центрифугирано, а супернатант је уклоњен. Ћелије су ресуспендоване у 5 мЛ свежег медијума са 20 нг/мЛ ГМ-ЦСФ и поново додате у боце за културу. Културе су сакупљене 7. дана и припремљене за вакцинацију.

Припрема за вакцинацију дендритских ћелија

Културе дендритских ћелија (ДЦ) су пребачене у конусну епрувету од 50 мЛ и избројане помоћу хемоцитометра. Ћелије су стимулисане са 100 нг/мЛ липополисахарида (ЛПС) из Есцхерицхиа цоли О55:Б5 (Сигма Цат#Л2880) и 1 µг/мЛ пилећег овалбумина (ОВА)257–264(СИИН) (ПепСцан Системс, Холандија), Лели 1 х у инкубатору на 37 ◦Ц са 5% ЦО2. Ћелије су затим испране са ПБС три пута и ресуспендоване до концентрације од 5 × 105 ћелија по 30 µЛ. Вакцине су даване у дозама од 5 × 105 ћелија по 30 µЛ ПБС.

Обрада ткива

Лимфни чворови и слезине су сакупљени и стављени у Петријеве посуде са 2 мЛ Ханксовог пуферованог физиолошког раствора (ХБСС). Они су пресовани у једноћелијске суспензије помоћу задње стране чепа шприца од 3 мЛ. Једноћелијске суспензије су филтриране у конусну епрувету од 50 мЛ коришћењем ћелијске цедиљке величине пора од 70 µм. Лимфни чворови су пребројани помоћу хемоцитометра. Слезине су центрифугиране, супернатант је уклоњен, а ћелије су ресуспендоване у АЦК пуферу за лизу (8,29 г НХ4Цл [0.15 М], 1 г КХЦО3 [10,0 мМ], 37,2 мг На2ЕДТА [0,1 мМ] у 1 мЛ Милли К воде) и оставити да одстоји пет минута да се еритроцити лизују. Ћелије су два пута испране са ХБСС пре него што су ресуспендоване у медијуму и избројане помоћу хемоцитометра.

Плућа су сакупљена и измерена пре него што су стављена у нежну МАЦСТМ епрувету која садржи 1 мг/мЛ колагеназе ИВ (Гибцо Реф#17104-019) и 5 ​​µг/мЛ ДНасе И (Роцхе Реф#11284932001) у ХБСС. Користећи гентлеМАЦСТМ дисоциатор, узорци су пропуштени кроз протокол за плућа А, а затим инкубирани 20 минута у инкубатору на 37 ◦Ц са 5% ЦО2. Узорци су затим прошли кроз протокол за плућа Б на нежном МАЦСТМ дисоцијатору. Узорцима је додата дупла запремина узорка ХБСС да би се неутралисала реакција ензима. Узорци су филтрирани у конусну епрувету од 50 мЛ кроз сито за ћелије величине 70 µм. Ћелије су затим два пута испране са ХБСС и ресуспендоване у АЦК пуферу за лизу. После пет минута у пуферу за лизу АЦК, ћелије су два пута испране са ХБСС и ресуспендоване у медијуму.

Испитивање одговора на цитокине

Једноћелијске суспензије из узорака ткива су засејане у 96- плоче са бунарима у дупликатима, где је један бунар третиран као контрола без стимулације, а други добро је добио стимулативни третман. Нестимулисаним бунарчићима дат је само медијум, а бунарчићи третирани стимулансом су примили 10 нг/мЛ форбол миристат ацетата (ПМА) и 1500 нг/мЛ јономицина у медијуму. Ћелије су стављене у инкубатор на 37 ◦Ц са 5% ЦО2 на један сат. Затим је Брефелдин А (ГолгиПлуг, Биолегенд Цат # 420601) (к 100 разблажења) додат у све јажице за узорке, а плоча је стављена назад у инкубатор на додатна четири сата. Ћелије су затим испране два пута са ПБС и обојене за анализу проточном цитометријом.

Б16Ф10 ћелије меланома

Ћелије Б16Ф10 су одмрзнуте из течног азота и избројане помоћу хемоцитометра. Ћелије су затим ресуспендоване у медијуму (Дулбеццо-ов медијум Еаглес модификован са високом глукозом [ХиЦлоне Цат#СХ3002201] са 1% пеницилина/стрептомицина [ХиЦлоне Цат# СВ30010] и 10% говеђег серума [ВВР} Цат#) до концентрација од 1 × 105 ћелија по мЛ. Ћелије Б16Ф10 су затим распоређене у боце за културу и стављене у инкубатор на 37 ◦Ц са 5% ЦО2. Да би се ћелије Б16Ф10 припремиле за примену, ћелије су пребачене из тиквица за културу у конусну епрувету од 50 мЛ, испране са ПБС, а затим ресуспендоване у ПБС. Ћелије су избројане помоћу хемоцитометра и ресуспендоване у ПБС да би се добиле дозе од 3 × 105 ћелија по 200 µЛ.

Бојење интрацелуларним цитокинским антителом

Ћелије су засејане у {{0}} плоче са бунарима и ресуспендоване у Фц блоку (анти-ЦД16/ЦД32, БиоЛегенд Цат#101320) и инкубиране на 4 ◦Ц током 15 мин. Ћелије су два пута испране физиолошким раствором пуферованим фосфатом који садржи 0,5% говеђег серумског албумина (ФАЦС пуфер), а затим поново суспендоване у главној мешавини антитела за бојење површине ћелије (ЦД45, БиоЛегенд Цат#103132; НКп46, БиоЛегенд Цат#137617; ДКС5, БиоЛегенд Цат # 108919; ЦД127, БиоЛегенд Цат # 135007; Линеаге Цоцктаил, БиоЛегенд Цат # 133311) и инкубирао на 4 степена 20 мин. Ћелије су два пута испране физиолошким раствором пуферованим фосфатом и ресуспендоване у Зомбие Акуа Фикабле вибилитетној боји (ФВД) (БиоЛегенд Цат#423101) и инкубиране на 4 °Ц током 30 мин. За испирање ћелија два пута је коришћен физиолошки раствор са фосфатним пуфером пре ресуспензије у пуферу за фиксацију (БиоЛегенд Цат#420801). Ћелије су инкубиране на 4 ◦Ц током 20 мин. После фиксације, ћелије су два пута испране пуфером за пермеабилизацију (БиоЛегенд Цат # 421002). Ћелије су ресуспендоване у главној мешавини антитела за интрацелуларно бојење (ИЛ-22, БиоЛегенд Цат#516404; ИЛ-17А, еБиосциенце Цат# 17-7177-81) и инкубиране на 4 ◦Ц током 20 мин. Ћелије су два пута испране пуфером за пермеабилизацију, затим ресуспендоване у ФАЦс пуферу, а затим обрађене проточним цитометром БД ФАЦСЦантоТМ ИИ и анализиране коришћењем софтвера БД ФАЦСДиваТМ.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

Бојење антителом транскрипционим фактором

Ћелије су засејане у {{0}} плоче и ресуспендоване у ФЦ блоку (анти-ЦД16/ЦД32 БиоЛегенд Цат# 101320) и инкубиране на 4 ◦Ц током 15 мин. Ћелије су два пута испране са ФАЦс пуфером (0,5% у албумину говеђег серума [ХиЦлоне Цат# СХ30574.02] у ПБС), затим поново суспендоване у главној мешавини антитела за бојење на површини ћелије (ЦД45, БиоЛегенд Цат#103132; НКп46 , БиоЛегенд Цат # 137617; ДКС5, БиоЛегенд Цат # 108919; ЦД127, БиоЛегенд Цат # 135007; Линеаге Цоцктаил, БиоЛегенд Цат # 133311), и инкубирао на 4 °Ц током 20 мин. Ћелије су затим испране физиолошким раствором пуферованим фосфатом, два пута ресуспендованим у ФВД (БиоЛегенд Цат#423101) и инкубиране на 4 °Ц током 20 мин. Ћелије су два пута испране физиолошким раствором пуферованим фосфатом и ресуспендоване у пуферу за фиксацију ФокП3 миша (БД Пхарминген БД Сциенцес Цат#51-9006124) и инкубиране на 4°Ц током 30 мин. Након фиксације, ћелије су испране пуфером за пермеабилизацију ФокП3 миша (БД Пхарминген БД Сциенцес Цат# 51-9006125) ресуспендованим у пуферу за пермеабилизацију ФокП3 и инкубиране на 37 ◦Ц током 30 мин. Ћелије су ресуспендоване у антителима транскрипционог фактора (РОР гама(т), еБиосциенце Цат#17-6988-82; Т-бет, еБиосциенце Цат# 12-5825-82) и инкубиране на 4 ◦Ц током 20 мин. Ћелије су два пута испране пуфером за пермеабилизацију, затим ресуспендоване у ФАЦс пуферу и анализиране коришћењем БД ФАЦСЦантоТМ ИИ проточног цитометра и БД ФАЦСДиваТМ софтвера.

Статистичка анализа

Популације слезине и плућа НЦР+ и НЦР− ИЛЦ3 су анализиране коришћењем непарних т-тестова. Анализа популације кинетичког експеримента је упоређена коришћењем обичне једносмерне анализе варијансе (АНОВА) и Тукеи-овог теста вишеструког поређења. Анализа цитокина у слезини и плућима је испитивана коришћењем двосмерне АНОВА и Шидаковог теста вишеструких поређења. Средње вредности за третиране групе су дефинисане као значајно различите са п-вредношћу < 0.05.

Стратегија улаза

Прво, коришћењем подручја распршења напред (ФСЦ-А) и бочног подручја распршивања (ССЦ-А), лимфоцити су укључени. Затим су дублетне ћелије искључене коришћењем ФСЦ-А и ФСЦ-висине (ФСЦ-Х). Живе ћелије су затворене узимањем ћелија негативних на ФВД. Затим су узете ЦД127+ и ћелије коктела да би се сузиле ИЛЦ. ЦД45+ ћелије су затим укључене. Да би се осигурало да су све НК ћелије искључене, ДКС5− је затим укључен. За идентификацију фактора транскрипције ИЛЦ3, РОР т + ћелије су затим укључене, а из ових ћелија, НЦР+ ИЛЦ3 су били Т-бет+ и НКп46+, а НЦР− ИЛЦ3 су били Т-бет− и НКп46. За идентификацију цитокина, након гајтинга на лимфоцитима, појединачне ћелије, живе ћелије и ЦД127+ лоза-ЦД45+, ИЛ-17 и ИЛ-22 су затим укључене као производе ИЛЦ3 пошто би ИЛЦ3 биле једине ћелије у овој коначној капији које би могле да производе ИЛ-22 и ИЛ-17.

цистанцхе користи за мушкарце - јача имуни систем

5. Закључци

Иако је повећана производња ИЛ3-изведених ИЛ-17 и ИЛ-22 у слезини примећена у моделу без тумора изгубљена у моделу изазивања тумора, дошло је до супротног померања у НЦР+ и НЦР− ИЛЦ3 популације у плућима. Ово сугерише да је ДЦ вакцинација могла да утиче на ИЛЦ3 у моделу изазивања тумора, као и код мишева без тумора. Међутим, ефекат овог односа између ДЦ у вакцини и ИЛЦ3 на антитуморске одговоре остаје непознат и представља будући правац истраживања. Стога, студије описане овде показују да постоји комуникација између вакцина заснованих на ДЦ и ИЛЦ3 субпопулација, како код мишева без тумора, тако и код мишева који носе тумор. Чини се да су ове комуникације и њихов накнадни утицај на имуне одговоре сложени. Ова запажања доприносе литератури која настоји да дешифрује однос између ДЦ вакцина и ИЛЦ3 у настојању да се развију побољшане стратегије ДЦ вакцинације. Препоручујемо даље студије које истражују потенцијал за дизајнирање стратегија вакцинације које могу модулирати ове комуникације како би оптимизирали ИЛЦ3 одговоре како би помогли у антитуморским одговорима и ограничили подршку про-туморских одговора.

Референце

1. Цриниер, А.; Вивиер, Е.; Блери, М. Урођене лимфоидне ћелије сличне помагачима и имунотерапија рака. Семин. Иммунол. 2019, 41, 101274. [ЦроссРеф] [ПубМед]

2. Салими, М.; Ванг, Р.; Иао, Кс.; Ли, Кс.; Ванг, Кс.; Ху, И.; Цханг, Кс.; Фан, П.; Донг, Т.; Огг, Г. Активиране урођене популације лимфоидних ћелија акумулирају се у хуманим туморским ткивима. БМЦ Цанцер 2018, 18, 341. [ЦроссРеф] [ПубМед]

3. Спитс, Х.; Бернинк, ЈХ; Ланиер, Л. НК ћелије и урођене лимфоидне ћелије типа 1: Партнери у одбрани домаћина. Нат. Иммунол. 2016, 17, 758–764. [ЦроссРеф] [ПубМед]

4. Бруцхард, М.; Гхирингхелли, Ф. Дешифровање улога урођених лимфоидних ћелија у раку. Фронт. Иммунол. 2019, 10, 656. [ЦроссРеф]

5. Маззурана, Л.; Рао, А.; Ван Ацкер, А.; Мјосберг, Ј. Улоге урођених лимфоидних ћелија у људском имунолошком систему. Семин. Иммунопатхол. 2018, 40, 407–419. [ЦроссРеф]

6. Солано-Галвез, СГ; Товар-Торес, СМ; Трон-Гомез, МС; Веисер-Смеке, АЕ; Алварез-Хернандез, ДА; Фрањути-Кели, Џорџија; Тапиа-Морено, М.; Ибарра, А.; Гутиеррез-Кобех, Л.; Вазкуез-Лопез, Р. Људске дендритске ћелије: онтогенија и њихове подскупине у здрављу и болести. Мед. Сци. 2018, 6, 88. [ЦроссРеф]

7. Стеинман, РМ; Хемми, Х. Дендритске ћелије: Превођење урођеног у адаптивни имунитет. Цурр. Врх. Мицробиол. Иммунол. 2006, 311, 17–58. [ЦроссРеф]

8. Фу, Ц.; Ма, Т.; Зхоу, Л.; Ми, КС; Јианг, А. Вакцине против рака на бази дендритичких ћелија: изазови, напредак и будуће могућности. Иммунол. Инвестиг. 2022, 51, 2133–2158. [ЦроссРеф]

9. Карими, К.; Боудреау, ЈЕ; Фрасер, К.; Лиу, Х.; Делангхе, Ј.; Гаулдие, Ј.; Ксинг, З.; Брамсон, ЈЛ; Ван, И. Појачани антитуморски имунитет изазван вакцинама дендритичних ћелија је резултат њихове способности да ангажују и НК ћелије које производе ЦТЛ и ИФН. Мол. Тхер. 2008, 16, 411–418. [ЦроссРеф]

10. Боувер, АЛ; Саундерсон, СЦ; Цалдвелл, ФЈ; Дамани, ТТ; Пелхам, СЈ; Дунн, АЦ; Јацк, РВ; Стоитзнер, П.; МцЛеллан, АД НК ћелије су потребне за имунотерапију засновану на дендритским ћелијама у време изазивања тумора. Ј. Иммунол. 2014, 192, 2514–2521. [ЦроссРеф]

11. Пампена, МБ; Леви, ЕМ Природне ћелије убице као помоћне ћелије у вакцинама против рака дендритичних ћелија. Фронт. Иммунол. 2015, 6, 13. [ЦроссРеф] [ПубМед]

12. Гарднер, А.; де Минго Пулидо, А.; Руффелл, Б. Дендритске ћелије и њихова улога у имунотерапији. Фронт. Иммунол. 2020, 11, 924. [ЦроссРеф] [ПубМед]

13. Цортез, ВС; Робинетте, МЛ; Цолонна, М. Урођене лимфоидне ћелије: Нови увиди у функцију и развој. Цурр. Опин. Иммунол. 2015, 32, 71–77. [ЦроссРеф] [ПубМед]

14. Монталдо, Е.; Јуелке, К.; Ромагнани, Ц. Група 3 урођене лимфоидне ћелије (ИЛЦ3): Порекло, диференцијација и пластичност код људи и мишева. ЕУР. Ј. Иммунол. 2015, 45, 2171–2182. [ЦроссРеф]

15. Вацца, П.; Цхиоссоне, Л.; Мингари, МЦ; Моретта, Л. Хетерогеност НК ћелија и других урођених лимфоидних ћелија у људским и мишјим децидуама. Фронт. Иммунол. 2019, 10, 170. [ЦроссРеф] [ПубМед]

16. Ранкин, ЛЦ; Гирард-Мадоук, МЈ; Сеиллет, Ц.; Миелке, ЛА; Кердилес, И.; Фенис, А.; Виедувилд, Е.; Путоцзки, Т.; Мондот, С.; Лантз, О.; ет ал. Комплементарност и редундантност урођених лимфоидних ћелија које производе ИЛ-22-. Нат. Иммунол. 2016, 17, 179–186. [ЦроссРеф] [ПубМед]

17. Хоорвег, К.; Петерс, ЦП; Цорнелиссен, Ф.; Апарицио-Доминго, П.; Папазиан, Н.; Каземиер, Г.; Мјосберг, ЈМ; Спитс, Х.; Цупедо, Т. Функционалне разлике између људских НКп44(-) и НКп44(+) РОРЦ(+) урођених лимфоидних ћелија. Фронт. Иммунол. 2012, 3, 72. [ЦроссРеф]

18. Царрега, П.; Лоиаконо, Ф.; Ди Царло, Е.; Сцарамуцциа, А.; Мора, М.; Цонте, Р.; Бенелли, Р.; Спаггиари, ГМ; Цантони, Ц.; Цампана, С.; ет ал. НЦР(+)ИЛЦ3 се концентрише на људски карцином плућа и повезан је са интратуморалним лимфоидним структурама. Нат. Цоммун. 2015, 6, 8280. [ЦроссРеф]

19. Спитс, Х.; Артис, Д.; Цолонна, М.; Диефенбацх, А.; Ди Санто, ЈП; Еберл, Г.; Коиасу, С.; Лоцкслеи, РМ; МцКензие, АН; Мебиус, РЕ; ет ал. Урођене лимфоидне ћелије – предлог за јединствену номенклатуру. Нат. Рев. Иммунол. 2013, 13, 145–149. [ЦроссРеф]

20. Вереница, Р.; Финлаи, ЦМ; Виллис, Ц.; Бевингтон, СЛ; Солеи, Ј.; Нг, СТХ; Бакер, СМ; Андревс, С.; Хепвортх, МР; Витхерс, ДР Мреже реципрочних фактора транскрипције управљају функцијом и идентитетом подскупа ИЛЦ3 резидентног у ткиву. Нат. Иммунол. 2021, 22, 1245–1255. [ЦроссРеф]

21. ван Беек, ЈЈП; Мартенс, АВЈ; Бакдасх, Г.; де Вриес, ИЈМ Урођене лимфоидне ћелије у имунитету тумора. Биомедицинес 2016, 4, 7. [ЦроссРеф] [ПубМед]

22. Маттнер, Ј.; Виртз, С. Пријатељ или непријатељ? Двосмислена улога урођених лимфоидних ћелија у развоју рака. Трендс Иммунол. 2017, 38, 29–38. [ЦроссРеф]

23. Кирцхбергер, С.; Роистон, ДЈ; Боулард, О.; Тхорнтон, Е.; Францхини, Ф.; Сзабади, РЛ; Харрисон, О.; Поврие, Ф. Урођене лимфоидне ћелије одржавају рак дебелог црева кроз производњу интерлеукина-22 у моделу миша. Ј. Екп. Мед. 2013, 210, 917–931. [ЦроссРеф] [ПубМед]

24. Ирсхад, С.; Флорес-Борја, Ф.; Лавлер, К.; Монипенни, Ј.; Еванс, Р.; Мале, В.; Гордон, П.; Цхеунг, А.; Газинска, П.; Ноор, Ф.; ет ал. РОРгаммат( + ) урођене лимфоидне ћелије промовишу метастазе рака дојке у лимфним чворовима. Цанцер Рес. 2017, 77, 1083–1096. [ЦроссРеф] [ПубМед]

25. Гоц, Ј.; Лв, М.; Бессман, Њ; Фламар, АЛ; Сахота, С.; Сузуки, Х.; Тенг, Ф.; Путзел, ГГ; Еберл, Г.; Витхерс, ДР; ет ал. Дисрегулација ИЛЦ3 ослобађа прогресију и отпорност на имунотерапију код рака дебелог црева. Целл 2021, 184, 5015–5030.е16. [ЦроссРеф]

26. Лиу, И.; Сонг, И.; Лин, Д.; Леи, Л.; Меи, И.; Јин, З.; Гонг, Х.; Зху, И.; Ху, Б.; Зханг, И.; ет ал. НЦР(-) Група 3 Урођене лимфоидне ћелије оркестрирају ИЛ-23/ИЛ-17 осовину за промоцију развоја хепатоцелуларног карцинома. ЕБиоМедицине 2019, 41, 333–344. [ЦроссРеф] [ПубМед]

27. Бруцхард, М.; Геиндреау, М.; Перрицхет, А.; Трунтзер, Ц.; Балот, Е.; Боидот, Р.; Рацоеур, Ц.; Барсац, Е.; Цхалмин, Ф.; Хибос, Ц.; ет ал. Регрутовање и активација урођених лимфоидних ћелија типа 3 промовише антитуморски имуни одговор. Нат. Иммунол. 2022, 23, 262–274. [ЦроссРеф]

28. Ретхацкер, Л.; Бои, М.; Бисио, В.; Роуссин, Ф.; Денизеау, Ј.; Винцент-Саломон, А.; Борцоман, Е.; Седлик, Ц.; Пиаггио, Е.; Тоуберт, А.; ет ал. Урођене лимфоидне ћелије: НК и цитотоксичне ИЛЦ3 подгрупе инфилтрирају метастатске лимфне чворове рака дојке. Онцоиммунологи 2022, 11, 2057396. [ЦроссРеф]

29. Цеста, МФ Нормална структура, функција и хистологија слезине. Токицол. Патхол. 2006, 34, 455–465. [ЦроссРеф]

30. Исхигуро, Т.; Накајима, М.; Наито, М.; Муто, Т.; Тсуруо, Т. Идентификација гена различито експримираних у подлинијама Б16 мишјег меланома са различитим метастатским потенцијалима. Цанцер Рес. 1996, 56, 875–879.

32. Сзабо, СЈ; Ким, СТ; Коста, ГЛ; Зханг, Кс.; Фатхман, ЦГ; Глимцхер, ЛХ Нови фактор транскрипције, Т-бет, усмерава посвећеност Тх1 линији. Целл 2000, 100, 655–669. [ЦроссРеф] [ПубМед]