Заштитни ефекат Херба Цистанцхес на миотоксичност изазвану статинима ин Витро
Mar 24, 2022
Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com
Елаине Ват а,б,1, Цхун Фаи Нг а,б,1, Цхи Ман Коон а,б, Ериц Цхун Ваи Вонг а,б, Бриан Томлинсон ц, Цлара Бик Сан Лау а,б,н
Институт за кинеску медицину, Кинески универзитет у Хонг Конгу, Шатин, Нове територије, Хонг Конг
б Државна кључна лабораторија за фитохемију и биљне ресурсе у Западној Кини, Кинески универзитет у Хонг Конгу, Шатин, Нове територије, Хонг Конг
ц Одсек за клиничку фармакологију, Одсек за медицину и терапију, Кинески универзитет у Хонг Конгу, Шатин, Нове територије, Хонг Конг
Апстрактан:
Етнофармаколошка релевантност: ХербаЦистанцхес(ХЦ,Цистанцхедесертицола, илиЦистанцхетубулоса) је кинеска биљка која се традиционално користи за проблеме са мишићима. Претходне студије су показале да екстракт ХЦ може смањити оштећење мишића и побољшати складиштење АТП-а код пацова након вежбања. Међутим, његов ефекат на мишићну токсичност изазвану статинима никада није истражен.
Циљ:Циљ ове студије је био да се утврди да ли водени екстракт ХЦ (ХЦЕ) може да спречи токсичност изазвану симвастатином у ћелијама скелетних мишића пацова Л6 и да ли је вербаскозид главни биоактивни састојак који доприноси ефектима.
Материјали и методе:МТТ је изведен да би се одредили ефекти ХЦЕ ({{0}}–2000 мг/мл) или вербаскозида (0–160 мМ) на Л6 ћелије третиране симвастатином (10 мМ). Анексин В-ФИТЦ/ПИ тест апоптозе и анализа каспазе 3 су изведени да би се утврдила заштитна улога ХЦЕ на ћелијску смрт изазвану симвастатином и да би се проценило да ли је ХЦЕ испољио свој заштитни ефекат кроз пут каспазе. Измерена је производња АТП-а да би се испитало да ли ХЦЕ може спречити смањење производње АТП-а ин витро изазвано симвастатином.
Резултати:Симвастатин је значајно повећао смрт апоптотске ћелије у ћелијама Л6. ХЦЕ је значајно извршио дозно-зависно смањење апоптотичких ћелија изазваних симвастатином, вероватно путем каспазе-3 пута. Симвастатин је смањио производњу АТП-а у ћелијама Л6, што је ХЦЕ спречио у зависности од дозе. Постојао је само тренд, али не и значајан ефекат (осим при високим дозама) вербаскозида на заштиту мишићне токсичности изазване симвастатином.
Закључци:У закључку, по први пут смо показали да ХЦЕ може испољити заштитни ефекат зависан од дозе на токсичност изазвану симвастатином ин витро, што је мало вероватно због присуства вербаскозида. Наша студија је сугерисала потенцијалну употребу ХЦ у ситуацији мишићне токсичности изазване симвастатином.
Кључне речи:ХербаЦистанцхес, статини холестерол, хиперлипидемија, мишићна токсичност, вербаскозид, каспаза-3
1. Представљање
Инхибитори ХМГ-ЦоА редуктазе (статини), као најпродаванија класа лекова на рецепт у свету у историји, добро је документовано да су корисни за пацијенте оба пола у различитим годинама са умереним и високим ризиком од кардиоваскуларних болести (КВБ) (Голомб и Еванс, 2008). Затим су развијени и клинички одобрени различити статини, укључујући правастатин, аторвастатин, флувастатин, ловастатин, питавастатин, росувастатин и симвастатин. Генерално, сви статини делују тако што инхибирају редукцију ХМГ-ЦоА у мевалонску киселину током ране фазе мевалонатног пута како би се смањила производња холестерола (Кромер и Моосманн, 2009; Тхомпсон ет ал., 2003). Иако се статини обично добро толеришу, један од најважнијих и добро познатих клиничких нежељених ефеката је токсичност скелетних мишића (рабдомиолиза) (Кобаиасхи ет ал., 2008). Абнормалности скелетних мишића могу се кретати од бенигне мијалгије до тешке миопатије. Док се предлаже низ механизама који би могли бити одговорни за штетне ефекте статина на мишиће, верује се да митохондријски механизми играју важну улогу (Голомб и Еванс, 2008). Мевалонат није само прекурсор холестерола, већ и других једињења укључујући селенопротеине, долихол и убихинон (Кауфманн ет ал., 2006; Ваклавас ет ал., 2009). Способност статина да инхибирају мевалонат би стога такође инхибирала производњу селенопротеина као што је глутатион пероксидаза (ГПк), који су важни ензими у одржавању антиоксидативног одбрамбеног механизма (Кромер и Моосманн, 2009). Статини такође могу довести до исцрпљивања убихинона, узрокујући смањење потрошње кисеоника и синтезе АТП-а (Белтовски ет ал., 2009). Штавише, све веће ин витро и ин виво студије су показале да статин такође може да делује директно на митохондрије ткива да изазове прелаз пропусности мембране зависан од Ца2 (МПТ) на начин зависан од дозе (Белтовски ет ал., 2009; Велхо ет ал., 2006. ). Такође је повезан са повећаним реактивним врстама кисеоника (РОС) и митохондријалним оксидативним стресом, што доводи до смрти ћелије и стога доприноси оштећењу јетре и мишића (Белтовски ет ал., 2009; Велхо ет ал., 2006).
ХербаЦистанцхес, цела осушена биљка Цистанцхе десертицола ИЦ Ма, или Цистанцхе тубулоса (Сцхренк) Вигхт (фамилија Оробанцхацеае), су паразитске биљке које претежно расту у пустињским областима северне и североисточне Кине (Сиу и Ко, 2010).ХербаЦистанцхесје кинеска тоник биљка која оснажује Јанг и која се првенствено користи за лечење недостатка бубрега са симптомима као што су импотенција, неплодност, превремена ејакулација. Тешка и заморна природа биљке такође влажи црева и помаже у ублажавању затвора. То је такође кинеска биљка која се традиционално преписује пацијентима за болове у слабинама и коленима и она је биљка која се обично користи у кинеским формулацијама за лечење мишићних проблема (Сиу и Ко, 2010; Ксионг ет ал., 1998). Занимљиво је да је ово такође у складу са савременим научним студијама које су показале анти-замор екстракта богатог полисахаридима и фенилетаноида.ХербаЦистанцхескод пацова након вежбања смањењем оштећења мишића и побољшањем складиштења АТП-а (Цаи ет ал., 2010). Недавни рад је показао да метанолни екстракт Херба Цистанцхес може побољшати стварање митохондријалног АТП-а (Леунг и Ко, 2008). Сиу и Ко (2010) су то показалиХербаЦистанцхестакође може побољшати статус митохондријалног глутатиона посредовањем нивоа синтезе глутатиона и ГПк-а, штитећи тако ткива од оксидативног стреса у срцима пацова. То су показали и Сиу и Ко (2010).ХербаЦистанцхесможе смањити садржај митохондријалног Ца2, чиме се смањује МПТ зависан од Ца2. У наставку,ХербаЦистанцхестакође је доказано да је снажан антиоксидант и хватач слободних радикала у различитим органима, смањујући оксидативни стрес и активности РОС ин виво студије (Лу ет ал., 1995; Суи ет ал., 2011). Још интересантније, у покушају да се одреди активна фракција која доприноси деловању против умораХербаЦистанцхес, утврђено је да је вербаскозид главни састојак у активној фракцији (Цаи ет ал., 2010). Такође је доказано да вербаскозид смањује замор мишића код крастача, вероватно због својих антиоксидативних активности (Лиао ет ал., 1999), што сугерише да би вербаскозид могао бити биоактивна компонента која доприноси благотворним ефектима Херба Цистанцхес.
Циљ ове студије је био да се утврди да ли употреба биљног екстракта воде Цистанцхес (ХЦЕ) може смањити токсичност мишића изазвану симвастатином ин витро. Претпостављало се да би употреба ХЦЕ могла да исправи нежељене ефекте мишићне токсичности изазване симвастатином. Такође је покушано да се утврди да ли су корисни ефекти одХербаЦистанцхессе приписују присуству вербаскозида.
2. Материјал и методе
2.1. Провера аутентичности и припрема биљних материјала
Сирови биљни материјал одХербаЦистанцхесје купљен од реномираног добављача у Гуангџоуу, Кина.ХербаЦистанцхесје хемијски потврђен коришћењем танкослојне хроматографије (ТЛЦ) у складу са Кинеском фармакопејом (ЦП), 2010, са вербаскозидом и ехинакозидом као хемијским маркерима (подаци нису приказани). Након хемијске аутентификације, узорак хербарског ваучера одХербаЦистанцхесдепонован је у Музеју Института кинеске медицине на Кинеском универзитету у Хонг Конгу (ЦУХК), са узорком ваучера број 2014–3434.
Укратко, 1 кг сирове биљке је натопљен 1 х, након чега је уследила екстракција два пута загревањем током 1 х под рефлуксом на 100 степени користећи 10 дестиловане воде за сваку екстракцију. Водени екстракти (ХЦЕ) су комбиновани и филтрирани. Филтрат је концентрован под сниженим притиском на 60 степени. Концентровани екстракт је лиофилизован до сува. Проценат приноса био је 50,1 процената в/в. Мала количина је коришћена за одређивање количине вербаскозида и ехинакозида коришћењем течне хроматографије ултра-перформансе (УПЛЦ). Сав екстраховани прах је вакуумиран и чуван до употребе.
2.2. УПЛЦ анализа воденог екстракта
УПЛЦ анализе су обављене коришћењем Ватерс Ацкуити Ултра Перформанце ЛЦ система (Ватерс, САД). Сви растварачи потребни за УПЛЦ анализе купљени су од Одељења за хемију на Кинеском универзитету у Хонг Конгу. Вербаскозид и ехинакозид су набављени од Националног института за контролу фармацеутских и биолошких производа, Кина. Раствор узорка је убризган у Ватерс Ацкуити УПЛЦ БЕХ Ц18 колону (10{{20}} 2,1 мм2 ид, величина честица 1,7 мм) са Ватерс АЦКУИТИ УПЛЦ БЕХ Ц18 ВанГуард пре-колона ( 5-2.1 мм2 ид, величина честица 1,7 мм). Сви растварачи су претходно филтрирани са 0.45 мм Миллипоре филтер диском (Миллипоре) и дегасирани. Градијентно елуирање је спроведено коришћењем следећих система растварача: мобилна фаза А – ацетонитрил; мобилна фаза Б – двоструко дестилована вода/мравља киселина (99,9/ 0.1; в/в). Елуирање је изведено поступком градијента на следећи начин: 0–5 мин, 88 процената Б; 5–10 мин, од 88 процената Б до 83 процената Б. Коришћена брзина протока је била 0,4 мл/мин, а детекција је изведена на 331 нм у складу са ЦП (2010). Сваки узорак (5 ул) је убризган у колону након филтрације кроз филтер диск од 0,2 мм. Идентификација хемијских маркера је извршена упоређивањем времена задржавања и УВ апсорбанције непознатих пикова са онима стандарда. Калибрациона крива је уцртана низом концентрација вербаскозида и ехинакозида (40, 20, 10, 5, 2,5 и 1,25 мг/мл) за квантификацију. Квантификација вербаскозида и ехинакозида у биљном екстракту извршена је у три примерка. Систем је надгледан помоћу рачунара опремљеног софтвером Ватерс МассЛинк за прикупљање, интеграцију и анализу података.
2.3. Ћелијска култура
Ћелијска линија скелетних мишића пацова Л6 је купљена од Америчке колекције типских култура (АТЦЦ, Манасса, ВА, САД). Ћелије су одржаване на субконфлуентној густини у Дулбеццо-овом модификованом орловом медијуму (ДМЕМ, АТЦЦ, Манассас, ВА, САД) са додатком 10 процената в/в феталног говеђег серума (ФБС) и 1 проценат пеницилин-стрептомицина (П/С), и инкубирано на 37 степени у влажној атмосфери која садржи 5 процената ЦО2 и 95 процената ваздуха.
Да би се одредили ефекти ХЦЕ на мишићну токсичност изазвану статинима, ћелије Л6 су третиране симвастатином у количини од 10 μМ током 48 сати да би се изазвала токсичност. ХЦЕ (у концентрацијама 0, 250, 500, 1000 и 2000 уг/мл) или вербаскозид (у концентрацијама 0, 20, 40, 80 и 160 μМ) су додати као заједнички третман са статином да би се утврдило да ли биљни екстракт би могао да спречи токсичност статина изазвану у ћелијама скелетних мишића и да би вербаскозид могао да испољи сличне заштитне ефекте као биљни водени екстракт.
Заштитни ефекат екстракта Херба Цистанцхе на токсичност изазвану симвастатином ин витро
2.4. Ин витро цитотоксичност
Л6 ћелије (1к105/ бунар) су посејане у {{0}} плоче за културу равног дна (Иваки, Јапан) преко ноћи, након чега је уследио третман са 10 μМ симвастатина, заједно са или без различитих доза ХЦЕ ( 0–2000 уг/мл) или вербаскозид (0–160 μМ), током 48 х. У контролне бунарчиће додат је обичан медијум (ДМЕМ). Биљни екстракт и једињење растворени су у ДМЕМ.
После третмана од 48 сати, медијум из свих ћелија је одбачен и 30 ул 5 мг/мл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,{{ 8}}дифенил-тетразолијум бромид (МТТ; Сигма, САД) у физиолошком раствору пуферисаном фосфатом (ПБС) је додат у сваки бунар и плоче су даље инкубиране 3 х на 37 степени. Супернатант је затим уклоњен и 100 ул ДМСО је додато у сваки бунар да би се растворили љубичасти кристали формазана (Сигма-Алдрицх, Ст. Лоуис, МО. САД). Апсорбанција сваког узорка је очитана на 540 нм помоћу читача микроплоче (Биотек μ-Куант, САД). Резултати су изражени као проценат апсорпције МТТ у односу на контролне ћелије.
2.5. Анексин-В ФИТЦ/ПИ тест бојења
Л6 ћелије (3 к 105/ бунар) лечени су симвастатином, заједно са или без различитих доза ХЦЕ или вербаскозида. Ћелије су затим сакупљене, испране и обојене анексин-В ФИТЦ комплетом у складу са протоколом произвођача (Тревиген, МД, САД). Укратко, ћелије су испране два пута са 1 к пуфером за везивање и кубиране у 100 ул раствора за обележавање који садржи 1 ул анексин-В ФИТЦ коњугата и 10 ул ПИ у мраку 15 минута на собној температури. Флуоресценција узорака је детектована проточном цитометријом (Бецтон Дицкинсон ФАЦСЦанто ИИ, САД).
2.6. Анализа активности каспазе 3
Активност каспазе 3 је одређена флуорометријским, имуносорбентним ензимским тестом (Сигма) према упутству произвођача. Укратко, Л6 ћелије (3 105/бажирић) третиране симвастатином, заједно са или без различитих доза ХЦЕ вербаскозида, лизиране су коришћењем пуфера за лизу. Слободни 7-амино-4-метилкумарин (АМЦ) генерисан протеолитичким цепањем супстрата од стране каспазе 3 је измерен и квантификован флуорометријски са таласном дужином ексцитације на 360 нм, и таласном дужином емисије на 460 нм са БМГ ФЛУепт БМГ ФЛУплатом читач (БМГ ЛАБТЕЦХ ГмбХ, Немачка).
2.7. Целлулар АТП тест
Л6 ћелије (3к105/ бунар) лечени су симвастатином, заједно са или без различитих доза ХЦЕ или вербаскозида. Након третмана, ћелије су сакупљене и садржај АТП је мерен коришћењем комерцијално доступног колориметријског комплета (Абцам, УК) мерењем садржаја глицерол фосфата у лизираним ћелијама и очитавањем на 570 нм помоћу читача микроплоче (Биотек μ-Куант, САД ). Мерење производње АТП-а је изражено у процентима у односу на контролну групу.
2.8. Статистичка анализа
Подаци су представљени као меан7СД, Присм 5 фор Виндов (верзија 5.0ц, ГрапхПад Софтваре, Инц., УСА) је коришћен за статистичку анализу. Значајне разлике међу свим групама процењене су једносмерном АНОВА-ом, праћеном Бонферонијевим тестом вишеструког поређења. Вероватноћа од по0.05 се сматрала статистички значајном.
3. Резултати
3.1. УПЛЦ анализа воденог екстракта Херба Цистанцхес
Слика С1А је показала УПЛЦ профил стандардне смеше која садржи ехинакозид и вербаскозид. Временске тачке задржавања сваког од ових маркера су упоређене са УПЛЦ профиломХербаЦистанцхесводени екстракт (слика С1Б). Количина ехинакозида и вербаскозида унутарХербаЦистанцхеснађено је да је водени екстракт {{0}}.45% в/в и 0,085% в/в, респективно.
3.2. Ефекат ХЦЕ и вербаскозида на ин витро цитотоксичност симвастатина у ћелијама скелетних мишића Л6
Као што је приказано на слици 1А, симвастатин је изазвао значајну цитотоксичност на ћелије Л6, што се огледа у значајном смањењу виталности ћелија Л6 при 10 мМ симвастатина. ХЦЕ третман је дозно-зависан и значајно је спречио цитотоксичност изазвану симвастатином при дозама од 500, 1000 и 2000 мг/мл. Вербаскозид је показао тренд побољшања одрживости ћелија Л6 које су третиране заједно са симвастатином. Међутим, ниједна концентрација није достигла статистички значај (слика 1Б).
Слика 1. Заштитни ефекат (а) ХЦЕ; и (б) вербаскозид на цитотоксичност изазвану симвастатином у ћелијама Л6. Вредности представљају средње вредности 7СД (н=3). Значајна разлика између третмана само симвастатином и контролне групе која користи Студентов т-тест: ### по0.{{10}}01. Значајна разлика међу свим групама које су третиране симвастатином са или без ХЦЕ вербаскозида истовременог третмана коришћењем једносмерне АНОВА: ** по0,01,*** по0,001.
3.3. Ефекат ХЦЕ и вербаскозида на ћелијску смрт изазвану симвастатином у ћелијама скелетних мишића Л6
Да би се испитао начин ћелијске смрти изазване симвастатином и одредила заштитна улога ХЦЕ или вербаскозида на ћелијску смрт изазвану симвастатином, удео апоптотичких ћелија је детектован бојењем пропидијум јодидом (ПИ). Резултати су показали да је симвастатин изазвао значајно повећање удела раних апоптотичких ћелија (анексин В-ФИТЦ позитивне и ПИ негативне, К4–2), и касних апоптотичких/мртвих ћелија (анексин В-ФИТЦ позитивне и ПИ-позитивне, К2– 2) у поређењу са контролном групом. Ко-третман са ХЦЕ смањио је удео раних апоптотичких и касних апоптотичких/мртвих ћелија на начин зависан од дозе до 1000 мг/мл (слика 2А). Овај заштитни ефекат је такође примећен у групама које су третиране вербаскозидом. Међутим, ниједна од тестираних концентрација није достигла статистички значај (слика 2Б).
Слика 2. Ефекат симвастатина са или без ХЦЕ или ко-третмана вербаскозидом на екстернализацију фосфатидилсерина у ћелијама Л6. Ћелије су обојене Анексином-В ФИТЦ и И и детектоване проточном цитометријом
3.4. Ефекат ХЦЕ и вербаскозида на активност каспазе 3 у ћелијама скелетних мишића Л6 третираних симвастатином
Као што је приказано на слици 3А, 10 мМ симвастатина је значајно индуковало активност каспазе 3 у ћелијама Л6, што сугерише да је симвастатин индуковао апоптозу у Л6 ћелијама кроз каспазну каскаду. Међутим, у ћелијама Л6 које су истовремено лечене симвастатином и ХЦЕ, ХЦЕ је дозно-зависно и значајно смањио активност каспазе 3, што сугерише способност ХЦЕ да спречи апоптозу изазвану симвастатином кроз каспазну каскаду. С друге стране, иако је вербаскозид такође показао тренд смањења повећања активности ензима каспазе 3 изазваног симвастатином, само концентрација од 160 мМ је достигла статистички значај (слика 3Б).
Слика 3. Заштитни ефекат (а) ХЦЕ; и (б) вербаскозид на ензимску активност каспазе 3 индуковане симвастатином у ћелијама Л6. Вредности представљају средња вредност 7СД (н=3–5). Значајна разлика између третмана само симвастатином и контролних група које користе Студентов т-тест: ###по0.001. Значајна разлика између свих група третираних симвастатином са или без ХЦЕ или ко-третмана вербаскозидом коришћењем једносмерне АНОВА: *по0.05, **п о0.01, ***по0.001.
3.5. Утицај ХЦЕ на смањење производње АТП-а у ћелијама скелетних мишића Л6 изазвано симвастатином
Симвастатин (10 мМ) је значајно смањио производњу АТП-а у ћелијама Л6 за око 60 процената у поређењу са контролном групом (слика 4А). ХЦЕ истовремени третман у зависности од дозе је ослабио смањење производње АТП-а у ћелијама третираним симвастатином, од којих су само концентрације од 500, 1000 и 2000 мг/мл достигле статистички значај. С друге стране, иако је вербаскозид показао тренд обнављања производње АТП-а на 50 мг/мл, није достигао статистички значај (слика 4Б).
Слика 4. Заштитни ефекат (а) ХЦЕ и (б) вербаскозида на смањење производње АТП-а у ћелијама Л6 изазвано симвастатином. Вредности представљају средња вредност 7СД (н=3–5). Значајна разлика између третмана само симвастатином и контролних група које користе Студентов т-тест: ###по0.001. Значајна разлика између свих група третираних симвастатином са или без ХЦЕ или ко-третмана вербаскозидом коришћењем једносмерне АНОВА: *по0,05, **по0,01.
4. Дискусија
Са све већом преваленцом кардиоваскуларних болести (КВБ) и пацијентима са дијагнозом хиперхолестеролемије на глобалном нивоу, употреба статина је постала чешћа. Иако се статини генерално веома добро толеришу, повреда мишића је често пријављивана нуспојава повезана са употребом статина која се може јавити акутно недељама или месецима након што је лек започет (Фине, 2003). Мишићни симптоми могу варирати од благих проблема, на пример, бол, осетљивост или слабост са или без повишења креатин киназе (ЦК), до најтежег стања рабдомиолизе (Армитаге, 2007; Ху ет ал., 2012). Због појаве ових нежељених ефеката и чињенице да не постоји ефикасан третман за мишићну токсичност изазвану статинима, статини остају недовољно коришћени. У широкој анкети на 10.409 француских субјеката спроведеној путем телефонског интервјуа, 10 процената пацијената који су примали терапију статинима пријавило је мишићне симптоме, од којих је 30 процената ових симптоматских пацијената довело до прекида терапије (Росенбаум ет ал., 2013).
Први пут смо показали да водени екстракт одХербаЦистанцхес, уобичајено коришћена традиционална кинеска биљка, могла би имати заштитни ефекат против токсичности изазване симвастатином ин витро у ћелијама скелетних мишића Л6, што указује на потенцијалХербаЦистанцхесводени екстракт (ХЦЕ) због његове заштитне улоге токсичност мишића изазвана статинима, што је познати уобичајени нежељени ефекат код пацијената који узимају статине. Моћна способност ХЦЕ да заштити од мишићне токсичности изазване статинима би стога била од великог потенцијала.
Према традиционалној теорији у ТЦМ-у, Јанг је повезан са митохондријалним енергетским метаболизмом у телу, а утврђено је да преписивање биљака које оснажују Јанг побољшава генерисање митохондријалног АТП-а (Ко и Леунг, 2007). Занимљиво је да смо приметили смањење производње АТП-а у ћелијама Л6 скелетних мишића третираних симвастатином, а ово смањење производње АТП-а је значајно побољшано уз ХЦЕ ко-третман. У нашој студији, користећи ћелије скелетних мишића пацова Л6, показали смо смањење виталности ћелија узроковано симвастатином. Ово смањење виталности ћелија је значајно побољшано са заједничким третманомХербаЦистанцхесна начин који зависи од дозе. Иако тачан механизам мишићне токсичности изазване статинима није у потпуности разјашњен, сугерисано је да је апоптоза здравих скелетних миоцита изазвана статином фактор који узрокује миопатију, најчешћи нежељени ефекат који доживљавају корисници статина (Диркс и Јонес, 2006.) . У нашој студији, приметили смо значајно повећање апоптотичких ћелија изазваних симвастатином, што је било повезано са значајно повишеном активношћу каспазе 3. Ови подаци су такође у складу са претходним студијама, које су показале да различити статини могу индуковати апоптозу у скелетним миобластима, миотубама и у диференцираним примарним људским ћелијама скелетних мишића кроз активацију активности каспазе-9 и каспазе-3 (Диркс и Јонес, 2006). Наш ХЦЕ је био у стању да спречи ово повећање апоптозе активиране каспазом-3 изазвано симвастатином на начин зависан од дозе.
ХербаЦистанцхес
Осим тога, претходна литература је сугерисала да је вербаскозид један од главних активних састојака у њемуХербаЦистанцхес. Вербаскозид, такође познат као актеозид, припада члану фенилетаноидних гликозида, природне групе полифенолних једињења која су растворљива у води (Лиао ет ал., 1999). Раније је показано да је вербаскозид моћан антиоксидант који може да испољи снажну акцију чишћења РОС и антиоксидативне активности (Лиао ет ал., 1999). У нашој студији, да бисмо утврдили да ли је вербаскозид главна компонента у нашем ХЦЕ која доприноси уоченим корисним ефектима, тестирали смо ефекте вербаскозида у концентрацијама од 0–160 мМ. Пошто смо показали да је наш ХЦЕ активан у опсегу концентрација од 250–2000 мг/мл, на основу наших ХПЛЦ резултата који сугеришу да је наш ХЦЕ садржавао вербаскозид у концентрацији од 0,085% теж. /вт, активна концентрација вербаскозида треба да се креће између 0,2125–1,7 мг/мл (тј. 0,34–2,72 мМ), да ли вербаскозид треба да буде активни састојак? Ипак, нисмо успели да приметимо значајан повољан ефекат вербаскозида са тестираним опсегом концентрација, иако смо приметили тренд зависан од дозе за благотворно дејство вербаскозида на ћелије скелетних мишића Л6. Ови подаци сугеришу да је мало вероватно да се благотворни ефекат нашег ХЦЕ примећеног у Л6 скелетним ћелијама приписује ефекту самог вербаскозида, што сугерише да би компоненте које нису вербаскозид могле бити одговорне за уочене корисне ефекте. Такође је могуће да вербаскозид може да ступи у интеракцију са другим биоактивним једињењима у екстракту како би допринео корисним ефектима. Додатни експерименти који користе фракционисање вођено биолошким тестом биће корисни у пружању даљег увида у откривање биоактивних компоненти одговорних за допринос уоченим заштитним ефектима ХЦЕ на токсичност мишића изазвану симвастатином.
У закључку, ова студија указује да би ХЦЕ могао да испољи моћне заштитне ефекте на смањење виталности мишићних ћелија ин витро изазвано симвастатином. Ови резултати пружају прелиминарне доказе који сугеришу да би наш водени екстракт ХЦ могао бити од терапеутске вредности као функционална храна или нутриционизам за пацијенте са хиперлипидемијом од којих се захтева да се повуку из лечења статинима због миотоксичности изазване статинима.
ЗахвалностОву студију је финансијски подржао Биро за храну и здравље ХКСАР, Фонд за здравство и медицинска истраживања бр. 11120831.
Референце
Армитаге, Ј., 2007. Безбедност статина у клиничкој пракси. Ланцет 370, 1781–1790.
Белтовски, Ј., Војцицка, Г., Јамроз-Висниевска, А., 2009. Нежељени ефекти статина – механизми и последице. Цурр. Друг Саф. 4, 209–228.
Цаи, РЛ, Ианг, МХ, Схи, И., Цхен, Ј., Ли, ИЦ, Ки, И., 2010. Активност против умора екстракта богатог фенилетаноидима из Цистанцхе десертицола. Пхитотхер. Рес. 24, 313–315.
Диркс, АЈ, Јонес, КМ, 2006. Статин-индукована апоптоза и скелетна миопатија. Сам. Ј. Пхисиол. Целл Пхисиол. 291, Ц1208–Ц1212.
Фине, ДМ, 2003. Токсичност мишића повезана са статинима. Цлин. Пхармацол. 3, 554.
Голомб, БА, Еванс, МА, 2008. Нежељени ефекти статина: преглед литературе и докази за митохондријски механизам. Сам. Ј. Цардиовасц. Другс 8, 373–418.
Ху, М., Цхеунг, БМ, Томлинсон, Б., 2012. Безбедност статина: ажурирање. Тхер. Адв. Друг Саф. 3, 133–144.
Кауфманн, П., Торок, М., Захно, А., Валдхаусер, КМ, Брецхт, К., Крахенбухл, С., 2006. Токсичност статина на митохондрије скелетних мишића пацова. Ћелија. Мол. Лифе Сци. 63, 2415–2425.
Ко, КМ, Леунг, ХИ, 2007. Повећање капацитета за генерисање АТП-а, антиоксидативне активности и имуномодулаторних активности кинеским Ианг и Иин тонизирајућим биљем. Брада. Мед. 2, 3.
Кобаиасхи, М., Кагава, Т., Наруми, К., Итагаки, С., Хирано, Т., Исеки, К., 2008. Бикарбонатна суплементација као превентивни начин код оштећења мишића изазваних статинима. Ј. Пхарм. Пхарм. Сци. 11, -8.
Кромер, А., Моосманн, Б., 2009. Повреда јетре изазвана статинима укључује унакрсно преговарање између путева биосинтезе холестерола и селенопротеина. Мол. Пхарм. 75, 1421–1429.
Леунг, ХИ, Ко, КМ, 2008. Екстракт Херба Цистанцхе побољшава стварање митохондријалног АТП-а у срцима пацова и ћелијама Х9Ц2. Пхарм. Биол. 46, 418.
Лиао, Ф., Зхенг, РЛ, Гао, ЈЈ, Јиа, ЗЈ, 1999. Ретардација замора скелетних мишића од стране два фенилпропаноидна гликозида: вербаскозида и мартензита из Педицуларис плицата Маким. Пхитотхер. Рес. 13, 621–623.
Лу, КГ, Лиу, ХБ, Гу, КК, 1995. Студија о хемијским састојцима Цистанцхе десертицола Ма. и Цистанцхе салса (ЦА Меи) Г. Бецк. Брада. Традит. Херб. Дроге 26, 143.
Фармакопејска комисија, 2010. Фармакопеја Народне Републике Кине. Цхемицал Индустри Пресс, Пекинг.
Росенбаум, Д., Даллонгевилле, Ј., Сабоурет, П., Бруцкерт, Е., 2013. Прекид терапије статинима због нежељених ефеката мишића: анкета у стварном животу. Нутр. Метаб. Цардиовасц. Дис. 23, 871-875.
Сиу, АХ, Ко, КМ, 2010. Екстракт Херба Цистанцхе побољшава статус митохондријалног глутатиона и дисање у срцима пацова, са могућом индукцијом одвајајућих протеина. Пхарм. Биол. 48, 512–517.
Суи, ЗФ, Гуа, ТМ, Лиу, Б., Пенг, СВ, Зхао, ЗЛ, Ли, Л., Схи, ДФ, Ианг, РИ, 2011. Једињење угљених хидрата растворљиво у води из телаХербаЦистанцхес: изолација и њен ефекат уклањања слободних радикала у кожи. угљени хидрат. Полим. 85, 75.
Тхомпсон, ПД, Цларксон, П., Карас, РХ, 2003. Миопатија повезана са статином. ЈАМА 289, 1681–1690.
Ваклавас, Ц., Цхатзизисис, ИС, Зиакас, А., Замбоулис, Ц., Гианноглоу, ГД, 2009. Молекуларна основа миопатије повезане са статинима. Атеросклероза 202, 18–28.
Велхо, ЈА, Оканобо, Х., Дегаспери, ГР, Мацумото, МИ, Алберици, ЛЦ, Цоссо, РГ, Оливеира, ХЦ, Верцеси, АЕ, 2006. Статини индукују прелаз пропусности митохондрија зависан од калцијума. Токсикологија 219, 124–132.
Ксионг, К., Хасе, К., Тезука, И., Тани, Т., Намба, Т., Кадота, С., 1998. Хепатопротективна активност фенилетаноида из Цистанцхе десертицола. Планта Мед. 64, 120–125.
