Укупни гликозиди Цистанцхе Десертицола промовишу опоравак неуролошких функција индукујући неуроваскуларну регенерацију путем Нрф- 2/Кеап-1 пута у МЦАО/Р пацовима-Ⅱ

ТГ промовишу неуронско ремоделирање код И/Р повређених пацова

Према бројним студијама, неурогенеза након можданог удара може значајно побољшати функционални опоравак. Синаптофизин (СИН), протеини постсинаптичке густине 95 (ПСД-95) и протеин 2 повезан са микротубулама (МАП-2) су коришћени као маркери за испитивање неуронске пластичности у исхемијској пенумбри кортекса. Да би се проценили ефекти третмана ТГ, ПС и ОС на неурогенезу код И/Р повређених пацова, извршена је имунофлуоресценција и вестерн блот за СИН, ПСД95 и МАП-2 експресије. Као што је приказано на сликама 9 и 10, нивои експресије СИН, ПСД95 и МАП-2 код И/Р пацова након 14 дана реперфузије су се смањили у поређењу са НОР пацовима, док би излечење ТГс и ПСс могло значајно да повећа- регулишу нивое њихове експресије. Група ОС није имала значајне промене у поређењу са групом МОД. Подаци су показали да је излечење ТГ и ПС било у стању драматичнопромовишу неурално ремоделирање након И/Р повреде. 

ПРИРОДНА ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ЗАШТИТУ ОД ИСХЕМИЈСКОГ МОЖДА ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

ТГс мењају изразе Нрф-2 и Кеап{1}} код И/Р повређених пацова

Оксидативни стрес је главни патогени механизам у И/Р повреди. Студије су потврдиле да је Нрф-2 главни регулатор антиоксидативних реакција. Да бисмо истражили оксидативне одговоре посредоване Нрф-2 и Кеап-1 након И/Р повреде, проценили смо цитоплазматски

израз као и нуклеарна транслокација Кеап-1. У међувремену, експресија Нрф-2 у можданим ткивима пацова повређених И/Р је такође анализирана (Слике 10 и 11). Према имунофлуоресцентној анализи, утврђено је да се Нрф-2 углавном налази у цитоплазми у НОР групи. У групи ТГс, експресија Нрф-2 у цитоплазматској локализацији била је смањена, али повећана у језгру, а такође је примећена смањена Кеап{6}} експресија. Подаци су показали да заштита мозга ТГ може бити повезана са модулацијом Нрф-2 и Кеап-1.

ТГ смањују оксидативни стрес можданог ткива код И/Р повређених пацова

Да би се потврдили антиоксидативни ефекти ТГ, активности СОД, ЦАТ, ГСХ-Пк и МДА су процењене код И/Р повређених пацова. На слици 12, садржај МДА је значајно повећан у МОД групи, а истовремено је смањена активност СОД, ЦАТ и ГСХ-Пк у поређењу са нормалним пацовима. Супротно томе, третман ТГ је довео до значајног смањења садржаја МДА и повећања активности СОД, ЦАТ и ГСХ-Пк. Ови резултати су додатно потврдили антиоксидациону активност ТГ.

ПРИРОДНА ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ЛЕЧЕЊЕ ИСХЕМИЈСКОГ МОЖДА ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

ДИСКУСИЈА

Многе студије сугеришу да ТЦМ Ц. десертицола има екстензивне биолошке активности, нпр. побољшава способност учења, памћења и имунитета. Међутим, активне компоненте Ц. десертицола за неуропротекцију остају нејасне. Садашњи рад има за циљ да прикаже активне компоненте изЦ. десертицола против исхемијског можданог ударана моделу МЦАО/Р. Три екстракта из Ц. десертицола (ТГ, ПС и ОС) су коришћена да би се проценио њихов ефекат на МЦАО/Р пацове, као и могући механизми.

Мождани удар је уобичајена акутна цереброваскуларна болест. Епидемиолошке студије показују да је мождани удар чешћи код мушкараца него код жена. Тако су у нашем експерименту за тестове усвојени мужјаци пацова. Наши резултати су доказали да индукција И/Р убрзава оксидативни стрес и запремину инфаркта, разбијајући БББ и доводи до нервних и цереброваскуларних повреда. Након скрининга, утврђено је да ТГ смањују запремину инфаркта и подстичу неурално ремоделирање и ангиогенезу. Штавише, примећено је да ТГ одржавају интегритет БББ након И/Р повреде. Напротив, ПС и ОС не доносе значајно ублажавање И/Р повреда. Према томе, ТГ се сматрају главном активном фракцијом Ц. десертицола за неуропротекцију, потенцијално кроз промовисање неуралног ремоделирања, ангиогенезе и интегритета БББ путем активације Нрф- 2/Кеап-1 пута.

Све више доказа указује да је успостављање ефикасне колатералне циркулације значајно важно за избегавање формирања инфаркта и исхемијске пенумбре, и да је критичан третман у раној фази исхемијског можданог удара. Пролиферација васкуларних ендотелних ћелија и ћелија глатких мишића након исхемијског инфаркта одређује успостављање колатералне циркулације. Међутим, модели исхемије имају заједнички феномен - то јест, оксидативни стрес широко постоји у микроваскулатури мозга. Подаци студије су показали да велики број антиоксиданата може пореметити функцију БББ и својства ангиогенезе. ЦД31 и а-СМА су маркери васкуларних ендотелних ћелија, као и ћелија глатких мишића, респективно. Да бисмо истражили ефекат горе поменуте ћелијске пролиферације екстраката из Ц. десертицола, испитали смо експресију ЦД31 и а-СМА у хомогенату церебралне исхемијске пенумбре. Наши подаци су показали да су ТГ упадљиво побољшали експресију ЦД31 и а-СМА. Међутим, није било значајних разлика између група ПС и ОС. Стога смо закључили да ТГ могу смањити оштећење мозга промовисањем ангиогенезе повећањем експресије ЦД31 и а-СМА, док ПС и ОС нису пружили такву заштиту од оштећења мозга. Ови резултати су даље потврдили да само ТГ могу спречити церебралну И/Р повреду.

Исхемијски мождани удар може се сматрати резултатом церебралне исхемије узроковане оштећењем пластичности неурона или ремоделирањем подручја мозга. Већина пацијената са можданим ударом пати од неуролошких дефицита. Активирање неурогенезе је обећавајућа стратегија за пацијенте са можданим ударом да побољшају своје неуролошке функције. Неурогенеза директно учествује у опоравку неуролошких функција након И/Р повреде мозга. Претходна истраживања показују да ТГ могу побољшати стопу преживљавања хипокампалних пирамидалних ћелија и индуковати неурогенезу. Оксидативни стрес узрокује губитак неурона током многих болести, као што су Паркинсонова болест, мождани удар и тако даље. Нрф-2 транскрибује много гена повезаних са неуро-заштитом у њиховом промоторском региону, углавном укључујући СОД, МДА, ЦАТ и г-глутамил цистеин лигазе, итд. СИН, ПСД-95 и МАП{{ 4}} протеини, који су блиско повезани са синаптичким формирањем и неуротрансмисијом, могу се сматрати маркерима истраживачке неуронске пластичности у региону исхемијске пенумбре. Након проучавања, открили смо да лек са ТГ може значајно да повећа експресију ПСД95, СИН и МАП-2, што указује да је церебрална заштита ТГ у корелацији са побољшаном пластичношћу неурона током И/Р. Међутим, штета је што не постоји очигледна разлика између група ПС-а и ОС-ова. Ови резултати су показали да ТГ могу побољшати неуропластичност након церебралне И/Р повреде.

Истраживање пацијената са можданим ударом показало је да се дисфункција БББ може сматрати упадљивим атрибутом периисхемијског мозга (Банг ет ал., 2007). ТЈ, који се састоје од цитоплазматских протеина, трансмембранских протеина и молекула адхезије споја између капиларних ендотелних ћелија, веома су важни у одржавању интегритета БББ (Ие ет ал., 2019). Међу њима, ЗО-1, цлаудин-5 и оклудин су најважнији протеини у ТЈ. Све већи докази показују да повећана пермеабилност БББ изазвана исхемијом генерално корелира са променама ЗО-1, клаудина-5 и оклудина (Цао ет ал., 2016а; Паге ет ал., 2016; Иу и сар., 2017.; Лиу ет ал., 2018.); У овом раду, резултати су показали да иако ТГ могу значајно повећати експресију ЗО-1, клаудина-5 и оклудин протеина у можданим ткивима изазваним МЦАО, ни ПС ни ОС то нису учинили. БББ се састоји од церебралних ендотелних ћелија и блиско је повезан са перицитима (Ниул-Тотх ет ал., 2016). Перицити су витални за интегритет БББ (Белл ет ал., 2010). Исхемијски мождани удар изазива смрт перицита и одвајање од ендотелних ћелија мозга у акутној фази, дестабилизујући тако микроваскулатуру и мењајући својства БББ (Зецхариах ет ал., 2013). Наши подаци су показали да ТГ могу повећати покривеност перицитима на капиларама и повећати нивое експресије ЗО-1, клаудина-5 и оклудина. Ови феномени су доказали да ТГ могу ефикасно заштитити интегритет БББ након церебралне И/Р повреде. Укратко, ТГ могу ублажити церебралну повреду на више начина, као што је промовисање ангиогенезе, побољшање пластичности неурона и одржавање интегритета БББ.

Затим смо истражили сигнални пут да бисмо истражили механизам који лежи у основи заштите мозга ТГ. Процес И/Р повреде је мултифакторски, те су стога бројни механизми укључени у патогенезу. Оксидативни стрес је основни фактор ризика који доприноси повреди мозга изазваном И/Р, као што је оштећење структуре БББ, дисфункција васкуларног ендотела и погоршање исхемијске повреде неурона. Дакле, оксидативни стрес је постао атрактивна терапијска мета код повреде мозга изазване И/Р. Ензими фазе 2, који су посредовани фактором повезаним са нуклеарним фактором Е2-сродним фактором-2 (Нрф-2), сматрају се важним средством помоћу којег се неурони штите од оксидативног стреса. Све више доказа указује да је активација Нрф-2 током И/Р потенцијална терапијска мета за неуропротекцију. Нрф-2, као важан регулатор ендогене антиоксидативне одбране, посредује у нивоу хем оксигеназе 1 (ХО-1) и других антиоксидативних ензима, као што је НАД(П)Х кинон оксидоредуктаза 1 (НКО1), СОД, ЦАТ, ГСХ и МДА. Штавише, Нрф-2 игра важну регулаторну улогу у ангиогенези. Ова студија показује да се Нрф-2 може значајно побољшати и активирати у процесу васкуларног развоја.

ПРИРОДНА ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА АНТИ-ИСХЕМИЈСКИ МОЖДАНИ удар ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%

Као што је претходно описано, ТГ садрже много биоактивних једињења, на пример, ехинакозид, тубулозид А, актеозид, изоактеозид и 2'-ацетилактеозид, а неки од њих су показали неуропротективне функције након церебралне И/Р повреде. Ехинакозид има много фармаколошких ефеката, као што су антиоксидација, анти-сенесценција, неуропротекција, анти-инфламација, промоција цицатризације, хепатопротекција, промоција формирања костију и антитуморске активности. Недавно је ехинакозид идентификован као моћан антиоксиданс у централном нервном систему. Ехинакозид може да смањи садржај МДА и да побољша активности СОД и ГСХ-Пк код исхемијске повреде мозга, а молекуларна анализа је показала да се ехинакозид може везати за Кеап-1, што доводи до транслокације Нрф-2 нуклеарне јединице. Студија коју је спровела Ксиа показала је да актеозид може да смањи запремину инфаркта и садржај воде у мозгу како би побољшао неуролошки дефицит код МЦАО/Р пацова ублажавањем оксидативног стреса. Друге студије су показале да изоактеозид може повећати активности ћелијских антиоксидативних ензима, СОД и ЦАТ у В79-4 ћелијама третираним Х2О2-. На основу горњих извештаја о активним једињењима садржаним у ТГ, могуће је закључити да би ТГ моглиштите од исхемијског можданог удара путем антиоксидационих путева.

Ли је известио о неуропротективним ефектима фенилетаноидних гликозида (ПхГ) на Х2О2-индуковану апоптозу на ПЦ12 ћелијама путем Нрф2/АРЕ пута (Ли ет ал., 2018). Ови ПхГ су значајно потиснути покретањем нуклеарне транслокације Нрф2 и повећањем експресије ХО-1, НКО1, каталитичке подјединице глутамат цистеин лигазе (ГЦЛЦ) и подјединице модификатора глутамат-цистеин лигазе (ГЦЛМ) (Ли ет ал., 2018). Гонг ет ал., 2019). Стога, ови налази сугеришу да пут Нрф-2/АРЕ игра кључну улогу у заштитним ефектима посредованим ПхГс на неуронске ћелије. Слично, у овој студији смо открили да ТГ могу смањити ниво МДА и повећати нивое СОД, ЦАТ и ГСХ-Пк код И/Р пацова. У међувремену, ТГ би могли повећати експресију Нрф2 у језгру, смањити одговарајућу експресију у цитоплазми и значајно смањити Кеап{16}} експресију. Стога, пут Нрф-2/Кеап-1 може бити укључен у неуропротективне ефекте посредоване ТГ. Даља валидација овог пута ће се вршити ин витро ћелијском културом са моделима повреде депривације кисеоника и глукозе/реоксигенације у будућности. Штавише, екстракти Ц. десертицола су давани у нашој студији током 14 дана непрекидно. Пошто би неурогенеза одраслих утицала на тумачење неуропротективних ефеката током 14 дана реперфузије, неурогенеза се не може искључити из нашег тренутног дизајна експеримента у истраживању неуропротективног ефекта ЦТ-а. Ово је ограничење нашег истраживања.

У закључку, ТГ из Ц. десертицола могупојачавају ангиогенезу и неурогенезукао и одржавање интегритета БББ код пацова са И/Р повредама, али не и ПС и ОС. Ефекти би могли бити посредовани активацијом Нрф-2/Кеап-1 путање.

ПРИРОДНА ЦИСТАНЦХЕ ТУБУЛОСА ЗА ЛЕЧЕЊЕ ИСХЕМИЈСКОГ МОЖДА ПХГС75% ЕЦХ 30% АЦТ 12%