Вакцине изазивају високо реактивни ћелијски имунитет на САРС-ЦоВ-2 Омицрон варијанту

Контакт: Аудреи Ху Вхатсапп/хп: 0086 13880143964 Е-пошта:audrey.hu@wecistanche.com

Јиниан Лиу1*, Абисхек Цхандрасхекар1*, Даниел Селлерс1*, Јулиа Барретт1, Мицхелле Лифтон1, Катхерине МцМахан1, Мицхаела Сциацца1,

Халеи ВанВик1, Цинди Ву1, Јингиоу Иу1, Аи-рис И. Цоллиер1, Дан Х. Бароуцх1,2*

1 Бетх Исраел Деацонесс Медицал Центер, Бостон, МА, САД;

2 Рагон институт МГХ, МИТ, и Харвард, Кембриџ, МА, САД

Показало се да високо мутирана САРС-ЦоВ-2 варијанта Омицрон (Б.1.1.529) избегава значајан део одговора неутрализујућих антитела изазваних тренутним вакцинама које кодирају ВА1/2020 Спике имуноген1, што доводи до повећаног продора инфекција и смањена ефикасност вакцине. Ћелијски имуни одговори, посебно одговори ЦД8 плус Т ћелија, вероватно су критични за заштиту од тешке САРС-ЦоВ-2 болести2-6. Овде показујемо да је ћелијски имунитет изазван актуелним САРС-ЦоВ-2 вакцинама веома унакрсно реактиван на САРС-ЦоВ-2 Омицрон варијанту. Појединци који су примили вакцине Ад26.ЦОВ2.С или БНТ162б2 показали су трајне ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелијске одговоре који су показали екстензивну унакрсну реактивност против Делта и Омицрон варијанти, укључујући централне и ефекторске ћелијске субпопулације. Медијан одговора ЦД8 плус Т ћелија специфичних за Омицрон износио је 82-84 процената ВА1/2020-специфичних ЦД8 плус Т ћелија одговора. Ови подаци сугеришу да садашње вакцине могу пружити значајну заштиту од тешке болести са САРС-ЦоВ-2 варијантом Омицрон упркос значајном смањењу одговора неутрализујућих антитела.

цистанцхе здравствене предности: побољшање имунитета

Недавне студије су показале да су неутрализујућа антитела изазвана вакцином (НАбс) значајно редукована на високо мутирану САРС-ЦоВ-2 Омицрон варијанту, што резултира брзим глобалним ширењем, укључујући продорне инфекције код потпуно вакцинисаних појединаца1. Да бисмо проценили унакрсну реактивност ћелијских имуних одговора изазваних вакцином против САРС-ЦоВ-2 Омицрон варијанте, проценили смо ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелијске одговоре код 51 особе која је вакцинисана Ад26 базираним на вектору аденовируса. ЦОВ2.С вакцина7 (Јохнсон & Јохнсон; Н=20) или БНТ162б2 вакцина заснована на мРНА8 (Пфизер; Н=31).

Након вакцинације БНТ162б2, приметили смо високе ВА1/2020-специфичне НАб одговоре у 1. месецу, након чега је уследио нагли пад до 8. месеца, као што се очекивало9,10 (Слика 1а). Након вакцинације против Ад26.ЦОВ2.С, било је значајно нижих ВА1/2020-специфичних НАб одговора у првом месецу, али су ови одговори били трајнији и постојали у месецима 89,11 (Слика 1а). Међутим, за обе вакцине су примећени минимални унакрсно реактивни НАбс специфични за Омицрон (слика 1а), што је у складу са недавним подацима у одсуству додатног појачавања1. Одговори везивних антитела специфичних за домен везивања рецептора (РБД) су процењени помоћу ЕЛИСА и показали су сличне трендове, са минималним унакрсним реактивним Омицрон-специфичним везујућим антителима (слика 1б). здружени пептидни ИФН-г ЕЛИСПОТ тестови су показали значајну унакрсну реактивност на Омицрон (проширени подаци, слика 1). Затим смо проценили Спике-специфичне ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелијске одговоре помоћу тестова бојења интрацелуларних цитокина. Ад26.ЦОВ2.С индуковао је медијану Спике-специфичног ИФН-г ЦД8 плус Т ћелија одговора од 0.061 проценат , 0.062 процента и {{ 72}}.051 проценат у односу на ВА1/2020, Делта и Омицрон, респективно, у 8. месецу након вакцинације (слика 2а). БНТ162б2 индуковао је медијан Спике-специфичног ИФН-г ЦД8 плус Т ћелија одговора од 0,028 процената и 0,023 процената у односу на ВА1/2020 и Омицрон, респективно, у 8. месецу након вакцинације (слика 2а). Ови подаци сугеришу да су Омицрон-специфични одговори ЦД8 плус Т ћелија били 82-84 процената унакрсно реактивни са ВА1/2020-специфичним ЦД8 плус Т ћелија одговорима. Спике-специфични ИФН-г ЦД4 плус одговори Т ћелија изазвани Ад26.ЦОВ2.С су били медијана од 0,026 процената, 0,030 процената и 0,029 процената у односу на ВА1/2020, Делта и Омицрон, респективно, а БНТ162б2 су били медијани 0,033 процената и 0,027 процената у односу на ВА1/2020 и Омицрон, респективно, што указује на значајну унакрсну реактивност одговора ЦД4 плус Т ћелија (слика 2б). Значајна унакрсна реактивност Омикрона је такође примећена за Спике-специфичне ТНФ-а и ИЛ-2 који луче ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелије (Проширени подаци, слика 2).

Анализа линеарне регресије је показала да су Омицрон-специфични одговори ЦД8 плус Т ћелија у корелацији са одговорима ВА1/2020-специфичних ЦД8 плус Т ћелија за Ад26.ЦОВ2.С вакцину за обе временске тачке (Р=0.78, П<0.0001, slope="" 0.75)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.56,"><0.0001, slope="" 0.81),="" although="" two="" individuals="" had="" undetectable="" omicron-specific="" cd8+="" t="" cell="" responses="" following="" bnt162b2="" vaccination="" (fig.="" 3a).="" similarly,="" omicron-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" correlated="" with="" wa1/2020-specific="" cd4+="" t="" cell="" responses="" for="" both="" the="" ad26.cov2.s="" vaccine="" (r="0.79,"><0.0001, slope="" 0.83)="" and="" the="" bnt162b2="" vaccine="" (r="0.90,"><0.0001, slope="" 0.88)="" (fig.3b).="" spike-specific="" ifn-g="" cd8+="" and="" cd4+="" t="" cell="" central="" memory="" and="" effector="" memory="" subpopulations="" elicited="" by="" ad26.cov2.s="" also="" showed="" extensive="" cross-reactivity="" to="" delta="" and="" omicron.="" at="" month="" 8,="" cd8+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.076%,="" 0.054%,="" and="" 0.075%,="" cd8+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.168%,="" 0.143%,="" and="" 0.146%,="" cd4+="" central="" memory="" responses="" were="" 0.030%,="" 0.035%,="" and="" 0.038%,="" and="" cd4+="" effector="" memory="" responses="" were="" 0.102%,="" 0.094%,="" and="" 0.083%,="" against="" wa1/202,="" delta,="" and="" omicron,="" respectively="" (fig.="">

Наши подаци показују да Ад26.ЦОВ2.С и БНТ162б2 изазивају широко реактивни ћелијски имунитет против САРС-ЦоВ-2 варијанти укључујући Омицрон. Конзистентност ових запажања у две различите технологије платформе за вакцину (вирусни вектор и мРНА) сугерише могућност генерализације ових налаза. Екстензивна унакрсна реактивност одговора Омицрон-специфичних ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелија у оштрој је супротности са значајно смањеним одговорима неутрализујућих и везујућих антитела специфичних за Омицрон. Ови подаци су у складу са претходним студијама које показују већу унакрсну реактивност ћелијских имуних одговора изазваних вакцином у поређењу са хуморалним имуним одговорима против САРС-ЦоВ-2 Алфа, Бета и Гама варијанти12. 82-84 проценат унакрсне реактивности одговора ЦД8 плус Т ћелија на Омицрон је у складу са теоријским предвиђањима заснованим на Омицрон мутацијама6.

Претклиничке студије су показале да ЦД8 плус Т ћелије доприносе заштити од САРС-ЦоВ-2 код резус макака, посебно када су одговори антитела субоптимални5. Издржљиви одговори ЦД8 плус и ЦД4 плус Т ћелија су такође пријављени након инфекције и вакцинације2- 4,6,9,11,13,14. С обзиром на улогу ЦД8 плус Т ћелија у уклањању вирусних инфекција, вероватно је да ћелијски имунитет значајно доприноси заштити вакцине против тешке САРС-ЦоВ-2 болести. Ово може бити посебно релевантно за Омицрон, који избегава значајан део одговора антитела. Наши подаци сугеришу да тренутне вакцине могу да пруже значајну заштиту од тешке болести због САРС-ЦоВ-2 Омицрон варијанте упркос смањеном одговору неутрализујућих антитела и повећаном броју инфекција.

цистанцхе прах

Методе

Студијска популација

Узорци појединаца који су примили вакцину БНТ162б2 добијени су из биорепозиторија узорака Бетх Исраел Деацонесс Медицал Центер (БИДМЦ). Узорци појединаца који су примили Ад26.ЦОВ2.С су добијени из студије ЦОВ1001 (НЦТ04436276). Обе студије је одобрио институционални одбор за ревизију БИДМЦ-а. Сви учесници су дали информисани пристанак. Појединци су искључени из ове студије ако су имали историју САРС-ЦоВ- 2 инфекција, примили су друге вакцине против ЦОВИД-19 или су примали имуносупресивне лекове. Тест неутралисања антитела на псеудовирус

САРС-ЦоВ-2 псеудовируси који експримирају репортерски ген луциферазе коришћени су за мерење антитела за неутрализацију псеудовируса. Укратко, конструкције паковања псПАКС2 (Програм ресурса и реагенса за АИДС), репортер плазмида луциферазе пЛентиЦМВ Пуро-Луц (Аддгене) и пцДНА3 који експримира протеин шиљака.1-САРС-ЦоВ-2 СΔЦТ су били ко- трансфицирано у ћелије ХЕК293Т (АТЦЦ ЦРЛ_3216) са липофектамином 2000 (ТхермоФисхер Сциентифиц). Псеудовируси САРС-ЦоВ-2 варијанти су генерисани коришћењем соја ВА1/2020 (Вухан/ВИВ04/2019, ИД приступа ГИСАИД: ЕПИ_ИСЛ_402124), варијанта Б.1.1.7 (Алфа, ГИСАИД приступни ИД: ЕПИ_ИСЛ_601443), Б.1.351 варијанта (Бета, ГИСАИД приступни ИД: ЕПИ_ИСЛ_712096), Б.1.617. 2 (Делта, ИД приступа ГИСАИД: ЕПИ_ИСЛ_2020950), или Б.1.1.529 (Омицрон, ГИСАИД ИД: ЕПИ_ИСЛ_7358094.2). Супернатанти који садрже псеудотипове вируса су сакупљени 48х након трансфекције; псеудотипови вируси су пречишћени филтрацијом са 0.45- μм филтером. Да би се одредила активност неутрализације хуманог серума, ћелије ХЕК293Т-хАЦЕ2 су засејане у 96-плоче за културу ткива у бунарима при густини од 1,75 × 104 ћелија по бунарчићу преко ноћи. Трострука серијска разблажења топлотно инактивираних узорака серума су припремљена и помешана са 50 ул псеудовируса. Смеша је инкубирана на 37 степени током 1 х пре додавања ћелијама ХЕК293Т-хАЦЕ2. После 48 х, ћелије су лизиране у тесту Стеади-Гло Луциферасе (Промега) према упутствима произвођача. Титри неутрализације САРС-ЦоВ-2 дефинисани су као разблаживање узорка при којем је примећено смањење од 50 процената (НТ50) у релативним светлосним јединицама у односу на просек контролних јажица вируса.

Ензимски имуносорбентни тест (ЕЛИСА)

Антитела која се везују за САРС-ЦоВ-2 шик рецептор-везујући домен (РБД) у серуму су процењена ЕЛИСА-ом. 96-плоче са бунарима су обложене са 2 уг/мЛ САРС-ЦоВ-2 ВА1/2020, Б.1.617.2 (Делта), Б.1.351 (Бета), или Б.1.1.529 (Омицрон) РБД протеин у 1× физиолошком раствору пуферисаном Дулбеццо фосфатом (ДПБС) и инкубиран на 4 степена преко ноћи. Након инкубације, плоче су једном испране пуфером за испирање (0,05 процената Твеен 20 у 1 × ДПБС) и блокиране са 350 μЛ раствора казеинског блока по бунарчићу 2 до 3 сата на собној температури. Након инкубације, блок раствор је одбачен и плоче су осушене. Серијска разблажења топлотно инактивираног серума разблаженог у казеинском блоку додата су у јажице, а плоче су инкубиране 1 сат на собној температури, пре још 3 испирања и 1-часовне инкубације са разблажењем анти- 1:4000 хумана ИгГ пероксидаза рена (ХРП) (Инвитроген, ТхермоФисхер Сциентифиц) на собној температури у мраку. Плоче су испране 3 пута и у сваки бунар је додато 100 μЛ раствора СераЦаре КПЛ ТМБ СуреБлуе Старт; развој плоче је заустављен додавањем 100 μЛ СераЦаре КПЛ ТМБ Стоп раствора по бунарчићу. Апсорбанца на 450 нм, са референтном на 650 нм, забележена је ВерсаМак читачем микроплоча (Молецулар Девицес). За сваки узорак, титар крајње тачке ЕЛИСА је израчунат коришћењем 4-параметарске логистичке криве да би се израчунало реципрочно разблаживање серума које даје кориговану вредност апсорбанције (450 нм-650 нм) од 0,2. Пријављени су интерполирани титри крајње тачке.

екстракт цистанцхе десертицола: побољшати имунитет

Ензимски имуно-спот (ЕЛИСПОТ) тест.

ЕЛИСПОТ плоче су обложене мишјим антихуманим ИФН-моноклонским антителом из МабТецх-а у количини од 1 µг/бунарићу и инкубиране преко ноћи на 4 степена. Плоче су испране са ДПБС и блокиране са Р10 медијумом (РПМИ са 10 процената топлотно инактивираног ФБС са 1 процентом 100к пеницилин-стрептомицина, 1М ХЕПЕС, 100 мМ натријум пирувата, 200 мМ Л-глутамина 1 процента и 50 . 2-Меркаптоетанол) за 2-4 х на 37 степени. САРС-ЦоВ-2 скупљени С пептиди из САРС-ЦоВ-2 ВА1/2020, Б.1.617.2 (Делта) или Б.1.1.529 (Омицрон) (21ст Центури Биоцхемицалс) су припремљени и на плочи у концентрацији од 2 µг/бунарићу, и 100,000 ћелија/бунарићу је додато на плочу. Пептиди и ћелије су инкубирани 15-20 х на 37 степени. Сви кораци након ове инкубације изведени су на собној температури. Плоче су испране ЕЛИСПОТ пуфером за испирање и инкубиране 2-4 х са биотинилованим мишјим анти-хуманим ИФН-моноклонским антителом из МабТецх-а (1 µг/мЛ). Плоче су испране по други пут и инкубиране 2-3 х са коњугованим козјим анти-биотинским АП од Роцкланд, Инц. (1,33 µг/мЛ). После завршног испирања уследило је додавање раствора супстрата нитор-плави тетразолијум хлорид/5-бромо-4-хлоро 3'индолил фосфат п-толуидин со (НБТ/БЦИП хромаген) у трајању од 7 минута. Хромаген је одбачен, а плоче су испране водом и сушене на тамном месту 24 х. Плоче су скениране и пребројане на Целлулар Тецхнологиес Лимитед Иммуноспот Анализер.

Интрацелуларни тест бојења цитокина (ИЦС).

ЦД4 плус и ЦД8 плус Т ћелијски одговори су квантитативно одређивани збирним пептидима стимулисаним интрацелуларним цитокинским тестовима (ИЦС). Групе пептида садржавале су 15 аминокиселинских пептида који се преклапају са 11 аминокиселина које обухватају САРС-ЦоВ-2 ВА1/2020, Б.1.617.2 (Делта) или Б.1.1 .529 (Омицрон) Спике протеини (биохемије 21. века). 106 бунара мононуклеарних ћелија периферне крви је поново суспендовано у 100 µЛ Р10 медијума са додатком ЦД49д моноклонског антитела (1 µг/мЛ) и ЦД28 моноклонског антитела (1 µг/мЛ). Сваки узорак је процењен лажним (100 µЛ Р10 плус 0,5 процената ДМСО; позадинска контрола), пептидима (2 µг/мЛ) и/или 10 пг/мЛ форбол миристат ацетата (ПМА) и 1 µг/мл јономицина (Сигма- Алдрицх) (100 µЛ; позитивна контрола) и инкубирана на 37 степени 1 х. После инкубације, 0,25 µЛ ГолгиСтоп-а и 0,25 µЛ ГолгиПлуг-а у 50 µЛ Р10 је додато у сваки бунар и инкубирано на 37 степени током 8 сати, а затим држано на 4 степена преко ноћи. Следећег дана, ћелије су испране два пута са ДПБС, обојене воденом живом/мртвом бојом 10 минута, а затим обојене унапред одређеним титрима моноклонских антитела против ЦД279 (клон ЕХ12.1, ББ700), ЦД4 (клон Л200, БВ711), ЦД27 (клон М-Т271, БУВ563), ЦД8 (клон СК1, БУВ805), ЦД45РА (клон 5Х9, АПЦ Х7) 30 мин. Ћелије су затим испране два пута са 2 процента ФБС/ДПБС пуфера и инкубиране 15 минута са 200 µЛ БД ЦитоФик/ЦитоПерм раствора за фиксацију/пермеабилизацију. Ћелије су два пута испране са 1Кс Перм Васх пуфером (БД Перм/ВасхТМ пуфер 10Кс у комплету ЦитоФик/ЦитоПерм Фикатион/Пермеабилизатион, разблаженим са МиллиК водом и пропуштене кроз филтер од 0,22 µм) и обојене интрацелуларно са моноклонским БН27ц антителима (против моноклонских БН7ц; БУВ395) и ЦД3 (клон СП34.2, Алека 700), током 30 мин. Ћелије су два пута испране са 1Кс Перм Васх пуфером и фиксиране са 250 µЛ свеже припремљеног 1,5% формалдехида. Фиксне ћелије су пребачене у 96- плочу са округлим дном и анализиране помоћу БД ФАЦСимпхони™ система. Подаци су анализирани коришћењем ФловЈо в9.9.

Цистанцхе додатак:побољшати имунитет

Референце

1. Целе С, Јацксон Л, Кхан К, ет ал. САРС-ЦоВ-2 Омицрон има обимно, али непотпуно ослобађање од Пфизер БНТ162б2 изазване неутрализацијом и захтева АЦЕ2 за инфекцију. медРкив 2021.

2. Дан ЈМ, Матеус Ј, Като И, ет ал. Имунолошка меморија на САРС-ЦоВ-2 процењена до 8 месеци након инфекције. Наука 2021;371.

3. Сетте А, Цротти С. Прилагодљиви имунитет на САРС-ЦоВ-2 и ЦОВИД-19. Ћелија 2021;184:861-80.

4. Гоел РР, Паинтер ММ, Апостолидис СА, ет ал. мРНА вакцине изазивају трајну имунолошку меморију на САРС-ЦоВ-2 и варијанте које изазивају забринутост. Наука 2021;374:абм0829.

5. МцМахан К, Иу Ј, Мерцадо НБ, ет ал. Корелати заштите од САРС-ЦоВ-2 код резус макака. Природа 2021;590:630-4.

6. Грифони А, Веископф Д, Рамирез СИ, ет ал. Циљеви одговора Т ћелија на САРС-ЦоВ-2 коронавирус код људи са ЦОВИД-19 болешћу и неизложених појединаца. Ћелија 2020;181:1489-501 е15.

7. Садофф Ј, Греи Г, Вандебосцх А, ет ал. Безбедност и ефикасност једнодозне вакцине Ад26.ЦОВ2.С против Цовида-19. Н Енгл Ј Мед 2021;384:2187-201.

8. Полацк ФП, Тхомас СЈ, Китцхин Н, ет ал. Безбедност и ефикасност БНТ162б2 мРНА Цовид-19 вакцине. Н Енгл Ј Мед 2020.

9. Цоллиер АИ, Иу Ј, МцМахан К, ет ал. Диференцијална кинетика имунолошких одговора изазваних Цовид-19 вакцинама. Н Енгл Ј Мед 2021;385:2010-2.

10. Фалсеи АР, Френцк РВ, Јр., Валсх ЕЕ, ет ал. САРС-ЦоВ-2 Неутрализација са БНТ162б2 вакцином дозом 3. Н Енгл Ј Мед 2021.

11. Бароуцх ДХ, Степхенсон КЕ, Садофф Ј, ет ал. Издржљиви хуморални и ћелијски имуни одговори 8 месеци након вакцинације против Ад26.ЦОВ2.С. Н Енгл Ј Мед 2021;385:951-3.

12. Алтер Г, Иу Ј, Лиу Ј, ет ал. Имуногеност Ад26.ЦОВ2.С вакцине против САРС-ЦоВ-2 варијанти код људи. Природа 2021;596:268-72.

13. Поон ММЛ, Рибкина К, Като И, ет ал. САРС-ЦоВ-2 инфекција генерише ткивно локализовану имунолошку меморију код људи. Научна имунологија 2021;6:еабл9105.

14. Видал СЈ, Цоллиер АИ, Иу Ј, ет ал. Корелати неутрализације против САРС-ЦоВ-2 варијанти забринутости према серумима ране пандемије. Ј Вирол 2021;95:е0040421.

предности додатка цистанцхе:побољшати имунитет