Одрживост и антиоксидативни ефекти традиционалног расхладног пиринчаног праха (бедак Сејук) направљеног од Ориза Сатива Ссп. Индица и Ориза Сатива Ссп. Јапоница о ћелијама меланома Б164А5 изазваним УВБ-ом

Контакт: ali.ma@wecistanche.com

Ахмад Рохи Гхазали1*, Равеена Ваидхесвари Муралитхаран1, Цхан Кам Соон1, Тхарсини Салиам1, Нурул Најихах Ахмад Маулана1, Уммул Акеела Балкеес Мохамед Тхаха1, Расиидах Мохамад Халим1, Цхан Кам Соон1, Тхарсини Салиам1, Нурул Најихах Ахмад Маулана1, Уммул Акеела Балкеес Мохамед Тхаха1, Расиидах Мохамад Халим1, Расиидах Мохамад Халим1, Цхан Кам Соон1, Тхарсини Салиам1, М.

Апстрактан

Позадина:Традиционални расхладни пиринач у праху (бедак сејук) је на бази ферментисаног пиринчакозметичкикоја се наноси локално на кожу, као маска за лице преко ноћи. Према сведочењима корисника,бедак сејукулепшава и избељује кожу, при чему се ове предности могу искористити као потенцијално средство за хемопревенцију меланома.

Објективан:Стога је ова студија имала за циљ да утврди ефектебедак сејукнаправљен од Ориза сатива ссп. индица (Индица) и Ориза сативассп. јапоница (Јапоница) на ћелије меланома Б164А5 изазване УВБ-ом, а такође идентификујуантиоксиданскапацитети обе врсте бедак сеџука.

Методе:Оптимална доза Индица и Јапоница бедак сејук за лечење ћелија одређена је МТТ тестом. Затимантиоксиданскапацитети обе врстебедак сејукодређивани су коришћењем ФРАП теста.

Резултати:Из МТТ теста је утврђено да Индица и Јапоница бедак сејук нису показали цитотоксичне ефекте на ћелије. Дакле, ИЦ50 се не може добити и две веће дозе, 50 и 100 г/Л су изабране за лечење. У ФРАП тесту, Индица бедак сејук при 50 и 100 г/Л показао је ФРАП вредности од 0,003 ± 0,001 уг АА (аскорбинске киселине)/г бедак сејука и 0,004 ± 0,0003 уг АА/гбедак сејук. Док је Јапоница бедак сејук од 50 г/Л имао исту ФРАП вредност као Индица бедак сејук од 100 г/Л. Што се тиче Јапоница бедак сејука од 100 г/Л, показао је највећиантиоксиданскапацитет са ФРАП вредношћу {{0}}.01 ± 0,0007 уг АА/г бедак сејука што је било статистички значајно (п < 0,05) у поређењу са другим тестираним концентрацијама.

Закључак:У закључку, Јапоницабедак сејукима вишуантиоксиданскапацитет у поређењу са Индица бедак сејуком упркос томе што оба нису цитотоксична према ћелијама. Без обзира на то, потребна су даља истраживања пре него што се бедак сејук развије као потенцијални агенс за хемопревенцију меланома.

Кључне речи:Бедак сејук- ферментисани пиринач- ферментисанкозметика- Ориза сатива Индица- Ориза сатива Јапоница

Кликните да бистеекстракт цистанцхе и цистанцхе десертицола ма за антиоксиданс

Увод

Највећи орган људског тела је кожа, која чини 16 одсто телесне тежине човека. Епидермис коже функционише као заштитни слој који одваја организме од спољашње средине. Ово је кључно у супротстављању стресорима животне средине као што је ултраљубичасто (УВ) светло. Када УВ светлост продре у епидермис, пигменти меланина у кератиноцитима формирају заштитни омотач изнад језгра кератиноцита. Ово даје заштиту кожи од продирања УВ светлости, као и неутрализацију реактивних врста кисеоника (РОС) које су произведене (Д'Оразио ет ал., 2013; Алуви ет ал., 2016; Воолридге Цоопер, 2018).

Међутим, повећано излагање УВ светлу је главни узрок хиперпигментације и оштећења коже (Цхан ет ал., 2014; Америцан Цанцер Социети, 2020). УВ светлост од Сунца која продире у кожу су УВА (90 - 95 процената) и УВБ зраци (5 – 10 процената), при чему степен оштећења коже зависи од таласне дужине сваког зрака. УВА зраци имају веће таласне дужине (320 – 400 нм) које продиру дубоко у дермис и резултирају стварањем слободних радикала, посебно РОС. Што се тиче УВБ зрака, са краћим таласним дужинама (280 – 320 нм) који продиру само до епидермалног слоја, зраци оштећују ДНК што заузврат изазива мутације. Ова комбинација РОС формација и мутација на крају доприноси развоју рака коже (Сандер ет ал., 2003; Пфеифер и Бесаратиниа, 2012; Д'Оразио ет ал., 2013; Камарулзаман ет ал., 2017; Павел ет ал., 2017; Нагапан ет ал., 2018).

Тип рака коже који настаје услед прекомерног излагања УВ светлу је меланом. Меланом се јавља када меланоцити расту ван контроле због мутација у ДНК. Иако меланом чини само мање од 10 процената свих карцинома коже, он доприноси већини смртних случајева од рака коже. Ово се може приписати високом метастатском потенцијалу меланома и отпорности на терапију (Пфеифер и Бесаратиниа, 2012; Америцан Цанцер Социети, 2020). Стога су стратегије хемопревенције меланома погодније у борби против ове болести (Цххабра ет ал., 2017).

У складу са стратегијама хемопревенције меланома, идеја да се користи локалнакозметичкипојавио се производ који има потенцијал да смањи стварање РОС-а и мутације на људској кожи. Овај производ, традиционални расхладни пиринач у праху, познатији каобедак сејуку Малезији, је традиционални козметички производ на бази ферментисаног пиринча. Зрна пиринча која су ферментисана у претходним студијама за производњу бедак сејука су Ориза сатива ссп. индица (Индица) и Ориза сатива ссп. јапоница (Јапоница) (Дзулфакар ет ал., 2015а). Зрна пиринча Индица су дуга, равна, витка, лако се ломе и имају висок садржај амилозе, док су зрна пиринча Јапоница кратка, округла, не ломе се лако и имају низак садржај амилозе (Рицепедиа, нд). Бедак сејук као производ ферментације зрна пиринча је у облику капљица воде или пастила у облику конуса. Када се ове пастиле помешају са водом и нанесу на кожу као маска за лице преко ноћи, дају ефекат хлађења. Из генерације у генерацију потврђују сведочења корисника да је бедак сејук у стању да улепша и избели кожу (Дзулфакар ет ал., 2015б; Дзулфакар ет ал., 2016ц; Јохар ет ал., 2018). Међутим, ова сведочанства никада нису тестирана у лабораторијским условима, посебно у погледу утицаја на ћелије коже, како нормалне тако и малигне.

Стога је наша студија имала за циљ да утврди ефектебедак сејукнаправљен од подврста пиринча Индица и Јапоница користећи ћелије меланома Б164А5 изазване УВБ-ом, као и идентификацијуантиоксиданскапацитети обе врсте бедак сеџука.

Материјали и методе

Припрема Индица и Јапоница бедак сејук

Тхебедак сејукнаправљени од подврста пиринча Индица и Јапоница љубазно су обезбеђени са Факултета за инжењерство и грађевинско окружење, Университи Кебангсаан Малаисиа, 43600 Банги, Селангор. Да би се припремио бедак сејук, зрна пиринча Индица и Јапоница су намочена у воду из славине у односу 1:1 (в/в) у одвојеним затвореним посудама које нису стерилисане. Зрна пиринча су затим остављена да прођу природну ферментацију током 14 дана на собној температури. Четрнаестог дана, зрна пиринча су филтрирана помоћу крпе од муслина и поново натопљена у нову серију воде (в/в). Намакање зрна пиринча је поновљено шест пута сваких 14 дана, чиме је укупан процес намакања трајао 84 дана. После 84 дана, добијена пиринчана паста из сваке подврсте пиринча је сакупљена и осушена у пећници да би се добио прашкасти облик бедак сејука (Дзулфакар ет ал., 2016а). Затим је бедак сеџук држан у фрижидеру на 4оЦ до даље употребе. Пре експеримената, бедак сејук је растворен у дестилованој води и филтриран кроз 0,22 µм Миллипоре филтер шприца за стерилизацију.

Ћелијска култура

Ћелијска линија мишјег меланома Б164А5 купљена је од Европске колекције провјерених ћелијских култура (ЕЦАЦЦ). Ћелије су узгајане у Дулбеццо-овом модификованом медијуму орла (ДМЕМ) обогаћеном са 10 процената феталног говеђег серума (ФБС), 1 проценат мешавине пеницилин-стрептомицина (Пен/Стреп, 10,000 ИУ/мл), глукозом и Л- глутамин. Ћелије су затим инкубиране у влажној атмосфери на 37оЦ у 5% ЦО2. Када конфлуентност ћелија достигне 80 процената, ћелије су субкултурисане (Публиц Хеалтх Енгланд, нд). Пре него што су тестови спроведени, уцртана је крива раста ћелија Б164А5. Из криве раста добијено је време удвостручавања од 24 сата, при чему је овај налаз подржан студијом Данциу ет ал., (2013).

МТТ тест

Цитотоксичност обе врстебедак сејукпрема Б164А5 ћелијама су процењене путем теста виталности ћелија 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолијум бромида (МТТ) према методом Мосманна (1983) са малим модификацијама. 200 µЛ од 5 к 104 ћелије су засејане у 96-плочу са равним дном и инкубиране 24 сата у влажној атмосфери на 37оЦ у 5 проценат ЦО2. После 24 сата инкубације, медијум је одбачен и замењен са 200 µЛ ПБС-а. Затим су ћелије изложене УВБ зрачењу при 30 мЈ/цм2 током 36,4 секунде (Лин ет ал., 2002). Одмах након излагања УВБ-у, ПБС је одбачен и ћелије су третиране са обе врсте бедак сејука у серијски разблаженим концентрацијама од 6,25, 12,5, 25, 50 и 100 г/Л. Што се тиче позитивне контроле, ћелије су третиране менадионом у серијски разблаженим концентрацијама од 0,0625, 0,125, 0,25, 0,5 и 1 мМ према Басри ет ал., (2015), док су негативна контрола биле нетретиране ћелије. После третмана, ћелије су инкубиране још 24 сата. После периода инкубације, 20 уЛ раствора МТТ од 5 мг/мЛ је додато у сваки бунар и инкубирано 4 сата. Затим, 190 µЛ смеше је одбачено из сваког базенчића и додато је 200 µЛ ДМСО и инкубирано 15 минута. На крају, плоча је мућкана 5 минута и очитавања апсорбанције су узета на 570 нм помоћу читача микроплоче. Проценат виталности ћелије је израчунат коришћењем следеће формуле: Вијабилност ћелије ( проценат )= (средња ОД третираних ћелија)/(средња ОД негативне контроле) ×100

Тест смањења антиоксидативне моћи жељеза (ФРАП).

Тхеантиоксиданскапацитети обе врстебедак сејукодређивани су путем ФРАП теста како су описали Бензие и Страин (1996). То је метода за процену антиоксидативне моћи кроз редукцију гвожђа (Фе3 плус) у гвожђе јоне (Фе2 плус) на ниском пХ што резултира формирањем обојеног комплекса гвожђа-трипиридилтриазин. Прво, ФРАП радни реагенс је припремљен свеже мешањем ацетатног пуфера (30 мМ, пХ 3,6), раствора гвожђа (ИИИ) хлорида (ФеЦл3) (20 мМ) и раствора ТПТЗ (10 мМ) у односу 10:1:1 . Припремљени ФРАП радни реагенс је затим држан у воденом купатилу на 37оЦ и заштићен од светлости. Након тога следи припрема калибрационе криве гвожђе (ИИ) сулфата (ФеСО4) коришћењем серијски разблажених концентрација које се крећу од 100 – 1,000 µМ. Аскорбинска киселина је коришћена као позитивна контрола и припремљена је коришћењем серијски разблажених концентрација које се крећу од 3,125 – 50 µг/мЛ, у мраку (Хасиах ет ал., 2011). Што се тиче експерименталних корака, 50 µЛ ФеСО4, аскорбинске киселине и обе врсте бедак сејука додато је у њихова додељена лежишта у 96-плочи са бунарима. Након тога, 175 µЛ загрејаног ФРАП радног реагенса је додато накнадно у сваки бунар. Затим је плоча инкубирана на 37оЦ 5 минута. Коначно, очитавања апсорпције су узета на 595 нм помоћу читача микроплоче и ФРАП вредности су изражене као антиоксидативни капацитет еквивалента аскорбинске киселине (АЕАЦ) (Гасхахун и Соломон, 2019).

цистанцхе прах

Статистичка анализа

За презентацију података коришћен је софтвер СПСС в25. Сваки тест података из три независна експеримента (н=3) је изражен као средња вредност ± СЕМ. Једносмерни АНОВА тест је коришћен за поређење између средњих вредности. Коришћена алфа је била 0.05, а п-вредност < 0,05="" се="" сматрала="" статистички="">

Резултати

Цитотоксичност Индица и Јапоница бедак сејук

Цитотоксичност обе врстебедак сејукје процењен у односу на ћелије меланома Б164А5 изазване УВБ-ом путем МТТ теста. Менадион, који је коришћен као позитивна контрола, показао је цитотоксичност са ИЦ50 од 0.04 ± 0.02 мМ (Слика 1). Свака концентрација менадиона била је статистички значајна (п < 0,05)="" у="" поређењу="" са="" негативном="" контролом.="" док="" индица="" и="" јапоницабедак="" сејук="" нису="" показали="" цитотоксичност,="" стога="" нису="" добијене="" вредности="" иц50.="" обе="" врсте="" бедак="" сејука="" су="" на="" почетку="" имале="" смањење="" виталности="" ћелија,="" али="" су="" се="" постепено="" повећавале="" како="" се="" концентрација="" повећавала="" (слике="" 2="" и="" 3).="" поред="" тога,="" све="" концентрације="" оба="" типа="" бедак="" сејука="" нису="" биле="" статистички="" значајне="" (п=""> 0,05) у поређењу са негативном контролом. Резултати су показали да обе врсте бедак сејука нису биле цитотоксичне за ћелије меланома Б164А5 изазване УВБ-ом.

Антиоксидативни капацитети Индица и Јапоница бедак сејук

Смањење способности обе врсте бедак сеџук асантиоксидансиодређивани су ФРАП тестом. ФРАП вредности су изражене као антиоксидативни капацитет еквивалента аскорбинске киселине (АЕАЦ) у јединици µг АА (аскорбинска киселина)/г бедак сејука. ФРАП вредности за 50 и 100 г/Л Индица бедак сејука биле су 0.003 ± {{ 17}}.001 и 0,004 ± 0,0003 µг АА/г бедак сејука (Слика 4). Што се тиче Јапоница бедак сејук, вредности ФРАП за 50 и 100 г/Л биле су 0,004 ± 0,0003 и 0,01 ± 0,0007 µг АА/гбедак сејукреспективно, показујући начин зависан од дозе (Слика 4).

Када су упоређене ФРАП вредности Индица бедак сејука за 50 и 100 г/Л, то није било статистички значајно (п=0.803). Али, ФРАП вредности Јапоница бедак сејука за 50 и 100 г/Л биле су статистички значајне (п=0.006) у поређењу. Поред тога, ФРАП вредност Јапоница бедак сејука за 100 г/Л која показује највећи антиоксидативни капацитет била је статистички значајна у поређењу са ФРАП вредностима Индицабедак сејукза 50 (п=0.001) и 100 г/Л (п=0.003).

Дискусија

У последње време све је већи тренд употребе природних производа у нези коже. Доказано је да већина ових природних производа имаантиоксиданскарактеристике поред пружања заштите кожи од УВ светлости (Абдул Вахаб ет ал., 2014). Један пример таквог производа је бедак сејук, козметички производ на бази ферментисаног пиринча. за генерације,бедак сејукпастиле се мешају са водом и наносе локално на кожу као маска за лице преко ноћи (Дзулфакар ет ал., 2016ц; Јохар ет ал., 2018).

У ферментацији зрна пиринча за производњу бедак сејука обично су укључене бактерије млечне киселине (ЛАБ), поред буђи и квасца (Дзулфакар ет ал., 2015а; Дзулфакар ет ал., 2016б). Употребакозметичкипроизводи који имају ову компоненту ЛАБ ферментисаног пиринча резултирају експанзијом и глаткоћом производа, као и влажним осећајем након наношења на кожу (Саваки ет ал., 2010). Слично искуство извештава и одбедак сејуккорисника, при чему примена бедак сеџука производи осећај хладноће (Дзулфакар ет ал., 2015а). Такође постоји интересантан однос између коже и ферментације помоћу ЛАБ-а, при чему ЛАБ вода за намакање која се користи током ферментације зрна пиринча садржи млечну киселину и друге аминокиселине које доприносе хидратацији коже. Ове предности чине ЛАБ воду за намакање корисном као извор козметичких производа. Дакле, комбинација супстрата или медијума попут зрна пиринча и ЛАБ сојева може довести до козметичких ефеката као што су антиоксидативни ефекти, контрола пХ вредности и превенција ћелијског стреса (Изава и Соне, 2014). Ове предности су у складу са стратегијама хемопревенције меланома. Међутим, бедак сеџук тек треба да се истражи у лабораторији због његових ефеката на малигне ћелије коже. Стога, као прелиминарна студија за потенцијални агенс за хемопревенцију меланома, ћелије мишјег меланома Б164А5 које су индуковане УВБ су погодан модел рака.

Прво, у МТТ тесту је установљено да Индица и Јапоницабедак сејукнису били цитотоксични према ћелијама меланома Б164А5 изазваним УВБ-ом. Међутим, примећено је да је дошло до смањења виталности ћелија при нижим концентрацијама бедак сејука, праћеног повећањем виталности ћелија при вишим концентрацијама бедак сејука. Ово смањење виталности ћелија може се приписати чињеници да су УВБ зраци цитотоксични према ћелијама, у овом случају, ћелијама Б164А5 (Павел ет ал., 2017). У исто време, ниже концентрације бедак сејука нису биле довољне да повећају број ћелија које су индуковане УВБ. Без обзира на то, смањење виталности ћелија није пало испод границе од 50 процената и стога није било могуће добити ИЦ50 за оба типа бедак сејука. Као резултат, две веће дозе, 50 г/Л и 100 г/Л су изабране као дозе третмана за следећи тест.

У ФРАП тесту утврђено је да је Јапоница бедак сејук имао вишуантиоксиданскапацитет у поређењу са оним у Индицибедак сејук. Разлике се могу објаснити чињеницом да се зрна пиринча Јапоница гаје у умереним и хладнијим регионима Азије, док се зрна пиринча Индица гаје широм тропске Азије (Гаррис ет ал., 2005). Температура околине игра суштинску улогу у антиоксидативним активностима биљака, а биљке које се гаје у хладније време имају израженије антиоксидативне активности за разлику од биљака које су гајене у топлијем времену. Ово повећање антиоксидативне активности може се приписати производњи већег броја фитокемикалија јер су биљке изложене стресу по хладнијем времену (Кумар ет ал., 2017).

Постоје и други производи од ферментисаног пиринча који су показали обећавајуће резултате. Прво, ту је ферментни филтрат Галацтомицес (ГФФ) који је нуспродукт ферментације пиринча помоћу квасца Галацтомицес. Екстракт ГФФ садржи јединствену мешавину витамина, минерала, малих пептида и олигосахарида који се користе каокозметичкисастојци у производима за негу коже. Екстракт је показаоантиоксиданскарактеристике тако што штите нормалне људске епидермалне меланоците (НХЕМ) од оксидативног стреса (Воолридге Цоопер, 2018). Ови налази ГФФ-а били су слични налазимабедак сејукУ овој студији.

Пиринчане мекиње такође поседују снажне антиоксидативне активности до те мере да доводе до цитотоксичности према меланоцитима. Али, када се пиринчане мекиње ферментишу, цитотоксичност екстракта пиринчаних мекиња према Б16Ф1 ћелијама је елиминисана. Ово показује да је ферментација мозга пиринча произвела нова корисна једињења са биолошким функцијама, иако тачна једињења тек треба да се разјасне (Цхунг ет ал., 2009).

На крају, пиринач за намакање воде из прахабедак сејукзаправо садржи аминокиселине које би могле бити корисне за козметичку примену. Постоји 16 од 17 аминокиселина откривених у Индица бедак сејуку, као и у води за намакање. Глутаминска киселина је била највећа концентрација аминокиселине која је пронађена у Индица бедак сејуку и његовој води за намакање (Јохар ет ал., 2018). Глутамин (дериват глутаминске киселине), поред аргинина, тирозина и лизина који се детектују у бедак сејуку и његовој води за намакање, спадају међу главне аминокиселине које се користе у козметичкој индустрији (Ха ет ал., 2018). Осим тога, аминокиселине укозметичкипроизводи функционишу каоантиоксиданси(Иванов и сар., 2013) и садржај аминокиселина у Индица бедак сејуку био је много већи у поређењу са водом за намакање. Дакле, примена бедак сејука је била ефикаснија у погледу садржаја аминокиселина у поређењу са водом за намакање (Јохар ет ал., 2018).

Укратко, Индица и Јапоницабедак сејуктреба даље истражити пре него што се може рећи да имају потенцијал као агенс за хемопревенцију меланома који је у стању да (1) спречи меланом, (2) спречи развој малигног меланома од предмалигних лезија или (3) спречи поновну појаву меланома након успешног лечења меланома (Цххабра ет ал., 2017).