Ехинакозид има антитуморско дејство код рака јетре
Mar 31, 2022
Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ ВхатсАпп: 008618081934791
Вен Ли*, Ђинг Џоу, Јађие Џанг, Ђинг Џанг, Сјуе Ли, Ћао Јан, Ђиабинг Хан и Фангди Ху*
Апстрактан
Позадина:Ехинакозид (ЕЦХ) је главни активни састојак Цистанцхес Херба, за који је познато да има терапеутске ефекте на метастатске туморе. Међутим, ефекти ЕЦХ на рак јетре су још увек нејасни. Ова студија је требало да истражи ефекте ЕЦХ на агресију ћелија рака јетре.
Методе:Две врсте ћелија рака јетре Хух7 и ХепГ2 су третиране различитим дозама ЕЦХ у различитим временима и градијентима. МТТ и тестови формирања колонија коришћени су за одређивање ефеката ЕЦХ на одрживост Хух7 и ХепГ2 ћелија. Трансвелл тестови и тестови проточне цитометрије су коришћени за откривање ефеката ЕЦХ третмана на инвазију, миграцију, апоптозу и ћелијски циклус Хух7 и ХепГ2 ћелија. Вестерн блот анализа је коришћена за откривање ефеката ЕЦХ на нивое експресије ТГФ- 1, смад3, смад7, протеина повезаних са апоптозом (Цаспасе-3, Цаспасе-8) и Цито Ц у ћелијама рака јетре. Веза између миР-503-3п и ТГФ- 1 је откривена коришћењем биоинформатичке анализе и Луциферазе репортер теста.
Резултати:Резултати су показали да ЕЦХ инхибира пролиферацију, инвазију и миграцију Хух7 и ХепГ2 ћелија на начин који зависи од дозе и времена. Штавише, открили смо да је ЕЦХ изазвао апоптозу Хух7 и ХепГ2 ћелија блокирањем ћелија у С фази. Штавише, откривено је да је експресија миР-503-3п смањена у ткивима тумора јетре, али третман ЕЦХ повећао је експресију миР-503-3п у Хух7 и ХепГ2 ћелијама. Поред тога, открили смо да је ТГФ- 1 идентификован као потенцијална мета миР-503-3п. ЕЦХ је промовисао активацију ТГФ- 1/Смад сигналног пута и повећао нивое експресије Бак/Бцл-2. Штавише, ЕЦХ би могао да изазове ослобађање митохондријалног Цито Ц и изазове реакцију степена каспазе.
Закључци:Ова студија показује да ЕЦХ испољава антитуморско деловање преко миР-503-3п/ТГФ- 1/Смад осе код рака јетре и обезбеђује безбедан и ефикасан антитуморски агенс за рак јетре.
Кључне речи: ехинакозид, рак јетре, апоптоза, МиР-503-3п, ТГФ- 1/смад
Цистанцхе је сигуран и ефикасан антитуморски агенс за рак јетре.
Увод
Рак јетре је један од најчешћих малигних тумора са високом стопом инциденције, а инциденција рака јетре убрзано расте [1]. Хепатектомија је најбољи начин лечења карцинома јетре код пацијената у његовим раним фазама [2]. Међутим, већина пацијената има рецидив и метастазе након операције. 5-годишња стопа преживљавања је само око 3–5 процената [2]. Стога су хитно потребни нови терапијски приступи и агенси.
У последњих неколико година, развој лекова против рака и истраживања фитокемикалија почели су да обраћају пажњу на етнофармакологију [3, 4]. Велики број клиничких и експерименталних студија је показао да медицински мономери могу да инхибирају пролиферацију, метастазу ћелија хепатоцелуларног карцинома, индукују апоптозу и диференцијацију ћелија рака [5]. Цистанцхес Херба је биљка која припада породици биљака, која је традиционална медицина у Кини и позната је као „пустињски гинсенг“ [6]. Цистанцхес Херба је богата врстама хемијских компоненти, а истраживачи у земљи и иностранству су из ње изоловали више од стотину једињења, укључујући фенилетанол гликозиде, лигнане, циклоалифатске терпене, шећере, аминокиселине итд. [7]. Ехинакозид (ЕЦХ) је главна компонента Цистанцхес Херба и такође се генерално сматра његовим главним активним састојком [6]. Последњих година, студије су показале да ЕЦХ може бити нова опција лечења за агресивне или широко метастатске туморе [8]. Студије су откриле да ЕЦХ може инхибирати рак панкреаса, леукемију, рак желуца, рак ендометријума и многе друге туморе [9]. Међутим, нема извештаја о ефекту ЕЦХ на прогресију рака јетре.
МиРНА играју кључну улогу у пост-транскрипционој регулацији експресије гена (10). Опсежне студије су показале да су миРНА уско повезане са раком јетре [11] и мултиплом склерозом. МиР-503-3п је новооткривена миРНА која је укључена у пролиферацију, миграцију и инвазију туморских ћелија [12]. Међутим, његова функција код рака јетре је нејасна. Тренутно је истраживање циљних гена миРНА низводно у релативно зрелој фази, али многи локуси циљних гена остају неоткривени. Пут трансдукције ТГФ- 1/Смад3 сигнала је посебно важан за туморигенезу и развој [13]. Утврђено је да је ТГФ- 1/Смад3 пут активиран у моделу хепатома, што сугерише да је ТГФ- 1/Смад3 пут играо значајну улогу у развоју рака јетре [14]. Висока експресија ТГФ- 1/Смад3 пута сматра се једним од кључних разлога за настанак карцинома јетре [15]. Да би се даље истражио основни механизам који је посредовао у ефектима ЕЦХ на рак јетре, истражен је пут миРНА/ТГФ- 1/Смад3.
У овој студији, проценили смо ефекте ЕЦХ на прогресију ћелија рака јетре и открили да ЕЦХ испољава антитуморско деловање преко миР-503-3п/ТГФ- 1/Смад осе код рака јетре, и обезбеђује сигуран и ефикасан антитуморски агенс за рак јетре.
цистанцхе тцмје против рака.
Методе и материјали
Материјали
Echinacoside (ECH) (purity>98 процената, монохидрат) добијено је од Хетиан Дицхен сасхинг Пхармацеутицал Девелопмент Цо., Лтд (Сињианг, Кина). Структурна формула је приказана на слици 1.
Ћелијска култура и трансфекција
Ћелијске линије рака јетре код људи Хух7 и ХепГ2 купљене су од ФЕНГХУИСХЕНГВУ (Хунан, Кина). Ћелије су култивисане у ДМЕМ медијуму са додатком 10% феталног говеђег серума (ФБС, Гибцо, УСА) на 37 степени у инкубатору ћелија са 5% ЦО2. МиР-503-3п мимиц и миР-НЦ су добијени од Схангхаи Гене Пхармацеутицал Цо., Лтд. (Шангај, Кина). Све трансфекције су изведене коришћењем реагенса Липофецтамине 2000 (Инвитроген) према упутствима произвођача. После додатних 24–48 х, трансфектоване ћелије су сакупљене и обрађене за даље студије.
Луциферазни репортерски тест
Укупне РНК су екстраховане из ћелија, а ТГФ- је амплификован коришћењем ВТ и МУТ прајмера. Фрагмент ТГФ- 1 је убачен у пГЛ3-Басхц репортерски вектор луциферазе назван ТГФ- -ВТ-Луц. Регион везивања 1 и миР-503-3п је мутагенизован да би се формирао мутантни плазмид означен као ТГФ- 1-Мут-Луц. ТГФ 1-ВТ-Луц и ТГФ- 1-Мут-Луц су ко-трансфектовани у ћелије са миР-503-3п мимиком и пРЛТК. Ћелије су сакупљене 6 х након трансфекције. Дуал-Луциферасе Репортер Ассаи Кит (Промега, Мадисон, ВИ, САД) је коришћен за одређивање активности луциферазе.
Тест раста ћелија
Хух7 и ХепГ2 ћелије (2 × 105) су смештене у 96- плоче са бунарима. Ћелије су затим третиране са ЕЦХ током 24, 36 и 48 х. Након тога, 10 мЛ МТТ раствора је додато у сваки бунар и ћелије су инкубиране 4 х. Након тога, у бунарчиће је додато 150 μЛ ДМСО. А апсорбанца на 570 нм је измерена помоћу ЕЛИСА читача (Аовеииа, Пекинг, Кина).
Формирање колоније
Једноћелијска суспензија је припремљена од трансфектованих ћелија и култивисана у инкубатору 7 дана. Након одбацивања медијума, ћелије су обојене Рајтовом бојом 5 минута, а затим обојене раствором Гиемса боје и раствором Соренсен фосфомолибдатног пуфера (1:9) током 10 минута. Након прања, колоније су избројане под микроскопом.
Трансвелл тест
Тестови миграције и инвазије су изведени у Трансвелл коморама (Цостар, Бадхоеведорп, Те Нетхер ландс) обложеним са или без Марибел (БД Биосциенцес) на горњој површини {{0}} μм (величина пора) мембране. За тест миграције, трансфектоване Хух7 и ХепГ2 ћелије су поново суспендоване у 200 µЛ ДМЕМ медијума без серума и засејане у горње коморе. За тест инвазије, Матригел (30 уг/бунарићу) је претходно премазан на мембранама горњих комора, а остали кораци су били исти као и тест миграције. После инкубације од 24 х, ћелије које су мигрирале или ушле кроз мембрану на доњу површину су фиксиране етанолом и обојене са 0,2 процента кристално љубичасте боје. На крају, ћелије су посматране и бројане у пет насумичних поља помоћу микроскопа.
Анализа ћелијског циклуса
Ћелије Хух7 и ХепГ2 су засејане у 6-плоче са бунарима при густини од 1×105 ћелија/мЛ. Ћелије су сакупљене након третмана са ЕЦХ током 0, 24, 48 х. Тесе ћелије су затим додате са 1 мЛ ледом претходно охлађеног 75% етанола, фиксираног на 20 степени током 2 х. Након тога, ћелије су додане са раствором за бојење ПИ и инкубиране у мраку 15 минута. Ћелијски циклус је затим анализиран проточном цитометријом.
Анализа апоптотичких ћелија
Ћелије су постављене у плоче са 6-бунарићима при густини од 5×105 ћелија/бунарићу. После сакупљања, ћелије су центрифугиране и додато је 195 μЛ раствора за везивање Анексин В-ФИТЦ да би се ћелије ресуспендовале. Затим је додато 5 μЛ Анексина В-ФИТЦ и 10 μЛ раствора за бојење пропидијум јодида. Ћелије су инкубиране у мраку, а затим стављене у ледено купатило.
Цистанцхе штити јетру.
ПЦР квантитативне реверзне транскрипције (кРТ-ПЦР)
Укупне РНК су екстраховане ТРИзол реагенсом (Хаигене, Хаербин, Кина). Те вииА™ 7 ПЦР систем у реалном времену је коришћен за кРТ-ПЦР. РНК је реверзно транскрибована у цДНК коришћењем БеиоРТ™ Фирст Странд цДНА Синтхесис Кит (Беиотиме Институте оф Биотецхнологи). У6 је коришћен као ендогена контрола [16]. Секвенце прајмера су биле следеће:
миР-503-3п: напред: 5′-ЦТГАТГГТТААГАГАГААТГТ-3′,
миР-503-3п: реверс: 5′-ГТЦЦТТГГАЦАТЦЦГГГЦЦГ-3′,
У6: напред: 5′-ГАЦАГАТТЦГГТЦТГТГГЦАЦ-3′,
У6: реверс: 5′-ГАТТАЦЦЦГТЦГГЦЦАТЦГАТЦ-3′.
Вестерн блот анализа
Трансфициране ћелије су сакупљене и укупни протеини су екстраховани. Концентрације протеина су одређене коришћењем БЦА Протеин Ассаи Кит. Узорци протеина су раздвојени са 10% СДС-ПАГЕ и пребачени на поливинилиден флуоридну мембрану. Мембрана је затим инкубирана са анти-ТГФ- 1 (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), СМАД3 (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), СМАД 7 (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), Бцл-2 (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), Бак (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), Цито Ц (1:1000, Схифенг, Шангај, Кина), каспаза{ {19}} (1:1000, Шифенг, Шангај, Кина), каспаза-8 (1:1000, Шифенг, Шангај, Кина) и анти- -антитело против актина (1:1000, Шифенг, Шангај , Кина) преко ноћи. Десет мембрана је инкубирана са секундарним антителом против зеца (1:1000, Шифенг, Шангај, Кина) [17].
статистичке методе
Подаци су представљени као средња вредност±стандардна девијација (СД). Све статистичке анализе су обављене помоћу софтвера СПСС 13.0. За поређења је коришћен студентов т-тест. п-вредност < 0.05="" се="" сматрала="">
Резултати
Ефекат ЕЦХ на активност и пролиферацију ћелија рака јетре код људи
Да би се истражио ефекат ЕЦХ на функцију ћелија рака јетре код људи, спроведен је МТТ тест и резултати су показали да се виталност ћелија ХепГ2 (слика 2а) и Хух7 (слика 2б) постепено смањује са повећањем дозе и времена Третман ЕЦХ у поређењу са контролном групом (п < 0.01).="" после="" 48="" х="" изложености="" ецх,="" виталност="" ћелија="" је="" била="" најнижа,="" па="" је="" 48="" х="" изложености="" ецх="" одабрано="" за="" даљи="" експеримент.="" резултати="" теста="" формирања="" колонија="" показали="" су="" да="" се="" број="" колонија="" ћелија="" хепг2="" (слика="" 2ц)="" и="" хух7="" (слика="" 2д)="" постепено="" смањивао="" третманом="" ецх="" на="" начин="" који="" зависи="" од="" дозе="" у="" поређењу="" са="" контролном="" групом="" (п="">< 0="" .01,="" п="">< 0.001).="" ови="" резултати="" указују="" да="" ецх="" игра="" важну="" улогу="" у="" активности="" и="" пролиферацији="" ћелија="">
Ефекти ЕЦХ на миграцију и инвазију ћелија рака јетре код људи
Да би се даље истражио ефекат ЕЦХ на функцију ћелија рака јетре код људи, откривена је миграција и инвазија ћелија. Као што је приказано на слици 3а, б, у поређењу са групом без третмана ЕЦХ, миграција и инвазија Хух7 и ХепГ2 ћелија су значајно смањене након третмана ЕЦХ на начин који зависи од дозе (п<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
ЕЦХ је регулисао дистрибуцију ћелија рака јетре код људи и апоптозу
Да би се истражио ефекат ЕЦХ на апоптозу ћелија рака јетре, спроведена је проточна цитометрија. Као што је приказано на слици 4а, у поређењу са контролном групом, проценат Хух7 и ХепГ2 ћелија у Г0/Г1 фази је значајно смањен након ЕЦХ третмана на начин који зависи од дозе (п<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), што указује да је ЕЦХ изазвао заустављање С фазе ћелија Хух7 и ХепГ2. Поред тога, са повећањем дозе ЕЦХ, стопа апоптозе Хух7 и ХепГ2 ћелија постепено се повећавала у поређењу са контролном групом (слика 4б, стр.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
Ефекти ЕЦХ на ТГФ-1/Смад пут
Познато је да је ТГФ- 1/Смад сигнални пут добро укључен у апоптозу ћелије. Да би се истражио механизам апоптозе изазване ЕЦХ у ХепГ2 ћелијама. Детектована је експресија ТГФ- 1/Смад сигналног пута. У поређењу са контролном групом, открили смо да третман ЕЦХ значајно смањује нивое експресије ТГФ- 1 и Смад3 на нивоима мРНА (слика 5а) и протеина (слика 5б), и значајно повећава експресију Смад7 на начин који зависи од дозе и на нивоима мРНА и протеина (стр<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">
ТГФ‑1 је био директна мета миР‑503‑3п
Поред тога, онлајн алатка за предвиђање Старбасе в2. показало је да је ТГФ- 1 потенцијална мета миР-503-3п (слика 6а). Резултати теста гена репортера луциферазе су показали да је активност луциферазе ћелија ХепГ2 и Хух7 ћелија ко-трансфектованих са миР-503-3п мимиком и ТГФ- 1-ВТ значајно смањена, али не и ћелијама ко-трансфектованим миР{ {10}}п мимиц и ТГФ- 1-МУТ (слика 6б, стр<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">
Ефекат ЕЦХ на активности цитохрома Ц и каспаза
Као што је приказано на слици 7а, у поређењу са контролном групом, открили смо да ЕЦХ третман изазива значајно смањење нивоа експресије Бцл-2 на начин који зависи од дозе (п<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">
Дискусија
Хируршка ресекција је главни метод лечења пацијената са карциномом јетре, а стопа рецидива и метастаза након ресекције јетре је висока [18, 19]. У овој студији смо открили да ЕЦХ има известан инхибиторни ефекат на туморе јетре и обезбеђује сигуран и ефикасан антитуморски агенс за рак јетре. Клиничка пракса је показала да традиционална кинеска медицина може ефикасно да ублажи клиничке симптоме пацијената са раком јетре [20]. За ЕЦХ, студије су показале да ЕЦХ има антиоксидативна, антидепресивна, антиинфламаторна, антивирусна, антитуморска и антибактеријска дејства [21, 22]. Код колоректалног карцинома, ЕЦХ може индуковати апоптозу туморских ћелија тако што регулише каспазу-3 и цепа ензиме за поправку ДНК да би индуковао оксидацију ДНК [23]. У овој студији смо по први пут открили да ЕЦХ испољава антитуморску активност преко миР 503-3п/ТГФ- 1/Смад осе код рака јетре.
Међућелијска фаза ћелијског циклуса еукариотских ћелија може се поделити на Г1, С и Г2. Регулационе тачке ћелијског циклуса у различитим периодима су регулисане различитим регулаторним факторима [24]. Ова студија је открила да је проценат Хух7 и ХепГ2 ћелија у Г0/Г1 и Г2/М фази смањен, а проценат ћелија у С фази је повећан након ЕЦХ, што указује да је ЕЦХ изазвао заустављање С фазе Хух7 и ХепГ2 ћелија. Дисбаланс апоптозе је један од главних механизама хуманих тумора. Пријављено је да антитуморски хемотерапеутски лекови генерално индукују апоптозу ћелија рака и контролишу прогресију рака. У нашој студији, такође смо открили да ЕЦХ може да изазове апоптозу ћелија рака јетре на начин који зависи од дозе, што сугерише да индуковање апоптозе ћелија рака може бити један од основних механизама ЕЦХ на рак јетре.
МиРНА играју кључну улогу у регулацији пролиферације ХЦЦ ћелија, циклуса, апоптозе, миграције кроз интеракције са различитим сигналним путевима и молекулима [25, 26]. На пример, откривено је да је миР-26а високо експримиран у нормалним ћелијама јетре, али је значајно смањен у ћелијама рака јетре и инхибира пролиферацију [27]. Прекомерна експресија миР-503-3п индукује апоптозу ћелија рака плућа и инхибира ћелијску инвазију и миграцију [28]. Поред тога, велики број студија је показао да ТГФ- 1/Смад сигнални пут игра кључну улогу у развоју рака јетре [7]. Штавише, када рак јетре настави да напредује, експресија ТГФ- 1 се постепено повећава [29]. У овој студији смо открили да је ЕЦХ смањио ТГФ- 1 и Смад3, и повећао Смад7, показујући да ЕЦХ инхибира активацију ТГФ- 1/Смад сигналног пута. У овој студији смо открили да је експресија миР-503-3п смањена у ткивима тумора јетре, али ЕЦХ третман је повећао експресију миР-503-3п у Хух7 и ХепГ2 ћелијама. Поред тога, открили смо да је ТГФ- 1 идентификован као потенцијална мета миР-503-3п. ЕЦХ је промовисао активацију ТГФ- 1/Смад сигналног пута и повећао нивое експресије Бак/Бцл-2. Ови резултати сугеришу да сигнални пут миР-503-3п/ ТГФ- 1/Смад може посредовати у ефектима ЕЦХ на рак јетре. Познато је да повећани однос Бак/Бцл-2 може изазвати ослобађање Цито Ц у митохондријима у цитоплазму. Цито Ц ступа у интеракцију са каспазом-8 и формира апоптотично тело које затим регрутује и активира каспазу-3, која изазива каскаду каспаза и промовише ћелијску смрт [30]. У овој студији смо открили да ЕЦХ смањује експресију Бцл-2 и повећава експресију Бак, Цито Ц, каспазе-8 и каспазе-3. Ови резултати сугеришу да ЕЦХ може да поправи митохондријалну повреду у одређеној мери.
Закључак У овој студији открили смо да ЕЦХ третман инхибира пролиферацију, инвазију и миграцију и индукује апоптозу ћелија рака јетре. Утврђено је да је основни механизам лечења ЕЦХ на ћелијама рака јетре повезан са миР-503-3п/ТГФ- 1/Смад сигналним путем. Ова студија ће пружити одређену експерименталну основу за истраживање ЕЦХ о антитумору. Вреди напоменути да је ова студија ограничена недостатком експеримената на животињама. Стога ће наша будућа студија изводити експерименте на животињама како би додатно потврдила наше налазе.
