Претходно учење о страху омогућава брзу асимилацију нових сећања страха директно у кортикалне мреже, 2. део

Претходно контекстуално учење страха омогућава предњем цингуларном кортексу да одмах кодира нова сећања

До данас смо истраживали динамику консолидације система у слушним сећањима страха. Међутим, модел консолидације система углавном потиче из студија о меморији која зависи од хипокампуса.

Аудитивни страх је веома чест психолошки проблем који може имати велики утицај на свакодневни живот људи. Када се појави слушна фобија, људи се могу осећати веома непријатно, па чак и изазвати разне здравствене проблеме. Али у исто време, постоје и експерименти који доказују да слушни страх такође може побољшати памћење.

Последњих година, истраживачи су открили да су људи са слушном фобијом пажљивији и осетљивији од других. Њихов мозак јаче и брже реагује на звучну стимулацију. Ова реакција их чини осетљивијим на звукове у свом животу. У неким случајевима, они су способнији да обрађују различите информације и чак добијају корисније назнаке од звукова, потенцијално побољшавајући њихову укупну меморију.

Када је особа у напетом или анксиозном емоционалном стању, мозак ослобађа супстанцу која се зове адреналин. Ова супстанца може промовисати активност неурона мозга и повећати концентрацију људи. Стога, током слушног страха, ослобађање адреналина доводи до веће концентрације и памћења код слушаоца.

У исто време, када звучни стимуланс страха траје, мозак се може прилагодити овом стимулусу изградњом дубље меморије звука. Ова меморија може помоћи пацијентима да боље реагују на различите звучне стимулусе, омогућавајући им да постану сигурнији и независнији.

Стога, иако слушни страх може изазвати многе непријатности у свакодневном животу људи, он такође може имати позитиван утицај на памћење. Када људи науче како да се носе са овим психолошким проблемом, могу да превазиђу своје страхове и чак имају користи од њих. Ово нас такође подсећа да на психичке проблеме треба да гледамо исправно, да обратимо пажњу на ментално здравље и користимо позитиван став да се носимо са потешкоћама како бисмо побољшали своје животе. Види се да треба побољшати своје памћење. Цистанцхе десертицола може значајно побољшати памћење, јер Цистанцхе десертицола такође може да регулише равнотежу неуротрансмитера, као што је повећање нивоа ацетилхолина и фактора раста. Ове супстанце су веома важне за памћење и учење. Поред тога, месо такође може побољшати проток крви и подстаћи испоруку кисеоника, што може осигурати да мозак добије довољно хранљивих материја и енергије, чиме се побољшава виталност и издржљивост мозга.

Кликните на суплементе да бисте побољшали памћење

Сматра се да се ова сећања у почетку формирају и на хипокампалном и на кортикалном нивоу. Временом, координирана интеракција између хипокампуса и кортикалних мрежа доводи до постепеног ремоделирања кортикалних кола која на крају чувају удаљена сећања [1–5]. У складу с тим, код наивних животиња, сећања на страх зависна од хипокампуса, односно контекстуална сећања на страх, у почетку су зависна од хипокампуса и постају прогресивно зависна од кортикалне мреже која обухвата АЦЦ и префронтални кортекс [1,2,6–8 ].

Стога смо размотрили да ли се ова временски зависна реорганизација догодила другачије ако је претходно дошло до консолидације система претходне меморије. Пацови су обучени да повезују контекст са САД. Две недеље раније, 1 група пацова је научила другу везу између различитог контекста и САД (ЦткА-ЦткБ), док је друга група примила само непосредне болне стимулусе који су ометали учење о контекстуалном страху (схоцк-ЦткБ) (С1А слика). Животињама је убризган ЦНККС или физиолошки раствор у АЦЦ 24 сата након контекстуалног учења (слике 4А и С1Б).

У складу са претходним студијама [1,6,8], инактивација АЦЦ-а код животиња које нису научиле другу асоцијацију страха претходно је оставила замрзавање ЦткБ-а без утицаја, што сугерише да ова манипулација није утицала на недавну меморију. Међутим, слично подацима добијеним у учењу слушног страха, инактивација АЦЦ је смањила замрзавање до недавног ЦткБ код пацова који су научили претходну контекстуалну повезаност страха (Слике 4Б и 4Ц).

Ова појава је била узрочно повезана са развојем споре системске консолидације првог памћења јер је изостала код животиња код којих су 2 догађаја страха била раздвојена за само 7 или 24 х, а код оних код којих је АЦЦ био инактивиран 24 х након оба прво и друго контекстуално учење страха. Штавише, био је одсутан код пацова који су искусили истраживање првог контекста у одсуству било каквог УС-а (група Цонтект-ЦткБ) (Слике 4Д и 4Е).

Критично је да је инактивација АЦЦ-а изведена 1 х након учења такође утицала на недавну меморију страха (Слике 4Ф и 4Г). У овом тренутку, примена анизомицина је смањила замрзавање до ЦткБ код животиња које су искусиле претходно контекстуално учење страха (слике 4Х и 4И). Ови подаци подржавају идеју да, када се први догађај страха запамти, неокортекс одмах постаје неопходан за нова сећања, користећи само механизме синаптичке консолидације.

Претходно контекстуално учење страха реорганизује АЦЦ-то-БЛА пројекције тако да подржавају недавна сећања

Затим смо испитали да ли неуронска повезаност која се регрутује током даљинског задржавања меморије код наивних животиња такође може учествовати у недавном задржавању памћења код животиња које су претходно научиле још једно контекстуално памћење страха. У том циљу, истражили смо умешаност пројекција од АЦЦ до БЛА у задржавање недавних и удаљених контекстуалних сећања.

Претходна студија је показала да оптогенетска инхибиција терминала аксона пројектованих из префронталног кортекса у БЛА нарушава контекстуално задржавање памћења страха у удаљеним, али не скорашњим временским тачкама код наивних животиња [7]. Адено-повезани вирусни вектор (ААВ5-ЦаМКИИа-еНпХР3.0-мЦхерри) или контролни вектор (ААВ5-ЦаМКИИа-мЦхерри) су убризгани у АЦЦ у 2 групе, као у горе описани експерименти (слике 5А–5Ц и С3Ц). Оптогенетска инхибиција АЦЦ терминала у БЛА током недавног задржавања контекстуалног памћења страха нарушила је замрзавање на ЦткБ само код животиња којима је убризган еНпХР3.{13}}мЦхерри вектор и које су претходно научиле различиту асоцијацију контекста и САД (Слика 5Д ).

У овој групи, накнадна инхибиција АЦЦ терминала у БЛА такође је изазвала значајно смањење замрзавања ЦткА, што сугерише да је такође утицало на задржавање асоцијације удаљеног контекста-УС (Слика 5Е). Ови резултати подржавају идеју да је исти неуронски пут неопходан за задржавање удаљеног сећања на први догађај страха и недавна сећања на нове аналогне догађаје. Ови подаци такође сугеришу да је преуређење кортикалних путева који се спуштају до БЛА, изазвано првим сећањем, уобичајен процес и за слушна и за контекстуална сећања на страх.

Након претходног учења о страху, дорзални хипокампус и АЦЦ су неопходни за формирање нових сећања

Ови налази постављају питање да ли хипокампус формира нова сећања чак и ако је дошло до претходног контекстуалног учења страха. Алтернативно, кортекс може формирати нова сећања, чак и у одсуству хипокампуса. Да бисмо одговорили на ова питања, инактивирали смо хипокампус 1 х након контекстуалног учења страха у 2 групе сличне горњим експериментима.

Пошто већина литературе о консолидацији система потиче из студија у којима је хипокампус трајно уништен, почели смо са неповратним лезијама дорзалног хипокампуса 1 сат након учења (слике 6А–6Ц). Лезије хипокампуса изазвале су значајно смањење замрзавања до ЦткБ у обе групе (слика 6Ц). Пошто ексцитотоксичне лезије могу пролазно да ометају активност можданих региона изван хипокампуса, као што је АЦЦ, поновили смо овај експеримент тако што смо инактивирали дорзални хипокампус са ЦНККС-ом да блокирају локалне АМПА глутаматне рецепторе и пронашли амнезичке ефекте у обе групе (Слика 6Д и 6Е ).

Ови резултати су показали да је хипокампус неопходан за формирање нових контекстуалних сећања, без обзира да ли је дошло до претходног учења страха. Заједно са горе наведеним резултатима, ови подаци такође указују на то да су код животиња које су научиле претходни контекстуални догађај страха, и хипокампус и АЦЦ неопходни за формирање недавних сећања на страх, и ниједно од ових места само по себи не може подржати формирање меморије у одсуству другог.

Затим смо истражили временски ток захвата хипокампуса одлагањем лезије хипокампуса на 1 недељу након учења. У складу са претходним налазима [46], лезије хипокампуса су и даље утицале на формирање памћења код животиња које никада раније нису научиле друге асоцијације страха. Супротно томе, у групи која је научила претходни догађај страха, хипокампалне лезије нису утицале на задржавање памћења (Слике 6Ф и 6Г), што сугерише да претходно памћење страха скраћује временски период захвата хипокампуса (са 2 недеље на 1 недељу), као што је такође примећено за просторна учења [3,20,21].

Дискусија

У овој студији смо открили да претходна системска консолидација слушне меморије страха омогућава Те2 да одмах кодира нову слушну меморију страха путем синаптичке консолидације. Штавише, опадајуће пројекције од Те2 до БЛА које су активиране током консолидације претходног учења постају неопходне у формирању нових слушних сећања страха.

Слични резултати су примећени у контекстуалном учењу страха зависно од хипокампуса. У последњем задатку, такође смо открили да претходно учење скраћује трајање хипокампалне укључености у недавно контекстуално учење страха. Узети заједно, наши налази сугеришу да претходно учење реорганизује мождане кругове тако да ће се нове аналогне информације одмах научити у кортикалним структурама.

Тренутни концепт системске консолидације сећања зависних од хипокампуса претпоставља да је хипокампус укључен на временски ограничен начин и да се пратећи постепени процес реорганизације можданог кола дешава током времена тако да кортикалне мреже постају све важније [1–5].

Иако постоје и алтернативне теорије [47], бројне студије подржавају временски ограничену улогу хипокампуса у процесима памћења и на људским и на животињским моделима [1–3]. Напротив, реорганизација можданих кола која подржавају памћење током времена је демонстрирана углавном на животињским моделима, док су докази код људи контроверзнији [3].

Неке студије су показале да активност хипокампуса током преузимања меморије код људи прогресивно опада током недеља и месеци, док се активност у вентралном медијалном префронталном региону [48], у темпоралном неокортексу [49] или повезаност између кортикалних области [48] значајно повећава. Напротив, новије студије су показале да иако је активност хипокампуса опадала како је време пролазило, кортикална активност је остала стабилна током времена [50] или се такође смањивала [51]. Конзистентнији докази о реорганизацији можданих кола која подржавају памћење током времена добијени су код животиња [1–3]. Ове студије су спроведене на експериментално наивним животињама.

Истражујући ово питање код животиња које су формирале претходну меморију страха, открили смо да је хипокампус неопходан за формирање нових сећања, без обзира на то да ли је дошло до претходног учења страха. Међутим, реорганизација можданих кола покренута првим учењем омогућава неокортексу да одмах кодира нова сећања, једноставно кроз ћелијске механизме синаптичке консолидације. Овај феномен се односи и на сећања зависна од хипокампуса и на независна сећања на страх, а посебно је изазвана спором консолидацијом система изазваном почетним догађајем учења.

Није га било код пацова код којих су 2 покушаја учења била временски блиска један другом (неколико сати или 1 дан) и код оних код којих је инактивација кортекса након првог догађаја учења онемогућила преуређење кортекса и његово накнадно укључивање у брзу асимилацију нових успомене. Штавише, када прво учење страха реорганизује мождану повезаност, путеви који се спуштају од кортекса до БЛА нису неопходни само за задржавање удаљених сећања, као код наивних пацова, већ и за оне новијег датума. Закључујемо да ако је аналогно памћење претходно било кодирано, реорганизација можданих кола се већ догодила и можда више није потребна за формирање нових сећања, које насупрот томе одмах ангажују кортекс и његову интеракцију са субкортикалним местима.

Упркос великом броју студија које показују временски зависну реорганизацију можданих кола код наивних животиња, тачна сврха овог процеса је далеко од дефинисања. Пошто бихејвиорални одговори повезани са памћењем могу остати слични током времена, сматра се да овај процес служи за побољшање стабилности меморије током времена [1,2,52]. На основу наших налаза, предлажемо да, када се догађај страха догоди по први пут, мождани кругови пролазе кроз продужени процес реорганизације, као што је описано у моделу консолидације система. Овај процес може послужити да се преуреде неуронске мреже које трајно чувају меморију страха тако да могу одмах да стекну нове аналогне информације кроз механизме синаптичке консолидације. Заиста, овај оперативни механизам може учинити ново учење „економичнијим“, јер може смањити утрошак ресурса за стицање нових сродних информација, чиме се ослобађа више ресурса за учење нових, неповезаних информација.

Важно питање које произилази из наших налаза је да ли претходно учење трајно мења неуронске мреже тако да се слична искуства могу одмах ускладиштити у неокортексима, чак и ако се дешавају у веома удаљеним временским интервалима. Алтернативно, може бити да се систем ресетује на почетни ниво наивних животиња ако се нова слична искуства не јаве ускоро. Експерименти који процењују укљученост неокортекса у растућим временским интервалима између првог и другог учења ће разјаснити ову тачку.

Такође смо открили да је блокада неокортекса током ране консолидације првог искуства спречила тренутну алокацију нових сличних искустава неокортексу (види слике 1Ф и 4Д). Ови резултати сугеришу да су ћелијски процеси који се дешавају одмах након првог учења унутар неокортекса неопходни за његово ангажовање у процесу консолидације системске меморије. Ова идеја је у складу са открићима да се неке „означене“ ћелије активирају унутар неокортекса након учења код наивних животиња и служе за складиштење удаљених, али не и недавних сећања [7,8,12,44]. Потребне су будуће студије да би се разјаснило да ли ове ћелије играју ову улогу и након претходног учења или учествују иу формирању недавних сећања.

Првобитно, модел консолидације система довео је до додатне идеје да хипокампус брзо учи нове информације, док их неокортекс учи споро, али су касније студије показале да је неокортекс способан и за брзе процесе учења [3,20,21,53]. Наши подаци су показали да 2 различита кортекса (Те2 и АЦЦ) могу одмах научити нове информације ако се раније догодио аналогни догађај.

Према нашим претходним студијама [10,16,17,34,43,45], термин Те2 користимо да означимо најзадњи део слушног подручја појаса који, на основу Зиллесових студија [24,25], обухвата углавном временска асоцијација и екторхиналне области. Иако не можемо искључити да наши резултати могу одражавати доприносе ефеката лекова иу околним регионима, наиме у суседном визуелном кортексу, примарном слушном кортексу и перириналном кортексу, подаци које смо добили код наивних животиња сугеришу да су они првенствено последица инактивације Те .

Открили смо да је код наивних животиња Те2 био неопходан за удаљена, али не и недавна слушна сећања, док је инактивација суседног визуелног кортекса оставила удаљена слушна сећања непромењена [10]. Супротно томе, комбинована блокада примарног и Те2 кортекса је нарушила и недавно памћење [34]. Слично, инактивација предњег перириналног кортекса је нарушила сећања на страх [32,54], док инактивација задњег перириналног кортекса није утицала на недавна [54] и удаљена [10] сећања на страх.

Такође у случају АЦЦ и контекстуалних сећања на страх, инактивација суседног примарног и секундарног моторног кортекса није утицала на недавна и удаљена сећања [55], док је инактивација суседног прелимбичког кортекса нарушила и недавна и удаљена сећања [11].

Што се тиче улоге коју ови кортекси имају у процесима памћења, Те2 учествује у меморисању емоционалне вредности упарене са звуковима [10,13,16,56]. Ова идеја је недавно демонстрирана иу визуелном кортексу вишег реда [57,58]. С друге стране, АЦЦ може да формира и складишти сећања, али такође може да модулише активност других кортикалних области [1–3,6].

Упркос великом броју студија које показују да су Те2 и АЦЦ неопходни за удаљена, али не и скорашња сећања, неке недавне студије су известиле да ови кортекси могу бити неопходни и за задржавање недавних слушних [34,59] и контекстуалних [55] сећања на страх. Прецизни гранични услови који могу одредити неопходност ових кортикса за недавна сећања су слабо схваћени.

Једна од ових студија сугерише да интензитет емоционалног искуства може играти важну улогу [34], али би будуће студије требало боље да се позабаве овим питањем. Будуће студије ће такође морати да разјасне да ли ћелије које се активирају у неокортексу након учења код наивних животиња, а које служе за складиштење удаљених, али не и недавних сећања [7,8,12,44], такође играју ову улогу након претходних учења, или да ли учествују у формирању недавних сећања.

Што се тиче учешћа хипокампуса у процесима памћења, овде смо открили да је дорзални хипокампус неопходан за учење нове контекстуалне меморије чак и ако је дошло до претходног контекстуалног учења. Сличан резултат је примећен извођењем дизајна унутар субјеката на пацовима који су научили и удаљена и недавна контекстуална сећања [60]. С друге стране, такође је показано да се ћелијски механизми који посредују у каснијем учењу у хипокампусу могу разликовати од оних који су укључени током претходног испитивања учења [22,61].

Такође смо открили да је код животиња које су први пут искусиле контекстуални страх, хипокампус је неопходан такође недељу дана након учења, у складу са претходним налазом код наивних животиња [46]. Насупрот томе, у другој групи, хипокампалне лезије нису утицале на задржавање памћења у овом временском интервалу, што сугерише да претходно учење о страху скраћује временски оквир захвата хипокампуса, као што је такође примећено код просторног учења [3,20,21]. Те студије и ова студија стога пружају конвергентне доказе да временски оквир темпоралне амнезије изазване лезијама хипокампуса зависи од претходних научених искустава у просторним и емоционалним сећањима.

У тим студијама, аутори су такође предложили да обука пацова током дужег периода у просторном задатку производи „менталну“ шему знања, где се нове повезане информације могу брзо асимиловати [3,20,21,53]. Иако наши налази такође могу бити у складу са овом идејом, веома је тешко рећи да ли једно испитивање учења страха може да формира асоцијативну „шему“ знања и да ли нови и другачији догађај који се дешава у другом окружењу може бити интегрисан у ову шему. . Потребне су даље студије да би се разјаснило ово питање. У сваком случају, с обзиром да је већина сећања код људи и других животиња изграђена на прошлим искуствима, мождане мреже које по први пут чувају удаљена сећања на страх могу бити оне које кодирају и недавна и удаљена сећања на страх током целог живота.

Методе експериментални модел и детаљи предмета

Животиње

Здрави мужјаци Вистар пацова (старост, 65 до 70 дана; тежина, 250 до 350 г, дивљи тип), добијени из унутрашњег узгоја животиња, смештени су 3 по кавезу са храном и водом доступним ад либитум, под светлом од 12 сати /тамни циклус (светла се у 7:00 пре подне) на константној температури од 22 ± 1˚Ц. Све експерименте је одобрило италијанско Министарство здравља (овлашћење бр. 408/2020-ПР) и локални биоетички комитет Универзитета у Торину.

Експериментални дизајн

Репродуцибилност података је процењена са различитим понављањима (С1 табела). Први експерименти инактивације ЦНККС-а у Те2 (слике 1А-1Ц) изведени су у већем броју понављања јер су то били први експерименти које смо спровели и служили су за тестирање главне хипотезе наше студије. Животиње су а приори распоређене у различите групе понашања на начин избалансиран по тежини.

Мужјаци из истог легла су насумично распоређени у сваку експерименталну групу. Прво смо се позабавили главном хипотезом наше студије, односно, кортикална инактивација може другачије утицати на консолидацију нове меморије страха код експериментално наивних пацова и код животиња које су научиле претходни догађај страха. У случају статистичких разлика између ових група, на крају смо извршили додатне контролне групе кроз ињекцију физиолошког раствора. Сличан приступ је примењен и на оптогенетске експерименте, где је ААВ-контролна група изведена тек након што су откривене статистичке разлике између наивних и претходно обучених пацова. Ови експериментални распореди су нам омогућили да избегнемо непотребне контролне групе и употребу непотребних животиња, што је кључно питање у европском и италијанском законодавству о експериментисању на животињама (принцип од 3 Рс).

Поступци понашања

Сви експерименти су спроведени током светлосне фазе дана (од 8 до 16 часова). Животиње су транспортоване појединачно од објекта до експерименталних соба у различитим малим провидним кантама у зависности од експерименталних захтева.

Аудитивни тренинг: Прва сесија понашања.

Слушне животиње условљене страхом (ЦС1-ЦС2). У овој групи, пацови су нежно узимани из кућног кавеза и преношени из собе за становање у просторију са звучном изолацијом. Једном тамо, животиње су стављене у апарат за кондиционирање који се састојао од правоугаоног црног кавеза (35 × 40 цм) опремљеног решетком од нерђајућег челика (1 цм у пречнику, на размаку од 1,5 цм) повезаном са ударцем подесити. Пацови су остављени неометани 1 минут. Након овог времена, примењено је 7 условљених стимулуса (ЦС) који се састоје од чистог тона фреквенције од 15 кХз (по 15 с трајања, 80 дБ, 36 с пробног интервала). Последњих 1 с сваког тона је упарен са болним УЗ (0,5 мА, 1 с). На крају кондиционирања, пацови су враћени у свој кућни кавез.

Животиње само за шок (схоцк-ЦС2). У овој групи, пацови су на сличан начин смештени у исти апарат за кондиционирање. Непосредно након тога, сваки пацов је подвргнут 7-ударцима стопала (1 с, 0.5 мА) један за другим. На крају стимулације, животиње су враћене у кућни кавез. Временско трајање у кавезу за кондиционирање било је мање од 9 секунди. Претходне студије су показале да овај поступак омогућава избегавање асоцијативних процеса између болних и чулних стимулуса [29,30].

Мирис животиња условљених страхом (мирис-ЦС2). У овој групи, пацови су смештени унутар истог правоугаоног црног кавеза који је употребљен у горњим експерименталним групама и повезани на поставку за испоруку шока. Пацови су остављени неометани 2 мин. Након овог времена, дато је 7 ЦС који се састоје од мириса ваниле (10 с трајања сваки, 24 с пробни интервал). Последњих 1 с сваког мириса је упарен са болним УС (0,5 мА, 1 с). Модул за кондиционирање је постављен у близини извора вентилације како би се избјегло постојаност испоручених стимулуса након њиховог отклањања. Кавез је био обезбеђен горњом решетком. Мириси су представљени помоћу олфактометра за разблаживање протока. Чист ваздух (1,5 Л/мин) је био усмерен на електромагнетни вентил, који је, када је радио, пропуштао ваздух у боцу од 15 мл која је садржала 10 мл мириса ваниле.

Животиње само за тон (Тоне-ЦС2). Пацови у овој групи су смештени у исти црни кавез и представљен им је 15-кХз тон (7 стимулуса, 15 с трајања, 36 с ИТИ) испоручен у одсуству САД.

Претходно изложене животиње (Тоне-ЦС1-ЦС2). Пацови су смештени у кавез за кондиционирање и, 1 минут касније, 20 пута им је представљен само 15-кХз тон, а 24 х касније исти тон је упарен са САД који је постао ЦС1.

Животиње условљене страхом од беле буке (ВН-ЦС2). У овој групи, пацови су смештени у правоугаони црни кавез и остављени неометани 1 минут. Након овог времена, примењено је 7 ЦС који се састоје од ВН-а (15 с трајања сваки, 75 дБ, 36 с интервала између покушаја). Последњих 1 с сваког тона је упарен са болним УС (0.5 мА, 1 с). На крају кондиционирања, пацови су враћени у свој кућни кавез.

Аудитивно учење страха: Други тренинг понашања.

Две недеље након процедура описаних у горњем параграфу, животиње су обучене за још један другачији задатак кондиционирања слушног страха. Пацови су стављени у стандардну кутију за кожу, као у нашем претходном раду [10], и остављени неометани 2 мин. Након овог времена, испоручено је 7 ЦС-ова који се састоје од чистих тонова фреквенције 3 кХз (8 с трајања сваки, 80 дБ, 22 с међупробног интервала). Последњих 1 с сваког тона је упарен са болним УЗ (0,5 мА, 1 с). На крају кондиционирања, пацови су враћени у свој кућни кавез.

Страх задржавање памћења. Задржавање слушне меморије страха која је недавно стечена на ЦС2 (3 кХз) тестирана је 4 дана касније. За оптогенетичке експерименте, тест недавне меморије је изведен са ласерском испоруком 24 х након ЦС2-УС учења у аналогији са временским интервалом у којем смо извршили инактивацију кортикале кроз давање ЦНККС-а (тј. 24 х након обука). Пацови су навикнути на апарате који се разликују од оних који се користе за кондиционирање и смештени у другу просторију како би се избегло условљено понашање страха контекстуалним сигналима [10,62]. Нови апарат се састојао од прозирног пластичног кавеза са црном обојеном страном затвореном у кутији за пригушивање звука опремљеној издувним вентилатором, који је елиминисао мирисни ваздух из кућишта и обезбедио позадинску буку од 60 дБ. Животињама је било дозвољено да истражују кавез 5 минута дневно током сесије навикавања. На дан теста задржавања памћења на страх, након 2 минута слободног истраживања, испоручили смо 4 ЦС2 од 3 кХз (8 с—22 ИТИ) без праћења ниједног УС.

Ако је то захтевала експериментална потражња, пацови су затим тестирани на задржавање удаљене меморије страха, добијене 2 недеље пре другог испитивања слушног условљавања страха. У том циљу, 7 дана након теста задржавања памћења страха на 3-кХз тон, животиње су стављене у ново окружење (црно-бели пругасти кавез) и затим представљене са 15-кХз тоном. Четири тона су представљена у интервалима од 36 секунди.

Контекстуални тренинг: Прва сесија понашања.

Контекстуална група за условљавање страха (ЦткА-ЦткБ). У овој групи, пацови су нежно извучени из њиховог кућног кавеза, стављени у канту и пренети из собе за становање у просторију са звучном изолацијом. Једном тамо, животиње су смештене у апарат за кондиционирање који се састоји од горе поменутог правоугаоног црног кавеза, опремљеног решетком од нерђајућег челика повезаном са поставком за испоруку шока. Пацови су остављени неометани 1 минут. Након овог времена, примењено је 5 УС (0.5 мА, 1 с) са временским интервалима од 51 с. На крају сесије, животиње су враћене у свој кућни кавез.

Група само за шок (схоцк-ЦткБ). Пацови, када су једном стављени у апарат за кондиционирање, одмах су примили 5- шокове стопала (1 с, 0.5 мА) један за другим. Временско трајање у кавезу за кондиционирање било је мање од 7 секунди. Претходне студије су показале да овај поступак омогућава избегавање асоцијативних процеса између болних и чулних стимулуса [29,30].

Животиње само у контексту (цонтект-ЦткБ). Пацови су смештени у исти црни кавез који је употребљен у горњим експериментима на 5 минута без испоруке било каквог УС.

Ново контекстуално условљавање страха и недавно задржавање сећања на страх. Две недеље након процедура описаних у горњем параграфу, све групе су обучене да повежу ново контекстуално окружење (модул кутије скиннер, смештен у другу просторију) са болним УС (0.5 мА, 1 с) . Свака животиња је стављена у нову комору и остављена неометана 2 мин. Затим је изложен 5 УС одвојеним интервалима од 30 с.

Задржавање контекстуалне меморије страха је тестирано 4 дана након поступка условљавања страха тако што су пацови поново стављени у Скиннер кутију на 3 минута. За оптогенетичке експерименте, тест недавне меморије је изведен са ласерском испоруком 24 х након учења ЦткБ-УС у аналогији са временским интервалом у којем смо извршили инактивацију кортекса кроз давање ЦНККС-а (тј. 24 х након тренинга). Ако је то захтевала експериментална потражња, пацови су затим тестирани на задржавање удаљене меморије страха стављањем животиња у контекст упарен са САД 2 недеље пре нове асоцијације.

Животиње су ношене у 2 различите канте у коморе за кондиционирање према различитим контекстуалним процедурама.

Мера замрзавања. У свим експерименталним поступцима, процена задржавања памћења на страх је одређена као одговор замрзавања [10], анализиран као потпуно одсуство соматске покретљивости осим респираторних покрета. За сваку животињу, време (у секундама) проведено у замрзавању је мерено ван мреже од стране 2 независна посматрача који су били слепи за групе животиња.

For more information:1950477648nn@gmail.com